中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 不同活菌数卡介苗制品诱导免疫反应差异的比较

    杨阳;付丽丽;赵爱华;徐苗;

    目的比较不同活菌数卡介苗(BacilleCalmette-Guérin,BCG)制品诱导的免疫反应的差异。方法用不同活菌数BCG分别免疫豚鼠和小鼠后,采用BCG纯蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD)试验检测豚鼠免疫后诱导的变态反应大小,酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)检测小鼠脾淋巴细胞分泌抗原特异性IFNγ的水平,分析不同评价方法的检测结果与BCG活菌数的相关性。结果在活菌数(1.5~4.6)×106CFU/mg范围内,PPD反应大小与BCG的活菌数无相关性,而抗原特异性的IFNγ分泌水平与活菌数呈正相关。结论相较于传统的PPD试验,ELISPOT法能更精确地评价BCG的效力与BCG活菌数之间的量效关系。

    2022年01期 v.35 1-3+10页 [查看摘要][在线阅读][下载 676K]
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  • 壳聚糖兽用疫苗稀释液的制备及其应用

    曹政;格格其木格;徐晓泉;翟少钦;付文贵;朱买勋;

    目的建立一种壳聚糖稀释液的制备方法,并制备一种生物相容性较好、安全性高、可有效提高疫苗免疫效果的兽用疫苗稀释液,以用于草原牧区大规模动物免疫。方法在酸性条件下溶解壳聚糖,向上清中滴加NaOH使已溶解的可溶壳聚糖析出,制备再生壳聚糖。用不同pH的0.2 mol/L磷酸-柠檬酸缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液和磷酸盐缓冲液配制1%~5%的壳聚糖以及再生壳聚糖溶液,并在115℃条件下湿热灭菌。通过溶解特性以及外观等条件筛选最佳缓冲体系。利用不同浓度的可溶壳聚糖稀释液(soluble chitosan diluent,SCD)及再生壳聚糖稀释液(regenerated chitosan diluent,RCD)稀释山羊痘活疫苗,通过免疫山羊后的安全性及ELISA抗体水平筛选最佳稀释液配方,并建立最佳稀释液的制备流程。利用制备的稀释液稀释山羊痘活疫苗及猪瘟活疫苗并免疫动物,检测制备的稀释液的安全性及免疫增强作用。结果筛选得到的最佳稀释液配方及其制备过程为:0.2 mol/L pH 4.0醋酸-醋酸钠缓冲液配制3%浓度的壳聚糖溶液,离心去除杂质后,上清滴加NaOH至沉淀完全析出;收集再生壳聚糖,用0.2 mol/L pH 4.6醋酸-醋酸钠缓冲液配制成2%浓度的再生壳聚糖溶液,115℃湿热灭菌30 min;用1 mol/L无菌醋酸钠溶液调pH至6.0并稀释至终浓度0.5%,即为0.5%pH 6.0的RCD。使用该稀释液配制疫苗,仅免疫1次即可达到其他稀释液配制疫苗免疫2次后的抗体水平,免疫增强作用高于铝胶稀释液,同时具备与生理盐水一致的安全性。结论本研究利用再生壳聚糖制备了性状优良、pH接近中性、生物相容性好的兽用疫苗稀释液。基于壳聚糖良好的抗原吸附及缓释特性,稀释液可在疫苗注射剂量不足的情况下达到理想的免疫效果,较为适合大规模动物免疫时使用。

    2022年01期 v.35 4-10页 [查看摘要][在线阅读][下载 881K]
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基础研究

  • BC02复合佐剂成分协同增强机体固有免疫应答的分析

    李军丽;付丽丽;杨阳;王国治;赵爱华;

    目的探讨复合佐剂BC02(BCG CpG DNA combination adjuvant system 02)组成成分对机体固有免疫应答的协同增强作用。方法将C57BL/6小鼠随机分为4组,分别肌肉注射Al(OH)3佐剂、BC01佐剂和BC02复合佐剂及PBS溶液(对照)。免疫后6 h,将各组部分小鼠解剖取腹股沟淋巴结进行全基因组转录谱分析。免疫后24、48、72和96 h,将各组剩余小鼠解剖取右后肢内侧注射部位肌肉组织,经组织HE和免疫荧光染色,分析注射部位炎性细胞招募情况。同时,采用qPCR法对信号通路中富集的显著性差异表达基因(significantly differentially expressed genes,SDEG)进行验证分析。结果 SDEG数据经IPA(Ingenuity Pathway Analysis)软件进行GO富集和信号通路网络分析后发现,BC02复合佐剂组成成分具有协同增强免疫细胞活化网络激活、免疫细胞招募信号网络激活、巨噬细胞吞噬功能、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)信号通路网络激活和CCL2相互作用网络激活作用。BC02复合佐剂组成成分也具有协同增强佐剂在注射部位炎性细胞招募的能力。结论 BC02复合佐剂组成成分Al(OH)3无机盐佐剂及BC01生物佐剂具有协同增强机体固有免疫应答的作用。

    2022年01期 v.35 11-18页 [查看摘要][在线阅读][下载 1276K]
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  • 基孔肯雅病毒无血清培养及灭活病毒保护效果的分析

    王嘉琪;彭浩然;何燕华;赵兰娟;任浩;王文;戚中田;赵平;唐海琳;

    目的建立无血清条件下培养基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)的生产工艺,评价灭活CHIKV在小鼠感染模型的保护效果。方法采用无血清培养基(virus production serum-free medium,VP-SFM)适应培养Vero细胞扩增CHIKV,与含血清DMEM培养基扩增CHIKV效果进行比较。用甲醛和β-丙内酯灭活CHIKV,作为免疫抗原,以氢氧化铝为佐剂,分别在第1和14天接种6周龄C57BL/6小鼠,第28天采血,分离血清,检测血清抗体中和效果。在CHIKV Ross毒株感染小鼠模型中,比较免疫小鼠与对照小鼠体重及脑组织病理变化,评价灭活CHIKV对小鼠的保护效果。结果 Vero细胞在VP-SFM中传代稳定性较好,无血清与含血清培养的CHIKV滴度差异无统计学意义(P> 0.05),均达到108PFU/mL。接种甲醛和β-丙内酯灭活CHIKV的小鼠,血清抗体具有中和作用。小鼠滴鼻感染CHIKV Ross毒株,对照组小鼠脑组织出现病变,体重下降,接种灭活CHIKV组小鼠脑组织未出现明显病变,体重未出现下降,两组小鼠体重下降差异有统计学意义(P <0.001)。结论无血清培养Vero细胞适用于CHIKV扩增,灭活CHIKV在C57BL/6小鼠感染模型上具有显著保护效果。

    2022年01期 v.35 19-25+32页 [查看摘要][在线阅读][下载 1217K]
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  • 甲型肝炎病毒在太平洋牡蛎中的富集及消减规律

    闫旭佳;袁亚迪;幺山山;崔博沛;宋丽芳;刘佩;孙世洋;卞莲莲;高帆;张洁;毛群颖;梁争论;

    目的探讨总甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)和活HAV在太平洋牡蛎消化腺中富集和净化消减动态规律,以及在牡蛎不同组织中的分布。方法通过人工暂养太平洋牡蛎和人为HAV污染养殖水体,并自染毒24 h后净化养殖的方式,建立牡蛎体内HAV富集和净化衰减模型。采用免疫沉淀提取结合一步法实时荧光定量RT-PCR(quantitative real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction,qRT-PCR)法,分别检测0~264 h不同时间点的养殖水体、牡蛎消化腺以及牡蛎其他组织的总HAV含量;采用qRT-PCR和叠氮溴化丙锭-定量RT-PCR(propidium monoazide-quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction,PMA-qRT-PCR)同时检测0、3、6、9、12、24、48、72、96、120、144、168、192、216、240和264 h牡蛎消化腺总HAV和活HAV含量,并对两者进行相关性分析;对0、3和24 h的染毒牡蛎进行免疫组化检测,评价各组织的组化动态改变。结果在24 h内,养殖水体的总HAV含量从0 h的5.544 Lgcopies/g下降至4.428 Lgcopies/g;但净化养殖后1 d(48 h),水体仍检出2.757 Lgcopies/g,并可持续检出至216 h。而牡蛎消化腺的总HAV在染毒3 h后即迅速升高至5.810 Lgcopies/g,12 h达最高点(6.152 Lgcopies/g),为养殖水体的29.7倍。净化养殖后,牡蛎消化腺中总HAV仍持续高水平,至72 h后才缓慢下降,264 h仍为4.398 Lgcopies/g。与总HAV的变化规律一致,活HAV在3 h即达3.432 LgCCID50/g,至12 h达最高点(3.929 LgCCID50/g),72 h后缓慢下降,264 h为2.678 LgCCID50/g。全部检测时间点总HAV和活HAV含量的相关系数(R2)达0.811 6,相关性良好,10 CCID50/g活HAV约相当于81 copies/g的总HAV。染毒后24 h,消化腺、鳃、唇瓣、外套膜和闭壳肌中均可检出不同含量的总HAV,其中,消化腺最高(P <0.05),唇瓣最低;免疫组化显示,染毒后3 h唇瓣中即可见强阳性HAV颗粒,提示在污染早期,唇瓣可能较消化腺更加敏感。结论太平洋牡蛎受污染后3 h即可在消化腺中检出高水平的HAV,12 h达最高点。净化养殖不能有效降低牡蛎体内的HAV水平,且在消化腺内11 d仍维持良好的病毒活性,并可持续排毒,对环境造成二次污染。我国应进一步加强牡蛎等可生食贝类与HAV的相关基础、监测和管理策略研究,为加强我国后甲肝疫苗时代的HAV预防和控制做好源头控制,更好地保障我国的食品安全。

    2022年01期 v.35 26-32页 [查看摘要][在线阅读][下载 1130K]
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  • 戊型肝炎病毒感染对补体系统表达的影响

    王文静;王珏;禹文海;姜典财;黄芬;

    目的探讨补体在戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)感染孕妇及非孕妇患者中的表达水平。方法采用免疫比浊法检测HEV感染孕妇及非孕妇患者血清中补体固有成分C3及C4水平;RT-qPCR法检测HEV感染孕妇及非孕妇患者全血中补体C3aR、CD55和CD59的表达水平。结果 HEV感染激活补体C3、C3aR、CD55和CD59的表达,且在孕妇患者中的表达水平显著高于非孕妇患者,这可能是导致孕妇体内HEV滴度较高的原因之一。结论 HEV感染激活补体系统,且感染的孕妇体内补体表达量远高于感染的非孕妇。

    2022年01期 v.35 33-36页 [查看摘要][在线阅读][下载 1015K]
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  • 模制瓶及盐水透析对人血白蛋白制品中铝离子残留量的影响

    范蓓;冯云安;王振海;张学成;周铮;梁雪爽;

    目的探讨模制瓶及盐水透析对人血白蛋白制品中铝离子残留量的影响。方法采用原子吸收法检测5%、10%、20%和25%4种规格人血白蛋白空白制剂(不含人血白蛋白,仅含辛酸钠和氯化钠等辅料配方制剂,不同规格空白制剂的辅料配方相同,仅浓度不同)的铝离子含量,随后分别灌装至不同厂家的模制瓶中,于57℃存放0、2、4、6和8周,原子吸收法检测铝离子含量。将5%和10%规格人血白蛋白中间样品分别经6倍和8倍浓度的盐水透析,原子吸收法检测铝离子含量。取5%和10%规格人血白蛋白(批号分别为:B201908050和B201908047)生产过程中盐水透析(8倍浓度)前后和灌装(2~8℃)前后样品,原子吸收法检测铝离子含量。结果 4种规格人血白蛋白空白制剂中铝离子含量均较低。在高温保存条件下,不同厂家的模制瓶中铝离子含量随时间延长整体呈上升趋势。两种规格人血白蛋白中间样品经8倍浓度盐水透析后,铝离子含量明显低于6倍浓度盐水透析(P <0.05)。5%和10%规格人血白蛋白生产过程中透析后样品中铝离子含量大幅降低,灌装前后变化较小。结论人血白蛋白生产过程中,原辅料中的铝离子含量可通过提高盐水透析的倍数大幅降低,灌装过程中模制瓶中铝离子的析出可通过调控温度控制在安全范围内。

    2022年01期 v.35 37-40页 [查看摘要][在线阅读][下载 1140K]
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  • 2019—2020年辽宁省沿海城市甲型肝炎病毒基因特征分析

    任丽萍;邵玉平;王艳;孙静;杨晓丽;刘杨;赵玲;韩一楠;于艳;方兴;

    目的对2019—2020年辽宁省沿海城市甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)的基因特征进行分析。方法选取2019—2020年辽宁省丹东、大连、盘锦市急性期甲型肝炎患者的血清或粪便标本(共162份),采用巢式PCR法进行HAV VP1/2A序列扩增,阳性样本进行基因测序,选取28个代表序列,同时从GenBank中下载全球HAV不同型别的基因序列,通过Neighbor-Joining方法构建亲缘关系进化树,分析基因序列同源性。结果 2019—2020年辽宁省沿海城市的162份甲型肝炎患者血清及粪便标本中,PCR阳性127份,均为ⅠA型;构建的亲缘关系进化树可分为2个进化分支,即分支1和分支2,与日本、韩国流行HAV的核苷酸同源性分别达98.8%~100%和98.4%~100%。结论 2019—2020年辽宁省沿海城市HAV基因型均为ⅠA型,与日本、韩国流行的HAV属同一分支。本研究为辽宁省甲型肝炎的防控提供了实验依据。

    2022年01期 v.35 41-44页 [查看摘要][在线阅读][下载 1046K]
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  • 化脓隐秘杆菌对奶牛脾脏组织细胞凋亡的影响

    范春玲;颜廷富;张林雁;王洋;周玉龙;孙斌;郭东华;原冬伟;赵明迪;吴海燕;刘琳珊;

    目的观察化脓隐秘杆菌自然感染奶牛脾脏组织的病理学变化,并检测组织细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax和Bcl-2的表达,以确定化脓隐秘杆菌感染对奶牛脾脏组织细胞凋亡的影响。方法筛检2头化脓隐秘杆菌阴性健康奶牛(对照)和5头自然感染化脓隐秘杆菌的奶牛,收集脾脏组织样本,采用本课题组国家发明专利方法,进行石蜡制片和HE染色,观察脾脏组织病理学变化;采用免疫组织化学方法与本课题组国家发明专利方法相结合,检测奶牛脾脏组织中与细胞正负凋亡相关的调节基因Bax和Bcl-2及凋亡通路蛋白Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达情况。结果肉眼观察可见化脓隐秘杆菌自然感染奶牛脾脏肿大、柔软,有出血;病理组织学观察可见脾脏组织出血,水肿,淋巴细胞数量减少,有坏死;脾脏淋巴细胞Caspase-3、Caspase-9和Bax表达阳性,与对照组相比,差异有统计学意义(P <0.05),少量淋巴细胞Caspase-8和Bcl-2表达阳性,与对照组相比,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论化脓隐秘杆菌能够引起奶牛脾脏淋巴细胞发生坏死和凋亡;可通过调节脾脏中淋巴细胞Bcl-2家族的活性,引起其Bax和Bcl-2比率改变,增加淋巴细胞线粒体内外膜通透性,导致与凋亡相关因子的释放,激活Caspase-9,进一步激活Caspase-3,从而引起脾脏中淋巴细胞发生凋亡。

    2022年01期 v.35 45-49页 [查看摘要][在线阅读][下载 1440K]
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治疗制剂

  • 小鼠H22肝癌移植瘤模型在PD-1单抗治疗肝癌中的应用

    黄凝;祝思宇;李鸿泉;程曦;邓向亮;

    目的探讨小鼠H22肝癌移植瘤模型在PD-1单抗治疗肝癌中的应用。方法制备小鼠H22肝癌移植瘤模型,用淋巴细胞分离液分离肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocytes,TILs),然后采用流式细胞术分析TILs中T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞和调节性T细胞比例,以及肿瘤组织和脾脏组织中T细胞表达PD-1的分子水平。经H22肝癌移植瘤模型小鼠腹腔注射PD-1单抗[200μg/(只·次),共3次],观察肿瘤生长情况。结果小鼠肿瘤组织中T细胞、CD8+T细胞及调节性T细胞比例分别为(33.7±1.5)%、(22.4±0.9)%和(24.0±2.3)%。在肿瘤组织浸润的CD8+T细胞[(28.6±8.7)%]和CD4+T细胞[(26.0±4.6)%]表达PD-1分子水平显著高于在脾脏组织中的表达水平[(4.3±0.7)%和(17.2±3.8)%],差异有统计学意义(P <0.01)。PD-1单抗治疗组小鼠肿瘤体积[(663.09±385.99)mm3]显著低于模型组小鼠[(1 435.25±683.96)mm3],差异有统计学意义(P <0.05)。结论H22肝癌移植瘤模型小鼠肿瘤组织有T细胞浸润,且表达高水平PD-1分子,对PD-1单抗治疗有响应,提示该模型用于PD-1单抗治疗肝癌研究具有可行性。

    2022年01期 v.35 50-54+62页 [查看摘要][在线阅读][下载 1450K]
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  • 日本血吸虫重组半胱氨酸蛋白酶抑制剂对小鼠心肌梗死预后的影响及其免疫调节机制

    李燕楠;杨小迪;陈思宇;颉丽英;刘思麒;高尔和;左琳;

    目的探讨日本血吸虫重组半胱氨酸蛋白酶抑制剂(r Sjcystatin)对小鼠心肌梗死(myocardial infarction,MI)预后的影响及其免疫调节机制。方法建立小鼠MI模型,分别于术后1、3、5、7、14、28 d经腹腔注射PBS及10、25μg r Sjcystatin。术后28 d,记录MI小鼠的生存率及心脏黏连率;通过超声心动图观察心功能变化;Masson三色染色法检测心脏结构重构情况。术后7 d,HE染色法检测小鼠心脏损伤情况;CD45免疫组化染色法检测炎症细胞浸润程度;ELISA法检测小鼠血清中主要炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-10(interleukin-10,IL-10)、IL-6、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的分泌水平。结果 MI术后28 d,与PBS组比较,两剂量r Sjcystatin治疗组小鼠存活率呈上升趋势,心脏黏连率降低;25μg r Sjcystatin治疗组小鼠左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)和左室短轴缩短率(left ventricular fraction shortening,LVFS)明显升高(P <0.05),左室的梗死面积百分比明显减少(P <0.01);两剂量r Sjcystatin治疗组小鼠左室舒张末内径(left ventricular diastolic internal diameter,LVID,d)显著减小(P <0.05),左室壁厚度明显增加(P <0.001);与10μg r Sjcystatin治疗组比较,25μg r Sjcystatin治疗组的LVEF和LVFS均明显升高(P <0.05),LVID,d差异无统计学意义(P﹥0.05),左室梗死面积百分比显著减小(P <0.05),室壁厚度明显增加(P <0.001)。MI术后7 d,与PBS组比较,两剂量r Sjcystatin治疗组炎性细胞的浸润减少,心肌纤维的破坏减轻;25μg r Sjcystatin治疗组棕黄色炎性细胞颗粒的平均光密度值显著低于PBS组及10μg r Sjcystatin治疗组(P分别为<0.05和<0.001);与PBS组比较,25μg r Sjcystatin组小鼠血清TNF-α和IL-6的含量显著降低(P分别为<0.05及<0.01),TGF-β1含量显著升高(P <0.001),IL-10含量呈升高趋势,但差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 r Sjcystatin可通过适度减弱炎细胞浸润、降低促炎因子TNF-α和IL-6分泌及增加抗炎因子IL-10和TGF-β1分泌,从而抑制小鼠MI后的炎症反应,延缓心肌结构重构的发生,对心肌有一定保护作用。

    2022年01期 v.35 55-62页 [查看摘要][在线阅读][下载 1525K]
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诊断制剂

  • 结核分枝杆菌Rv1886c蛋白的表达、纯化及其多克隆抗体的制备

    刘琼;李慧;罗鹏征;马国荣;张炜;万巧凤;

    目的表达、纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M. tb)Rv1886c重组蛋白(Ag85B),并免疫小鼠制备多克隆抗体。方法采用PCR技术从M. tb(H37Rv)基因组中扩增Rv1886c基因,克隆至pET-28a质粒中,构建重组表达质粒pET-28a-Rv1886c,转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达Ag85B蛋白,并对表达条件进行优化。采用Ni-NTA His亲和层析柱纯化目的蛋白;将纯化的蛋白经皮下注射BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,ELISA法检测抗体滴度,Western blot法检测抗体特异性。结果重组表达质粒pET-28a-Rv1886c经双酶切和测序鉴定证明构建正确;重组蛋白的最适表达条件为0.5 mmol/L IPTG 37℃诱导表达4 h,获得了相对分子质量约30 000的重组蛋白;纯化的重组蛋白纯度达90%以上,蛋白浓度约为1.5 mg/mL;免疫BALB/c小鼠后获得的抗Ag85B血清具有良好的抗原结合特性,且抗体滴度达1︰51 200。结论成功获得了高纯度的Rv1886c蛋白Ag85B,并制备了小鼠抗Ag85B多克隆抗体,为进一步研究TB的血清学早期诊断奠定了基础。

    2022年01期 v.35 63-67+73页 [查看摘要][在线阅读][下载 1350K]
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临床研究

  • 新型冠状病毒肺炎背景下医务人员对免疫功能受损儿童疫苗接种意见的影响因素分析

    邓鹏飞;杨天;周芬;张桦;杨丹丹;刘文敏;王卫平;王琦璋;薛曹怡;费怡;

    目的分析新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019)背景下医务人员对免疫功能受损儿童疫苗接种意见的影响因素,为免疫功能受损儿童疫苗接种政策制定提供科学依据。方法采用分层整群随机抽样方式,对2020年1—6月上海儿童医学中心、仁济医院、唐镇和三林社区卫生服务中心医务人员进行问卷调查,通过Logistic回归模型进行影响因素分析。结果调查医务人员462例,其中男性45例(9.74%),女性417例(90.26%)。疫苗重新接种的相关信息知晓途径中,国内外文献和会议培训判断重新接种疫苗的差异有统计学意义(P <0.05);单因素分析显示,科室类型、疫苗相关工作时间和患儿病情不稳定是医务人员判断免疫功能受损儿童能否接种的影响因素(P均<0.05);多因素分析显示,患儿病情不稳定(OR=4.106)是医务人员判断免疫功能受损儿童能否接种的危险因素,疫苗相关工作时间越长(OR=0.447)是医务人员判断免疫功能受损儿童能否接种的保护因素。结论应加强医务人员疫苗相关知识培训,鼓励医务人员主动了解并参与免疫功能受损儿童主动免疫评估工作,提高免疫功能受损儿童疫苗接种覆盖率,增强该人群对传染病的抵御能力。

    2022年01期 v.35 68-73页 [查看摘要][在线阅读][下载 1287K]
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  • 2013—2018年太原市手足口病流行特征及病原学分析

    柴向琪;王骥涛;高瑞红;姚红;

    目的分析2013—2018年太原市手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)流行及病原学特征,为HFMD的防控提供科学依据。方法用Excel 2003及SaTScan 9.4.1软件对太原市2013—2018年HFMD病例资料分别进行统计描述及时空聚集性分析,采用RT-PCR对部分HFMD患者咽拭子样本进行病原检测。结果 2013—2018年太原市共报告HFMD病例32 686例,平均年发病率为126.93/10万,其中重症病例报告3例。其发病高峰在5—8月份;发病人群多见于1~5岁儿童,男女发病率之比为1.37∶1,且高发人群为散居儿童和幼托儿童。发病率排在前3的县区为晋源区(196.30/10万)、小店区(181.81/10万)及阳曲县(170.39/10万)。HFMD有统计学意义的时空聚集区分为两级,其中一级聚集区3个,二级聚集区4个(LLR分别为4 021.9和1 348.3,P均<0.01)。2014年以柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A 16,CVA16)及肠道病毒71型(enterovirus,EV71)为共同优势病原,2015年以CVA16和其他肠道病毒(非EV71、CVA16型)为共同优势病原,其他年份以其他肠道病毒为优势病原。结论太原市HFMD的发病存在时空聚集性,应在高发时间,高发地区,针对高发人群进行重点防控,且应增加其他肠道病毒的分型监测。

    2022年01期 v.35 74-78页 [查看摘要][在线阅读][下载 1281K]
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技术方法

  • b型流感嗜血杆菌结合疫苗游离多糖含量检测高效阴离子交换色谱-脉冲安培法的建立及验证

    赵丹;李茂光;毛琦琦;李亚南;陈苏京;叶强;

    目的建立b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗游离多糖含量检测的超速离心联合高效阴离子交换色谱-脉冲安培(high performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detector,HPAEC-PAD)法,并对该方法进行验证及初步应用。方法将供试品经超速离心后,收集上清获得游离多糖,加入水解液使供试品水解约16 h后,采用CarboPacPA-10 4 mm×250 mm分析柱与CarboPacPA-10 4 mm×50 mm保护柱,氢氧化钠-醋酸钠溶液梯度洗脱,检测供试品游离多糖含量。对该方法进行专属性、线性、精密度、稳定性、准确度验证,确定定量限。用建立的方法检测13个批次Hib结合疫苗游离多糖含量,同时与乙醇沉淀法进行比较。结果Hib多糖标准品在0.77~12.26μg/mL范围内,与峰面积呈良好的线性关系,测定5次,线性相关系数均大于0.995;方法定量限为1.875 ng/mL;精密度、稳定性的RSD均小于5%;高、中、低3个浓度的平均加标回收率为100.26%,RSD为3.96%。13个批次Hib结合疫苗中的游离多糖含量为6.76%~16.74%。结论该方法准确可靠,可用于检测Hib结合疫苗游离多糖含量,同时也为其他多糖蛋白结合疫苗游离多糖提取和检测提供了思路。

    2022年01期 v.35 79-84页 [查看摘要][在线阅读][下载 1386K]
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  • 长效生长激素相关蛋白含量检测反相高效液相色谱法的建立及验证

    赵鑫;俞露;孙瑞欣;朱秋媚;王江林;刘涵;刘玉林;刘景会;邹勇;

    目的建立长效生长激素(recombinant human growth hormone-Fc,rhGH-Fc)相关蛋白含量检测的反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,并进行验证。方法通过质谱肽图法进行rhGH-Fc相关蛋白结构解析后建立相关蛋白含量检测的方法,优化梯度洗脱方法和流动相方案,并对该方法进行重复性、专属性、耐用性验证,确定检测限和定量限。用建立的方法检测rhGH-Fc氧化加速试验样品、脱酰胺加速试验样品及不同批次纯化液样品。结果建立的RP-HPLC法色谱柱为ZORBAX 300SB-C18(4.6 mm×250 mm,5-Micron),柱温45℃,上样量40μg,流速0.7 mL/min,检测波长280 nm;流动相A为30%乙腈+0.1%三氟乙酸,流动相B为80%乙腈+0.1%三氟乙酸;梯度洗脱方法为0~10 min,10%B→50%B;10~50 min,50%B→90%B。rhGH-Fc的相关蛋白主要产生在4个氧化位点和2个脱酰胺位点处。建立的RP-HPLC检测方法重复性验证RSD为1.8%;蛋白缓冲液对检测结果无干扰;耐用性验证RSD为0.05%;在相同色谱柱条件下,不同设备、不同时间配制的流动相、不同柱温对检测结果无明显影响;方法检测限为0.01 mg/mL,定量限为0.025 mg/m L。结论成功建立了rhGH-Fc相关蛋白含量的RP-HPLC检测方法,该方法重复性、专属性、耐用性良好,可用于rhGH-Fc相关蛋白含量的检测。

    2022年01期 v.35 85-90页 [查看摘要][在线阅读][下载 1444K]
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  • 青海血蜱重组rHq002蛋白包涵体的纯化

    马静;陈开廷;曹美娜;刘玉婷;马婧;高金亮;

    目的对青海血蜱重组r Hq002蛋白包涵体进行复性及纯化。方法将重组质粒pET-30a-Hq002转化E. coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达重组Hq002蛋白;超声破碎菌体,收集细胞碎片,用PBS缓冲液和低浓度尿素进行多次洗涤;洗涤后的包涵体用6 mol/L盐酸胍溶解,稀释法进行蛋白复性;用镍离子亲和层析法纯化蛋白后,分别于4和-20℃保存7 d后进行12%SDS-PAGE鉴定。结果经PBS缓冲液和低浓度尿素多次洗涤,可去除大量的水溶性杂质和部分水不溶性杂蛋白,初步纯化了包涵体;包涵体经6 mol/L盐酸胍溶解后可直接稀释复性重组蛋白;经镍离子亲和层析纯化后的蛋白相对分子质量约27 000,与预期相符,4和-20℃保存7 d未出现降解或者聚集。结论成功获得含二硫键的蜱源重组蛋白,本研究的复性纯化方法可为纯化包涵体蛋白提供参考。

    2022年01期 v.35 91-94+99页 [查看摘要][在线阅读][下载 1341K]
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综述

  • 靶向视黄酸(维甲酸)诱导基因蛋白-Ⅰ受体应用的研究进展

    李克雷;吴星;郑海发;梁争论;

    模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)具有激活固有免疫,诱导适应性免疫的重要作用。当PRR识别配体后,启动信号级联反应,诱导干扰素等细胞因子表达,从而触发适应性免疫系统的体液免疫和细胞免疫。由于PRR在免疫系统的关键作用,靶向PRR的配体成为潜在的候选药物或佐剂。其中,靶向视黄酸(维甲酸)诱导基因蛋白-Ⅰ(retinoic acid inducible gene-Ⅰ,RIG-Ⅰ)样受体(RIG-Ⅰ-like receptors,RLRs)的配体不仅可作为抗病毒和癌症治疗药物,还可作为佐剂应用于新型疫苗研发。作为新的药物靶点,RLRs越来越受到重视,本文就靶向RLRs的配体在抗病毒、癌症治疗及疫苗佐剂中的应用作一综述。

    2022年01期 v.35 95-99页 [查看摘要][在线阅读][下载 1346K]
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  • 冠状病毒非结构蛋白的研究进展

    汪梦俊;申硕;

    近20年来,动物冠状病毒(coronavirus,CoV)变异并传播于人,引起严重的烈性传染病,在全球造成巨大的经济损失。因此,对CoV进行基础研究非常重要。CoV的非结构蛋白(non-structural protein,NSP)在病毒复制过程中发挥着重要作用,如抑制宿主的固有免疫、帮助病毒逃避宿主细胞感应、形成复制转录复合物(replication transcription complex,RTC)等。本文主要以严重急性呼吸综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARSCoV)和严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)为例,对存在于CoV中的病毒编码蛋白,特别是16种NSP的结构以及在病毒复制过程中的作用作一综述。

    2022年01期 v.35 100-111页 [查看摘要][在线阅读][下载 1791K]
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  • 肠道微生物代谢产物参与动脉粥样硬化的研究进展

    李海霞;魏静;哈小琴;

    肠道微生物群像一个内分泌器官,能产生多种生物活性代谢物,影响宿主的健康。近来研究发现,肠道微生物的代谢组成变化在肥胖、高血压、慢性心脏和肾脏疾病中起重要作用。多项研究表明,肠道微生物衍生的许多代谢物与动脉粥样硬化事件密切相关,如三甲胺N-氧化物(trimethylamine N-oxide,TMAO)、胆汁酸(bile acid)、短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)、尿毒症毒素(uremic toxins)以及多酚(polyphenols)等。虽然目前代谢组学的应用已对这些微生物代谢物进行了准确的表征和定量分析,但其作用机制尚不明确。本文对肠道微生物代谢产物在动脉粥样硬化发展中的作用作一综述,为预防或治疗动脉粥样硬化提供新的策略。

    2022年01期 v.35 112-118+122页 [查看摘要][在线阅读][下载 1482K]
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  • 环状RNA作为微小RNA海绵在肿瘤进展中的作用

    牛亚倩;常钰玲;刘芳;陈彻;

    环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类共价封闭的内源性非编码RNA,无5′端帽和3′端多聚A尾,具有组织特异性,广泛存在于人类细胞中。circRNA于包括肿瘤在内的多种疾病相关组织及细胞中存在差异表达,提示circRNA对某些疾病具有调节作用,如circRNA可作为微小RNA(microRNA,miRNA)海绵,即作为竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)与miRNA竞争性结合,从而对肿瘤细胞的增殖、侵袭及血管生成等生理活动发挥调控作用,因此,circRNA在肿瘤进展中扮演重要角色。本文就circRNA作为mi RNA海绵在肿瘤增殖、侵袭转移及血管生成中的作用作一综述。

    2022年01期 v.35 119-122页 [查看摘要][在线阅读][下载 1338K]
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  • 网钙蛋白2的结构与功能及其在疾病中作用的研究进展

    刘隆福;彭宁;蒋铁建;

    网钙蛋白2(Reticulocalbin 2,RCN2)属于Cab45/Reticulocalbin/ERC45/Calumenin(CREC)蛋白家族,其结构主要包括1个N-末端的信号序列、6个EF-hand结构和1个His-Asp-Glu-Leu(HDEL)羧基末端四肽序列。RCN2可与Ca~(2+)相互结合,维持细胞内Ca~(2+)稳态,从而发挥广泛的免疫调节活性,如参与维持氧化还原稳态、调节细胞周期及凝血过程等生理活动,尤其与某些疾病的恶性转化相关。本文就RCN2的结构与功能及其在恶性肿瘤、心血管疾病、骨质疏松及肌少症中作用的研究进展作一综述。

    2022年01期 v.35 123-128页 [查看摘要][在线阅读][下载 1413K]
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