中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

专栏——党为人民谋幸福的100年

  • 创新细菌疫苗的研究进展及挑战

    顾江;曾浩;邹全明;

    细菌疫苗仍然是公共卫生防疫不可或缺的重要科学手段。近年来,医学、生物学、材料学等学科前沿领域的快速发展,不断推动已上市细菌疫苗品种升级优化,以满足人们日益增长的健康需求。与此同时,原创细菌疫苗在异常艰难的探索中取得诸多重大突破,以应对日趋严峻的超级耐药细菌。细菌比病毒颗粒大数10倍,且以独立生命体生存,基因组庞大,可形成芽孢、L形变异体、鞭毛、荚膜等特殊结构,其复杂的构造及高度的进化及繁衍能力,给细菌疫苗研制带来巨大挑战。前沿科学的不断突破与交叉融合,为解决上述挑战带来新的希望。本文对近年来创新细菌疫苗研发取得的突破和面临的挑战作一简要综述。

    2021年09期 v.34 1017-1022页 [查看摘要][在线阅读][下载 651K]
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疫苗研究

  • 流感嗜血杆菌D蛋白作为A群脑膜炎奈瑟菌多糖蛋白结合疫苗蛋白载体的免疫效果评价

    王丽婵;谭亚军;卫辰;张庶民;张华捷;马霄;

    目的对流感嗜血杆菌D蛋白(protein D,PD)作为A群脑膜炎奈瑟菌多糖蛋白结合疫苗蛋白载体的免疫效果进行评价。方法采用CDAP活化法,将PD、破伤风类毒素(tetanus toxin,TT)分别与A群脑膜炎奈瑟菌多糖结合制备结合物;将结合物分别免疫BALB/c小鼠,腹部皮下免疫3次,每次加强免疫前及末次免疫后7 d经眼眶采血,分离血清,间接ELISA法检测抗体水平及亚类,同时在末次免疫后7 d取小鼠脾脏,检测细胞免疫水平。结果 PD与A群多糖结合后能增强抗-多糖抗体的IgG水平,第3次免疫后抗体水平达1∶12 800,显著高于单独多糖组(1∶400)(P <0.05);其脾细胞经多糖及多糖蛋白混合物刺激后,IFNγ和IL-4的斑点形成细胞数量与多糖组比较均升高(P <0.05);但Th1/Th2亚群比值与单独多糖组比较并未增高(P> 0.05),反而显著低于GAMP-TT组和单独PD组(P <0.05)。结论重组PD与A群多糖结合后能够增强多糖的免疫原性,既可提高体液免疫反应能力,又可激发细胞免疫反应,提示PD具备作为A群脑膜炎奈瑟菌多糖蛋白载体的潜力。

    2021年09期 v.34 1023-1027+1032页 [查看摘要][在线阅读][下载 770K]
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  • 肠道病毒71型灭活疫苗体外和体内相对效力试验的相关性

    周振歆;易力;张晗;赵勇;杨骄雪;王丹丹;苗睿;张玉平;董少忠;

    目的评价肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)灭活疫苗体外和体内相对效力试验检测结果的相关性。方法以EV71灭活疫苗上市以后1个自然年内生产的62批EV71灭活疫苗为研究对象,进行体外(抗原含量测定)和体内相对效力试验(ED_(50)效力试验和中和抗体效价检测),并分析62批EV71灭活疫苗的抗原含量与半效稀释倍数、ED_(50)效力、中和抗体效价的相关性及ED_(50)效力与中和抗体效价的相关性。结果抗原含量与半效稀释倍数及中和抗体效价呈良好正相关(P <0.01),ED_(50)效力与中和抗体效价呈显著负相关(P <0.01),抗原含量与ED_(50)效力无相关性(P> 0.05)。结论体外相对效力试验替代体内相对效力试验用于EV71灭活疫苗效力检测具有可行性。

    2021年09期 v.34 1028-1032页 [查看摘要][在线阅读][下载 761K]
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基础研究

  • 猪源副流感病毒5型SH毒株全基因组测序及分析

    姜宁;郭禹汐;李春秋;苏明俊;孔凡志;孙东波;

    目的对猪源副流感病毒5型(parainfluenza virus 5,PIV5)SH毒株进行全基因组测序及分析。方法根据GenBank中登录的猪源PIV5基因组序列设计10对引物,采用RT-PCR法对各片段进行扩增、测序,并对获得的PIV5-SH株全基因组序列进行遗传进化性分析。结果 PIV5-SH毒株基因组长15 246 nt,与传统毒株PIV5-W3A核苷酸序列同源性为98.7%。基于全基因组构建的遗传进化树显示,PIV5-SH毒株与韩国犬源PIV5(1168-1)、中国孟加拉虎源PIV5(PIV5-HMZ)、中国东北虎源PIV5(PIV5-SR)及中国小熊猫源PIV5(ZJQ-221)具有较近的亲缘关系,与传统毒株W3A亲缘关系较远。进一步以PIV5 NP、F及HN基因构建遗传进化树显示,PIV5-SH毒株与PIV5 1168-1、PIV5-HMZ、PIV5-SR、PIV5 ZIQ-221和PIV5-CAN毒株亲缘关系近。结论 PIV5不同分离株基因差异较小,表现出一定的遗传稳定性。

    2021年09期 v.34 1033-1038页 [查看摘要][在线阅读][下载 1015K]
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  • 无血清悬浮培养MDCK-siat7e细胞的传代稳定性

    张生琰;吴元元;孙燕;刘鹏;孙振鹏;王革;李薇;

    目的研究连续传代的犬肾上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞MDCK-siat7e的传代稳定性。方法复苏工作细胞库,连续传45代,比较不同代次(0、7、17、28、45代)MDCK-siat7e细胞生长4 d的形态、0~9 d的生长曲线及比生长速率(μ)、葡萄糖比消耗率[Qi(Gluc)_(24 h)]、乳酸比生成率[Qi(Lac)_(24 h)]、氨比生成率[Qi(NH4~+)_(24 h)]。采用q RT-PCR法检测不同代次MDCK-siat7e细胞中siat7e基因的表达量。采用裸鼠体内接种法检测连续传代至第45代的MDCK-siat7e细胞的成瘤性;采用细胞裂解物裸鼠体内接种法和细胞DNA裸鼠体内接种法检测连续传代至第45代的MDCK-siat7e细胞的致瘤性。结果 5个不同代次的MDCK-siat7e细胞在培养4 d时均呈圆形,细胞边缘清晰,均匀分散于培养液中,无聚团现象,呈悬浮生长状态,生长状态良好。不同代次MDCK-siat7e细胞的μ、Qi(Gluc)_(24 h)、Qi(Lac)_(24 h)及Qi(NH4~+)_(24 h)差异均无统计学意义(P>0.05)。不同代次MDCK-siat7e细胞siat7e基因表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。连续传代至第45代的MDCK-siat7e细胞无明显的致瘤性。结论 MDCK-siat7e细胞连续传代至45代时,细胞形态基本保持一致,目的基因稳定,无致瘤性。

    2021年09期 v.34 1039-1043页 [查看摘要][在线阅读][下载 944K]
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  • 1,25-二羟维生素D_3对川崎病患儿T细胞Wnt信号通路的影响

    尚晓麟;孟瑞荣;王颖;

    目的研究1,25-二羟维生素D_3[1,25(OH)_2D_3]对T细胞的增殖作用及其对Wnt信号通路的影响。方法分离川崎病患儿外周血T细胞,用不同浓度(0、10~(-1)、10~(-2)、10~(-3)、10~(-4)和10~(-5)μmol/L)1,25(OH)_2D_3作用于T细胞,MTT法检测细胞增殖情况,确定对T细胞生长抑制的最佳浓度。用10~(-3)μmol/L 1,25(OH)_2D_3分别作用于T细胞30和60 min后,Western blot法检测Wnt和β-catenin的表达,PCR法检测miR-154的表达。结果 10~(-3)μmol/L的1,25(OH)_2D_3对T细胞增殖抑制作用最强。1,25(OH)_2D_3作用T细胞30、60 min后,Wnt、β-catenin和miR-154的表达量均明显降低(P<0.05)。结论 1,25(OH)_2D_3作用于T细胞过程中,Wnt通路及miR-154参与刺激T细胞增殖。

    2021年09期 v.34 1044-1046+1055页 [查看摘要][在线阅读][下载 936K]
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  • CXC亚家族趋化因子13在乳腺癌组织中表达及其调控网络的生物信息学分析

    李英蕊;李琴;解军;冯皓楠;郭璇;傅松涛;

    目的通过生物信息学方法分析CXC亚家族趋化因子13(CXC subfamily chemokine 13,CXCL13)在乳腺癌组织中的表达及其调控网络。方法利用多种在线数据库分析CXCL13在乳腺癌组织中的表达、基因变化及相关的功能网络,筛选CXCL13相关的差异表达基因,进行基因本体论及京都基因与基因组百科全书信号通路分析,同时分析CXCL13正相关基因集在乳腺癌中的激酶、转录因子及miRNA类型的靶点网络。结果 CXCL13在乳腺癌组织中过表达(P <0.01);扩增是CXCL13在乳腺癌中最常见的突变类型;CXCL13基因的变化对G蛋白偶联受体的激活、信号传递及T细胞激活等多个过程具有深远的影响;CXCL13与几种肿瘤相关激酶(如FYN)、转录因子(如NF-κB)及miRNA(如miRNA-146a)特异相关。结论 CXCL13可能是乳腺癌治疗中一个潜在的靶点,为进一步研究CXCL13在肿瘤发生中的作用奠定了基础。

    2021年09期 v.34 1056-1061页 [查看摘要][在线阅读][下载 1054K]
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  • 短发夹RNA沉默丝裂原活化蛋白激酶1对胃癌细胞生物学表型的影响及其分子机制

    王转兄;宋耀辉;杜正平;陈熙;顾静;李海龙;

    目的探讨短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1)对胃癌细胞生物学表型的影响及其分子机制。方法 SGC-7901和HGC-27细胞按MOI=20分别感染慢病毒LV-sh-MAPK1、LV-sh-Ctrl(分别为两种细胞的试验组及阴性对照组)。RT-qPCR及Western blot法检测SGC-7901及HGC-27细胞中MAPK1的沉默效果,MTT法检测细胞的增殖能力,细胞划痕愈合试验和Transwell小室试验检测细胞的迁移能力,Transwell小室试验检测细胞的侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,Western blot检测细胞周期及凋亡相关信号因子的表达情况。结果与阴性对照组比较,试验组细胞中MAPK1基因m RNA及蛋白表达水平均显著降低(P <0.01);细胞增殖、侵袭、迁移能力均显著降低(P <0.01);凋亡率显著增加(P <0.01),且细胞阻滞于G1期;CDK6、Bax、Caspase 3、C-Caspase 3、Caspase 9、C-Caspase 9的表达水平明显上调(P <0.01),CDK1、CCNB1、Bcl-2表达水平明显下调(P <0.01)。结论沉默MAPK1可抑制人胃癌细胞的增殖、侵袭、迁移能力,促进细胞凋亡,并将其阻滞在G1期。

    2021年09期 v.34 1047-1055页 [查看摘要][在线阅读][下载 1286K]
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治疗制剂

  • 二甲双胍抑制PI3K-AKT-mTOR信号通路对四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤的影响

    牛艳邦;王晓玲;陈晨;任益凡;张海利;董胜利;

    目的探讨二甲双胍通过抑制PI3K-AKT-mTOR信号通路对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCL4)诱导的小鼠急性肝损伤的影响。方法将18只C57BL/6小鼠随机分为3组:正常对照组、CCL4模型组和CCL4模型+二甲双胍干预组,每组6只。模型组和模型+干预组经腹腔注射40%CCL4(5 mL/kg)构建小鼠急性肝损伤模型,正常对照组给予等量生理盐水,造模前干预组经腹腔注射二甲双胍(溶于生理盐水,按照小鼠体重400 mg/kg剂量血清给药)预先处理6 h,其余两组给予等量生理盐水。给药18 h后,检测小鼠血清转氨酶ALT、AST水平;称量小鼠肝重和体重,计算肝重体重比;采用石蜡包埋肝组织制备切片,HE染色观察小鼠肝脏的病理变化;ELISA和RT-qPCR检测小鼠肝组织中炎症因子IL-6、IL-10、TNF-α蛋白及基因mRNA水平;Western blot检测小鼠肝组织中PI3K-AKT-mTOR信号通路相关蛋白PI3K、AKT、mTOR磷酸化水平,以及Th17细胞和Treg细胞转录因子ROR-γt、Foxp3蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组小鼠血清转氨酶AL和T、AST、肝重体重比及肝脏炎症因子(IL-6、TNF-α、IL-10)表达水平显著升高(P <0.05);大量肝细胞气球样变性坏死及肝组织炎症浸润;肝组织中PI3K、AKT、mTOR蛋白磷酸化水平、ROR-γt和Foxp3蛋白表达均显著升高(P <0.05)。模型+干预组与模型组相比,血清转氨酶、肝重体重比均显著下降;肝细胞变性坏死及炎症浸润显著减轻;肝组织中促炎因子(IL-6、TNF-α)的表达水平降低,而抗炎因子IL-10的表达水平升高;肝组织中PI3K、AKT、mTOR蛋白的磷酸化水平、ROR-γt蛋白表达水平均有所下降,Foxp3蛋白表达水平升高(P <0.05)。结论二甲双胍可通过抑制PI3K-AKT-mTOR信号通路减轻CCL4诱导的小鼠急性肝损伤。

    2021年09期 v.34 1062-1068+1075页 [查看摘要][在线阅读][下载 1220K]
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诊断制剂

  • 第二代肠道病毒71型(EV71)抗原国家标准品的建立

    高帆;卞莲莲;吴星;么山山;王一平;毛群颖;梁争论;

    目的建立第二代肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)抗原国家标准品,用于体外效力(EV71抗原含量)质量控制。方法选取与第一代EV71抗原国家标准品相同来源的原料和冻干方法制备候选标准品(CS),经均匀性和稳定性考核合格后,分发给4个实验室,以EV71抗原国际标准品(WHO IS)和第一代EV71抗原国家标准品(NS)为标准进行协作标定及适用性研究。结果 CS与WHO IS及CS与NS均具有良好的平行性和线性。以WHO IS为标准时,CS检测的平均值为2 316 IU/mL,实验室内CV为4.3%~9.3%,实验室间CV为7.1%,95%置信区间为2 229~2 403 IU/mL;以NS为标准时,CS检测平均值为2 437 U/mL,实验室内CV为3.9%~10.7%,实验室间CV为5.3%,95%置信区间为2 355~2 519 U/mL。以CS为标准检测各企业生产的EV71收获液、原液和疫苗均具有较好的平行性和线性,且准确率均位于90%~110%之间。在2~8和37℃放置56 d,CS抗原含量稳定;CS复溶后置2~8℃保存7 d或-20℃反复冻融5次,抗原含量残留率均未超过90%~110%。结论建立了第二代EV71抗原国家标准品,赋值2 320 IU/mL(相当于2 440 U/mL)。

    2021年09期 v.34 1069-1075页 [查看摘要][在线阅读][下载 1111K]
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临床研究

  • 上海市闵行区2015—2018年校园水痘聚集性疫情流行病学特征分析及不同应急接种方案效果

    吴晓婷;汪曦;梅克雯;张莉萍;陆佳;

    目的分析上海市闵行区2015—2018年校园水痘聚集性疫情的流行病学特征及不同应急接种方案效果,为今后校园水痘聚集性疫情的防控提供参考。方法收集整理闵行区2015—2018年校园水痘聚集性疫情及病例的相关资料,对其流行病学特征进行描述性分析,并对防控校园水痘聚集性疫情的不同应急接种方案效果进行评价。结果 2015—2018年,闵行区校园共报告发生水痘聚集性疫情132起,报告病例总数为1 371例,其疫情主要发生在秋冬季节(9月—次年1月),其次为春季(每年的3—5月);托幼机构和小学是校园水痘聚集性疫情的高发机构;84.39%的病例为水痘突破病例,其中小学水痘突破病例占比最高。接报1例水痘病例时开展水痘疫苗应急接种方案可有效缩短水痘聚集性疫情平均持续时间。结论闵行区秋冬季校园水痘聚集性疫情形势严峻,托幼机构和小学是水痘聚集性疫情的高发场所,水痘突破病例占比较高。应加强秋冬季校园、特别是托幼机构和小学水痘聚集性疫情的防控,密切接触人群及早进行水痘疫苗应急接种,能有效控制疫情蔓延范围,缩短疫情持续时间。

    2021年09期 v.34 1076-1079+1084页 [查看摘要][在线阅读][下载 1119K]
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  • 子痫前期患者胎盘组织中骨保护素和肿瘤坏死因子-α的表达及其与疾病发展的相关性

    周向东;黄苗苗;朱凯恒;张英;

    目的探讨子痫前期(preeclampsia,PE)患者胎盘组织中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达及其与疾病发展的相关性。方法通过qRT-PCR、Western blot和免疫组化法检测60例PE患者(试验组)和36例正常妊娠女性(对照组)胎盘组织中OPG和TNF-α基因mRNA及蛋白表达水平,并分析其与疾病发展的相关性。结果 PE患者胎盘组织中OPG基因mRNA及蛋白表达水平显著低于对照组(P <0.05),而TNF-α基因mRNA及蛋白表达水平则显著高于对照组(P <0.05);OPG与TNF-α蛋白在PE患者胎盘组织中的表达呈负相关(rs=-0.702,P <0.05)。结论 PE患者胎盘组织中OPG表达下调,TNF-α表达上调,二者表达呈负相关性。本研究为阐明PE的发病机制及探讨诊断和预后指标提供了实验依据。

    2021年09期 v.34 1080-1084页 [查看摘要][在线阅读][下载 1179K]
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  • 赤峰市5 073名暴露者接种冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的不良反应分析

    李小东;马俊清;石汉杰;李欣;薄祎凡;李澄;

    目的分析赤峰市5 073名暴露者接种冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)后的不良反应。方法选取2018年4月—2019年4月期间赤峰市13个旗县5 073名狂犬病暴露者作为研究对象,收集接种冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)后发热、乏力、接种部位红肿热痛等不良反应的发生情况,数据采用卡方检验进行统计分析。结果 5 073名暴露者接种冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)后,共发生715例(占14.09%)不良反应,共接种21 823剂次,发生不良反应963例次,发生率为4.41%。不良反应以一般反应为主,主要表现为发热和接种部位红肿热痛;异常反应发生数较少,主要为过敏性皮疹。不良反应主要发生在0~10岁年龄组,发生率为20.61%,显著高于其他年龄组(P <0.001)。接种第1针次后共发生711例次不良反应,占比14.01%,显著高于其他针次(P <0.001)。结论5 073名暴露者接种冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)后,以发热及接种部位的红肿热痛为主要不良反应,应着重观察和随访第1针次免疫后的儿童群体,降低不良反应给患者带来的伤害及风险。

    2021年09期 v.34 1085-1087+1099页 [查看摘要][在线阅读][下载 1173K]
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技术方法

  • 多糖疫苗中十六烷基三甲基溴化铵和去氧胆酸残留量液相色谱串联质谱检测方法的建立及验证

    李茂光;龙珍;陈琼;李月琪;许美凤;王春娥;李亚南;叶强;

    目的建立多糖疫苗中十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyltrimethyl ammonium bromide,CTAB)和去氧胆酸(deoxycholic acid,OBA)残留量的液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测方法,并进行验证。方法建立以Kinetex色谱柱C18(2.1 mm×50 mm,2.6μm)为固定相,5 mmol/L甲酸铵、乙腈为流动相的LC-MS/MS法,并验证方法的线性范围、精密性、准确度、检出限及定量限。采用建立的方法检测23批肺炎球菌多糖(1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17A、18C、19A、19F、20、22F、23F和33F)、3批b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)粗糖和精糖、3批A、C、Y、W135群脑膜炎球菌粗糖和精糖中CTAB及OBA残留量。结果 CTAB浓度在1.56~50μg/L范围时,与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=133 056 X-290 15,R~2=0.999 9;OBA浓度在6.25~100μg/L范围时,与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=250.5 X-59.1,R~2=0.999 7;OBA及CTAB对照品6次重复进样检测的保留时间和峰面积RSD均<2%;OBA和CTAB加标回收率均在91.8%~103.5%之间;OBA的检出限为1.02μg/L,定量限为2.04μg/L,CTAB的定量限为1.56μg/L。4、9N、9V和15B型肺炎球菌多糖无明显CTAB检出,其他血清型均有不同程度检出;大部分血清型肺炎球菌多糖中无明显OBA检出。3批A、C、Y、W135脑膜炎球菌粗糖中CTAB残留量为112.40~1 709.60μg/L,对应批次精糖中CTAB残留量为0.08~43.20μg/L。3批Hib粗糖中CTAB残留量分别为1 265.10、1 189.00和1 513.30μg/L,对应批次精糖中CTAB残留量分别为6.50、166.60、6.65μg/L。结论建立了多糖疫苗中CTAB和OBA的LC-MS/MS检测方法,该方法具有良好的精密性及准确度,可用于多糖疫苗及多糖结合疫苗中CTAB和OBA残留量的检测。

    2021年09期 v.34 1088-1093页 [查看摘要][在线阅读][下载 1224K]
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  • 疫苗中铝含量紫外分光光度测定法的建立及验证

    王平;张学峰;陈美丽;冯帆;邵帅;刘梅影;

    目的建立疫苗中铝含量的紫外分光光度测定法,并进行验证。方法采用Tiron试剂衍生氯化铝,紫外分光光度法进行检测,筛选方法的最佳检测波长,并绘制标准曲线。同时采用氢氧化铝标准溶液优化样品处理方法中的干烤温度(120、140、160、180、200、220℃)及1 mol/L盐酸加入量(10、20、50、100、200、300、400和500μL)。对建立的方法进行准确性、精密性及专属性验证。应用建立方法检测含铝佐剂疫苗中铝含量,并与传统滴定法进行比较。结果确定衍生物的检测波长为310 nm。氯化铝标准品在1~10μg/mL范围内,与A310呈良好的线性关系,回归方程为Y=0.009 41 X+0.009 97,R=0.998 29。样品处理最适干烤温度为200℃,1 mol/L盐酸最适加入量为50μL。氯化铝的加样回收率在100.36%~108.40%之间;重复性及中间精密性RSD均<6%;非佐剂疫苗成分、硫柳汞溶液和磷酸缓冲盐溶液对测定无干扰。氢氧化铝佐剂、百白破疫苗与实验用乙型肝炎疫苗铝含量紫外分光光度法与传统滴定法测定结果差异较小;实验用流感病毒裂解疫苗(佐剂)单支检测9支均值与滴定法结果一致。结论紫外分光光度法具有良好的准确性和精密性,且操作简便、安全,避免了人为因素干扰,实现了单支疫苗的铝含量检测,为研发过程中铝佐剂制备工艺、抗原吸附工艺和分装工艺优化提供了有效的监测手段。

    2021年09期 v.34 1094-1099页 [查看摘要][在线阅读][下载 1249K]
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  • 无血清悬浮MDCK细胞培养流感病毒纯化工艺的初步建立

    刘丽;郭骐源;郝建丽;郭丹丹;张雪梅;吴业红;

    目的建立无血清悬浮MDCK细胞培养流感病毒的下游纯化工艺。方法采用40 L反应器,收获无血清悬浮MDCK细胞培养的流感病毒,经澄清浓缩后,添加不同终浓度(1、10、30、50 U/mL)的Benzonase~?核酸酶,置37℃酶解不同时间(2、4、6、8 h),优化核酸酶去除细胞残留DNA的条件。采用两步层析法,探讨不同线性流速(60、150、300 cm/h)和上样缓冲液盐离子浓度(150、500、1 000 mmol/L)对复合介质纯化效果的影响;探讨不同线性流速(60、150、300 cm/h)对离子层析介质纯化效果的影响。根据确定的参数进行3批次纯化工艺样品的检测。结果病毒浓缩液经10 U/mL Benzonase~?核酸酶37℃酶解6 h后,DNA去除率即可达99%以上。确定复合介质的流速为60 cm/h,上样缓冲液组成为150 mmol/L NaCl+50 mmol/L Tris,pH 7.4,确定离子交换介质流速为150 cm/h。3批纯化工艺样品去除了99.94%的宿主细胞残留蛋白和99.99%的残留DNA,残留DNA达欧盟标准,不高于10 ng/剂。结论初步建立了无血清悬浮MDCK细胞流感疫苗的下游纯化工艺。

    2021年09期 v.34 1100-1104+1110页 [查看摘要][在线阅读][下载 1279K]
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  • 人凝血因子Ⅷ制品中聚山梨酯80残留量高效液相色谱-电喷雾检测器检测方法的建立及验证

    邵天舒;丁锐;周长明;郭雷;

    目的建立人凝血因子Ⅷ制品中聚山梨酯80残留量的高效液相色谱(HPLC)-电喷雾检测器(charged aerosol detection,CAD)检测方法,并进行验证及初步应用。方法采用反相-离子交换混合色谱柱Oasis MAX(2.1 mm×20 mm,30μm),流动相A为含2%(V/V)甲酸的异丙醇∶水(20∶80)溶液,流动相B为含2%(V/V)甲酸的异丙醇溶液,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,进样量为30μL,梯度洗脱,检测人凝血因子Ⅷ中聚山梨酯80残留量。验证方法的系统适用性、线性范围、检测限、定量限、重复性、稳定性及准确性,并与HPLC-蒸发光散射检测器(evaporative light scattering detector,ELSD)检测法进行比较。应用建立的HPLC-CAD方法检测10批人凝血因子Ⅷ样品中聚山梨酯80残留量。结果聚山梨酯80与其他组分色谱峰分离度良好,无其他色谱峰干扰。经HPLC-CAD检测,聚山梨酯80标准品在12.8~256.3μg/mL浓度范围内线性关系良好,回归方程y=121.42 x+1.321 7,r=0.998 0;定量限约为3.20μg/mL,检测限约为1.07μg/mL;供试品溶液重复检测6次聚山梨酯80含量的RSD为0.86%;供试品溶液室温放置0、2、4、6、8及10 h聚山梨酯80含量的RSD为0.65%;浓度为32.8、41.0及49.2μg/mL的加标样品回收率为96.85%~101.49%;该方法的定量限、检测限、重复性、稳定性、准确性指标均优于HPLC-ELSD。10批样品中聚山梨酯80残留量在56.09~66.75μg/mL,均符合《中国药典》三部(2015版)要求(≤100μg/mL)。结论成功建立了检测人凝血因子Ⅷ制品中聚山梨酯80残留量的HPLC-CAD法,该方法重复性、稳定性及准确性良好,可用于检测人凝血因子Ⅷ制品中聚山梨酯80残留量。

    2021年09期 v.34 1105-1110页 [查看摘要][在线阅读][下载 1292K]
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  • 重组蛋白中吐温80含量硫氰酸铵钴显色检测法的改进及验证

    庞丽然;贺丞;杜力;刘国芳;

    目的改进重组蛋白中吐温80含量的硫氰酸铵钴显色检测方法,并进行验证。方法将《中国药典》四部(2020版)中收录的吐温80含量检测方法,即硫氰酸钴铵比色法中的二氯甲烷调整为4.00 g,硫氰钴铵溶液浓度提高3倍,并对改进后的方法进行专属性、线性范围、定量限、重复性、日间精密性、准确性验证。采用该方法检测3批重组人源抗hTNF-α单克隆抗体注射液中吐温80的含量。结果改进的方法具有良好的专属性;吐温80标准品浓度在0~400μg/mL范围内与A620呈良好的线性关系,回归方程为y=0.000 6 x-0.003 4,R~2=0.999;重复性及日间精密性RSD均<5%;定量限为22.69μg/mL;加入80、180、320μg吐温80标准品的加样回收率分别为100.00%、98.77%、99.31%。3批重组人源抗hTNF-α单克隆抗体注射液中吐温80含量分别为0.95、1.00、1.02 mg/mL。结论改进后的硫氰酸铵钴显色法具有良好的专属性、精密性及准确性,可用于重组人源抗hTNF-α单克隆抗体注射液中吐温80含量的检测。本研究为其他重组蛋白中吐温80含量的检测提供了实验依据。

    2021年09期 v.34 1111-1113+1119页 [查看摘要][在线阅读][下载 1262K]
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综述

  • 人源化单克隆抗体的研究进展

    周永飞;杨敬鹏;常军亮;曹玉锋;

    人源化单克隆抗体目前在肿瘤、自身免疫病、抗病毒等多个治疗领域发挥着越来越重要的作用。截止目前,FDA已有50多种人源化抗体药物获批上市,人源化抗体为人类疾病的治疗提供了广阔的思路。抗体人源化技术包括嵌合抗体技术、人源化抗体技术和全人源抗体技术,并随之衍生出单链抗体、双特异性抗体、纳米抗体等多种形式的小分子人源化单克隆抗体。本文对人源化单克隆抗体技术及人源化抗体的发展形势作一综述。

    2021年09期 v.34 1114-1119页 [查看摘要][在线阅读][下载 1352K]
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  • 鼠疫疫苗的临床应用及研究进展

    魏东;王国治;赵爱华;

    鼠疫是一种烈性传染病,具有高度的传染性和致病性,免疫接种是预防鼠疫的重要措施之一。目前使用的鼠疫疫苗主要是减毒活疫苗,近期开展临床研究的疫苗主要是亚单位疫苗。本文就鼠疫减毒活疫苗的临床应用及鼠疫亚单位疫苗的临床研究进展作一综述,以期为新疫苗的研制提供参考。

    2021年09期 v.34 1120-1125页 [查看摘要][在线阅读][下载 1295K]
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  • 原代细胞在人用狂犬病疫苗中的应用及研究进展

    石磊泰;李玉华;

    原代细胞直接来源于动物,保留了其来源组织的特性,不具有致瘤特性。原代细胞仅使用简单的培养基和牛血清即可实现工业化生产,而且通常对多种病毒具有广泛的敏感性。但原代细胞也有不足:操作过程中污染的风险高;不同来源的动物质量不稳定;虽然非人类灵长类动物的细胞培养在过去被广泛使用,但其在某些国家和地区已越来越难以获得,而且有时使用这些动物需证明是符合要求的。我国使用原代地鼠肾细胞生产的人用狂犬病疫苗预防狂犬病已有半个世纪的历史,目前该类疫苗仍在我国疫苗市场流通,为我国狂犬病的预防和控制发挥着积极的作用。本文就原代细胞在人用狂犬病疫苗中的应用及研究进展作一综述。

    2021年09期 v.34 1126-1131页 [查看摘要][在线阅读][下载 1241K]
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  • Toll样受体激动剂佐剂的研究进展

    年悬悬;李军英;张家友;杨晓明;

    新型佐剂对于新疫苗的研发至关重要。Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)激动剂能诱导天然免疫和适应性免疫应答,可作为疫苗佐剂用于新型或者传统疫苗的研发,并可用于复杂疾病的治疗,如癌症、艾滋病或疟疾等。TLR是跨膜受体,主要由天然免疫细胞表达,分为细胞表面TLR(TLR1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR6)和细胞内TLR(TLR3、TLR7、TLR8、TLR9)。TLR激动剂作为佐剂,可提供危险信号以诱导有效的免疫反应从而产生免疫保护效应。本文就TLR激动剂诱导的信号通路以及其作为疫苗佐剂的应用作一综述。

    2021年09期 v.34 1132-1138页 [查看摘要][在线阅读][下载 1387K]
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专题报道

  • 国外新型冠状病毒变异株疫苗研发与评价技术要求的比较与分析

    徐莉;郭胜楠;郭占东;李敏;

    <正>目前,新冠疫情仍在持续流行,且新型冠状病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2)仍在不断变异[1-4]。其中,病毒基因序列的突变组合可导致病毒的传播力、致病力和/或免疫原性等发生明显改变[5-8]。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)对病毒变异株进行了分类,满足以下条件之一的毒株定义为"关切变异株"(variant of concern,VOC):流行病学上传播力增强或流行特点出现有害变化,致病力增强或临床表现趋重;

    2021年09期 v.34 1139-1143页 [查看摘要][在线阅读][下载 1277K]
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  • 《中国生物制品学杂志》稿约

    <正>《中国生物制品学杂志》于1988年创刊,主要报道我国生物制品科技成果及相关行业国内外研究现状和发展动态。本刊为月刊,由国家卫生健康委员会主管,中华预防医学会和长春生物制品研究所主办。1刊载内容和设置栏目主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床医学等方面的研究、生产、使用及质控类学术文章,并兼顾重大学术交流活动的报道。在选择来稿时注重学术性、前沿性和实用性。

    2021年09期 v.34 1144页 [查看摘要][在线阅读][下载 993K]
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