中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 单纯疱疹病毒2型表面糖蛋白D亚单位疫苗免疫佐剂的筛选及免疫方案优化

    徐亭亭;齐永;潘英;李素芹;陈红霞;李佳萌;杨彬彬;尹琼;邵银秀;郭峻;罗霄;李越希;

    目的筛选单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)表面糖蛋白(glycoprotein)D2(g D2)亚单位疫苗的免疫佐剂,对免疫剂量、免疫次数等免疫方案进行优化。方法使用Alum佐剂、Poly I:C佐剂及Alum+Poly I:C混合佐剂,分别配伍不同剂量(2、5、10μg)的gD2蛋白,共制成9种注射制剂,经后腿肌肉注射免疫9组雌性BALB/c小鼠,分别于初次免疫后第28和42天各加强免疫1次,于初次免疫后28 d及第2、3次免疫后14 d,经眼眶静脉窦取血,分离血清,ELISA法检测特异性抗g D2抗体效价;脱颈椎处死小鼠,分离研磨脾脏后,获得脾细胞,加入gD2抗原刺激培养71 h后,收集细胞上清,应用CBA试剂盒测定细胞因子(IL-2、IFNγ、TNF-α)浓度;确定最佳免疫方案。结果初次免疫后28 d,各组总抗体效价偏低,混合佐剂(Alum+Poly I:C)配伍10μg抗原组小鼠血清抗体效价最高,但动物个体差异大。第2次免疫后14 d,各组小鼠血清抗体效价较第1次免疫显著增高;佐剂及抗原剂量对抗体效价影响显著,其中Poly I:C佐剂配伍10μg抗原组小鼠抗体效价及细胞因子分泌水平综合最高。末次免疫后14 d,小鼠血清中抗体效价较第2次免疫再次升高,动物个体间效价差异缩小,混合佐剂组效价最高;各组细胞因子分泌水平较第2次免疫略有增高,混合佐剂配伍2μg抗原组分泌高水平的IL-2、IFNγ、TNF-α。结论小鼠免疫模型中,使用Alum+Poly I:C混合佐剂较使用任一单独佐剂可产生最佳免疫效果,最佳免疫组为混合佐剂配伍2μg抗原组,最佳免疫次数为3次,第1和2次免疫间隔28 d,第2和第3次免疫间隔14 d,最佳免疫剂量为2μg/只小鼠。

    2018年07期 v.31 689-694页 [查看摘要][在线阅读][下载 308K]
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  • 猪弓形虫重组卡介苗的构建及其免疫保护性

    于艳辉;杨升;姜鑫;信彩岩;李显赫;王伟荣;李建华;张西臣;宫鹏涛;

    目的构建弓形虫Rhomboid基因和猪IL-2基因的重组卡介苗(BCG),并分析其免疫保护效果。方法应用RT-PCR技术分别扩增弓形虫Rhomboid基因和猪IL-2基因,克隆至p MD18-T载体中,双酶切鉴定及测序正确后,将弓形虫Rhomboid基因和猪IL-2基因串联后分别连接至穿梭表达载体pMV261和整合表达载体pMV361中,电转化BCG,制备重组BCG pMV261-IL-2-Rho和pMV361-IL-2-Rho。分别经颈部肌肉注射免疫猪,共3次,每次间隔2周,免疫剂量均为108 CFU/只,采用ELISA法检测免疫前后猪体内抗体(IgG)滴度、Th1型及Th2型细胞因子的变化情况;第3次免疫后2周通过腹腔注射的方式接种弓形虫China I株速殖子1×108个/只进行攻虫试验,观察重组BCG对猪的免疫保护效果。结果成功构建了重组BCG p MV261-IL-2-Rho和p MV361-IL-2-Rho。重组BCG免疫猪后,随着免疫次数的增加,血清中抗体滴度也逐渐升高,且与PBS对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。3次免疫后,pMV261-IL-2-Rho组血清Th1型细胞因子IL-2、IFNγ和IL-12的表达水平均明显提高,与PBS对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),而pMV361-IL-2-Rho组血清IL-2、IFNγ和IL-12的水平虽略有升高,但与PBS对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);各组在免疫过程中Th2型细胞因子IL-4水平均未发生明显变化。攻虫后各组猪出现精神沉郁,食欲下降,体温升高等症状,耐过发病期后的猪,食欲逐渐恢复,体温渐趋正常,各种症状减轻,且各组猪在攻虫后20 d均无死亡。结论构建的基因重组BCG pMV261-IL-2-Rho对猪弓形虫感染具有一定的免疫保护作用。

    2018年07期 v.31 695-700+707页 [查看摘要][在线阅读][下载 384K]
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基础研究

  • 汉坦病毒76-118株假病毒的构建及其在中和试验中的应用

    李燕;邱野;孙宏亮;郝建丽;安继新;姜崴;李玉华;

    目的构建含有汉坦病毒76-118株包膜蛋白的假病毒,并初步探讨双价肾综合征出血热(hemorrhagic fever wiht renal syndrome,HFRS)灭活疫苗效价检测的新方法。方法提取汉坦病毒76-118株病毒RNA,PCR扩增获得M基因,将其插入真核表达质粒,获得重组表达质粒Pc DNA3.1-M。将质粒Pc DNA3.1-M与HIV假病毒构建体系DMEM 1、Lenti-HG和HG transgene reagent瞬时共转染Vero-E6细胞,48 h后,收集假病毒上清,对其滴度、单轮感染性、蛋白量及中和活性进行检测,并应用于双价HFRS灭活疫苗抗血清的检测。结果质粒Pc DNA3.1-M经酶切及测序鉴定证明构建正确。假病毒对Vero-E6细胞的感染性滴度为8×10~7 TU/mL,能被76-118株抗血清中和,从而失去感染性,其中和活性与野生型病毒一致。基于假病毒的效价检测方法对效价合格血清进行再检测时结果均达到了预期要求。结论构建了含有汉坦病毒76-118株包膜蛋白的假病毒,构建的假病毒可以应用于中和试验,并与野生病毒的检测结果具有高度相关性,为下一步检测双价HFRS灭活疫苗的效价提供了可能。

    2018年07期 v.31 701-707页 [查看摘要][在线阅读][下载 452K]
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  • 轮状病毒UK株NSP1蛋白对人源宿主细胞干扰素调节因子3的影响

    冉旭华;刘阳阳;曹思;张峣;闻晓波;

    目的探讨轮状病毒UK株NSP1蛋白对人源宿主细胞干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)的影响。方法将UK毒株感染人结肠腺癌细胞Caco-2 6、12、24 h后,通过实时定量PCR和Western blot检测细胞内源性IRF3在转录水平和蛋白水平的变化;构建质粒pCMV-3×FLAG-UK-NSP1和缺失IRF3结合结构域的质粒pCMV-3×FLAG-UK-NSP1△IRF3,分别单独转染及与p EGFP-N3-IRF3质粒共转染293T细胞4、8、12 h后,Western blot分析IRF3蛋白含量的变化。结果 IRF3 m RNA转录水平无明显变化,UK毒株感染组和NSP1质粒转染组IRF3蛋白含量均下降。结论 UK-NSP1能够介导人IRF3蛋白降解,且需要IRF3结合结构域参与。

    2018年07期 v.31 708-712页 [查看摘要][在线阅读][下载 306K]
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  • 丝氨酸-苏氨酸激酶11基因沉默对人前列腺癌RWPE-1细胞侵袭及迁移能力的影响及其作用机制

    邓玮;唐鸿;吕玉宇;

    目的探讨丝氨酸-苏氨酸激酶11(liver kinase B1/serine-threonine kinase 11,LKB1)基因沉默对人前列腺癌RWPE-1细胞侵袭及迁移能力的影响及其作用机制。方法将质粒LKB1-sh RNA1及sh NC分别转染至RWPE-1细胞中,同时设空白对照组(未转染),经G418筛选出稳定表达细胞株。RT-PCR及Western blot法检测RWPE-1细胞中LKB1基因mRNA转录及蛋白表达水平;划痕试验及Transwell小室试验分别检测LKB1基因沉默对RWPE-1细胞迁移及侵袭能力的影响;RT-PCR及Western blot法检测RWPE-1细胞中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)及MMP-9基因mRNA转录及蛋白的表达水平。结果与sh NC组及空白对照组比较,LKB1-shRNA1组RWPE-1细胞中LKB1基因mRNA转录及蛋白表达水平明显降低(P<0.001);细胞划痕愈合能力及侵袭细胞数明显升高(P<0.001);TGF-β1、MMP-2及MMP-9基因mRNA转录及蛋白表达水平均明显上升(P<0.01)。结论 LKB1基因沉默可显著提高RWPE-1细胞的转移及侵袭能力,可能是通过上调TGF-β1、MMP-2及MMP-9表达水平产生作用的。

    2018年07期 v.31 713-717+722页 [查看摘要][在线阅读][下载 457K]
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  • 脱氧核糖核酸酶1类似物3基因表达与肝癌临床病理特征及预后的相关性

    瞿兵;陈鹏飞;李希平;

    目的探讨脱氧核糖核酸酶1类似物3(deoxyribonuclease 1 like 3,DNASE1L3)基因表达与肝癌临床病理特征及预后的相关性。方法收集NCBI(National Center for Biotechnology Information)GEO(Gene Expression Omnibus)公共数据库的225份肝癌组织样本基因表达谱数据集,将探针信号强度以2为底的对数值作为DNASE1L3的相对表达量,≥5为高表达组,<5为低表达组。对样本的基因表达谱数据及对应的患者临床数据进行病理指标的回顾性分析和预后情况分析;通过基因集富集方法分析DNASE1L3表达相关的肿瘤基因集。结果与DNASE1L3高表达组比较,低表达组样本中甲胎蛋白(AFP)含量较高(P=0.001),肿瘤体积较大(P=0.009),美国癌症联合委员会(AJCC)和国际抗癌联盟(UICC)共同建立的肿瘤分期体系(TNM)分期(P<0.001)、巴塞罗那临床肝癌评分系统(BCLC)分期(P=0.043)、意大利肝癌小组评分体系(CLIP)分期(P=0.010)均较差,且更易发生转移(P<0.001);DNASE1L3低表达组患者的预后明显差于高表达组(P=0.007,HR:1.807,95%CI:1.175~2.779);DNASE1L3低表达组可富集到组蛋白结合、微管运动、组蛋白激酶活性等多个肿瘤相关基因集,但高表达组未富集到肿瘤相关基因集。结论 DNASE1L3基因表达与肝癌临床病理特征及预后相关,其低表达是肝癌的危险因素之一。

    2018年07期 v.31 718-722页 [查看摘要][在线阅读][下载 278K]
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  • 人生长分化因子11基因原核表达质粒的构建、表达及其蛋白的纯化

    吴思思;蒋维;

    目的构建及表达人生长分化因子11(growth differentiation factor 11,GDF11)基因原核表达质粒,并对重组表达蛋白进行纯化。方法 PCR法扩增人源GDF11 cDNA全长序列,插入至载体pCold-I,构建重组质粒pCold-GDF11,转化感受态Rosetta(DE3)菌株,经终浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导表达后,超声破碎获得GDF11包涵体,添加8 mol/L尿素溶解,与Ni~(2+)NTA Agarose充分混匀后装柱,用含谷胱甘肽(glutathione,GSH)和氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)的复性液进行复性,经含咪唑的洗脱液洗脱获得目的蛋白,进行Western blot检测。结果重组质粒pCold-GDF11经双酶切及测序鉴定,构建正确;诱导表达蛋白的相对分子质量约45 000,主要以包涵体形式存在;GDF11蛋白纯化产物纯度达85%以上,每升菌液获得2.5 mg的目的蛋白,且可与小鼠抗His单克隆抗体发生特异性结合。结论成功构建了GDF11基因原核表达质粒,且表达产物经纯化后可获得纯度较高的目的蛋白。

    2018年07期 v.31 723-727页 [查看摘要][在线阅读][下载 297K]
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  • 胎衣不下奶牛母体胎盘黏着斑激酶异常表达分析及验证

    林宏甲;郑程远;邹晓;刘瑶;罗春海;付世新;

    目的通过对黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)在胎衣不下(retained fetal membranes,RFM)奶牛胎盘组织中差异表达的检测及验证,分析FAK在RFM中的作用。方法选取无其他疾病影响的胎衣自然排出组和RFM组奶牛,提取两组奶牛胎盘组织中的总蛋白和总RNA,利用Western blot及荧光定量PCR法对其FAK蛋白及mRNA水平进行检测。结果与胎衣自然排出组相比,RFM组奶牛母体胎盘组织中FAK蛋白及mRNA水平明显降低(P<0.05)。结论发生RFM的奶牛母体胎盘中FAK表达下调,提示FAK可能参与该疾病的发生与发展。

    2018年07期 v.31 728-731页 [查看摘要][在线阅读][下载 202K]
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治疗性制剂

  • 重组人表皮生长因子与其衍生物功能和结构对比分析

    刘兰;韩春梅;于雷;秦玺;史新昌;饶春明;

    目的对比分析重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rh EGF)与重组人表皮生长因子衍生物(rhEGF derivative,rhEGFd)的比活性和结构。方法采用《中国药典》三部(2015版)通则中3T3细胞/MTT显色法检测rhEGF和rhEGFd的生物学活性,新建的凝胶色谱法检测成品中主药蛋白质含量。计算比活性并分析结构与功能的关系。结果 rhEGFd的比活性明显高于rhEGF(P<0.05),约为rhEGF的1.48倍。结论对比分析了rhEGF和rhEGFd的比活性和结构,为其质量标准的完善提供了支持。

    2018年07期 v.31 732-736页 [查看摘要][在线阅读][下载 273K]
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  • 紫草素对变应性鼻炎大鼠TH细胞表型表达的调节作用

    李智红;游进;

    目的分析紫草素对变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)大鼠模型TH细胞免疫干预作用。方法用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)局部滴鼻法建立大鼠AR模型,建模成功后紫草素干预组分别雾化吸入50、100、200、300μg/kg紫草素进行治疗,另设健康大鼠对照组和雾化吸入生理盐水模型组。观察分析干预组和模型组大鼠症状表现,病理学检查大鼠鼻黏膜变化,流式细胞术检测各组大鼠外周血TH细胞亚群水平,ELISA法检测外周血中IL-4、IL-12和IFNγ水平。结果大鼠经紫草素干预后,AR症状缓解,病理检查炎症表现轻;外周血中TH细胞亚群接近对照组(P>0.05),但与模型组差异有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,IL-4表达水平降低,IL-12、IFNγ升高(P<0.01),症状及细胞因子变化幅度与紫草素干预用量呈正相关。结论紫草素对AR大鼠模型中TH细胞的异常表达可起到纠正作用。

    2018年07期 v.31 737-740页 [查看摘要][在线阅读][下载 240K]
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诊断制剂

  • 4种结核分枝杆菌皮肤变态反应原的动物试验

    都伟欣;卢锦标;王国治;沈小兵;苏城;杨蕾;陈保文;

    目的通过不同分枝杆菌致敏豚鼠皮试反应的大小评价4种结核分枝杆菌皮肤变态反应原的诊断效果。方法用结核分枝杆菌和卡介苗分别致敏豚鼠,致敏成功后采用轮圈法于每只豚鼠皮内分别注射TB-PPD、BCGPPD、重组结核分枝杆菌ESAT6-CFP10变态反应原(简称EC)和重组结核分枝杆菌11k Da变态反应原(简称11k Da)4种皮肤变态反应原各0.1 mL。记录注射后24及48 h注射局部红肿反应的纵径和横径,计算其均值。结果在不同分枝杆菌致敏豚鼠中,4种皮试试剂各自24及48 h皮试反应大小差异均无统计学意义(P>0.05)。在结核分枝杆菌致敏豚鼠中,TB-PPD和BCG-PPD皮试反应均为阳性,48 h局部红肿直径分别为(11.1±1.4)和(8.7±2.4)mm,差异有统计学意义(P<0.05);EC和11kDa皮试反应也均为阳性,48 h局部红肿直径分别为(15.4±2.3)和(17.0±1.7)mm,差异无统计学意义(P>0.05),但两者反应强度均高于TB-PPD和BCG-PPD。在卡介苗致敏豚鼠中,TB-PPD和BCG-PPD皮试反应均为阳性,48 h局部红肿直径分别为(11.8±1.3)和(11.4±1.5)mm,差异无统计学意义(P>0.05)。而EC和11kDa皮试反应均为0。结论 EC和11kDa可有效鉴别结核分枝杆菌感染和卡介苗接种,而TB-PPD和BCG-PPD均不能对其进行有效鉴别。

    2018年07期 v.31 741-743+747页 [查看摘要][在线阅读][下载 183K]
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临床研究

  • 重组人干扰素α2a栓剂对宫颈人乳头瘤病毒清除效果的观察

    吴希文;杨开宇;郭新;季艳;郭立君;刘景会;李利;

    目的观察重组人干扰素α2a(recombinant human interferonα2a,rh IFNα2a)栓剂对宫颈人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)的清除效果。方法选择193名宫颈HPV-DNA阳性患者作为观察对象,随机分为观察组和对照组,观察组为153名,对照组为40名。观察组采用rhIFNα2a栓剂进行治疗,将药品置于阴道后宫窿接近宫颈口处,1枚/次,隔日1次,9枚为1个疗程,连续使用两个疗程,首次给药后第6个月进行随访检查,HPV-DNA阳性者再进行1个疗程的治疗,首次给药后第12个月进行随访检查。对照组不进行任何治疗。结果首次给药后第6个月,观察组患者HPV-DNA转阴率达44.4%,对照组为0;第12个月时观察组患者HPV-DNA转阴率达51.0%,对照组为7.5%。观察组第6个月和第12个月的HPV-DNA转阴率均明显高于对照组(P<0.05);观察组第6和12个月的转阴率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 rhIFNα2a栓剂对宫颈HPV具有显著清除效果,值得推广使用。

    2018年07期 v.31 744-747页 [查看摘要][在线阅读][下载 184K]
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  • 2015~2016年北京市东城区流感病原学监测分析

    李艳宇;李姗姗;张瑶;杜嘉鑫;高鹏;

    目的对2015~2016年北京市东城区流感病原学进行监测分析,以明确东城区2015~2016年流感病原学特征,为流感疫情监测提供科学依据。方法采用实时荧光PCR法对流感样病例(influenza-like illness,ILI)的咽拭子样本进行流感病毒核酸检测,将检测为阳性的样本通过MDCK细胞进行病毒分离,并经血凝(hemagglutination,HA)试验鉴定流感病毒的型别。结果 2015~2016年共检测样本4 073份,核酸检测阳性样本为519份,阳性率为12.74%,其中H3N2型188份,新甲型H1N1型49份,乙型Yamagata(BY)139份,乙型Victoria(BV)143份。流感高发在冬春季,6~15岁为高发年龄,流感疫情的暴发主要集中在中小学和幼儿园。共分离得到流感病毒210株,整体分离率为40.46%,其中H3N2型62株,新甲型H1N1共16株,BY型68株,BV型64株。结论 2015~2016年北京市东城区流感以冬春季高发,两年流行的优势株不同,应加强对流感的实时监测,中小学生和老年人是流感防控的重点。

    2018年07期 v.31 748-750+757页 [查看摘要][在线阅读][下载 162K]
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技术方法

  • 人C1酯酶抑制剂活性动态显色检测方法的建立及验证

    汪菲菲;岳胜兰;周志军;彭焱;李娟;张云骁;李策生;胡勇;

    目的建立人C1酯酶抑制剂(C1 esterase inhibitor or C1 inhibitor,C1-INH)活性的动态显色检测方法,并进行验证。方法采用棋盘法分析C1酯酶与发色底物C1E 5603[CH3OC-Lys(Cbo)-Gly-Arg-pNA·AcOH]反应后的A值变化率(ΔA/min),确定能使不同浓度酶饱和的最低底物浓度。将C1-INH浓缩制剂标准品与C1酯酶孵育,剩余的C1酯酶与底物C1E 5603作用产生A值,将ΔA/min与C1-INH活性进行拟合,绘制标准曲线。验证该方法的线性范围、选择性、特异性、准确度、精密度、稳定性,并进行样品添加试验。将验证后的该方法应用于C1-INH制备工艺过程样品的分析。结果确定C1酯酶的浓度为28μg/mL,底物浓度为2.4 mmol/L,反应结果监测4 min。C1-INH标准品在0.15~0.025 IU/m 范围内与ΔA/min呈良好的线性关系,R2≥0.99,校正标样回算浓度在标示值的90.2%~105.4%内;CM阳离子交换层析洗脱缓冲液、HIC疏水层析平衡缓冲液、人纤溶酶原(plasminogen,Plg)、人纤溶酶(plasmin,Plm)的响应值均低于定量下限响应的7.2%,并低于内标响应的2.7%;20 mmol/L以下的pH 5.0Na Ac及300 mmol/L以下的Na Cl对C1-INH活性检测无影响;检测定量上限、高、中、低、定量下限质控样品,批内准确度在90.0%~114.8%之间,批内CV在0.7%~13.7%之间,批间准确度在94.2%~108.3%之间,批间CV在1.2%~9.7%之间;C1酯酶与底物C1E 5603室温放置3 h不影响检测结果;样品添加试验回收率在94.5%~106.1%之间。CM阳离子交换层析洗脱液、DEAE阴离子交换层析洗脱液、HIC疏水层析流穿液中C1酯酶抑制剂的特异性活性逐渐升高,分别为0.79、1.84、2.61 IU/g。结论本方法具有良好的选择性、准确度、精密度、特异性及稳定性,可作为C1-INH制备工艺中的内部控制指标。

    2018年07期 v.31 751-757页 [查看摘要][在线阅读][下载 321K]
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  • 聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子平均修饰度高效液相色谱蒸发光散射检测方法的建立及验证

    李永红;史新昌;李响;韩春梅;饶春明;

    目的建立聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子(PEGylated recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,PEG-rh G-CSF)平均修饰度的高效液相色谱蒸发光散射(high performance liquid chromatography coupled with evaporative light scattering detection,HPLC-ELSD)检测方法,并进行验证。方法采用Jupiter 5u C4 300A色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以含0.1%三氟乙酸(TFA)的水溶液为A流动相,含0.1%TFA的乙腈为B流动相,流速1 mL/min,在35℃柱温条件下经分段线性洗脱的方式分离样品,蒸发光散射检测器漂移管温度90℃,载气流速2.0 L/min,用外标法和双对数校正曲线定量溶液中的游离PEG含量。采用蛋白酶K消化去除PEG-rhG-CSF的蛋白部分后,经相同方法测定溶液中的总PEG含量,并计算结合PEG的含量和PEG的平均修饰度。对方法的专属性、线性、精密性、准确性进行验证,并确定检测限(LOD)和定量限(LOQ)。结果本实验建立的HPLC-ELSD法可将PEG与PEG-rh G-CSF及其他辅料成分有效分离;PEG在50~400μg/mL范围内,上样量对数值与相应峰面积对数值之间呈良好的线性关系,拟合回归方程为:Y=1.969 X+0.652,r~2=0.999;精密性试验RSD为1.9%;LOD和LOQ分别为66和109μg/mL;PEG的平均回收率为98.1%。结论本实验建立的方法具有良好的专属性、精密度及准确性,可用于测定PEG-rh G-CSF的平均修饰度。

    2018年07期 v.31 758-762页 [查看摘要][在线阅读][下载 259K]
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  • 基于免疫磁珠快速富集分离土壤中炭疽芽孢方法的建立

    梁冰;纪雪;孙洋;周伟;孙诗雯;刘军;郭学军;冯书章;祝令伟;

    目的建立基于免疫磁珠快速富集分离土壤中炭疽芽孢的方法。方法将炭疽芽孢杆菌疫苗株培养形成芽孢,灭活后免疫家兔,获得多克隆抗体,与磁珠偶联制备免疫磁珠,并检测其在纯炭疽芽孢稀释液中对炭疽芽孢富集分离的敏感性。通过对模拟土壤样品中炭疽芽孢抽提效果的比较,选择最优的芽孢抽提液及抽提条件。采用多重PCR法评价免疫磁珠对土壤中的炭疽芽孢在PLET平板培养基上富集分离的效果。结果 10 mg磁珠经活化后与500μL抗体偶联效果最佳,制备的免疫磁珠在纯炭疽芽孢稀释液中,富集分离的敏感性可达19 cfu/mL。以0.5%Triton X-100蔗糖PBS溶液作为芽孢抽提液,经1 000×g离心5 min后芽孢提取率最高。在模拟土壤样品中,检测敏感性可达100 cfu/g土壤,PLET平板培养基检测的阳性率达30%。结论本研究建立的免疫磁珠法简单实用,适用于土壤等各种类型环境样品中炭疽芽孢的检测。

    2018年07期 v.31 763-766+770页 [查看摘要][在线阅读][下载 244K]
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  • 分光光度法检测重组蛋白药物中PF68残留量

    刘素霞;杜力;王志明;

    目的建立能够定量检测重组蛋白药物中PF68残留量的分光光度法,并进行验证。方法采用TCA沉淀蛋白方法,上清中PF68与硫氰酸钴铵盐反应形成蓝色复合物,于酶标仪波长624 nm处测定吸光度值,通过标准曲线计算样品中PF68的含量。对方法进行线性、准确度、精密度验证,并确定定量限。结果分光光度法检测重组蛋白中PF68含量,PF68浓度在0.1~1.6 mg/mL范围内,标准曲线的线性较好,相关系数R~2>0.99,定量限低至0.1 mg/mL。各浓度水平验证样品的加样回收率在88%~100%之间;浓度为1.2、0.6、0.3 mg/mL样品重复性试验的RSD分别为4.0%、5.2%、3.9%,中间精密度试验的RSD分别为7.0%、5.7%、4.8%。结论分光光度法准确度和精密度良好,可用于重组蛋白药物研发及生产过程中残留PF68的监测。

    2018年07期 v.31 767-770页 [查看摘要][在线阅读][下载 192K]
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  • IBRV TaqMan-MGB实时荧光定量PCR方法在BVDV和IBRV共感染中病毒定量检测的应用

    王华欣;刘宇;赵静虎;刘通;周金玲;岳山;何泊宁;刘珊珊;张世勋;王天;刘增禄;朱战波;

    目的应用牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)Taq Man-MGB实时荧光定量PCR方法进行牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)和IBRV共感染的病毒定量检测,进一步研究BVDV和IBRV共感染后BVDV对IBRV复制的影响。方法分别用0.2和1.0 MOI的BVDV感染MDBK细胞,待细胞出现50%CPE时,再用0.1 MOI的IBRV共感染,作用24 h后收集样品,采用Taqman-MGB实时荧光定量PCR方法检测IBRV的拷贝数,并与对照组(IBRV单独感染组)进行比较。结果在先感染0.2和1.0 MOI BVDV情况下,IBRV拷贝数分别为3.0×10~6和6.47×10~6拷贝/μL,单独感染IBRV的对照组的拷贝数为1.15×10~7拷贝/μL。结论在体外情况下,BVDV对IBRV的复制影响较小,为研究BVDV和IBRV的共感染机制以及制备BVDV和IBRV感染同一细胞的二联苗奠定了基础。

    2018年07期 v.31 771-774页 [查看摘要][在线阅读][下载 194K]
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  • 一种用于实时荧光PCR法检测肉制品中鼠源性成分特异性引物的研发

    王学政;季福玲;刘志胜;鲁艳芹;赵飞;王友凯;

    目的研发一种用于实时荧光PCR法检测肉制品中鼠源性成分的特异性引物。方法通过比对NCBI中多种物种的脱氧核糖核酸细胞色素b(mitochondrial deoxyribonucleic acid cytochrome b,Cytb)基因全序列,设计针对鼠源性成分的特异性引物。采用DNA提取试剂盒提取鼠DNA,以其为模板,通过设计的特异性引物进行实时荧光PCR扩增,试验重复3次。同时验证该引物的特异性,并对羊肉卷、牛肉卷和猪肉片样品进行检测。结果通过设计的特异性引物进行3次实时荧光PCR扩增的Cp平均值为16.47,标准差为0.430,熔解曲线具有明显的单一主峰,且重合度良好。仅鼠源DNA模板的PCR产物可见115 bp的目的条带,其他物种DNA模板均未扩增出该目的条带。羊肉卷、牛肉卷和猪肉片样品中均未检测出鼠源性成分。结论本实验设计的引物可用于实时荧光PCR法对肉制品中鼠源性成分的检测,且特异性较好。

    2018年07期 v.31 775-777+781页 [查看摘要][在线阅读][下载 221K]
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  • 牛产肠毒素性大肠埃希菌菌蜕的制备及裂解条件的优化

    王士霞;常春龙;翟军军;倪宏波;

    目的制备牛产肠毒素性大肠埃希菌菌蜕,并对裂解条件进行优化。方法将裂解质粒pHH43电转入牛肠产毒素性大肠埃希菌中,37℃培养至A_(600)值为0.6时,升温至42℃诱导裂解,制备菌蜕。同时对起始诱导A_(600)值(0.4、0.6、0.8、1.0、1.2)和培养基成分含量(2/3、3/4、4/5和正常含量)进行优化,并计算裂解效率。结果在起始诱导A_(600)值为0.6,培养基营养成分为正常含量的3/4时,裂解效率最高,达99.93%。结论成功制备了牛产肠毒素性大肠埃希菌菌蜕,并对其制备条件进行了优化,为进一步开展对其免疫效果和佐剂效应等研究奠定了基础。

    2018年07期 v.31 778-781页 [查看摘要][在线阅读][下载 254K]
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综述

  • 肠道病毒71型疫苗的研究进展

    苏瑶;高帆;吴星;姜崴;毛群颖;

    肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)是导致手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)重症和死亡病例的主要病原体。2015年我国研制成功世界上首批EV71疫苗,2016年疫苗通过批签发上市。EV71疫苗的研发成功为我国以及世界范围控制严重HFMD的暴发和流行提供了有效手段。然而疫苗上市后仍面临进一步大规模人群应用的效果和安全性观察,疫苗质控标准和规范的建立、完善,疫苗应用后人群中HFMD新的流行态势等研究课题。本文对近期EV71疫苗的研究进展和应用进行了综述。

    2018年07期 v.31 782-786页 [查看摘要][在线阅读][下载 179K]
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  • 人乳头瘤病毒预防性疫苗的研究进展

    张飞齐;申瑷琳;杨晓明;

    宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤,严重威胁着女性健康及生命。在导致女性死亡的原因中,宫颈癌排第2位,世界范围内每年约有493 000例宫颈癌发生,其中273 000例死亡。流行病学数据显示,70%的宫颈癌与16、18两种人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)基因型有关。宫颈癌的发病率很高,且与HPV感染的相关性非常明确,因此大部分HPV疫苗集中在预防宫颈癌上。目前已上市的3种HPV疫苗可有效预防90%与宫颈癌有关的HPV感染。本文对全球市场上HPV疫苗的现状以及未来的发展方向作一综述。

    2018年07期 v.31 787-791页 [查看摘要][在线阅读][下载 186K]
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  • 金纳米颗粒的生物检测应用

    周朴帆;陈丽丽;

    金纳米颗粒是指一种直径在1~100 nm范围内的微小金颗粒,由于其自身特殊的理化性质常常作为标记物、生物探针、载体、传感器等广泛应用于各种生物检测中。本文综述了金纳米颗粒相较于其他标记物的优点,总结了部分具有代表性的金纳米颗粒生物检测方法及其近几年的发展状况,分析了相关方法的局限性以及金纳米颗粒在生物检测中的进一步发展方向。

    2018年07期 v.31 792-796页 [查看摘要][在线阅读][下载 183K]
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  • 虾青素在肝脏疾病中作用的研究进展

    王群;林波;

    虾青素是一种次生类胡萝卜素,主要来源于海洋生物,抗氧化作用显著,药用价值较高,已成为海洋天然产物研究的热点之一。研究表明,虾青素对肝纤维化、肝脏肿瘤、肝脏缺血再灌注损伤、非酒精性脂肪肝等相关疾病具有预防和治疗作用,其机制不仅与其较强的抗氧化作用有关,还可能通过调控多种信号通路(TGF-β1/Smad3、JAK/STAT3、Wnt/β-catenin、Nrf2/ARE、AKT-mTOR等)发挥作用。本文对虾青素在肝脏疾病防治中的研究现状作一综述,并进一步阐述其作用机制。

    2018年07期 v.31 797-800+804页 [查看摘要][在线阅读][下载 223K]
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专题报道

  • 大肠埃希菌表达的重组生物制品种子批质量控制

    赵志晶;么山山;王斌;曾明;

    <正>近年来,DNA重组技术在生物医药领域获得了迅速发展~([1-2])。《中国药典》三部(2015版)中,对人用重组DNA蛋白制品进行了定义:人用重组DNA蛋白制品是采用重组DNA技术,对编码所需蛋白质的基因进行遗传修饰,利用质粒或病毒载体将目的基因导入适当的宿主细胞,表达并翻译成蛋白质,经过

    2018年07期 v.31 801-804页 [查看摘要][在线阅读][下载 125K]
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  • 2016年重组乙型肝炎疫苗国家监督抽验质量分析与评价

    邱少辉;方鑫;何鹏;童海青;沈琦;胡忠玉;

    <正>乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染已成为全球性的健康问题,其每年可导致70余万人死于肝癌和肝硬化~([1])。我国之前一直是HBV高流行区,20世纪90年代,我国人群乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)携带率曾高达9.07%~([2])。1992年,我国将乙型肝炎疫苗(简称乙肝疫苗)纳入计划免疫管理,2002年纳入免疫规划推动阻断母

    2018年07期 v.31 805-808页 [查看摘要][在线阅读][下载 159K]
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消息

  • 《中国生物制品学杂志》移动版上线了

    <正>为深度推进《中国生物制品学杂志》数字化转型,使期刊的资源得到广泛传播和利用,本刊已入北京世纪超星信息技术发展有限责任公司的移动"域出版"平台,旨在更好地为业内同仁提供快捷的学习方式。扫描二维码,下载"超星学习通",点击"移动图书馆→期刊",输入"中国生物制

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  • 欢迎订阅《中国生物制品学杂志》

    <正>《中国生物制品学杂志》于1988年创刊,由中华人民共和国卫生部主管,系中华预防医学会系列杂志之一,为报道我国生物制品研究开发重大成果和最新进展的国内唯一生物制品专业学术期刊。主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临

    2018年07期 v.31 736页 [查看摘要][在线阅读][下载 42K]
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