中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 中国狂犬病疫苗株CTN-1、PV-2061全基因组序列分析

    卢学新;李艳荣;于鹏程;陶晓燕;刘淑清;闫江泓;周蕾;朱武洋;

    目的对中国狂犬病疫苗株CTN-1、PV-2061全基因组序列进行分析。方法通过RT-PCR法获取CTN-1和PV-2061株主种子批的全基因组序列,与国内分离的全基因组序列进行比对,并对狂犬病病毒主要抗原进行比对分析。结果 CTN-1和PV-2061株具有较高的同源性,CTN-1株与我国街毒株的亲缘关系更近,符合作为疫苗候选株的要求。PV-2061株在氨基酸序列中具有独特的突变,推测与中和抗体的产生相关。结论对中国狂犬病疫苗株CTN-1、PV-2061全基因组进行了多重比对,为研制安全高效的狂犬病疫苗奠定了理论基础。

    2018年02期 v.31 113-120页 [查看摘要][在线阅读][下载 670K]
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  • 不同蛋白载体制备A、C、Y、W_(135)群四价脑膜炎球菌多糖结合疫苗的免疫原性

    佟巍;孙晓东;刘建斌;尹珊珊;刘建凯;

    目的探讨以破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)及白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)为载体的A、C、Y、W_(135)群四价脑膜炎球菌多糖结合疫苗的免疫原性。方法将A、C、Y、W_(135)群流脑多糖经溴化氰(CNBr)活化后,以1,6己二酰肼(1,6-adipic acid dihydrazide,ADH)作为衍生剂制备相应的衍生物,分别与TT及DT在碳二亚胺[N-(3-Dimethylami-nopropyl)-N’-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDAC]作用下结合,经Sepharose 4FF凝胶层析纯化后,加入冻干保护剂进行冻干,制备成A、C、Y、W_(135)群四价脑膜炎球菌多糖结合疫苗。用两种蛋白载体疫苗分别按1及2.5μg两个剂量(各型多糖的含量为1和2.5μg)免疫小鼠,经腹部皮下注射,于0及14 d各免疫1次,于首次免疫后第28天经静脉采血,分离血清,ELISA法检测血清各型抗体水平。结果 1及2.5μg两个剂量组的阳转率均高于80%,2.5μg免疫组的阳转率优于1μg免疫组;总体上来说,以TT为蛋白载体结合疫苗的阳转率高于以DT为载体的结合疫苗,对A和W_(135)群脑膜炎球菌多糖结合疫苗较明显。结论以TT及DT为载体制备的A、C、Y、W_(135)群四价脑膜炎球菌多糖结合疫苗均具有良好的免疫原性,TT略优于DT。

    2018年02期 v.31 121-124+128页 [查看摘要][在线阅读][下载 268K]
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基础研究

  • Ⅱ型登革病毒前膜抗体对该病毒在THP-1细胞中复制能力的影响

    姜黎明;杨佳佳;罗佳;叶超;文送娇;孙强明;

    目的探讨Ⅱ型登革病毒(dengue virusⅡ,DENVⅡ)前膜(presynaptic membrane,prM)抗体对DENVⅡ在THP-1细胞中复制能力的影响。方法采用不同稀释度(1/4~1/16 384)的DENVⅡanti-pr M单克隆抗体分别与不同MOI的DENVⅡ(MOI分别为3、0.75及0.19)复合感染THP-1细胞。建立DENVⅡ荧光定量PCR检测标准曲线,检测THP-1细胞培养上清液的病毒拷贝数。结果 DENVⅡ按MOI=3感染THP-1细胞,当prM稀释度为1/16和1/16 384时诱发THP-1细胞产生病毒的载量较高,prM稀释度为1/64和1/256时抑制病毒生长;DENVⅡ按MOI=0.75感染THP-1细胞,当prM稀释度1/16时可诱发更高浓度病毒载量;DENVⅡ按MOI=0.19感染THP-1细胞时,不会诱导产生高浓度的病毒载量。结论中浓度pr M抗体可抑制DENVⅡ在THP-1细胞中的复制能力,而高及低浓度prM抗体可促进DENVⅡ在THP-1细胞中的复制能力。

    2018年02期 v.31 125-128页 [查看摘要][在线阅读][下载 245K]
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  • 百日咳杆菌无动物源培养基的筛选及其对百日咳毒素和丝状血凝素产量的影响

    陈元芬;马礼耕;吴强;王文;王宇;张建军;

    目的确定百日咳杆菌无动物源培养基最佳配方,并检测其对百日咳毒素(pertussis toxin,PT)和丝状血凝素(filamentous haemagglutinin,FHA)产量的影响。方法分别按一定比例混合使用或单独使用无动物源蛋白Hy Pep5603(小米和小麦蛋白)、精选大豆胨,替代培养基中动物源性成分(酸水解酪蛋白)作为氮源,进行百日咳杆菌摇瓶培养,比较细菌生长密度和产物生产量。以最高PT和FHA产量为参考标准,确定最佳培养基配方。用该配方与动物源培养基对比,进行4批30 L百日咳杆菌发酵培养;发酵液处理后,用离子交换层析分离PT和FHA样品,ELISA法测定各样品中PT和FHA的蛋白含量,SDS-PAGE法检测产物的相对分子质量大小。结果由无动物氮源Hy Pep56034.0 g/L、精选大豆胨6.0 g/L加改良SS培养基组成的培养基,摇瓶培养百日咳杆菌后最高A550为3.8,发酵百日咳杆菌后最高A550为5.8,均能有效地供菌体生长,且优于单独使用动物源或无动物源培养基;用该配方发酵百日咳杆菌并纯化,获得PT的产量约为5.7 mg/L,FHA产量约为23.0 mg/L,均高于用动物源培养基培养后的产物,且相对分子质量大小一致。结论用含Hy Pep5603 4.0 g/L、精选大豆胨6.0 g/L的无动物源培养基培养百日咳杆菌,可替代动物源培养基,用于PT和FHA的生产。

    2018年02期 v.31 129-133页 [查看摘要][在线阅读][下载 271K]
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  • 重组人神经生长因子在大肠埃希菌中的表达及活性测定

    沈丽;黄志立;蒋伟;林钰琼;王妍;

    目的在大肠埃希菌中表达重组人神经生长因子(recombinant human nerve growth factor,rhNGF),并检测其活性。方法通过密码子优化,设计表达rhNGF的基因,构建重组表达质粒pET-28a(+)-hNGF,转化大肠埃希菌BL21pLyS(DE3)中,IPTG诱导表达。表达的蛋白经层析纯化后,SDS-PAGE及HPLC法检测纯度,Lowry法检测蛋白浓度,TF-1细胞增殖法检测生物学活性。结果构建了融合表达rhNGF的大肠埃希菌表达系统,表达的3批外源蛋白纯化后纯度均达到100%,比活分别为5.5×10~5、6.8×10~5和7.4×10~5 IU/mg,均高于小鼠颌下腺提取的NGF标准品。结论成功表达了rhNGF,纯化后纯度高,比活强,为规模化生产hNGF提供了参考。

    2018年02期 v.31 134-139页 [查看摘要][在线阅读][下载 447K]
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治疗性制剂

  • 黄芪多糖在变应性哮喘大鼠模型中对树突状细胞的免疫干预作用

    刘璟;游进;

    目的探讨黄芪多糖(Astragalus polysacchaside,APS)对变应性哮喘(allergic asthma,AS)大鼠模型树突状细胞(dendritic cells,DCs)的免疫干预作用。方法选用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)对30只大鼠进行连续雾化致敏,建立AS模型,其中10只为模型组,20只经腹腔注射APS,给药量分为100和200μg/kg(各10只),同时以10只未建模的大鼠为对照组。给药4 h后观察大鼠的症状,并按预设评估标准评价治疗效果;给药24 h后检测各组大鼠肺功能,并处死大鼠,取肺黏膜相关淋巴组织,用免疫组织化学技术检测CD80、CD86、IL-4、IL-10、IL-12的表达情况。结果根据预设的评估情况,100μg/kg APS干预组9只显效,1只缓解,200μg/kg APS干预组10只显效。与对照组比较,模型组的第1秒肺活量(forced expiratory volume in one second,FEV1)/用力肺活量(forced vital capacity,FVC)比值、最大呼气流速(peak expiratory flow rate,PEF)及IL-10、IL-12表达水平均明显下降(P<0.05),CD80、CD86、IL-4的表达水平均显著升高(P<0.05);与模型组比较,100及200μg/kg APS干预组FEV1/FVC比值、PEF及IL-10、IL-12表达水平显著升高(P<0.05),CD86、CD80及IL-4的表达水平明显降低(P<0.05);100与200μg/kg APS干预组间各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 APS在AS大鼠模型中可通过调整DCs的表型表达缓解AS病情。

    2018年02期 v.31 140-144页 [查看摘要][在线阅读][下载 279K]
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  • 紫菜多糖对肠道病毒71型乳鼠模型T细胞亚群及细胞因子的免疫干预作用

    田冰;刘璟;

    目的探讨紫菜多糖在肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)乳鼠模型中的免疫干预作用。方法取7日龄健康乳鼠40只,对30只经腹腔注射EV71国际标准株(VR-1432)200μL(约300 TCID50)/只,建立EV71感染模型,其中20只设为干预组,于建模24 h后用紫菜多糖灌胃,剂量为40 mg/(kg·d),其余10只为模型组,分别于接种病毒后第3和7天观察乳鼠的临床表现,并经眼球摘取采血,分离血清。同时设对照组(10只,未注射病毒)。流式细胞术检测T细胞亚群,ELISA法检测干扰素α(interferonα,IFNα)、肿瘤坏死因子-α(tumor ne-crosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)及IL-10的表达水平。结果模型乳鼠经紫菜多糖干预后,显效5只,有效13只,无效1只,死亡1只。注射EV71后第7天,与模型组比较,干预组乳鼠的CD4~+及CD8~+T细胞比例明显升高(P<0.01),CD4~+/CD8~+比值明显降低(P<0.05);IL-6及TNF-α水平明显降低(P<0.001),IL-10及IFNα水平明显升高(P<0.001)。结论紫菜多糖在EV71乳鼠模型中,可诱导T细胞活化,促进IFNα等抗炎细胞因子的分泌,调节免疫功能,对EV71感染可起到正面免疫干预作用。

    2018年02期 v.31 145-149页 [查看摘要][在线阅读][下载 249K]
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  • 川芎嗪对慢性脑缺血小鼠认知功能障碍及海马星形胶质细胞胶质原纤维蛋白表达的影响

    侯良绢;黄小环;

    目的探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对慢性脑缺血小鼠认知功能障碍及海马星形胶质细胞胶质原纤维蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达的影响。方法采用改良双侧颈总动脉结扎术建立小鼠慢性脑缺血模型,经腹腔分别注射30和80 mg/kg的TMP注射液(即TMP低、高剂量组),每组10只,另设假手术组(不结扎),模型组和假手术组腹腔注射等量生理盐水。各组均在术后24 h开始给药,每日1次,连续8周。Morris水迷宫试验检测小鼠空间学习和记忆能力;黄嘌呤氧化酶法检测小鼠海马组织中的超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)含量,硫代巴比妥酸(TBA)法检测丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量,双抗体两步ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)及白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量;免疫组织化学染色法及Western blot法检测小鼠海马CA1区GFAP的表达水平。结果与模型组比较,TMP低、高剂量组小鼠在Morris水迷宫定位航行试验中的逃避潜伏期和游泳路程均明显缩短(P<0.05),空间探索试验中穿越原平台的次数增多(P<0.05);小鼠海马组织中SOD含量明显增加(P<0.05),MDA、TNF-α及IL-1β含量明显降低(P<0.05);IOD值明显下降(P<0.05),GFAP表达水平明显下降(P<0.05)。结论 TMP可改善慢性脑缺血小鼠认知功能障碍,其机制可能是增强抗脂质氧化能力,抑制星形胶质细胞增生活化,减少GFAP的表达,减轻炎症反应,从而降低对海马组织的损害。

    2018年02期 v.31 150-154+159页 [查看摘要][在线阅读][下载 290K]
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诊断制剂

  • 牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

    赵微;毕莹;闻晓波;倪宏波;

    目的制备牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheities virus,IBRV)g E蛋白的单克隆抗体,并进行鉴定。方法将扩增的IBRV gE基因插入至载体p ET-32a(+),转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白IBRV gE,通过Ni-NTA Agarous Kit纯化后,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞,与SP2/0细胞融合,间接免疫荧光法筛选阳性杂交瘤细胞。经小鼠腹腔注射杂交瘤细胞,3×10~6个/只,待小鼠腹腔膨大后,采集腹水,硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体,并进行亚类、浓度、染色体数目、Western blot及间接免疫荧光检测。结果重组蛋白IBRV gE相对分子质量约35 000,纯化后浓度为1.2 mg/mL。小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合后,筛选出1株稳定分泌IBRV单抗的杂交瘤细胞(命名为3G9),获得相应抗体浓度为1.46 mg/m L;为IgG1亚类,轻链为kappa链;染色体数目为95~105;可与IBRV发生特异性反应;可与接种IBRV毒株的MDBK细胞发生特异性结合,产生特异性荧光。结论采用原核表达系统表达并纯化了IBRV gE蛋白,成功制备了抗IBRV gE的单克隆抗体,为建立特异性的IBRV诊断方法及致病机理的研究奠定了基础。

    2018年02期 v.31 155-159页 [查看摘要][在线阅读][下载 270K]
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临床研究

  • 老年人接种23价肺炎球菌多糖疫苗后特异性功能性抗体水平的监测

    钱晓华;沈洪波;潘蓉;乔瑞洁;谭小梅;陈维政;

    目的监测老年人接种23价肺炎球菌多糖疫苗(pneumococcal capsular polysaccharide vaccine-23,PPV-23)后特异性功能性抗体的水平。方法选择沪籍60岁以上健康及结核病痊愈老年人接种PPV-23疫苗,采用肺炎链球菌荚膜多糖多型调理吞噬杀菌试验(multi-specificity opsonophagocyitosis killing assay,MOPA)分别对接种前、接种后1个月、6个月的13种血清型(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F)肺炎球菌的抗体水平进行检测,并对两组人群接种后1个月、6个月的13种血清型OPA抗体水平(GMT)及抗体增长率进行统计学分析。结果大部分老年人接种PPV-23后1个月、6个月13种血清型的OPA抗体GMT均显著高于接种前(P<0.05),接种后6个月结核病痊愈者的1、3型与接种前差异无统计学意义(P>0.05),且接种后1个月与6个月的6A、6B、7F、18C、19F、23F型抗体差异无统计学意义(P>0.05)。接种后1个月13种血清型OPA抗体水平≥2倍增长率均≥60%(除结核病痊愈者1型为37.5%外),且两组人群差异无统计学意义(P>0.05);除结核病痊愈者1、3型外,两组人群各型别OPA抗体水平≥4倍增长率差异无统计学意义(P>0.05)。接种后6个月13种血清型OPA抗体水平≥2倍增长率在45%以上,且除1型外,两组人群间差异无统计学意义(P>0.05);除1型、18C型外,两组人群OPA抗体水平≥4倍增长率差异无统计学意义(P>0.05)。结论健康和结核病痊愈老年人接种PPV-23后可产生针对13种血清型的特异性功能性抗体,且可维持6个月,但结核病痊愈者接种PPV-23后1、3型的OPA抗体水平和持久性明显低于健康老年人。

    2018年02期 v.31 160-165页 [查看摘要][在线阅读][下载 265K]
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  • 2011~2015年上海市闵行区第二类疫苗使用情况分析

    汪曦;王烨;金宝芳;李捷;张莉萍;梅克雯;

    目的分析上海市闵行区2011~2015年第二类疫苗的使用情况,为加强第二类疫苗的接种管理提供依据。方法从中国免疫规划信息系统和上海市闵行区生物制品管理信息系统中导出上海市闵行区2011~2015年第二类疫苗使用情况数据,并进行整理和描述性分析。结果 2011~2015年,上海市闵行区使用的第二类疫苗的种类基本稳定,使用量及占疫苗总使用量的比例逐年上升,分别由51.60万剂/年上升至57.82万剂/年、36.67%上升至42.48%;非本市户籍人口的第二类疫苗使用量高于本市户籍人口;可替代第一类疫苗的第二类疫苗使用总量逐年递增,总替代比例从17.92%增至36.68%,其中以A+C群流脑结合疫苗替代A群流脑多糖疫苗比例最高。结论2011~2015年上海市闵行区第二类疫苗使用品种多、使用数量大,有效地预防和控制了疫苗可预防疾病的发生。

    2018年02期 v.31 166-169+176页 [查看摘要][在线阅读][下载 192K]
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  • 大连市2011~2016年疑似预防接种异常反应监测分析

    韩一楠;杨月;林茜;

    目的分析大连市2011~2016年疑似预防接种异常反应(adverse events following immunization,AEFI)的监测结果,评价AEFI监测系统的运转情况。方法通过AEFI监测系统,收集2011~2016年AEFI个案数据,应用Excel2007对AEFI特征及相关指标进行描述性统计学分析。结果 2011~2016年大连市共报告AEFI个案467例,年平均估算报告发生率约4.87/10万。48 h报告率为97.43%,及时调查率为98.46%。0~8月份为全年发病最高峰,共209例,占报告总数的44.75%;2岁以内AEFI病例共378例,占报告总数的80.94%;无细胞百白破疫苗AEFI共142例,占报告总数的30.41%;一般反应401例,占报告总数的85.87%,异常反应43例,占报告总数的9.21%;379例AEFI发生在接种后48 h内,占报告总数的81.16%;无细胞百白破疫苗引起的一般反应最多(133例),占一般反应报告总数的33.17%,麻疹风疹联合减毒活疫苗引起异常反应中最多(12例),占异常反应报告总数的27.91%;发热、红肿、硬结是AEFI报告最多的症状,占报告总数的83.30%。结论大连市2011~2016年AEFI监测系统运转良好,但仍需针对重点疫苗开展强化预防接种的留置观察和随访,提高AEFI监测质量及应急处置能力。

    2018年02期 v.31 170-176页 [查看摘要][在线阅读][下载 221K]
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  • 上海市闵行区麻疹发病相关因素的病例对照分析

    陈泓泓;金宝芳;王烨;汪曦;陆佳;杜艳;张莉萍;梅克雯;

    目的分析影响上海市闵行区麻疹发病的相关因素,为麻疹防控策略提供依据。方法采用1∶1配对的病例对照研究,收集2014~2016年上海市闵行区麻疹确诊病例和对照人群的一般社会学人口因素、麻疹疫苗免疫史、人口流动等信息,对麻疹发病的相关危险因素进行单因素分析和配对多因素Logistic回归分析。结果发病前7~21 d内,有医院出入史、乘坐地铁、与疑似麻疹病例有接触史和有外出外来史等因素是麻疹发病的相关危险因素(P<0.05)。在小于8月龄和8月龄至15岁组中,儿童及母亲有麻疹疫苗接种史、母亲文化程度高是麻疹发病的保护因素;在大于15岁组中,有麻疹疫苗接种史是麻疹发病的保护因素(P<0.05)。结论无麻疹疫苗接种史、医院出入史、乘坐地铁、有外来外出史是上海市闵行区近年来麻疹高发的相关危险因素,可从这些方面制定具有针对性的疫情防控措施。

    2018年02期 v.31 177-180+187页 [查看摘要][在线阅读][下载 182K]
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技术方法

  • 一种改进型基于荧光蛋白重定位系统的丙型肝炎病毒滴度检测方法的建立

    毕研伟;李智华;龙琼;张辉;陈晨;李亚东;李育中;寸韡;

    目的建立一种简单、快速检测丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染的荧光细胞系检测系统,并用其检测HCV滴度。方法通过RT-PCR法获得干扰素β启动刺激因子-1(interferon beta promoter stimulator-1,IPS-1)蛋白C-端第462-540位氨基酸(C462-540)的基因序列及含有SV40核定位信号的IPS-1(C462-540)基因序列,插入经同样酶切的慢病毒表达载体LV-CAG--EGFP-WPRE、LV-CAG—mCherry(RFP)-WPRE,构建表达EGFP-IPS-1(C462-540)、RFP-NLS-IPS-1(C462-540)的慢病毒重组表达质粒;在此基础上构建含有IPS-1(C462-540)-2A-EGFP-puro、IPS-1(C462-540)-IRES-EGFP-puro的慢病毒重组表达质粒;利用293T细胞包装含有IPS-1(C462-540)蛋白的重组慢病毒;感染Huh7.5细胞,流式细胞仪筛选稳定表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)、红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)的Huh7.5细胞,或用puromycin筛选稳定表达EGFP的Huh7.5细胞;利用10倍系列稀释的HCV感染上述细胞,检测HCV的滴度。结果测序表明4种慢病毒表达质粒构建正确;收获的慢病毒感染Huh7.5细胞48 h后,可见EGFP或RFP表达,经流式细胞仪分选获得了稳定表达EGFP-IPS-1(C462-540)、RFP-IPS-1(C462-540)的细胞系,经puromycin筛选获得了稳定表达EGFP-IPS-1(C462-540)的细胞系;经10倍系列稀释的HCV感染后,弥散在细胞质中的点状EGFP、RFP会扩散到整个细胞或定位到细胞核中,在甲基纤维素的限制下形成明显的荧光噬斑点,通过计算荧光噬斑点数得到用Huh7.5-EGFP-IPS-1(462-540)-IRES-PURO、Huh7.5两种细胞检测的HCV滴度分别为(5.6±0.2)×10~5和(5.5±0.2)×10~5 PFU/mL,二者无显著差异。结论成功构建了含有绿色荧光或红色荧光报告系统的细胞系,建立了一种简单、快速检测HCV滴度的新方法。

    2018年02期 v.31 181-187页 [查看摘要][在线阅读][下载 507K]
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  • 头孢菌素C乙酰化酶高通量筛选方法的改进

    唐存多;史红玲;张梅;马莹;唐青海;周军事;姚伦广;阚云超;

    目的改进头孢菌素C(cephalosporin C,CPC)乙酰化酶高通量筛选方法,获得催化活性显著提高的突变体。方法基于对二甲氨基苯甲醛(p-dimethylaminobenzaldehyde,p-DAB)与7-氨基头孢烷酸(7-amino cephalosporanic acid,7-ACA)的复合物在405 nm有最大吸收值的原理,采用无菌96孔深孔板对重组菌进行低温低浓度诱导剂诱导表达,再以含溶菌酶和DNase的缓冲液进行菌体裂解,最后以96孔板进行底物的水解和反应终止,经p-DAB显色后,利用酶标仪进行产物的快速定量,以实现CPC乙酰化酶突变体的高通量筛选。结果利用改进的p-DAB比色法从先前建立的突变文库中筛选到2个在13℃下比酶活明显提高的突变子1A10和2G8,其比酶活分别为1.7和2.4 U/mg,较原酶的0.85 U/mg显著提高。在优化的筛选条件下,A405的变化能够准确反映酶活性的大小,确保了该方法筛选结果的可信度。结论改进的p-DAB比色法具有筛选快速,操作简便,筛选通量大及准确度高等优点,能够提高CPC乙酰化酶改造及筛选的效率,为低温CPC乙酰化酶的创制提供了技术支持。

    2018年02期 v.31 188-191页 [查看摘要][在线阅读][下载 192K]
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  • 肠道病毒71型灭活疫苗灭活验证超速离心条件的优化

    赵恒;袁梅;严皎;王云飞;杨佳;蒋国润;史磊;冯凯;杨晓蕾;洪超;

    目的优化肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗灭活验证超速离心条件,为EV71灭活疫苗灭活验证样品的处理提供实验依据。方法在不同转速(45 000、40 000、35 000、30 000、25 000 r/min)和时间(120、90、60、30 min)条件下对EV71收获液进行超速离心,检测离心前和离心后病毒液的滴度,计算回收率,比较不同条件下离心前后病毒回收效果。结果在转速相同或离心时间相同的条件下,EV71的沉淀效果与离心时间或离心转速呈正相关(R~2从0.77和0.88分别增大到0.99),其中,当离心转速超过40 000 r/min时,不同离心时间下病毒的回收率均在90%以上,当离心时间为120 min,离心转速为45 000 r/min时,病毒的沉淀效果最好,回收率最高,达98%。综合离心时间因素,选择离心条件为45 000 r/min-60 min较适宜(回收率为97%),与45 000 r/min-120 min相比,差异无统计学意义(P>0.05);如将时间减为45 000 r/min-30 min,与其他3组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EV71的沉淀效果与离心转速和离心时间呈正相关,即随着离心转速增大和离心时间的延长,病毒的沉淀效果越好、回收率越高。

    2018年02期 v.31 192-194+199页 [查看摘要][在线阅读][下载 154K]
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  • 利用气相二氧化硅从人血浆中制备载脂蛋白A1方法的建立

    李光飞;陶玲;王伟;

    目的建立利用气相二氧化硅从人血浆中制备载脂蛋白A1(apolipoprotein A1,apo A1)的方法,并对该方法的效果进行评价。方法在人血浆中加入气相二氧化硅吸附apo A1,考察气相二氧化硅加入人血浆比例(m/V)及孵育时间对吸附的影响,确定最佳吸附条件。吸附后,离心分离人血浆与气相二氧化硅,再用不同浓度的乙醇溶液洗脱气相二氧化硅吸附的apo A1,确定乙醇溶液的最佳洗脱浓度。洗脱产物采用BCA法测定总蛋白浓度后,经SDS-PAGE,采用凝胶成像分析软件Bandscan 5.0分析apo A1纯度,并评价该方法制备apo A1的效率。结果人血浆中加入1%(m/V)的气相二氧化硅时,apoA1提取效果最佳。气相二氧化硅与人血浆混合物孵育10 min,可完成对apoA1的饱和吸附。该混合物固液分离在大于12 000×g的离心力条件下离心10 min,可获得最佳效果。洗脱液中乙醇最佳浓度为20%(V/V)。在该洗脱条件下,可从1 mL人血浆中制备纯度为78.7%的apoA1 0.92 mg。结论建立了利用气相二氧化硅从人血浆中制备apoA1的方法,该方法可简便高效地从人血浆中制备apoA1。

    2018年02期 v.31 195-199页 [查看摘要][在线阅读][下载 264K]
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  • 二代测序法分析儿童肺炎支原体肺炎肺泡灌洗液中Th1/Th2的平衡

    庄华东;李威;王春艳;卢瑞华;刘君辉;孟繁峥;

    目的应用二代测序技术(next-generation sequencing,NGS)检测肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)患儿肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中,Th1细胞因子IFNγ、Th2细胞因子IL-4的表达水平及免疫应答的平衡变化趋势。方法提取支气管异物、MPP轻症及重症患儿BALF样本,应用NGS技术中转录组测序技术进行深度测序,根据基因表达量检测IFNγ、IL-4表达水平,并计算IL-4/IFNγ比值;采用Real-time q PCR法对样本的IFNγ、IL-4、IL-4/IFNγ相关趋势进行验证。结果 MPP轻症患儿BALF中IL-4、IFNγ表达水平及IL-4/IFNγ比值均较支气管异物对照组升高,MPP重症患儿BALF中IL-4、IFNγ水平较轻症组和支气管异物对照组升高,IL-4/IFNγ比值较支气管异物对照组升高,较轻症组有所下降。结论在MPP患儿免疫反应中,MPP轻症及重症患儿BALF中两类细胞因子均有所升高,IL-4/IFNγ比值变化趋势表明Th1/Th2存在失衡现象,MPP轻症组、重症组与支气管异物对照组相比,平衡向Th2移动,因此,平衡以Th2反应占优势为主。

    2018年02期 v.31 200-204+209页 [查看摘要][在线阅读][下载 269K]
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综述

  • 减毒活疫苗的应用及其研究进展

    李征;刘晔;李春阳;

    减毒活疫苗可引发机体免疫反应,刺激机体产生特异性的记忆B和T细胞,获得长期或终生保护作用,与灭活疫苗比较,减毒活疫苗具有免疫力强及作用时间长的优点。减毒活疫苗在疫苗史的初期就发挥了关键作用,如通过接种牛痘预防天花;后续开发的麻风腮减毒活疫苗、乙脑减毒活疫苗、水痘减毒活疫苗、轮状病毒减毒活疫苗、登革热减毒活疫苗及卡介苗等均具有良好的免疫效果;新开发减毒活疫苗还可用于预防和治疗肿瘤、糖尿病、肺炎及新结核病等疾病,具有广泛的应用前景。本文就减毒活疫苗在传染性疾病、肿瘤及其他疾病中的应用及研究进展作一综述。

    2018年02期 v.31 205-209页 [查看摘要][在线阅读][下载 192K]
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  • 轮状病毒疫苗的研发进展

    司璐;魏至栋;

    轮状病毒(rotavirus,RV)是引起5岁以下儿童严重急性腹泻的主要病原菌之一,全球每年有50万~60万儿童死于RV引起的腹泻,其中90%以上来自发展中国家,在非洲和亚洲低收入国家造成了严重的疾病负担。几乎全球所有儿童在5岁以前均感染过RV,临床上对RV引起的腹泻尚无特异性治疗手段,RV疫苗的合理应用是减轻腹泻的最有效方法。本文主要对目前国内外RV疫苗的研发进展、面临的挑战及未来的展望作一综述。

    2018年02期 v.31 210-214页 [查看摘要][在线阅读][下载 190K]
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  • 百日咳毒素的研究进展

    李鑫;张新创;谢贵林;

    百日咳毒素(pertussis toxin,PTX)是鲍特菌属百日咳杆菌产生的一种主要毒力因子,具有多种生物学活性,其为引起百日咳众多临床症状的主要因素,同时也是无细胞百日咳疫苗(acellular pertussis vaccine,APV)中唯一不受争议的抗原成分。本文就PTX的分子结构、生物学活性及其在疫苗中的应用作一综述。

    2018年02期 v.31 215-219+224页 [查看摘要][在线阅读][下载 261K]
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专题报道

  • 儿童家长对第二类疫苗接种意愿及其影响因素的调查分析

    郑东旖;刘兆秋;时念民;段瑾;张娇;王熙;

    <正>疫苗是目前人类预防疾病最有效的武器~([1])。国务院颁布的《疫苗流通和预防接种管理条例》将疫苗分为两类:第一类疫苗是指政府免费向公民提供,公民应当依照政府的规定受种的疫苗;第二类疫苗是指公民自费并且自愿受种的其他疫苗,由受种者或其监护人承担接种费用~([2])。第二类和第一类疫苗均应通过预防接种门诊对公民实施接种~([3]),因此,接种门诊工作人员的服务意识直接影响公民对第

    2018年02期 v.31 220-224页 [查看摘要][在线阅读][下载 158K]
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消息

  • 《中国生物制品学杂志》移动版上线了

    <正>为深度推进《中国生物制品学杂志》数字化转型,使期刊的资源得到广泛传播和利用,本刊已入北京世纪超星信息技术发展有限责任公司的移动"域出版"平台,旨在更好地为业内同仁提供快捷的学习方式。扫描二维码,下载"超星学习通",点击"移动图书馆→期刊",输入"中国生物制品学杂志"即可浏览,敬请关注指导。

    2018年02期 v.31 144页 [查看摘要][在线阅读][下载 47K]
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