中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 肠道病毒71型灭活疫苗免疫原性比较

    高帆;苏瑶;卞莲莲;姚昕;毛群颖;梁争论;

    目的探讨新上市国产肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗诱导小鼠体液免疫和细胞免疫应答特性。方法分别用我国3家企业生产的EV71灭活疫苗(V1、V2、V3)按0、14 d程序免疫BALB/c小鼠,采用体外微量中和试验检测血清单剂和2剂免疫后14 d的EV71中和抗体效价,ELISA法检测2剂免疫后14 d的小鼠脾单个核细胞(mononuclear cells,MNC)分泌细胞因子水平。结果 3家EV71疫苗1剂免疫后即可诱导90%以上小鼠产生EV71中和抗体阳转,V1疫苗组诱导的中和抗体效价显著高于V2和V3疫苗组,GMT分别为627.1、25.9和75.3(P<0.01);2剂免疫后中和抗体阳转率均为100%,V1和V3疫苗组抗体效价相近,GMT分别为1 752.9和2 013.5(P>0.05),均显著高于V2疫苗组(GMT为228.2,P<0.001)。3家疫苗均可诱导BALB/c小鼠产生Th1和Th2类细胞因子应答,但细胞因子种类具有差异,V1和V3疫苗组诱导小鼠分泌IFNγ的水平显著高于V2疫苗组(P<0.05);3个疫苗组间IL-2分泌水平差异无统计学意义(P>0.05),IL-4和IL-5分泌水平与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);V2疫苗组诱导小鼠分泌的IL-6水平显著高于V3疫苗组(P<0.01);V3疫苗组诱导小鼠分泌的IL-10水平显著高于V1和V2疫苗组(P<0.05)。结论 3家EV71疫苗均可诱导小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答,但呈现出不同的免疫应答特征。

    2017年07期 v.30 673-677+684页 [查看摘要][在线阅读][下载 219K]
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  • 近交系小鼠H-2基因与接种乙型肝炎疫苗后无(弱)应答的相关性分析

    马丽颖;钟熙;梁争论;岳秉飞;贺争鸣;刘双环;

    目的分析近交系小鼠H-2基因与接种乙型肝炎疫苗后无(弱)应答的相关性,建立免疫无应答小鼠动物模型,从基因水平和细胞因子水平研究免疫无应答的遗传机制,为乙肝疫苗的研制及人类免疫无应答的研究提供理论依据。方法采用微量细胞毒法检测不同近交系小鼠(DBA/1、BALB/c、NIH、SJL、C57BL/6、C57BL/10)的H-2单倍型;PCR法检测小鼠的H-2A和H-2E基因。用3种重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母、汉逊酵母、CHO细胞)和治疗性乙型肝炎疫苗(乙克)分别免疫6种不同品系近交系小鼠,采用ELISA法检测抗体水平,流式细胞术检测小鼠CD4~+、CD8~+、CD19~+T细胞和Treg细胞免疫前后的变化。结果不同近交系小鼠有不同的H-2单倍型。除封闭群小鼠NIH外,近交系小鼠SJL在A基因区内有两条200和500 bp的区带,其余均为1条区带;不同品系小鼠在H-2E基因区段均无异常表现。C57BL/10小鼠对乙肝疫苗表现为免疫无(弱)应答。结论 C57BL/10小鼠可作为免疫无应答实验动物模型,进行乙肝疫苗免疫无(弱)应答的相关性研究。建议在进行疫苗效力检测时先检测所用小鼠的H-2基因型,根据小鼠H-2基因的单倍型与免疫反应的相关性筛选实验用小鼠。

    2017年07期 v.30 678-684页 [查看摘要][在线阅读][下载 384K]
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基础研究

  • 腺病毒抗原表位嵌合蛋白的原核表达及其免疫原性

    王新国;齐永;潘英;李素芹;李佳萌;陈红霞;李素梅;陈晨;徐艺菲;张玉彬;李越希;

    目的设计含有人腺病毒(human adenovirus,HAd V)3、7、11、14及55型抗原表位的嵌合蛋白,利用大肠埃希菌进行原核表达,并检测其抗原性及免疫原性。方法对5种型别HAd V的六邻体蛋白氨基酸序列进行分析,筛选出其中具有强抗原性的片段,片段之间用2个甘氨酸和1个丝氨酸进行连接,形成1个多抗原片段串联的嵌合蛋白。优化嵌合蛋白的基因序列并化学合成全长基因,克隆至原核表达载体p ET28a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),筛选高表达嵌合蛋白的工程菌。用High Affinity Ni-NTA resin纯化该嵌合蛋白,并将其作为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备抗血清,间接ELISA法检测嵌合蛋白的抗原性及免疫原性。结果成功构建了高表达嵌合蛋白的工程菌,表达的嵌合蛋白相对分子质量约55 000,表达量达95%;破菌上清中嵌合蛋白的纯度较高,纯化后纯度在90%以上。嵌合蛋白免疫小鼠4次后,小鼠抗血清效价达1∶320 000。制备的腺病毒抗原表位嵌合蛋白能有效检测血清中腺病毒3、7、11、14及55型抗体,且能有效刺激机体产生针对各型别腺病毒抗原表位的抗体。结论表达制备的包含5种型别HAd V抗原表位的嵌合蛋白具有较好的抗原性及免疫原性,为进一步研制腺病毒疫苗、单克隆抗体及诊断试剂奠定了基础。

    2017年07期 v.30 685-689页 [查看摘要][在线阅读][下载 263K]
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  • 羊布鲁菌16MUGPase基因缺失株的构建及其特性分析

    卜昭阳;杨艳玲;郎需龙;钱晶;李诗雨;李争;卢晓冉;沙洲;王莉;王兴龙;

    目的构建羊布鲁菌16M株的尿苷三磷酸-葡萄糖-1-磷酸-尿苷酰基转移酶(UTP-glucose-1-phosphate-uridylyltransferase,简称UGPase)基因缺失候选疫苗株,并对其侵染宿主巨噬细胞的能力及毒力进行初步分析。方法采用PCR技术对羊布鲁菌的UGPase基因上、下游同源臂进行克隆,利用基因同源重组技术构建自杀质粒,经两步筛选法对重组菌株筛选后,进行巨噬细胞黏附侵袭试验和小鼠体内毒力试验。结果自杀质粒p BK-CMV-Sac B-△UGP构建成功,经双向筛选获得了羊布鲁菌UGPase基因缺失株16M△UGP。16M△UGP缺失株侵入巨噬细胞的CFU数低于16M强毒株,但高于M5疫苗株;小鼠攻毒14 d后,其平均脾指数为(6.55±0.27)g,平均克脾菌数为1.64×104CFU/g,均低于16M强毒株。结论成功构建了羊布鲁菌16M株的UGPase基因缺失株,并证实了UGPase基因的缺失对16M株毒力具有一定影响。

    2017年07期 v.30 690-694页 [查看摘要][在线阅读][下载 267K]
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  • 乳酸菌强化发酵对小米淀粉分子结构及糊化特性的影响

    寇芳;王维浩;王立东;李文杰;康丽君;宁冬雪;夏甜天;沈蒙;曹龙奎;

    目的研究自然发酵的优势菌-乳酸菌对小米淀粉分子结构及糊化特性的影响,为分析不同菌属在小米自然发酵中的改性机理及发酵对小米淀粉性质的影响奠定基础。方法采用0.2 g/100 ml的Na OH提取发酵后的小米淀粉,检测乳酸菌发酵后对小米淀粉颗粒结构、结晶度、官能团、分子量、糊化及老化特性的影响。结果乳酸菌发酵后,淀粉颗粒表面有明显的侵蚀迹象,而自然发酵淀粉颗粒表面侵蚀迹象较轻。乳酸菌发酵后小米淀粉的结晶度较自然发酵增加1.49%。发酵未改变小米淀粉官能团区的峰位,但特征峰强度减弱,乳酸菌发酵后小米淀粉指纹区图谱消失。未发酵小米淀粉重均分子量(Mw)在1.5×10~4~5.9×10~5 g/mol之间,自然发酵小米淀粉Mw在2.1×10~4~5.4×10~5g/mol之间,乳酸菌发酵小米淀粉Mw在1.6×10~4~5.3×10~5 g/mol之间,乳酸菌发酵后支链淀粉长链及直链淀粉比例减少,而中间及短支链淀粉的比例相对增加。乳酸菌发酵96 h,与自然发酵相比,糊化温度下降0.84℃,热焓值增加1.00 J/g,回生值下降743 m Pa·s。结论自然发酵的优势菌-乳酸菌可使小米淀粉的分子结构、糊化及老化特性发生明显变化,并在小米自然发酵过程中起主导作用。

    2017年07期 v.30 695-701页 [查看摘要][在线阅读][下载 306K]
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  • 冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)生产毒种的筛选

    任红卫;郑学刚;李守丽;金学敏;杨淼;李国晏;何彦林;

    目的筛选冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)生产毒种。方法将原代地鼠肾细胞传毒种(北京固定毒7aG)和豚鼠脑传毒种(北京固定毒6aG4)平行接种于10层细胞工厂培养的原代单层地鼠肾细胞,收获病毒液,共收获8次,1、3、5、7、9号细胞工厂接种脑毒,2、4、6、8、10号细胞工厂接种细胞毒。1次收获(简称1收)培养72h,从2次收获(简称2收)开始,培养24h,收获液经超滤浓缩、柱层析纯化、除菌过滤、再浓缩配制成人用狂犬病疫苗半成品,检测各项指标,筛选最佳毒种。结果6aG4株毒种制备的病毒收获液、浓缩液、纯化液、纯化除菌过滤液、狂犬病疫苗半成品的各项检定指标都优于7aG毒种。结论豚鼠脑传毒种(6aG4)明显优于原代地鼠肾细胞传毒种(7aG),选择豚鼠脑传毒种(6aG4)作为人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)生产毒种。

    2017年07期 v.30 702-705页 [查看摘要][在线阅读][下载 137K]
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  • BN大鼠在外来化合物致敏研究中的应用及评价

    孙运;陈小青;马中春;赵少浩;张银依;

    目的通过BN大鼠皮肤贴敷和皮内注射试验染毒具有致敏性的外源性化学物质己基肉桂醛,观察致敏特点,同时以豚鼠作为对照观察动物,探讨BN大鼠作为化学品过敏试验动物模型的可能性。方法将BN大鼠和白色豚鼠分别随机分为2组:对照组和己基肉桂醛组,每组10只。将己基肉桂醛组实验动物于试验的第1天分别进行皮肤贴敷试验和皮内注射试验,皮肤贴敷试验于首次贴敷后28 d进行激发试验,皮内注射试验于皮内注射后21 d进行激发试验;对照组给予相同体积的生理盐水注射液。激发后观察每只动物过敏反应情况,根据过敏反应症状评分,计算致敏率,对致敏强度进行分级。经腹主动脉取血,分离血清,竞争ELISA法检测血清Ig E含量。结果皮肤贴敷试验中染毒己基肉桂醛后,BN大鼠和豚鼠致敏率分别为60%和50%;BN大鼠血清Ig E含量与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),豚鼠Ig E含量与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。皮内注射试验中染毒己基肉桂醛后,BN大鼠和豚鼠致敏率分别为70%和80%;BN大鼠和豚鼠己基肉桂醛组血清Ig E含量与各自的对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在皮肤贴敷和皮内注射过敏反应中,BN大鼠已基肉桂醛组呈阳性反应,染毒后的局部反应特点强于豚鼠,因此,BN大鼠作为化学品过敏试验的动物模型具备可能性。

    2017年07期 v.30 706-709页 [查看摘要][在线阅读][下载 143K]
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治疗性制剂

  • A型肉毒毒素和A型肉毒神经毒素的非临床安全性评价

    梁琪;陈苏玲;张若晖;魏子昊;苏娟;周易;李小娟;何星;张雪平;

    目的分析注射用A型肉毒毒素和注射用A型肉毒神经毒素活性药用成分(active pharmaceutical ingredient,API)的纯度、N-末端氨基酸序列和相对分子质量,并通过多个非临床研究试验,评价两种制品在药理、毒理特性等方面的一致性。方法采用SDS-PAGE法检测注射用A型肉毒毒素(衡力~,Lantox~,以下简称复合物)和注射用A型肉毒神经毒素(Chintox~,以下简称神经毒素)的纯度;对其N-末端氨基酸序列进行测序,并将测序结果与NCBI blast数据库中A型肉毒梭菌Hall株的氨基酸序列比对,确证其各组分的成分;毛细管凝胶电泳(capillary gel electrophoresis,CGE)检测其在非还原及还原条件下各组分的相对分子质量;单次肌肉注射、静脉注射、灌胃给予大鼠及单次肌肉注射给予食蟹猴的试验评价复合物和神经毒素的急性毒性;重复肌肉注射给予食蟹猴39周和恢复期12周的药理毒理试验评价复合物和神经毒素的长期毒性;家兔红细胞的体外溶血试验评价两者的溶血性;肌肉注射给予大鼠Ⅰ、Ⅱ段生殖毒性试验评价肉毒毒素的生殖毒性。结果神经毒素组:非还原条件下,神经毒素相对分子质量约152 000,N-末端氨基酸序列ALNDLQINVN,为完整的A型肉毒神经毒素;还原条件下,由相对分子质量约101 000,N-末端氨基酸序列ALNDLQINVN的重链和相对分子质量约51 000、N-末端氨基酸序列PFVNKQFNYK的轻链组成;复合物组:非还原条件下,含A型肉毒神经毒素(Mr 152 000)、非毒素非血凝素蛋白(non-toxic non-HA,NTNH)(Mr 136 000)、HA70组分(Mr 57 000、17 000)、HA33组分(Mr 30 000、28 000)和HA17组分(Mr 15 000),还原条件下,则含有重链、轻链、NTNH、HA70、HA33和HA17组分。注射用A型肉毒毒素、注射用A型肉毒神经毒素单次肌肉注射和静脉注射给予大鼠,肌肉注射的最大耐受剂量≥100 U/kg,静脉注射的最大耐受剂量≥30 U/kg;单次肌肉注射给予食蟹猴所产生的急性中毒反应与死亡情况一致,最大耐受剂量均为20 U/kg,近似致死剂量为40 U/kg;反复肌肉注射给予食蟹猴的试验中,未见明显毒性作用剂量(no observed adverse effect level,NOAEL)均为16 U/kg;在体外对家兔红细胞无溶血作用,不引起红细胞凝聚;Ⅰ段生殖毒性试验对雄鼠生育力的NOAEL为4U/kg,对雌鼠生育力的NOAEL为8 U/kg,对孕鼠早期胚胎发育的NOAEL为16 U/kg;Ⅱ段生殖毒性试验对孕鼠的NOAEL为1 U/kg,对胚胎-胎仔毒性和致畸性的NOAEL为16 U/kg。结论注射用A型肉毒毒素和注射用A型肉毒神经毒素在食蟹猴和大鼠的急性毒性、长期毒性等试验中,剂量、动物病理解剖结果一致,进一步说明A型肉毒毒素和A型肉毒神经毒素的药理毒理特性是相同的,且在反复肌肉注射给予食蟹猴的长期毒性试验中发现,A型肉毒神经毒素更不易产生抗体。在神经毒素灌胃试验中半数致死剂量高于复合物,表明其安全性更好。

    2017年07期 v.30 710-717页 [查看摘要][在线阅读][下载 480K]
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  • 细胞核染色法检测人免疫球蛋白类制品巨细胞病毒中和抗体效价

    王敏力;秦婷婷;刘波;杨春;刘兰军;侯继锋;

    目的检测静注免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)(p H 4)及巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)免疫球蛋白(IG)中的CMV中和抗体效价。方法采用基于微量细胞病变的细胞核染色法检测39批国产IVIG、8批注册检验巨细胞病毒免疫球蛋白(CMV-IG)以及2批国外CMV-IG制品的CMV中和抗体效价。结果 39批IVIG的CMV中和抗体效价几何平均值为361 U/ml,最低效价为234 U/ml,最高效价为502 U/ml;8批注册检验CMV-IG的CMV中和抗体效价几何平均值为1 113 U/ml,最低效价为923 U/ml,最高效价为1 553 U/ml;2批国外CMVIG的CMV抗体效价分别为579 U/ml和163 U/m。8批注册检验CMV-IG的CMV中和抗体效价显著高于39批IVIG的CMV中和抗体效价(P<0.001)。结论国产39批IVIG的CMV中和抗体效价在234~502 U/ml之间,经血浆筛查后投浆制备的CMV-IG显著高于普通IVIG的CMV中和抗体效价。

    2017年07期 v.30 718-722页 [查看摘要][在线阅读][下载 168K]
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  • 八肽胆囊收缩素对肿瘤坏死因子-α诱导大鼠RSC-364细胞增殖及金属蛋白酶分泌的影响及作用机制

    徐锦荣;丛斌;李淑瑾;金玉怀;赵占胜;

    目的探讨八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导大鼠RSC-364细胞增殖及金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)分泌的影响及作用机制。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测TNF-α诱导RSC-364细胞的增殖情况,ELISA法测定细胞中MMPs(MMP-1、MMP-3、MMP-9)的分泌水平、环腺苷酸(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)含量和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)活性。结果 TNF-α可促进RSC-364细胞增殖及MMP-1、MMP-3、MMP-9的分泌,CCK-8可抑制TNF-α的上述作用,Forskolin(一种c AMP诱导剂)与CCK-8的上述作用类似,而H89(PKA特异性抑制剂)可部分逆转CCK-8的上述作用。TNF-α可提高细胞中c AMP含量和PKA活性,CCK-8(10~(-10)、10~(-8)、10~(-6) mol/L)可进一步促进TNF-α的上述作用,且呈剂量依赖性,CR1409(CCK-A受体结抗剂)和CR2945(CCK-B受体结抗剂)可部分逆转CCK-8的上述作用,以CR2945为著。结论 CCK-8可通过活化c AMP-PKA信号通路,进而抑制TNF-α促细胞增殖和MMP-1、MMP-3、MMP-9的分泌,该过程由CCK受体介导。

    2017年07期 v.30 723-727页 [查看摘要][在线阅读][下载 208K]
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  • 培哚普利对去势大鼠骨质疏松的影响

    顾会平;贾晓炜;

    目的观察培哚普利对去势大鼠骨质疏松的影响。方法将大鼠随机分为5组,每组10只。经切除大鼠双侧卵巢建立骨质疏松动物模型(OVX组)后,低(LP组)、中(MP组)、高剂量培哚普利组(HP组)经灌胃分别按2、4、8 mg/(kg·d)给药(溶解于1 ml生理盐水),正常对照组(CON组)仅切除卵巢周围部分脂肪组织,CON与OVX组仅灌胃等体积(1 ml)的生理盐水,均仅给药1次。给药24周后经股动脉采血并处死大鼠,检测血清钙、磷及碱性磷酸酶(ALP)活性,取股骨检测骨密度及生物力学变化。结果与CON组比较,OVX组血清钙、磷、ALP活性及骨密度明显下降(P<0.05)。与OVX组比较,MP及HP组大鼠的血清钙含量明显升高(P<0.05);MP组大鼠的血清磷含量明显升高(P<0.05);HP组大鼠的ALP活性明显升高(P<0.05),MP及HP组大鼠的骨密度均明显升高(P<0.05);MP组大鼠股骨的最大力学载荷明显升高(P<0.05)。结论各剂量培哚普利对改善骨质疏松模型大鼠的骨密度及生物力学均有效果,以中剂量培哚普利改善效果最佳。

    2017年07期 v.30 728-730页 [查看摘要][在线阅读][下载 112K]
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诊断制剂

  • 白斑综合征病毒胶体金免疫层析试剂板的研制

    刘长军;王振国;陈青舟;夏武强;缪翁晟途;平夏婷;

    目的研制检测对虾中白斑综合征病毒(white spot syndrome virum,WSSV)的胶体金免疫层析试剂板。方法分别制备抗WSSV单克隆抗体和多克隆抗体,并用胶体金标记单克隆抗体,将胶体金标记的抗WSSV单克隆抗体包被在金标垫上,抗WSSV多克隆抗体和羊抗鼠Ig G分别包被在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上,组装成试剂板,通过双抗体夹心法检测样品中WSSV含量。确定试剂板检测WSSV的最低检出限,验证其特异性,并检测其与ELISA结果的符合率及稳定性。结果该试剂板对WSSV的最低检出限为1.0 mg/kg,特异性强,与ELISA实验结果相符,在室温条件下(20~25℃)可保存12个月。整个检测所需时间为8~10 min。结论该试剂板能快速有效地筛查WSSV,适合现场快速检测。

    2017年07期 v.30 731-734+738页 [查看摘要][在线阅读][下载 207K]
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临床研究

  • 1例接种ACYW_(135)群脑膜炎球菌多糖疫苗偶合Miller-Fisher综合征的调查分析

    张艳;

    目的分析1例接种ACYW_(135)群脑膜炎球菌多糖疫苗(group ACYW_(135)meningococcal polysaccharide vaccine,MPV-ACYW_(135))后偶合发生Miller-Fisher综合征案例,为类似案例处置提供参考。方法收集患儿的疾病资料、接种资料,疫苗批签发、运转、管理资料,结合现场检查进行调查。结果患儿所患疾病Miller-Fisher综合征与接种MPVACYW_(135)因果关系依据不充分,为偶合症。结论调查诊断时不仅要充分收集接种前后的患病就诊资料,也需在合适的时间内补充开展辅助检查。预防接种人员在实施接种的过程中,需仔细了解受种者的健康状况,掌握疫苗禁忌症,减少偶合疾病的发生。

    2017年07期 v.30 735-738页 [查看摘要][在线阅读][下载 138K]
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  • Scc、CA125和Ki67在宫颈癌和癌前病变诊断中的价值

    张佳佳;王萍;

    目的探讨鳞状上皮细胞癌抗原Scc、CA125和Ki67在宫颈癌和癌前病变诊断中的价值。方法收集18例正常宫颈、46例宫颈上皮瘤样病变和52例宫颈癌患者,采用化学发光法检测患者血清中Scc、CA125水平,免疫组化SP法检测患者标本中Ki67的表达,并比较3项指标单项检测与联合检测的灵敏度及特异性。结果癌变组患者血清中Scc、CA125水平及Ki67阳性表达率均显著高于瘤变组和正常组(P<0.05);3项指标联合检测的灵敏度及特异性明显高于任一单项指标的灵敏度和特异性。结论 Scc、CA125、Ki67联合检测可作为早期诊断宫颈癌前病变及宫颈癌的标记物,可提高宫颈癌的早期诊断率。

    2017年07期 v.30 739-741页 [查看摘要][在线阅读][下载 109K]
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技术方法

  • 乙型肝炎疫苗中聚乙二醇6000残留量HPLC-蒸发光散射检测器检测方法的建立及其验证

    王瑾;何鹏;赵冉;柴龙龙;王文丽;邹烨宁;李晓东;胡忠玉;

    目的建立测定乙型肝炎疫苗中残留聚乙二醇(PEG)6000含量的HPLC-蒸发光散射检测器(evaporative light scattering detector,ELSD)法,并进行验证。方法对ELSD条件进行优化后,按照色谱条件[色谱柱:TSK-GEL G2000-SWXL(5μm,125魡,7.8 mm×300 mm);流动相:0.025 mol/L醋酸铵溶液;流速:0.8 ml/min]上HPLC测定PEG6000标准溶液和样品中PEG6000含量,并考察该方法的线性、检出限、定量限、精密度、稳定性、回收率和适用性。结果优化后的ELSD条件为:雾化室温度40℃,漂移管温度70℃,气体流速1.20 L/min。PEG6000含量在21.6~216μg/ml范围内,该方法线性关系良好,r=0.999 5,最低检出限为2.16μg/ml,最低定量限为7.13μg/ml;PEG6000标准溶液连续检测6次,RSD为0.72%;样品溶液置不同时间检测结果的RSD<2%;不同浓度PEG6000标准溶液检测结果的回收率在97.3%~107.7%之间;使用建立的方法所有样品均未检出PEG6000,样品中含有Tween-20不干扰PEG6000的测定,分离良好。结论该方法操作简便,灵敏度高,结果准确,适用于乙型肝炎疫苗中残留PEG6000的检测。

    2017年07期 v.30 742-746+750页 [查看摘要][在线阅读][下载 253K]
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  • 95%乙醇循环系统对人血白蛋白质量的影响分析

    李璐;兰学渊;林宏辉;

    目的分析采用低温乙醇工艺制备人血白蛋白时,95%乙醇循环系统对人血白蛋白原液的超滤收率和成品各项质量指标的影响。方法在多批次规模化生产中,分别测定对95%乙醇新增乙醇循环系统前后人血白蛋白原液的超滤收率和成品的纯度、多聚体含量、激肽释放酶原激活剂(prekallikrein activator,PKA)等指标,并将测定结果进行对比。结果新增乙醇循环系统后,人血白蛋白成品的纯度明显升高(P<0.001),多聚体含量明显下降(P<0.001),PKA无明显变化;同时,人血白蛋白原液超滤收率呈稳定趋势,未表现出明显变化。结论在低温乙醇工艺制备人血白蛋白的过程中,对95%乙醇使用乙醇循环系统自动控制添加过程,可降低操作难度,提高工作效率及操作精细度,更好地实现制品分离过程,进一步提升人血白蛋白产品的质量。

    2017年07期 v.30 747-750页 [查看摘要][在线阅读][下载 173K]
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  • 2、9N、17F及20型肺炎链球菌荚膜多糖血清IgG抗体定量检测ELISA法的验证

    李红;石刚;刘茹凤;李亚南;王春娥;唐静;陈琼;石继春;陈翠萍;叶强;

    目的验证2、9N、17F及20型肺炎链球菌荚膜多糖血清IgG抗体定量检测ELISA法。方法采用ELISA法检测2、9N、17F及20型肺炎链球菌荚膜多糖血清Ig G抗体含量,并验证该方法的准确性、精密性、特异性、线性、最低检测限及检测范围。结果 3次加标回收测定各型肺炎链球菌多糖IgG抗体回收率为77.47%~99.33%;连续11次测定质控血清2009S、QC5及QC6各型别多糖抗体的CV值为8.97%~18.38%;随着多糖浓度的增高,对抗体的抑制率也增高,呈浓度依赖性,相应其他22型多糖混合物对抗体的抑制率较低;线性R~2均>0.99;2、9N、17F及20型肺炎链球菌荚膜多糖血清IgG抗体的检测限分别为0.630、0.592、0.478及0.594 ng/ml,检测范围分别为0.125~30.6、0.08~19.425、0.104~25.325及0.089~21.825 ng/ml。结论该方法具有良好的准确性、精密性及特异性,可用于肺炎球菌疫苗临床血清的检测。

    2017年07期 v.30 751-755页 [查看摘要][在线阅读][下载 274K]
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  • 乙型肝炎疫苗纯化产物中脂质含量硫酸-香草醛测定法的建立及验证

    方鑫;雷国民;肖凯;朱征宇;何鹏;陈兴;张卫婷;邹烨宁;邱少辉;胡忠玉;

    目的建立乙型肝炎(简称乙肝)疫苗纯化产物中脂质含量的硫酸-香草醛测定法,并进行验证。方法以三油酸甘油酯为标准品,采用硫酸-香草醛法测定乙肝疫苗纯化产物的脂质含量,并对方法的线性范围、精密性、准确性进行验证,同时分析不同添加物对检测结果的影响。用该方法检测不同厂家乙肝疫苗纯化产物中的脂质含量。结果硫酸-香草醛法的线性范围为50~800μg/ml,回归方程为y=0.001 7 x+0.034 2,r=0.999 1;6次检测同批样品溶液脂质含量的变异系数(coefficient of variation,CV)为0.54%;2名操作人员检测3批样品溶液,重复测定3次的CV值为0.60%~3.26%;9份加标样品溶液的回收率为97.0%~105.4%;加入添加物Tween-20、PEG-6000、葡萄糖、甘油、Tris的样品回收率为92.4%~105.5%。不同厂家疫苗纯化产物每100μg蛋白脂质含量为53.9~309.5μg。结论本实验建立的硫酸-香草醛法具有良好的线性、精密性及准确性,可用于乙型肝炎疫苗纯化产物中脂质含量的测定。

    2017年07期 v.30 756-760页 [查看摘要][在线阅读][下载 198K]
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  • 人免疫球蛋白中甲肝抗体效价ELISA检测方法的建立及验证

    马秋平;王威;郝杰;侯继锋;王箐舟;

    目的建立人免疫球蛋白产品中甲肝抗体效价ELISA检测方法,并对该方法进行验证及初步应用,以期满足《中国药典》三部(2015版)对人免疫球蛋白产品中甲肝抗体效价的质量控制检测要求。方法将人免疫球蛋白甲肝抗体国际标准品(97/646)稀释后,采用建立的ELISA法检测甲肝抗体效价,分别验证方法的线性、准确性和精密度,试验均重复3次。应用建立的方法检测我国3家企业共13批人免疫球蛋白产品中的甲肝抗体效价。结果甲肝抗体效价在10~50 m IU/ml浓度范围内线性良好,相关系数为0.994 8;用建立的方法检测浓度为15、25、35 m IU/ml人免疫球蛋白甲肝抗体国际标准品的回收率在86.9%~104.4%之间,3次测定结果的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于10%。用建立的方法检测我国3家企业共13批人免疫球蛋白产品中的甲肝抗体效价,结果均低于《中国药典》三部(2015版)对甲肝抗体效价不低于100 IU/ml的新增要求。结论建立的ELISA方法快速、准确,可用于检测我国人免疫球蛋白产品的甲肝抗体效价。

    2017年07期 v.30 761-763页 [查看摘要][在线阅读][下载 119K]
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  • 一种高效快速肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗纯化方法的建立

    刘荣凤;寇佳琳;黄前荣;张永强;任新刚;李红臣;

    目的建立一种高效快速肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗CPS9V-CRM_(197)的纯化方法。方法将9V型肺炎球菌多糖(CPS9V)与载体蛋白(CRM197)通过胺还原法进行偶连结合,制备成多糖蛋白结合物CPS9V-CRM_(197)。通过超滤及阴离子层析两步法纯化后,经皮下免疫BALB/c小鼠,5μg/只,首次免疫后14d进行第2次免疫。于末次免疫后0、7、14、21d经颈动脉采血,分离血清,ELISA法检测血清中的IgG及IgM抗体滴度。结果纯化的CPS9V-CRM_(197)结合物纯度达100%,多糖的总回收率为95%,分子半径为8.4nm,CL-4B色谱洗脱体积为50.32ml,酶解敏感性高于载体蛋白CRM197。末次免疫后7、14、21d时,CPS9V-CRM_(197)免疫小鼠血清中IgG及IgM的滴度均明显高于CPS9V组(P<0.05)。结论本实验建立的肺炎多糖结合物两步纯化法具有高效、快速等优点,可用于进一步提高实际工业化生产中的生产效率。

    2017年07期 v.30 764-768页 [查看摘要][在线阅读][下载 256K]
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  • 基于PCR技术的DNA marker的研制

    李梅;廖龙;林惠超;郑杏枝;王锐;李丹;

    <正>20世纪70年代末至80年代初,由于近代生物学的不断发展,分子生物学、基因工程、DNA重组技术等的问世,基于生物遗传物质DNA为基础,从微观角度阐释生命活动规律成为研发的热点~([1])。在这些涉及核酸物质DNA的研发中,DNA marker是使用最为广泛的试剂之一,其能判断和指示核酸大小,用作核酸分子量标准及对核酸片段进行定量分

    2017年07期 v.30 769-771页 [查看摘要][在线阅读][下载 153K]
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综述

  • 长链非编码RNA结肠癌相关转录因子2在恶性肿瘤中的研究进展

    胡媛媛;冯虎;陈玉丙;

    长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)在肿瘤形成和进展中起重要作用,目前已成为继微小RNA(micro RNA,mi RNA)之后肿瘤研究领域的新热点。其中,结肠癌相关转录因子2(colon cancer associated transcript 2,CCAT2)在多种恶性肿瘤中被发现异常表达,扮演着癌基因的角色。CCAT2可影响肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭、周期和凋亡过程,对肿瘤早期筛查、治疗及监测预后具有重要意义。本文总结国内外最新报道,对lnc RNA CCAT2在恶性肿瘤中的研究进展作一综述。

    2017年07期 v.30 772-776页 [查看摘要][在线阅读][下载 162K]
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  • 一次性使用技术在生物制药领域的应用进展

    田洪敏;谢红德;周慧;闫利明;

    一次性使用(single-use或disposable)是指一次性使用后即抛弃使用物品或设备,基于一次性使用的技术,被称为一次性使用技术(single-use technology)。近年来,随着该技术的不断发展,已广泛应用于生物制药领域,并开始改变该领域的生产方式。生物制药领域一次性使用设备主要包括一次性混合系统、一次性生物反应器、一次性纯化系统及一次性灌装系统,与传统设备相比,具有显著优势。本文就一次性使用技术在生物制药领域的应用进展作一综述。

    2017年07期 v.30 777-780+784页 [查看摘要][在线阅读][下载 160K]
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  • 肿瘤坏死因子-α与不孕症关系的研究进展

    刘承波;杨德红;闫雪兰;冯云;

    细胞因子是由免疫细胞和某些非免疫细胞经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质。其介导和调控免疫、炎症反应及单核/巨噬细胞产生单核因子等过程。不孕症(infertility)是指女性无避孕性生活至少12个月未孕。随着社会生活压力的增大,女性妊娠年龄呈上升趋势且不孕患者数量逐年增加。肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)属于细胞因子之一,通过多种生物学效应参与子宫内膜异位症的形成和发展,同时干扰胰岛素信号途径中酪氨酸的磷酸化,抑制细胞膜上胰岛素受体底物-1(insulin receptorsubstrate-1,IRS-1)和胰岛素受体β(insulin receptorβ,INSR-β)链上酪氨酸激酶的磷酸化,导致胰岛素信号传导通路受阻,形成胰岛素抵抗。此外,TNF-α还能造成输卵管损伤,引起女性不孕。本文就国内外关于TNF-α与不孕症的关系研究作一综述。

    2017年07期 v.30 781-784页 [查看摘要][在线阅读][下载 155K]
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消息

  • 欢迎订阅《中国生物制品学杂志》

    <正>《中国生物制品学杂志》于1988年创刊,由中华人民共和国卫生部主管,系中华预防医学会系列杂志之一,为报道我国生物制品研究开发重大成果和最新进展的国内唯一生物制品专业学术期刊。主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临

    2017年07期 v.30 694页 [查看摘要][在线阅读][下载 36K]
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  • 征稿

    <正>《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外进展的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管,中华预防医学会和长春生物制品研究所有限责任公司主办,是中华预防医学会系列杂志之一,月刊。本刊主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床医学等

    2017年07期 v.30 701页 [查看摘要][在线阅读][下载 30K]
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  • 2017第五届上海国际生物发酵产品与技术装备展览会

    <正>由中国生物发酵产业协会主办、上海信世展览服务有限公司承办的2017第五届上海国际生物发酵产品与技术装备展览会(BIO CHINA),将于2017年10月25~27日在上海新国际博览中心举行。BIO CHINA已成为全球发酵行业年度盛会,业界有识之士汇聚一堂,新观点新思想荟萃一处。BIO CHINA,中国生物发酵行业再创业征程扬帆起航!为生物发酵行业和相关行业搭建了一个技术交流、促进合作、扩大上

    2017年07期 v.30 722页 [查看摘要][在线阅读][下载 35K]
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  • 《中国生物制品学杂志》移动版上线了

    <正>为深度推进《中国生物制品学杂志》数字化转型,使期刊的资源得到广泛传播和利用,本刊已入北京世纪超星信息技术发展有限责任公司的移动"域出版"平台,旨在更好地为业内同仁提供快捷的学习方式。扫描二维码,下载"超星学习通",点击"移动图书馆→期刊",输入"中国生物制品学杂志"即可浏览,敬请关注指导。

    2017年07期 v.30 760页 [查看摘要][在线阅读][下载 42K]
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