中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 不同载体蛋白对18C型肺炎多糖结合疫苗稳定性影响的比较

    常鑫;谭艾娟;吕世明;

    目的比较以牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)及破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)作为载体蛋白对18C型肺炎多糖结合疫苗稳定性的影响。方法采用点击化学法分别以BSA及TT作为载体蛋白制备18C型肺炎多糖结合疫苗。将2种疫苗在2~8℃条件下保存2、4、8个月,考察疫苗稳定性;分别于(25±2)℃条件下保存2、4、6周及(37±2)℃条件下保存7、14、21 d,考察疫苗的加速稳定性。每个时间点样品均进行外观检查、多糖含量、蛋白含量、pH测定、无菌检查及游离多糖含量测定。结果以TT及BSA作为载体蛋白制备的结合疫苗各项稳定性指标均符合《中国药典》三部(2010版)的相关要求,其中不同温度部分检测时间点结合物Ps-TT的游离多糖含量显著低于Ps-BSA(P<0.05)。结论 TT作为载体蛋白制备18C型肺炎多糖结合疫苗的稳定性明显优于BSA。

    2017年04期 v.30 337-341页 [查看摘要][在线阅读][下载 211K]
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  • 首批黄热减毒活疫苗病毒滴度国家标准品的研制

    王玲;刘晶晶;孔艳;李玉华;

    目的制备我国首批黄热减毒活疫苗病毒滴度国家标准品。方法委托北京天坛生物制品股份有限公司制备1批经全面检验合格的黄热减毒活疫苗作为候选国家标准品(批号为:20111201)。由3家实验室采用空斑法对黄热减毒活疫苗病毒滴度标准品进行协作标定,以黄热病疫苗国际标准品为溯源,确定本国家标准品以LgIU/ml为标示单位的病毒滴度,并分析标准品的分装精度、稳定性、均匀性。结果制备的国家标准品分装精度为-0.68%~0.95%。3家实验室20次协作标定结果显示,标准品病毒滴度的IU赋值为5.4 LgIU/ml。37℃2周加速破坏试验病毒滴度下降0.5 LgPFU/ml;长期稳定性考察(-30℃),病毒滴度2年内下降0.5 LgPFU/ml,而第3、4年病毒滴度基本无下降。均匀性参考量值——pH的CV值为0.17%、卵清蛋白含量的CV值为4.4%,病毒滴度CV值为2.0%。结论研制的黄热减毒活疫苗病毒滴度国家标准品符合国家标准品要求,可作为国家标准品进行发放和使用。该国家标准品批准文号为(2016)国生标字0032,其批号编码为250017-20111201。

    2017年04期 v.30 342-345+350页 [查看摘要][在线阅读][下载 178K]
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基础研究

  • 人血管内皮生长因子189在毕赤酵母中的表达、纯化及其活性

    贾恩朝;夏文娇;路臣桂;张会勇;朱武凌;

    目的在毕赤酵母中表达人血管内皮生长因子189(vascular endothelial growth factor 189,VEGF189),并进行纯化,同时检测其在体外的生物活性。方法以人VEGF183为模板,经重叠PCR法获得VEGF189基因,亚克隆至pPIC9K中,获得重组表达质粒pPIC9K-VEGF189。将其转化至E.coli DH5α中进行扩增,提取质粒,用SacⅠ酶线性化,电转至毕赤酵母GS115中,经4 mg/ml G418-YPD平板筛选高拷贝克隆。采用甲醇进行诱导表达,并通过肝素琼脂糖树脂亲和层析进行纯化。血管通透性试验检测其生物活性。结果经PCR鉴定证明重组表达质粒pPIC9K-VEGF189构建正确。VEGF189蛋白的表达及纯化产物均可与兔抗人VEGF183多克隆抗体发生特异性结合,纯化蛋白纯度达95%以上,浓度为0.291 1 mg/ml,可增加血管的通透性。结论本实验通过酵母表达系统获得了具有活性的VEGF189蛋白,为在体外探讨该蛋白在血管生成中的作用奠定了基础。

    2017年04期 v.30 346-350页 [查看摘要][在线阅读][下载 260K]
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  • 呈现埃博拉病毒包膜糖蛋白抗原表位重组病毒样颗粒的构建

    黎奎;孙鹏艳;姚宇峰;刘存宝;黄惟巍;王世杰;褚晓杰;白红妹;杨旭;孙文佳;马雁冰;

    目的构建呈现埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)包膜糖蛋白(glycoprotein,GP)抗原表位的病毒样颗粒(viruslike particles,VLPs)。方法通过EBOV GP抗原性预测,并结合其功能结构域分析获得潜在的B细胞表位,经基因重组将该抗原表位插入至乙肝核心抗原(HBcAg)的优势表位区域,SDS-PAGE法分析重组HBcAg抗原表位嵌合蛋白的表达。重组菌体破碎上清经硫酸铵沉淀和蔗糖密度梯度离心纯化后,通过电镜观察VLPs形态。将VLPs与Alum佐剂按1∶1的比例混合,经背部皮下免疫小鼠。ELISA及Western blot法检测小鼠血清的特异性。结果重组HBcAg抗原表位嵌合蛋白的相对分子质量约19 300,纯化后蛋白浓度为1.244 mg/ml,镜下可见其以VLPs形式存在。VLPs免疫小鼠血清可与GP发生特异性免疫反应。结论成功构建了呈现EBOV GP抗原表位的VLPs,其可有效诱导小鼠产生特异性免疫应答。本实验为EBOV基因重组疫苗的研究及特异性抗体的制备奠定了基础。

    2017年04期 v.30 351-356页 [查看摘要][在线阅读][下载 328K]
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  • 融合蛋白FliC-Pfs25在trxB和gor基因双突变大肠埃希菌中的表达

    钱锋;刘晓;李梦梦;陈勇;蒋琳;徐沪济;

    目的检测恶性疟原虫表面蛋白25(Plasmodium falciparum surface protein 25,Pfs25)与鼠伤寒沙门菌1相鞭毛蛋白(phase 1 flagellin of Salmonella enterica serovar Typhimurium,FliC)的融合蛋白FliC-Pfs25,在硫氧还蛋白还原酶基因(thioredoxin reductase gene,trxB)和谷胱甘肽还原酶基因(glutathione reductase gene,gor)双突变大肠埃希菌Origami2(DE3)中的表达。方法将含有Pfs25和FliC基因的重组质粒pET28a(+)-fliC-pfs25转化Origami2(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白FliC-Pfs25,破菌上清经Ni-Sepharose纯化,纯化产物进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。将纯化的融合蛋白配制成不同的疫苗制剂免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠免疫血清中抗Pfs25抗体水平。结果融合蛋白FliC-Pfs25在Origami2(DE3)中以可溶性形式表达;纯化的融合蛋白可被两个抗Pfs25的单抗mAb 1A6和mAb 4D10识别;融合蛋白与铝佐剂结合在小鼠中激发出抗Pfs25的抗体应答,但Origami2(DE3)表达的FliCPfs25与抗Pfs25单抗的反应以及在小鼠中激发抗Pfs25抗体的能力,均弱于大肠埃希菌BL21(DE3)表达的FliCPfs25。结论融合蛋白FliC-Pfs25在大肠埃希菌Origami2(DE3)中成功获得表达,但trxB和gor两个基因的突变未显示出能够提高该融合蛋白在大肠埃希菌中的表达量。

    2017年04期 v.30 357-361页 [查看摘要][在线阅读][下载 252K]
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  • 登革病毒感染C6/36、Vero、BHK-21和THP-1细胞CPE的比较及病毒检测

    杨佳佳;姜黎明;罗佳;叶超;文送娇;孙强明;

    目的比较感染登革病毒(dengue virus,DV)的C6/36、Vero、BHK-21和THP-1细胞的CPE情况,并进行病毒检测。方法将分离自云南西双版纳的Ⅲ型DV中国株D13053和广东省疾病预防控制中心惠赠的Ⅱ型中国株D10156,以5 MOI感染C6/36、Vero、BHK-21和THP-1细胞,同时将Vero和C6/36细胞来源的DV,分别以5 MOI感染C6/36细胞,连续观察CPE至第10天,并利用DV通用引物,RT-PCR法鉴定细胞培养上清中的病毒。结果C6/36细胞对DV最敏感并有明显的病变,细胞几乎100%聚集、破碎并呈网格状;Vero、BHK-21细胞至第5天出现脱落、破碎和悬浮等病变,对DV有一定的敏感性;THP-1细胞至第10天未出现CPE。PCR核酸检测发现,感染DV的C6/36、THP-1、BHK和Vero细胞培养上清中可检测到DV,而Vero细胞来源DV感染的C6/36细胞未检测到DV。结论 DV对不同细胞系的感染能力和感染DV后CPE的表现形式存在较大差异。

    2017年04期 v.30 362-365+371页 [查看摘要][在线阅读][下载 272K]
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  • 两种因素对体外聚合β淀粉样蛋白寡聚体的影响

    曾仁勇;刘园园;袁靖;陈云华;杨刚;曹海军;李长清;

    目的探讨β淀粉样蛋白(amyloid-β,Aβ)起始聚合浓度及PBS体系中添加SDS对Aβ寡聚体生成的影响。方法 Aβ_(40)、Aβ_(42)经六氟异丙醇(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol,HFIP)单体化处理后,分别溶于PBS及添加0.05%SDS的PBS中,Aβ样本250、125、62.5、31.2、15.6及7.8μmol/L梯度聚合,37℃恒温,100 r/min聚合72 h后,进行SDS-PAGE分析。结果 Aβ_(40)、Aβ_(42)聚合的寡聚体生成量随着Aβ起始浓度的升高而增加。Aβ_(40)在无SDS制备条件下能生成大量二聚体、三聚体及少量十二聚体;SDS制备条件下生成二聚体及少量十二聚体。无SDS制备条件250、125及62.5μmol/L浓度的Aβ_(42)能生成三聚体及中、高相对分子质量的寡聚体弥散带;SDS制备条件250、125、62.5μmol/L浓度的Aβ_(42)可生成三聚体及中等相对分子质量的寡聚体,31.2μmol/L浓度的Aβ_(42)可生成低、中、高相对分子质量的寡聚体。结论适合的起始聚合浓度有利于Aβ_(40)、Aβ_(42)寡聚体的生成;PBS中添加0.05%SDS有利于生成稳定的Aβ_(42)寡聚体,但不利于Aβ_(40)寡聚体的生成。

    2017年04期 v.30 366-371页 [查看摘要][在线阅读][下载 330K]
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  • 一种siRNA药物载体薄膜的稳定性与基因沉默效应评价

    吴丽娟;赵芳;刘光万;曲洪媛;杨旭霞;廖囡囡;陈丽;杨光;吴昌琳;

    目的分析一种siRNA药物载体薄膜在溶液中的稳定性,并评价其基因沉默效应。方法利用层层自组装(layer-by-layer self-assembly,LBL)技术制备壳聚糖(chitosan,CHS)-透明质酸(hyaluronic acid,HA)-siRNA多层薄膜。通过UV-vis吸光度法对siRNA在薄膜上的生长过程以及在不同缓释液中的稳定性分别进行验证。结合荧光图像和流式细胞术,采用直接与细胞接触的方式检测该siRNA载体薄膜的HEK293T细胞转染效应。结果 CHS-HA-siRNA多层薄膜在260 nm处有很强的吸收峰,且随着含siRNA的组装层数的增加,在260 nm的吸光度值越大。该siRNA载体薄膜在1 mol/L NaCl溶液中释放效果最好,在pH 7.4的PBS缓冲液中次之,在纯水中稳定性最好。过低或过高的盐离子浓度对促进薄膜的崩解无优势。阳性对照组7-eGFP-siRNA和2-eGFP-siRNA具有较好的沉默绿色荧光蛋白基因的效应;在细胞培养2 d后的转染试验中,阳性对照组7-eGFP-siRNA较2-eGFP-siRNA组显示出更强的基因沉默效应。结论成功构建了一种非病毒siRNA递送载体系统,为未来实现siRNA局部给药开辟了一条可行的途径。

    2017年04期 v.30 372-376+380页 [查看摘要][在线阅读][下载 411K]
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  • 真核重组表达质粒pTT5-CTP-PTEN的构建及其在HEK 293-6E细胞中的表达

    喻备;黄媛;胡海峰;易炜;王云汉;陈林;杨进;

    目的构建真核重组表达质粒pTT5-CTP-PTEN,并在HEK 293-6E细胞中进行表达。方法合成融合基因CTP-PTEN,定向克隆至真核表达载体pTT5中,构建重组表达质粒pTT5-CTP-PTEN,转化感受态E.coli DH5α,提取质粒,进行双酶切及测序鉴定。在Lipofectamine 2000的介导下,将鉴定正确的重组表达质粒转染至HEK 293-6E细胞,Western blot法检测细胞中融合蛋白CTP-PTEN的表达。结果经双酶切及测序鉴定,证明重组表达质粒pTT5-CTPPTEN构建正确。转染48 h后,HEK 293-6E细胞中可见相对分子质量约49 700的CTP-PTEN融合蛋白条带。结论成功构建了重组质粒pTT5-CTP-PTEN,并于HEK 293-6E细胞中表达了CTP-PTEN融合蛋白。

    2017年04期 v.30 377-380页 [查看摘要][在线阅读][下载 193K]
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  • 人骨形态发生蛋白-7在人骨肉瘤细胞U2-OS中的表达

    薛俊英;付加芳;韩金祥;王世立;

    目的探讨人骨肉瘤细胞U2-OS表达重组人骨形态发生蛋白-7(recombinant human bone morphogenetic protein-7,rhBMP-7)的可行性。方法将hBMP-7成熟肽基因片段克隆至载体pcDNA3.1上,构建真核表达质粒pcDNA3.1-rhBMP-7。利用Lipofectamine 2000将重组质粒转染至U2-OS细胞中,采用实时荧光定量PCR及Western blot法检测细胞中hBMP-7基因mRNA和rhBMP-7的表达。结果真核组表达质粒pcDNA3.1-rhBMP-7经NdeⅠ和EcoRⅤ双酶切及测序鉴定证明构建正确。pcDNA3.1-rhBMP-7质粒转染的U2-OS细胞中hBMP-7基因mRNA和rhBMP-7的表达水平均明显高于pcDNA3.1载体转染的细胞(P<0.05)。结论成功构建了hBMP-7基因的重组表达质粒,并在U2-OS细胞中成功表达,为进一步研究hBMP-7的制备方法和建立新的表达系统奠定了基础。

    2017年04期 v.30 381-385页 [查看摘要][在线阅读][下载 240K]
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  • 二十八烷醇缓解小鼠体力疲劳的作用

    董艳国;仇梓冰;

    目的探讨二十八烷醇对小鼠体力疲劳的缓解作用。方法将小鼠分成对照组、二十八烷醇低剂量组和二十八烷醇高剂量组,用乳化的二十八烷醇分别以10和20 mg/(kg·d)的剂量饲育低剂量组和高剂量组小鼠,对照组供给自来水,实验期为4周。检测二十八烷醇对小鼠运动耐力、血乳酸(lactic acid,LAC)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、糖原含量及血乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力的影响。结果二十八烷醇能提高小鼠的运动耐力;明显降低运动一段时间后的LAC和BUN含量(P<0.05),提高LDH的活力(P<0.05),显著增加肌糖原和肝糖原的储备量(P<0.05);雌雄小鼠各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论二十八烷醇具有明显的缓解实验小鼠体力疲劳的作用,为富含二十八烷醇抗疲劳功能性运动员食品的开发利用提供了实验依据。

    2017年04期 v.30 386-389+394页 [查看摘要][在线阅读][下载 172K]
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  • 植物激素诱导对小球藻Chlorella vulgaris细胞生物量和油脂合成积累的影响

    刘飞;王超;王振瑶;刘婷婷;李玉芹;

    目的探讨植物激素诱导对小球藻Chlorella vulgaris细胞生物量、油脂含量及内生激素浓度的影响规律。方法分别以天然植物源脱落酸(abscisic acid,ABA)、工业合成萘乙酸(1-naphthylacetic acid,NAA)和二氯苯氧基乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic acid,2,4-D)诱导培养小球藻Chlorella vulgaris细胞,细胞干重法检测藻细胞生物量及油脂含量,气相色谱-质谱(GC-MS)分析脂肪酸组成,高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)测定内生激素浓度。结果 NAA诱导对藻细胞生长和脂质合成积累表现出显著的促进效应,其最大油脂产率为418.6 mg/(L·d),分别为2,4-D和ABA诱导藻细胞的1.48和1.83倍;NAA诱导有效调整了小球藻胞内饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸比例,使其组成和含量更易于制备高质量生物柴油;NAA作为激素合成前体参与内生激素(吲哚乙酸、茉莉酸和水杨酸)生物合成,促进内生激素水平升高,而提高浓度的内生激素可能通过一定的信号途径刺激藻细胞生长和合成脂质。结论植物类激素NAA可作为植物源激素替代物用于低成本微藻油脂生产,为制备经济可行的、高质量生物柴油提供了新的途径。

    2017年04期 v.30 390-394页 [查看摘要][在线阅读][下载 231K]
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治疗性制剂

  • 皮下植入医用几丁糖对大鼠免疫系统的影响

    孙珍珠;马玉媛;赵雄;孙伟庆;王延琳;章金刚;

    目的探讨经大鼠腹部皮下植入医用几丁糖对其免疫系统的影响。方法将96只Wistar大鼠随机分为医用几丁糖高剂量组(5 ml)、低剂量组(1 ml)、假手术组(5 ml无菌生理盐水)、空白对照组(未处理)、免疫抑制组(取材前连续4 d经大鼠腹腔注射环磷酰胺)和免疫刺激组(取材前12 h单次腹腔注射脂多糖),根据考察周期将每组16只大鼠再随机分为1、4、8和12周4个实验操作小组。对大鼠以下指标进行检测:免疫器官系数、免疫器官组织病理学观察、NK细胞杀伤活性、T淋巴细胞亚群分析和T/B淋巴细胞增殖情况。结果医用几丁糖植入后1、4、8和12周,医用几丁糖高剂量组及低剂量组大鼠的免疫器官系数、NK细胞杀伤活性、T淋巴细胞亚群分析、T/B淋巴细胞增殖的结果与假手术组和空白对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05),免疫器官组织病理学观察未见异常;免疫抑制组大鼠的免疫器官系数、NK细胞杀伤活性、T淋巴细胞亚群分析、T/B淋巴细胞增殖的结果与其他各组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),免疫器官组织病理学观察可见淋巴细胞数目大量减少等免疫抑制现象;免疫刺激组大鼠的脾脏系数、T淋巴细胞亚群分析、T淋巴细胞增殖的结果与其他各组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),免疫器官组织病理学观察可见淋巴细胞数目大量增多等免疫刺激现象。结论经大鼠腹部皮下植入医用几丁糖后,未对其免疫系统产生明显影响。

    2017年04期 v.30 395-402页 [查看摘要][在线阅读][下载 644K]
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  • 八肽胆囊收缩素对肿瘤坏死因子-α诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364活化蛋白-1活性和JunB表达的影响

    徐锦荣;丛斌;李淑瑾;金玉怀;赵占胜;

    目的研究八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364活化蛋白-1(activator protein-1,AP-1)活性和JunB表达的影响。方法分别采用凝胶迁移试验、Western blot法和RT-PCR法检测CCK-8对TNF-α诱导RSC-364细胞中AP-1活性、JunB蛋白表达和JunB基因mRNA水平的影响。结果 TNF-α可激活RSC-364细胞中AP-1,CCK-8对其具有抑制作用。静息的RSC-364细胞中JunB蛋白表达很少;经TNF-α处理2 h,JunB表达增加,而CCK-8对TNF-α的上述效应具有明显的促进作用;FsK(一种cAMP诱导剂)与CCK-8作用类似,对TNF-α的上述效应亦有促进作用;CR1409(CCK-A受体)、CR2945(CCK-B受体结抗剂)和H89(PKA特异性抑制剂)均可部分逆转CCK-8的上述作用。CCK-8可促进TNF-α引起JunB基因mRNA表达的增加。结论 CCK-8引起AP-1活性降低,促进TNF-α诱导JunB蛋白和基因表达增加,该作用是由CCK-A受体和CCK-B受体共同介导的,cAMP/PKA通路可能参与其信号转导途径。

    2017年04期 v.30 403-407页 [查看摘要][在线阅读][下载 235K]
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诊断制剂

  • 水痘带状疱疹病毒IgG抗体检测试剂国家参考品的研制

    田亚宾;周海卫;刘东来;刘艳;沈舒;石大伟;张春涛;

    目的制备水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)IgG抗体检测试剂的国家参考品。方法利用国内外5个厂家ELISA试剂和膜抗原免疫荧光抗体检测(fluorescent-antibody-to-membrane-antibody,FAMA)试验,对候选样本进行筛选,确定水痘检测试剂国家参考盘;利用VZV WHO免疫球蛋白标准品对检测限参考品进行标定,通过不同厂家的协作标定最终确定国家参考品的质量标准,并对其稳定性和均匀性进行考察。结果参考品由8支阴性参考品、10支阳性参考品、1份重复性参考品和6支检测限参考品组成。质量标准为:阴性参考品符合率至少为7/8;阳性参考品符合率至少为9/10;检测限的浓度不高于127 mIU/ml;重复检测重复性参考品10次,其A值的变异系数不高于15.0%。该参考盘存放于不同条件下,相对稳定且均一性较好。结论成功建立了1套用于评价VZV IgG抗体检测试剂盒国家参考品。

    2017年04期 v.30 408-411页 [查看摘要][在线阅读][下载 182K]
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临床研究

  • 吉林省2015年高校入学新生麻疹抗体水平调查及分析

    王爽;单元春;程涛;廖颖;杨尧;田鑫;魏雷雷;曹凤瑞;付思美;张兴国;陶育晖;马学军;曹迎春;

    目的调查并分析吉林省2015年高校入学新生的麻疹抗体水平。方法采用分层整群的抽样方法,在吉林省高校随机抽取2015年秋季入学新生1 902人,ELISA法检测新生的麻疹IgG抗体水平,记录性别、年龄、户籍、地区等基本资料。结果 1 902名监测对象中,麻疹抗体几何平均浓度(GMC)为592.517 mIU/ml;总阳性人数为1 735人,总阳性率为91.2%;总抗体保护人数为690人,总保护率为36.3%。农村户籍学生的麻疹抗体水平、阳性率及保护率明显高于城市(P<0.05);省内外、不同性别及不同年龄段学生麻疹抗体GMC的差异无统计学意义(P>0.05);省内不同地区间麻疹抗体水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论吉林省2015年高校入学新生麻疹抗体保护率总体偏低,应开展对高校学生麻疹疫苗的补充免疫活动(supplementary immunization activities,SIA),以提高高校学生应对麻疹的免疫能力。

    2017年04期 v.30 412-416页 [查看摘要][在线阅读][下载 168K]
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技术方法

  • 层析技术制备马抗中东呼吸综合征冠状病毒F(ab’)_2

    邱泊宁;王翀;赵永坤;胡星星;王化磊;曹增国;盖微微;崔健男;闫飞虎;杨松涛;夏咸柱;

    目的采用层析技术制备高纯度的马抗中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrom coronavirus,MERS-CoV)F(ab’)_2。方法以MERS-CoV病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)对马匹进行多次免疫所制备的高免血清为原料,采用亲和层析技术提取血清IgG,经胃蛋白酶酶切后,通过阴离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析分别对F(ab’)_2进行纯化;以MERS假病毒检测所制备的IgG与F(ab’)_2中和活性。结果凝胶过滤层析实现了F(ab’)_2的高纯度分离,最终制备的F(ab’)_2收率约70%,纯度为93%以上,具有良好的中和活性,其半数抑制浓度(IC_(50))为5.13μg/ml。结论制备了高纯度马抗MERS-CoV免疫球蛋白F(ab’)_2,为人用抗MERS-CoV免疫球蛋白F(ab’)_2生产工艺的建立奠定了基础。

    2017年04期 v.30 417-423+428页 [查看摘要][在线阅读][下载 400K]
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  • 重组人复合干扰素的定点诱变及PEG化修饰

    王利锋;袁芳;何红秋;陈锐;

    目的将复合干扰素(consensus interferon,cIFN)76位点丙氨酸(Ala)突变为半胱氨酸(Cys),以期获得一种高效和可供聚乙二醇马来酰亚胺(PEG-MAL)定点修饰的IFN突变体分子。方法采用同源序列对比、空间结构模拟并结合IFNα与受体结合的特点设计突变位点。通过基因工程方法获得cIFN_(m76)工程菌,IPTG诱导表达,所得包涵体经变复性、DEAE阴离子及CM阳离子两步交换层析纯化后,采用SDS-PAGE和高效液相色谱法(HPLC)检测cIFN_(m76)的纯度;细胞病变抑制法检测其体外抗病毒活性;REFLEX~(TM)Ⅲ基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法(MALDI-TOFMS)测定其相对分子质量;SDS-PAGE分析cIFN_(m76)与PEG-MAL的交联反应;并进行N-末端、C-末端序列测定及紫外光谱扫描。结果 cIFN_(m76)以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%以上,纯度大于95%,比活性约为1.08×10~8IU/mg,N-末端、C-末端氨基酸序列与理论一致,相对分子质量经MALDI-TOF-MS测定为19 500,紫外特征吸收波长为280 nm,与PEG-MAL成功交联。结论成功获得一种高效和可供PEG-MAL定点修饰的cIFN_(m76),解决了现有PEG定点修饰技术存在的问题。

    2017年04期 v.30 424-428页 [查看摘要][在线阅读][下载 259K]
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  • 环介导等温核酸扩增法检测尖锐湿疣患者疣体组织中低危型人乳头瘤病毒分型的评价及分析

    钟琦;章楚光;顾肖萍;刘维薇;

    目的评价并分析环介导等温核酸扩增法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测尖锐湿疣患者(Condyloma acuminatum,CA)疣体组织中低危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的分型情况。方法针对CA常见HPV的7种亚型(包括HPV6、11、16、18、42、43、44型)基因的保守序列L1,设计LAMP引物。收集40份上海市皮肤病医院2015年6月至2016年6月病理确诊为CA患者的疣体组织石蜡包埋块,提取DNA,以其为模板进行LAMP,分别使用羟基萘酚蓝(hydroxynaphthol blue,HNB)颜色指示剂和琼脂糖核酸电泳同时判定扩增结果,并与PCR流式荧光杂交法的检测结果进行比较。结果 40份样本中共测得HPV阳性30份,其中HPV6型18份,11型7份、16型1份,42型1份,43型2份,44型2份,有1份为43及44型混合阳性,未测得18型阳性样本。LAMP法与PCR流式荧光杂交法总体符合率为95%(38/40)。结论 LAMP法可用于常见HPV低危型别的检测,且操作简便、准确。

    2017年04期 v.30 429-432页 [查看摘要][在线阅读][下载 234K]
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综述

  • 柯萨奇病毒B组5型的研究进展

    郝晓甜;高帆;毛群颖;梁争论;

    柯萨奇病毒B组5型(Coxsakievirus B5,CV-B5)引起的轻症包括上呼吸道感染、腹泻及手足口病(hand-footmouth disease,HFMD),也可引起病毒性脑炎、无菌性脑膜炎、胰腺炎、弛缓性麻痹、扩张性心肌炎等多种重症疾病,其中无菌性脑膜炎及病毒性脑炎呈全球范围分布,发病年龄主要集中于18岁以下的青少年人群,多发于夏秋季节。另外,CV-B5感染也是导致胰岛素依赖型(Ⅰ型)糖尿病的主要诱发因素之一,还可引起短暂性失语症和小儿急性横贯型脊髓炎等罕见临床症状。本文就CV-B5的病原学、流行病学、实验室诊断及动物模型等方面的研究进展作一综述。

    2017年04期 v.30 433-437页 [查看摘要][在线阅读][下载 159K]
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  • MicroRNA在肺纤维化中的研究进展

    张亮;王静;李芹;

    肺纤维化是一种不可逆转的慢性肺疾病,当纤维母细胞受到化学或物理性伤害时,会分泌胶原蛋白,对受损的肺间质组织进行修补,进而造成肺纤维化。microRNA(miRNA)是一类长度约23个核苷酸的非编码单链小分子RNA,可以促进或抑制肺成纤维细胞的活化。近年来研究发现,上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)是早期肺纤维化的一个重要标志。本文就miRNA在肺纤维化发生进程中的作用作一综述,以期为肺纤维化的治疗提供新的思路。

    2017年04期 v.30 438-443+448页 [查看摘要][在线阅读][下载 227K]
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  • 可促进慢性创伤愈合的生物医学工程药物研究进展

    林继志;刁勇;

    伤口愈合是一个动态变化的过程,其进程高度依赖于多种信号分子的协调合作。含有生长因子的生物医学工程药物,一直被认为是一种可实现慢性伤口快速和完全愈合的有效方法。可促进慢性伤口愈合的含生长因子类生物工程药物的研发进展迅速,未来的研究重点着眼于这些生长因子的作用机制,以及如何精确控制它们的释药行为,以实现最佳的治疗效果。

    2017年04期 v.30 444-448页 [查看摘要][在线阅读][下载 167K]
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消息

  • 2017第五届上海国际生物发酵产品与技术装备展览会

    <正>由中国生物发酵产业协会主办、上海信世展览服务有限公司承办的2017第五届上海国际生物发酵产品与技术装备展览会(BIO CHINA),将于2017年10月25~27日在上海新国际博览中心举行。BIO CHINA已成为全球发酵行业年度盛会,业界有识之士汇聚一堂,新观点新思想荟萃一处。BIO CHINA,中国生物发酵行业再创业征程扬帆起航!为生物发酵行业和相关行业搭建了一个技术交流、促进合作、扩大上下游贸易、提高品牌和企业知名度的平台。

    2017年04期 v.30 341页 [查看摘要][在线阅读][下载 38K]
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  • 征稿

    <正>《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外进展的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管,中华预防医学会和长春生物制品研究所有限责任公司主办,是中华预防医学会系列杂志之一,月刊。本刊主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床医学等

    2017年04期 v.30 402页 [查看摘要][在线阅读][下载 32K]
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  • 《中国生物制品学杂志》移动版上线了

    <正>为深度推进《中国生物制品学杂志》数字化转型,使期刊的资源得到广泛传播和利用,本刊已入北京世纪超星信息技术发展有限责任公司的移动"域出版"平台,旨在更好地为业内同仁提供快捷的学习方式。扫描二维码,下载"超星学习通",点击"移动图书馆→期刊",输入"中国生物制品学杂志"即可浏览,敬请关注指导。

    2017年04期 v.30 407页 [查看摘要][在线阅读][下载 41K]
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  • 欢迎订阅《中国生物制品学杂志》

    <正>《中国生物制品学杂志》于1988年创刊,由中华人民共和国卫生部主管,系中华预防医学会系列杂志之一,为报道我国生物制品研究开发重大成果和最新进展的国内唯一生物制品专业学术期刊。主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床学等方面的研究、生产、使用和质控等学术文章。主要设有

    2017年04期 v.30 416页 [查看摘要][在线阅读][下载 33K]
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