中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • LT70-DPC结核亚单位疫苗安全性的初步评价

    何娟娟;胡丽娜;刘勋;王秉翔;张婷婷;祝秉东;

    目的初步评价以阳离子脂质体二甲基三十六烷基铵(dimo-thylidioctyl ammonium bro-mide,DDA)、聚肌胞苷酸(Poly I∶C)及胆固醇复合佐剂(简称为DPC)为佐剂的结核融合蛋白ESAT6-Ag85B-MPT64(190-198)-Mtb8.4-Rv2626c(LT70)亚单位疫苗的安全性。方法急性毒性试验:分别将低剂量与高剂量(分别相当于人用剂量的10 000和40 000倍)的LT70-DPC结核亚单位疫苗经皮下、腹腔两种途径免疫小鼠,观察小鼠毒性反应、死亡情况及体重变化等,同时推算小鼠对LT70-DPC亚单位疫苗的最大耐受剂量(maximum tolerated dose,MTD);异常毒性试验:将小鼠和豚鼠分别经腹腔注射LT70-DPC结核亚单位疫苗,观察动物异常反应、死亡情况及体重变化等;全身过敏试验:豚鼠经LT70-DPC结核亚单位疫苗免疫后,经相应疫苗静脉攻击,观察豚鼠过敏反应。结果急性毒性试验:皮下及腹腔注射后14 d内均未见小鼠的异常反应和死亡,体重均增加,小鼠对该疫苗的MTD为:LT70蛋白>6 600μg/kg,DDA>166 600μg/kg,Poly I∶C>33 200μg/kg,胆固醇>50 600μg/kg;异常毒性试验:注射后7 d内,小鼠及豚鼠全部健存,均未出现异常症状,体重增加;全身过敏试验:攻击后1 h内,豚鼠均未出现过敏反应。结论 LT70-DPC结核亚单位疫苗具有良好的安全性。

    2017年01期 v.30 1-4页 [查看摘要][在线阅读][下载 157K]
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  • 水痘减毒活疫苗(SV-1细胞)的大鼠长期毒性试验

    杨利伟;栾春芳;干玲玲;王琳;孟凡红;黄金凤;

    目的观察SD大鼠注射水痘减毒活疫苗(SV-1细胞)后可能出现的毒性反应、毒性反应的恢复情况及可能出现的延迟性毒性反应。方法将SD大鼠随机分为8组,1~4组(主试验组)分为阴性对照组(生理盐水,2.5 ml/只)、细胞基质对照组(SV-1细胞基质,2.5 ml/只)、疫苗低剂量组(水痘减毒活疫苗1剂)和疫苗高剂量组(水痘减毒活疫苗5剂),每组30只;5~8组(卫星组)分组同1~4组,每组10只。均经大鼠颈背部皮下单点注射,每2周注射1次,连续注射3次,末次免疫后6周为恢复期。试验期间进行一般临床观察、体重、食量、体温、眼科、血细胞计数、凝血功能、血液生化、免疫指标、大体解剖观察、主要脏器称重、组织病理学等检查。结果试验期间,主试验组各组动物一般状况良好,各项指标检测均未见有毒理学意义的规律性改变,且动物脏器重量均未见与疫苗相关的明显改变,各组织脏器大体解剖观察均未见明显与给药相关的毒性病理学改变,注射局部组织未见明显与疫苗相关的刺激性反应;卫星组大鼠免疫前血清抗体均为阴性,末次免疫后2周,阴性对照组和细胞基质组抗体检测结果均为阴性,低剂量组和高剂量组抗体阳转率100%,抗体几何平均滴度(GMT)分别为1∶73.5和1∶111.4,仅有部分大鼠可检测到分泌IFNγ的T淋巴细胞。结论水痘减毒活疫苗(SV-1细胞)经大鼠长期毒性试验未见明显毒性反应,初步证实该疫苗具有良好的安全性及有效性。

    2017年01期 v.30 5-10页 [查看摘要][在线阅读][下载 248K]
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  • 甘露寡糖修饰布氏菌Rsα蛋白的生物活性

    许春晓;卢天成;王晓龙;杨艳玲;王大涛;王浩;王兴龙;王秀然;

    目的评价甘露寡糖修饰布氏菌Rsα蛋白的生物活性。方法经1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亚胺(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)化学偶联法,用4种甘露寡糖(甘露三糖、甘露四糖、甘露五糖及甘露六糖)对Rsα蛋白按不同摩尔比进行寡糖修饰。FITC荧光标记4种甘露寡糖修饰Rsα蛋白后,作用于RAW264.7细胞,荧光显微镜观察细胞对荧光的吞噬情况;流式细胞术检测细胞对蛋白的吞噬率。结果甘露寡糖与蛋白投料摩尔比达1 000∶1时获得的反应产物较稳定。甘露五糖修饰的Rsα蛋白被巨噬细胞吞噬的速度最快,其细胞吞噬率最高(25.89%)。结论筛选出五糖修饰的Rsα蛋白具有较高的生物活性,为研究其作为布氏菌糖蛋白候选疫苗的可行性奠定了基础。

    2017年01期 v.30 11-14+18页 [查看摘要][在线阅读][下载 273K]
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基础研究

  • Msi2对急性髓系白血病THP-1细胞体外增殖能力的影响

    邵会媛;苗宗玉;张贵丽;董菲;孙成铭;

    目的观察Musashi(Msi)2对急性髓系白血病(acute myelogenous leukemia,AML)THP-1细胞体外增殖能力的影响,初步探讨Msi2在AML中可能的调控作用。方法利用RNA干扰技术沉默Msi2表达,实时荧光定量PCR法检测Msi2、cyclin D1、p21、cdk2基因mRNA转录水平;Western blot法检测Msi2蛋白表达水平;生长曲线观察THP-1细胞体外增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期进程。结果与scramble组及空白对照组相比,Msi2-siRNA组细胞cyclin D1、cdk2基因mRNA转录水平明显降低(P<0.05),p21基因mRNA转录水平明显增高(P<0.05),Msi2 mRNA转录及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);Msi2-siRNA组细胞体外增殖能力降低(P<0.01);G1期细胞比例明显增高(P<0.05),S期细胞比例显著降低(P<0.05)。结论 Msi2可能通过调控细胞周期进程,促进白血病细胞恶性增殖,在AML的发生发展中发挥重要作用。

    2017年01期 v.30 15-18页 [查看摘要][在线阅读][下载 215K]
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  • 人呼吸道合胞病毒截短F1蛋白的原核表达及其免疫原性评价

    李华;杨婷;岳磊;何晓娟;朱凡丽;谢天宏;龙润乡;杨蓉;罗芳宇;谢忠平;

    目的原核表达重组人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)A型Long株截短F1融合性蛋白,并评价其免疫原性。方法采用RT-PCR法扩增HRSV截短F1蛋白基因序列,克隆至pET-28b表达载体,构建重组原核表达质粒RSV F1/pET-28b,转化大肠埃希菌Shuffle T7菌株,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析;用Ni亲和层析柱纯化,纯化产物经SDS-PAGE及Western blot分析。将纯化的重组截短F1蛋白免疫ICR小鼠,ELISA法检测小鼠血清抗体效价。结果重组原核表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的截短F1蛋白相对分子质量约44 000,主要以包涵体形式存在,纯度达90.6%。重组截短F1蛋白免疫小鼠血清抗体效价最高可达1∶4 096。结论原核表达的重组HRSV截短F1蛋白免疫原性好,为单克隆抗体的制备及检测试剂盒的研究奠定了基础。

    2017年01期 v.30 19-24页 [查看摘要][在线阅读][下载 255K]
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  • 通过自诱导方法对乙型肝炎病毒聚合酶TP区进行可溶性表达及鉴定

    陈可;代娟;甘春扬;刘亚;罗英英;胡接力;蔡雪飞;

    目的构建包含乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)聚合酶TP区段的重组原核表达质粒,转化表达型大肠埃希菌,以自诱导培养方法获得可溶性表达,并对其进行鉴定。方法分析HBV(A型)聚合酶N-末端1-192 AA区域的DNA序列,通过网络工具(http://www.jcat.de/)在线优化,并在5′和3′端分别添加NdeⅠ和XhoⅠ限制性内切酶位点后,送英潍捷基(上海)贸易有限公司进行人工合成;将人工合成的TP-DNA双酶切后,插入pET32a(+)原核表达载体,构建重组原核表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS进行自诱导表达。结果重组原核表达质粒pET32a(+)/POL-TP-Opt经双酶切及测序证明构建正确;在表达菌的破菌上清中有特异性表达的蛋白,相对分子质量约20 000,经SDS-PAGE和Western blot鉴定,为可溶性的重组TP蛋白。结论通过自诱导培养方法,直接成功获得可溶性的重组TP蛋白,改变了长期以来依靠包涵体复性对TP蛋白相关功能进行研究的状况。

    2017年01期 v.30 25-28+33页 [查看摘要][在线阅读][下载 373K]
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  • T-cadherin基因在前列腺癌组织中的表达及其对前列腺癌细胞DU145增殖的影响

    王秋菊;宋晓玉;

    目的探讨T-cadherin基因在前列腺癌组织中的表达及其对前列腺癌细胞DU145增殖的影响。方法采用RT-PCR法检测40份前列腺癌及相应癌旁组织中T-cadherin基因mRNA的表达。分别用10 ml滴度为1.6×10~(12)pdf/ml的GFP-T-cadherin腺病毒(Ad-GFP-T-cadherin)和GFP腺病毒(Ad-GFP)感染前列腺癌DU145细胞后,MTT法检测T-cadherin对前列腺癌DU145细胞增殖的影响,Western blot法检测T-cadherin对P21和cyclin D1蛋白表达水平的影响,同时设空白对照组(未感染病毒)。结果 T-cadherin在38/40(95%)的前列腺癌中表达下调(P<0.01),其表达与前列腺癌的分期、格里森评分及分化有关。Ad-GFP-T-cadherin组DU145细胞中P21蛋白表达水平明显高于Ad-GFP组及空白对照组(P<0.01),而cyclin D1蛋白表达水平及增殖活性明显低于Ad-GFP组及空白对照组(P<0.01);空白对照组DU145细胞的增殖活性及细胞中P21、cyclin D1蛋白表达水平与Ad-GFP组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 T-cadherin的表达与前列腺癌的发生密切相关,且可通过上调P21和下调cyclin D1蛋白的表达抑制前列腺癌DU145细胞的增殖。

    2017年01期 v.30 29-33页 [查看摘要][在线阅读][下载 276K]
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  • CpG ODN佐剂序列IMB-AC5的体外免疫刺激活性分析

    赵玉娇;蔡路奎;王晓丹;席珏敏;陈俊英;潘玥;邱丽娟;姜黎明;孙强明;

    目的对CpG ODN候选佐剂IMB-AC5进行体外免疫刺激活性分析。方法以目前国外进入临床研究的两种CpG ODN佐剂序列(Coley 7909和Dynavax ISS1018)为对照,采用~3H-TDR法检测IMB-AC5刺激人外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytes,PBLs)的增殖活性;流式细胞术分析CD19+B活化细胞表面CD69表达水平;ELISA法检测刺激后GEN细胞产生的IL-6和IFNα水平。结果 3种CpG ODN佐剂均能明显刺激人PBLs的增生,IMB-AC5刺激增生能力优于Dynavax ISS1018,略低于Coley 7909;IMB-AC5活化CD19+B细胞表面CD69表达水平与Coley7909相似,Dynavax ISS1018活化效果略低于前二者;3种CpG ODN佐剂体外活化树突状细胞水平差异较大,且呈明显的剂量依赖,IMB-AC5的最佳活化浓度范围为0.15~1.5μmol/L,Coley 7909的最佳活化浓度范围为<0.25μmol/L,活化效果均优于Dynavax ISS1018。结论 IMB-AC5可作为有效的疫苗候选佐剂,且不低于国外同类佐剂的体外免疫刺激活性。

    2017年01期 v.30 34-37页 [查看摘要][在线阅读][下载 298K]
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  • 海兰褐鸡卵泡颗粒细胞微管去稳蛋白2过表达对Ras-MAPK信号通路的影响

    徐剑华;李鹏;

    目的探讨微管去稳蛋白2(stathmin-2-like protein,STMN2)过表达对海兰褐鸡卵泡颗粒细胞中Ras-MAPK(mitogen-activated protein kinase)信号通路的影响。方法将STMN2腺病毒过表达载体以MOI为350 pfu/cell转染原代培养的蛋鸡卵泡颗粒细胞模型,设培养液组和腺病毒空载体组为对照组,转染48 h后,收集细胞总RNA和总蛋白,荧光定量PCR法检测各组细胞STMN2 mRNA水平及STMN2过表达对颗粒细胞分泌的细胞外调节蛋白激酶1(extracellular regulated protein kinases1,erk1)、erk2、大鼠肉瘤蛋白(rat sarcoma,ras)和转录激活因子ETS样蛋白1(ets-like protein 1,elk-1)的影响,Western blot法检测各组STMN2蛋白水平及STMN2过表达对颗粒细胞分泌的erk1、erk2、磷酸化erk1(p-erk1)、p-erk2、ras和elk-1的影响。结果与培养液组和腺病毒空载体组比较,STMN2过表达载体组STMN2 mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.01);除elk-1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)和elk-1 mRNA水平显著增加(P<0.05)外,STMN2过表达使颗粒细胞分泌的目的基因mRNA与蛋白表达水平均极显著增加(P<0.01)。结论 STMN2可通过Ras-MAPK信号通路影响蛋鸡卵泡颗粒细胞周期。

    2017年01期 v.30 38-42页 [查看摘要][在线阅读][下载 353K]
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治疗性制剂

  • 治疗性双质粒HBV DNA疫苗制剂的稳定性

    石燕飞;饶桂荣;黄彬;杨富强;陈光明;

    目的考察治疗性双质粒HBV DNA疫苗制剂A、B的稳定性。方法按照《中国药典》三部(2010版)方法,对治疗性双质粒HBV DNA疫苗制剂A、B分别进行影响因素试验、加速试验、长期试验,在不同条件下考察样品的基本性状,特别检测质粒DNA的超螺旋比例及进行细胞学转染试验和体内药效学试验。结果双质粒HBV DNA疫苗制剂在破坏性因素的影响下,于光照(4 500±500)Lx、高温(40和60℃)、反复冻融(-20℃←→4℃和-20℃←→RT)条件下5 d均不稳定;匀速振动(140和240 r/min)10 d不稳定;在(25±2)℃、相对湿度(60±10)%的条件下放置1个月不稳定;在温度2~8℃条件下放置2年保持稳定。结论双质粒HBV DNA疫苗制剂对光照、温度敏感,应避光低温保存,避免反复冻融,适合现代快速长途运输,长期保存应在2~8℃条件下,暂定二年有效期,为治疗性双质粒HBV DNA疫苗的临床用样品的运输和保存提供了依据。

    2017年01期 v.30 43-48页 [查看摘要][在线阅读][下载 244K]
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诊断制剂

  • 重组蛋白制品中大肠埃希菌宿主蛋白残留测定试剂盒的适用性验证

    邓春平;杨波;庄兰芳;李梦瑶;郑赞顺;曲伟;

    目的验证重组蛋白制品中大肠埃希菌宿主蛋白(host cell protein,HCP)残留检测试剂盒的适用性。方法对淄博云桥生物技术有限公司制备的大肠埃希菌HCP的ELISA检测试剂盒进行特异性、灵敏度、精密性、准确性验证,同时进行基质干扰试验和稀释回收试验。采用该试剂盒及一款市售进口试剂盒分别对本公司制备的3批重组碱性成纤维细胞生长因子(recombinant basic fibroblast growth factor,rbFGF)制品原液及纯化工艺中间样品的HCP残留量进行检测。结果试剂盒可特异性检测大肠埃希菌HCP残留量;线性范围为3.33~810 ng/ml;检测限和定量限均为3.33 ng/ml;试验内变异系数(CV)和试验间CV均<16%;低、中、高3个浓度样品的回收率分别为113.1%、113.7%和97.5%;原液样品基质对测定基本无影响,原液基质中DTT含量<5 mmol/L对测定结果的影响在可接受范围内;原液样品在测定HCP含量时存在干扰,稀释3倍时,干扰最小;该试剂盒与另一款市售试剂盒检测3批rbFGF制品原液及纯化工艺中间样品的HCP残留量基本一致。结论该试剂盒具有良好的特异性、灵敏度、准确性、精密度和线性,可用于本公司重组蛋白制品中大肠埃希菌HCP残留的检测。

    2017年01期 v.30 49-52+58页 [查看摘要][在线阅读][下载 193K]
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临床研究

  • 2015年山东省烟台地区柯萨奇病毒A组16型VP1区基因特征分析

    孙振璐;张桂芳;宫连凤;刘娟;王成芳;王志昱;高巧;

    目的研究2015年山东省烟台地区手足口病(hand,foot,and mouth disease,HFMD)的病原谱,并分析病原谱中柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16)流行株的进化及VP1区重要氨基酸位点的变异情况。方法采用实时荧光逆转录聚合酶链反应方法,对2015年烟台地区采集于HFMD患者的696份样品进行肠道病毒(enterovirus,EV)核酸检测和分子定型。根据EV的优势血清型,选取10株CV-A16扩增VP1区,并进行核苷酸序列及系统发育分析。结果从696份标本中检出EV 412株,其中101株为CV-A16,76株为EV-A71型。10株CV-A16的核苷酸序列相似性为88.4%~99.9%,氨基酸序列相似性为98.6%~100%。10株CV-A16烟台株分别属于B基因型的B1a和B1b进化分支,其中B1b进化分支为优势株。与参考株Tainan/5079/98(AF177911)相比,10株CVA16分离株氨基酸序列的第11、23、99、145、289位氨基酸出现突变,10株分离株的这些位点也有不同,表明烟台地区的CV-A16有其独特的突变位点。结论 CV-A16是引起2015年烟台地区HFMD发病的常见病原体,本次分离到的CV-A16均属于B基因型的Bla和B1b进化分支。

    2017年01期 v.30 53-58页 [查看摘要][在线阅读][下载 300K]
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  • 内蒙古自治区2013年麻疹流行病学特征分析及麻疹疫苗的接种情况

    闫绍宏;李彬;冯中强;武贵森;

    目的分析2013年内蒙古自治区麻疹流行病学特征及麻疹疫苗的接种情况。方法应用描述流行病学方法,对2013年内蒙古自治区麻疹疫情资料进行分析,评价麻疹成分疫苗(measles-containing vaccine,MCV)的接种情况及麻疹监测系统(Measles Surveillance System,MSS)的运行质量。结果内蒙古自治区2013年报告麻疹病例590例,发病率为2.37/10万,全自治区各盟市均有病例报告。麻疹发病呈季节性分布,第16~31周病例数(559例)占病例总数的94.95%;0~4岁组发病数(282例)和发病率(25.34/10万)最高,其次为30~34岁组(发病数为36例,发病率为3.81/10万);流动人口占全部报告病例的7.63%(45例),非流动人口占92.37%(545例);不满8月龄组病例98例,占病例总数的16.61%,其中免疫2剂、1剂、未免疫MCV及免疫史不详的比例分别为6.78%(40例)、7.63%(45例)、24.75%(146例)和44.23%(261例);第1剂(MCV1)实种268 182人,报告接种率为99.63%,第2剂(MCV2)实种257 466人,报告接种率为99.51%。通过MSS共报告疑似麻疹病例1 138例,99.82%(1 136例)报告了个案调查信息,48 h内个案完整调查比例为99.82%,主要基因型为H1a。结论 2013年内蒙古自治区麻疹发病率较低,MCV接种效果良好,今后应进一步提高自治区MCV接种率,将常规免疫作为核心,做好重点人群麻疹疫苗(measles vaccine,MV)的补种工作,提高MSS系统的运行效率和质量,控制麻疹传播直至消除。

    2017年01期 v.30 59-62+67页 [查看摘要][在线阅读][下载 187K]
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  • 甲状腺癌中CD105及内皮抑素蛋白的表达意义

    王立娟;宝荣;邹凌凤;曾敏;曹晓静;

    目的检测滤泡性甲状腺癌中Endoglin(又称CD105)和内皮抑素(Endostatin,ES)蛋白表达情况,探讨滤泡性甲状腺癌中血管内皮增殖与肿瘤转移侵袭的相关性。方法收集重庆市第九人民医院及中国医科大学附属第一人民医院甲状腺癌存档蜡块,包括甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)130例,滤泡状癌(follicular thyroid carcinoma,FTC)40例,甲状腺未分化癌(undifferentiated thyroid carcinoma,UTC)30例,制作组织芯片,采用免疫组织化学染色法检测滤泡性甲状腺癌中CD105和ES蛋白的表达情况。结果 CD105在PTC、FTC和UTC样本中的表达水平依次递增,平均IRS评分分别为6.1±0.7、7.3±0.8和10.6±1.4(P<0.01);CD105的表达水平与性别、年龄无关,而与癌灶发生甲状腺外侵袭、淋巴结转移和远处转移相关;在随访期内发生甲状腺癌复发或死亡患者的CD105表达水平较病情稳定患者明显升高(P<0.01)。ES在PTC、FTC和UTC样本中的表达水平依次递增,平均IRS评分分别为5.6±2.0、7.0±1.8和9.1±1.2(P<0.01);ES蛋白表达水平与性别、年龄无关,而与腺外侵袭、淋巴结转移或远处转移相关;在随访期内发生甲状腺癌复发或死亡患者的ES表达水平较病情稳定患者明显增高(P<0.01)。同一病例的CD105表达评分与ES表达评分呈正相关(r=0.313,P<0.01)。结论 CD105及ES在不同侵袭性的甲状腺癌组织中的表达存在差异,且具有相关性,可能参与了甲状腺癌的侵袭、转移,导致预后改变,提示其可作为甲状腺癌靶向治疗的靶点之一,为甲状腺癌的治疗提供新的研究方向。

    2017年01期 v.30 63-67页 [查看摘要][在线阅读][下载 242K]
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技术方法

  • 无血清培养Vero细胞及其传代稳定性分析

    张香玲;张生琰;孙燕;刘鹏;赵星文;李薇;

    目的建立无血清无动物源性培养基(virus production-serum-free medium,VP-SFM)培养Vero细胞的工艺,并分析其传代稳定性。方法采用VP-SFM适应培养Vero细胞,建立无血清无动物源性Vero细胞库,对细胞库进行常规检定;绘制VP-SFM培养Vero细胞的生长曲线;比较140、150、160代Vero细胞在VP-SFM中培养的比生长速率(μ)和分裂次数(Cd);比较142、147、153代Vero细胞在VP-SFM中培养的狂犬病病毒滴度;比较无血清与含血清培养140、150、160代Vero细胞的μ和Cd值;分别在250 ml spinner flask中加入2 g/L cytodexⅠ、在3 L生物反应器中加入3 g/L cytodexⅠ培养Vero细胞,观察细胞贴壁和生长情况。结果建立的无血清无动物源性Vero细胞库,细胞密度为4×10~6个/ml,冻存前细胞活率为100%,复苏后细胞平均活率为(94.20±3.95)%,无菌检查和支原体检查合格;细胞在VP-SFM中复苏传代后生长良好,经过24 h潜伏期后,进入对数生长期,第8天进入平台期,第12天达最大细胞密度20.5×10~5个/ml,并维持至第14天,活细胞数开始下降,最大μ值为0.025 4 h~(-1)。Vero细胞在无血清培养基中传代稳定性较好,140、150、160代Vero细胞在VP-SFM培养的μ和Cd值差异无统计学意义(P>0.05);142、147、153代Vero细胞在VP-SFM培养的狂犬病病毒滴度差异无统计学意义(P>0.05);140、150、160代Vero细胞在无血清和含血清培养基培养的μ和Cd值差异无统计学意义(P>0.05)。在生物反应器微载体系统中,采用无血清培养基培养Vero细胞,细胞贴壁及生长状态良好。结论初步建立无血清、无动物源性物质的Vero细胞库,采用方瓶静置培养或微载体搅拌培养,细胞生长状态均良好,传代稳定性也较好。

    2017年01期 v.30 68-73页 [查看摘要][在线阅读][下载 488K]
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  • 人纤溶酶活性动态显色检测方法的建立及验证

    岳胜兰;周志军;彭焱;林连珍;李陶敬;邢延涛;汪菲菲;李策生;胡勇;

    目的建立人纤溶酶(plasmin,Plm)活性的动态显色检测方法,并进行验证。方法用微量滴定板作为载体,将不同活性浓度的Plm(1.0、0.5、0.25、0.125、0.062 5、0.031 25 IU/ml)分别与不同浓度的发色底物S-2251(2.0、1.0、0.66、0.33 mg/ml)混匀,连续监测10 min,测定反应体系吸光值变化率(ΔA/min),确定方法的反应参数。同时对方法的选择性、线性范围、定量下限、准确度、精密性、特异性及稳定性进行验证。采用建立的方法检测Plm纯化样品。结果确定定量上限为0.6 IU/ml,底物浓度为0.66 mg/ml;监测5 min时校正标样及质控样品回收率为92.0%~111.8%,定量下限样品回收率为96.5%~118.0%。注射用水、稀释液、尿激酶(Urokinase,UK)、6-氨基己酸(6-Aminocaproic acid,EACA)、人纤溶酶原(plasminogen,Plg)等组分的响应低于定量下限响应的8.22%,并低于内标响应的0.86%,表明该方法具有良好的选择性;线性范围为0.05~0.6 IU/ml,校正标样回收率在96.8%~111.2%之间,R2≥0.99;定量下限为0.05 IU/ml,定量下限处准确度在115.2%~116.2%之间,CV≤5.0%;高、中、低浓度质控样品检测结果准确度在102.3%~111.8%之间;批内CV值≤7.7%,批间CV值≤5.2%;0.5μg/ml UK对Plm活性检测无影响,EACA浓度在0.05~0.2 mol/L之间及Plg浓度低于0.3 mg/ml时对Plm活性检测结果无影响;Plm质控样品复溶后在室温及2~8℃放置1 h不影响检测结果。Plm纯化样品活性回收率为91.84%。结论本方法具有良好的准确度、精密度、特异性及稳定性,可用于工艺样品中Plm活性的检测。

    2017年01期 v.30 74-78页 [查看摘要][在线阅读][下载 214K]
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  • 生物反应器-微载体技术培养Vero细胞制备柯萨奇病毒A组16型

    刘志成;卿琰;岳凤先;井敏敏;黄芬;井申荣;

    目的利用生物反应器-微载体培养技术培养Vero细胞制备柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CA16)。方法应用生物反应器-微载体培养法进行Vero细胞培养,待细胞长成致密单层时,接种CA16,于37℃培养,每隔24 h观察细胞病变情况,并检测病毒滴度。结果 Vero细胞在微载体上吸附140 h后,绝大部分细胞在微载体上长成致密单层,细胞密度约为12.3×10~5个/ml;接种CA16后72 h,Vero细胞完全病变,几乎全部从微载体上脱落,病毒滴度达最高,约7.75 TCID_(50)/ml。结论成功采用生物反应器-微载体培养技术培养Vero细胞制备了CA16,且病毒滴度较高,为CA16灭活疫苗的研制奠定了基础。

    2017年01期 v.30 79-81页 [查看摘要][在线阅读][下载 196K]
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  • 犬粪便中细粒棘球绦虫抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用

    刘原源;黄书晨;高珺珊;王晓岑;宫鹏涛;张壮志;李建华;杨举;李赫;张西臣;

    目的建立简便、特异的检测犬粪便中细粒棘球绦虫抗原的双抗体夹心ELISA方法,并进行验证及初步应用。方法以细粒棘球绦虫EdiagA864蛋白为抗原,免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体;利用HRP标记兔抗细粒棘球绦虫EdiagA864多克隆抗体,通过溶解、超声方法处理犬粪便样品;以抗细粒棘球绦虫单克隆抗体2D12作为捕获抗体,HRP标记的兔抗细粒棘球绦虫EdiagA864多克隆抗体为检测抗体,通过棋盘法确定抗体最佳包被浓度、最佳封闭剂、待检粪样最佳稀释比例及酶标抗体最佳浓度。应用建立的双抗体夹心ELISA法对来自长春地区的64份犬粪便样品及来自新疆的8份犬粪便阳性样品进行检测。结果兔抗EdiagA864多克隆抗体的效价为105。建立的双抗体夹心ELISA法的最佳检测条件为:抗体包被浓度为1∶50,封闭剂为1%BSA,粪液稀释度为1∶5,酶标二抗稀释度为1∶800。建立的双抗体夹心ELISA法与犬贾第虫和犬蛔虫阳性样品均无交叉反应;检测不同稀释度的粪便液,当稀释至1∶20时,P/N仍大于2;检测6份阳性样品与4份阴性样品的批间和批内变异系数均小于8。用建立的方法检测8份阳性样品的结果均为阳性,64份待检样品的结果均为阴性。结论建立的双抗夹心ELISA方法特异性较强,敏感性较高,重复性较好,为细粒棘球绦虫流行病学调查及诊断提供了一种更简便、快速、特异的免疫学检测方法。

    2017年01期 v.30 82-85+89页 [查看摘要][在线阅读][下载 185K]
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  • 气管内喷雾注入博莱霉素诱导大鼠肺纤维化模型的建立及其评价

    彭方毅;周欢;吴静;姜海蓉;

    目的建立大鼠肺纤维化模型,并对其进行评价。方法经气管内喷雾注入博莱霉素(Bleomycin,BLM)致大鼠肺纤维化,于第1、2、3、4周处死大鼠,观察大鼠给药后日常状况和体重变化,测定羟脯氨酸(L-hydroxyproline-trans-4-hydroxy-L-proline,HYP)含量、肺重,计算肺系数,取肺组织制备病理切片,进行HE、Masson染色后,评价肺组织形态学变化。结果给药4周后,模型组大鼠肺部产生了明显肺纤维化症状,肺系数及HYP含量均明显高于对照组,肺泡间隔增厚,纤维化区可见大量蓝色胶原纤维沉积。结论大鼠气管内喷雾注入BLM可成功制备肺纤维化模型,且纤维化分布较均匀。

    2017年01期 v.30 86-89页 [查看摘要][在线阅读][下载 200K]
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  • 肾综合征出血热病毒84-Fli株单克隆抗体的制备及鉴定

    郝程程;廖辉;王文娟;陈羽;徐威;周荔葆;

    目的制备抗肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndromes,HFRS)病毒特异性单克隆抗体。方法以汉坦病毒84-Fli株抗原纯化液免疫BALB/c小鼠,采用细胞融合技术获得单克隆抗体,利用IFA、SDS-PAGE和Western blot法鉴定其生物学特性。结果成功筛选出阳性杂交瘤细胞株4F6,能稳定且持续分泌抗HFRS病毒的单克隆抗体,亚类鉴定结果为IgM,可与HFRS病毒蛋白在相对分子质量约50 000处发生特异性反应,具有较好的专属性。结论成功制备了1株抗HFRS病毒的单克隆抗体,为进一步研究该病毒感染的诊断、治疗及其预防方法奠定了基础。

    2017年01期 v.30 90-92+102页 [查看摘要][在线阅读][下载 203K]
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综述

  • 寨卡病毒研究进展

    闫飞虎;黄培;李恩涛;赵永坤;杨松涛;

    寨卡病毒病是由寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)感染引起的一种新病毒病。寨卡病毒为黄病毒的一种,由伊蚊属蚊子传播,对成人不会造成生命危险,但其与罕见的格林巴利综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)及新生儿小头症有关,因此,与全世界的公共卫生健康息息相关。起初该病仅在非洲地区流行,1980年传入东南亚,2007年传入密克罗尼西亚,于2014年传入美国并呈现出扩大蔓延趋势,引起世界卫生组织高度重视。2016年,在我国确诊了ZIKV输入性感染病例。本文就ZIKV的分子生物学特征、传播途径、流行病学、临床症状、诊断、预防等方面作一综述,为其相关研究提供参考。

    2017年01期 v.30 93-102页 [查看摘要][在线阅读][下载 350K]
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  • 流感病毒减毒活疫苗的研究进展

    耿兴良;廖国阳;

    目前,疫苗接种仍是预防流感最有效的途径,流感疫苗主要有三价灭活疫苗和减毒活疫苗。灭活疫苗虽安全有效,但其抗原用量大,生产过程复杂,生产周期长,且黏膜免疫力弱;而流感病毒减毒活疫苗不仅能诱导机体产生抗体,同时可引起包括黏膜免疫和细胞免疫在内的一系列适应性免疫反应,因此,认为其免疫效果优于灭活疫苗。本文就流感减毒活疫苗的研究历史及现状、疫苗候选株的获得及基于细胞的流感减毒活疫苗的研发作一综述。

    2017年01期 v.30 103-105+111页 [查看摘要][在线阅读][下载 130K]
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  • 静注人免疫球蛋白在治疗自身免疫疾病和炎症所引发皮肤病的应用

    于引航;傅绍兰;杨莉;李常禄;

    静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)是由多种蛋白组成,包括IgG、IgM、IgA、IgE抗体及少量的白蛋白,还包括氯化钠、麦芽糖等物质。由于IVIG从健康人血浆中提取,因此含有多种人体所需要的自然抗体,一直以来被用作治疗传染性疾病和免疫缺陷疾病。近些年发现IVIG可以治疗多种临床疾病,包括自身免疫和炎症疾病及其所引起的多种皮肤科相关疾病。本文针对IVIG治疗因自身免疫系统紊乱或炎症引发的皮肤疾病的应用作一综述。

    2017年01期 v.30 106-111页 [查看摘要][在线阅读][下载 188K]
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消息

  • 《中国生物制品学杂志》移动版上线了

    <正>为深度推进《中国生物制品学杂志》数字化转型,使期刊的资源得到广泛传播和利用,本刊已入北京世纪超星信息技术发展有限责任公司的移动"域出版"平台,旨在更好地为业内同仁提供快捷的学习方式。扫描二维码,下载"超星学习通",点击"移动图书馆→期刊",输入"中国生物制品学杂志"即可浏览,敬请关注指导。

    2017年01期 v.30 48页 [查看摘要][在线阅读][下载 41K]
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  • 《中国生物制品学杂志》稿约

    <正>《中国生物制品学杂志》于1988年创刊,为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内重要的生物制品专业学术期刊,由中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会主管,中华预防医学会和长春生物制品研究所有限责任公司主办,月刊。1刊载内容和设置栏目本刊主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床

    2017年01期 v.30 112页 [查看摘要][在线阅读][下载 39K]
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