中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 产肠毒素大肠埃希菌K99-987P-F41融合蛋白在小鼠体内免疫效果的评价

    王欣;郎秀艳;张洋龙;倪宏波;

    目的评价产肠毒素大肠埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K99-987P-F41融合蛋白在小鼠体内的免疫效果。方法制备ETEC融合蛋白K99-987P-F41亚单位疫苗、ETEC全菌体灭活疫苗、ETEC天然菌毛K99-987P-F41混合蛋白亚单位疫苗及ETEC重组菌毛K99-987P-F41混合蛋白亚单位疫苗,分别免疫小鼠,同时以免疫PBS的小鼠作为对照。ELISA法检测小鼠血清中IgG、IL-4和IFNγ的水平及小鼠粪便和小肠冲洗液中分泌型免疫球蛋白A(secreted immunogobulin A,sIgA)的含量;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况,并进行攻毒试验。结果 ETEC融合蛋白K99-987P-F41重组亚单位疫苗组小鼠血清中的抗ETEC的特异性IgG抗体、IL-4、IFNγ、粪便和小肠冲洗液中的sIgA、小鼠脾脏B和T淋巴细胞增殖能力均显著高于PBS对照组(P<0.05);ETEC融合蛋白K99-987PF41重组亚单位疫苗对小鼠的保护率为80%,与其他3种疫苗的小鼠保护率相近,而PBS对照组为0。结论 ETEC融合蛋白K99-987P-F41可有效诱导小鼠产生较高滴度的特异性抗体,可作为ETEC重组亚单位疫苗候选蛋白。

    2016年09期 v.29 897-902页 [查看摘要][在线阅读][下载 291K]
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  • 奇异变形杆菌-金黄葡萄球菌-铜绿假单胞菌吸附联合疫苗的制备及其对小鼠的保护效果

    杨文腰;修雪亮;王瀛;张建;戴泽文;王琦;周荔葆;

    目的制备奇异变形杆菌-金黄葡萄球菌-铜绿假单胞菌(Proteus mirabilis-Staphylococcus aureus-Pseudomonas aeruginosa,PSP)吸附联合疫苗,并检测其对小鼠的保护效果。方法通过不同生产工艺制备奇异变形杆菌胞膜抗原(Proteus mirabilis membrane antigen,PMA)、金黄葡萄球菌胞质抗原(Staphylococcus aureus cytoplasmic antigen,SCA)金黄葡萄球菌类毒素抗原(Staphylococcus aureus toxoid antigen,SEA)及铜绿假单胞菌类毒素抗原(Pseudomonas aeruginosa toxoid antigen,PEA),按照一定配伍方式与Al(OH)_3佐剂形成PSP吸附联合疫苗,经腹腔注射小鼠,测定其保护效果。结果 6价PMA抗原对奇异变形杆菌6株疫苗株保护率为50%~100%;PSP吸附联合疫苗对奇异变形杆菌PM104的保护率为80%,对铜绿假单胞菌PA101的保护率为100%,对2株金黄葡萄球菌SA79和CMCC26002的保护率分别为90%和60%,对金黄葡萄球菌CMCC26002 α-毒素的保护率为70%。PSP吸附联合疫苗对同群异源菌株交叉保护率达70%以上的比例为:奇异变形杆菌占61.11%;金黄色葡萄球菌占50%;铜绿假单胞菌保护率占92.86%。结论 PSP吸附联合疫苗对疫苗株具有保护性,也对同群菌株具有保护性,为进一步临床研究提供了理论基础和技术支持。

    2016年09期 v.29 903-906页 [查看摘要][在线阅读][下载 164K]
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基础研究

  • 人二倍体细胞对不同病毒感染过程的生物学效应比较分析

    王辉;张莹;刘龙丁;廖芸;王建斌;胡雅洁;王丽春;赵婷;王艳翠;李琦涵;

    目的分析人二倍体细胞对不同病毒感染的生物学反应差异性及相关分子生物学机制。方法用人类肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和人单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染人二倍体细胞,光镜和电镜下观察感染细胞形态学特征;比较两种病毒在人二倍体细胞上的增殖动力学及两种病毒感染后细胞酶谱的变化;采用基因芯片检测两种病毒感染后人二倍体细胞基因反应的差异。结果感染细胞的光镜或电镜的超微结构观察均表现出许多相同的特点,包括细胞变圆、肿胀、折光性增强,以及细胞细微结构的受损,大多数细胞器的破坏等。两种病毒在人二倍体细胞上具有不同滴度峰值的增殖动力学过程;对细胞超氧化物歧化酶的动力学改变趋势有不同影响,但对乳酸脱氢酶和琥珀酸脱氢酶动力学变化趋势无明显影响;两种病毒感染引起人二倍体细胞出现不同的基因反应,其中与信号转导及与天然免疫反应有关的mRNA转录效率具有一定的差异。结论人二倍体细胞对EV71、HSV-1感染过程表现不同的生物学效应。

    2016年09期 v.29 907-912页 [查看摘要][在线阅读][下载 367K]
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  • 一种肠道病毒71型毒株的一般生物学特性检测及分子鉴定

    奚彩丽;魏艳红;尧晨光;寇铮;胡康洪;

    目的对一种肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)毒株进行一般生物学特性检测及分子鉴定。方法将EV71毒株接种于人横纹肌瘤(rhabdomyosarcoma,RD)细胞进行病毒培养,通过EV71致细胞病变效应(CPE)分析、CCID50法检测子代病毒产量、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测EV71核酸合成情况以及免疫荧光印迹检测EV71蛋白表达水平,来确认其生物学特性;RT-PCR扩增EV71保守区的基因片段后进行基因测序,并将测序结果经BLAST程序进行同源性比对。结果该毒株接种RD细胞48 h后出现明显的CPE,其可在RD细胞中增殖,最终导致细胞死亡;该毒株在RD细胞中处于快速复制状态,其核酸合成与蛋白表达随时间的延长大量增加;该毒株与EV71/wuhan/3018/2010(KF501389)的核苷酸序列同源性为100%。结论该EV71毒株为EV71/wuhan/3018/2010,在RD细胞中可快速增殖,毒力较强,适合作为抗EV71药物筛选毒株。

    2016年09期 v.29 913-917页 [查看摘要][在线阅读][下载 349K]
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  • 人源大麻素Ⅰ型受体基因真核表达质粒的构建及表达

    郝坡;马强;孙厚良;赖国旗;李晶;

    目的构建人源大麻素Ⅰ型受体(human cannabinoid receptor 1,hCBⅠ)基因GV230真核表达质粒,并于HEK-293细胞中进行表达。方法以人脑皮质细胞的总RNA为模板,扩增获得hCBⅠ基因,克隆至真核表达载体GV230,构建重组表达质粒GV230-hCBⅠ,筛选阳性克隆,脂质体瞬时转染HEK293细胞。置倒置荧光显微镜下观察,并采用激光共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)和Western blot法检测hCBⅠ基因在HEK293细胞中的表达。结果重组表达质粒GV230-hCBⅠ经双酶切及测序鉴定,构建正确。转染48 h后,转染率约40%,CBⅠ蛋白主要于细胞膜分布及表达,且于相对分子质量约50 000处可见特异性条带。结论成功构建了重组真核表达质粒GV230-hCBⅠ,并于HEK293细胞中表达,为进一步研究CBⅠ的生物学功能奠定了基础。

    2016年09期 v.29 918-921页 [查看摘要][在线阅读][下载 218K]
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  • 基于~1H核磁共振技术的产后乏情奶牛血浆代谢组学分析

    王刚;肖鑫焕;范子玲;夏成;吴凌;杨威;孙雨航;舒适;许楚楚;白云龙;张江;

    目的应用~1H核磁共振(~1H nuclear magnetic resonance,~1H NMR)技术筛选正常发情奶牛与乏情奶牛血浆中差异表达的代谢物,初步揭示奶牛产后乏情与代谢变化的关系。方法选取年龄、体况、胎次相近的产后60~90 d经产荷斯坦奶牛206头,结合临床表现、直肠检查、B超检查和激素检测结果筛选出发情组(20头)和乏情组(24头)共计44头为实验动物。应用~1H NMR技术对两组奶牛血浆代谢物进行检测,并结合多元统计分析,筛选出两组奶牛血浆中差异代谢物。结果与发情组相比,筛选出的10种差异表达代谢物,即L1[LDL,脂类(低密度脂蛋白)]、L2[VLDL,脂类(极低密度脂蛋白)]、L3(Lipid,脂质)、丙氨酸(Ala)、谷氨酸(Glu)、天冬酰胺(Asn)、肌酸(Crea)、胆碱(Choline)、磷酸胆碱(PC)和甘油磷酸胆碱(GPC),在乏情组奶牛血浆中均表达下调,其参与了能量、氨基酸、脂类以及胆碱等代谢途径。结论筛选出表达下调的差异代谢物,可能导致奶牛处于能量负平衡、脂类代谢异常或脂肪肝状态,从而干扰生殖激素合成与分泌,引发奶牛产后乏情。

    2016年09期 v.29 922-927页 [查看摘要][在线阅读][下载 323K]
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治疗性制剂

  • 15肽介导的聚吡咯修饰的纳米金花对小鼠脏器的损伤及其体内代谢分析

    王丽;曾素耘;曾佳;

    目的分析15肽介导的聚吡咯修饰的纳米金花(gold nanoflower modified with 15 peptide mediated polyrrole,15P-PPy-NPS)对小鼠脏器的损伤及体内代谢情况。方法向SKOV-3肿瘤荷瘤裸鼠尾静脉注射15P-PPy-NPS,采用电感耦合等离子体质谱(inductively coupled plasma-mass spectrometry,ICP-MS)技术分析不同时间点Au元素在裸鼠血液和主要脏器中的沉积及代谢情况。将裸鼠主要脏器制成石蜡切片,利用TUNEL试剂盒及PI碘化丙啶作核染色双标染色,观察裸鼠主要脏器损伤情况。结果 15P-PPy-NPS通过血液进入裸鼠体内,可被肝脏代谢,少量蓄积未造成明显的组织损伤。结论 15P-PPy-NPS对裸鼠肝脏、肾脏、脾脏等主要脏器未造成明显损伤,可经肝脏代谢,用于生物治疗和光热治疗,具有较好的安全性和可靠性。

    2016年09期 v.29 928-931页 [查看摘要][在线阅读][下载 228K]
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  • 姜黄素对小鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其与Toll样受体4/核因子-κB信号通路的相关性

    顾会平;吴明煜;郭晓红;

    目的探讨姜黄素对小鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)的保护作用及其与Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子-κB(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB)信号通路的相关性。方法取健康C57BL/6小鼠,采用随机区组法分为假手术组(Sham组)、MIRI组及姜黄素预处理的MIRI组(Cur组):使用丝线暂时阻断小鼠冠状动脉前降支(left anterior descending,LAD)血流30 min,再灌注4 h,建立小鼠MIRI模型;假手术组接受相同的手术过程,但未阻断LAD;Cur组在缺血前30 min腹腔注射姜黄素(100 mg/kg)。采用伊文思蓝和氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色评估小鼠心肌梗死面积;电化学发光法检测小鼠血清肌钙蛋白(cardiac troponin T,cTnT)水平;RT-PCR法检测小鼠心肌组织TLR4及肿瘤坏死因子-α(tumor nectosis factor-alpha,TNF-α,)mRNA水平;Western blot法检测小鼠心肌组织NF-κB蛋白表达水平;ELISA法检测小鼠心肌组织TNF-α蛋白表达水平。结果 Cur组小鼠心肌梗死面积及血清cTnT均低于MIRI组(P均<0.01);Cur组小鼠心肌组织TLR4、TNF-αm RNA水平及NF-κB、TNF-α蛋白表达水平均低于MIRI组(P均<0.05)。结论姜黄素对小鼠MIRI的心肌具有保护作用,可能是通过TLR4/NF-κB信号通路实现的。

    2016年09期 v.29 932-935页 [查看摘要][在线阅读][下载 171K]
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诊断制剂

  • ABO正定型和RhD定型检测卡(柱凝集法)的质量分析

    沈舒;周海卫;刘东来;马秋平;张春涛;

    目的对在我国上市的9个品种的ABO正定型和RhD定型检测卡(柱凝集法)进行实验室质量分析。方法使用性能良好的红细胞试剂对上述试剂盒的外观、特异性、灵敏度、重复性、批间重复性和稳定性进行检测。结果参与验证的ABO正定型和RhD定型检测卡(柱凝集法),外观、特异性、灵敏度、重复性、批间重复性和稳定性均能达到要求。结论通过对ABO正定型和RhD定型检测卡(柱凝集法)的实验室验证,形成了相关的性能条款,制定了相关的行业标准。

    2016年09期 v.29 936-939页 [查看摘要][在线阅读][下载 126K]
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临床研究

  • 人用狂犬病疫苗(Vero细胞)上市后4针与5针接种程序安全性的比较

    苏家立;汤妍;陈义建;夏艳辉;黄竹航;

    目的比较人用狂犬病疫苗(Vero细胞)上市后4针和5针接种程序的安全性。方法以2012年8月~2014年2月接种狂犬病疫苗的4 251名健康人作为观察对象,统计按4针和5针程序接种后相关安全性指标资料,并进行分析比较。结果 4针和5针程序组不良事件发生率分别为4.48%和2.69%,两组间差异有统计学意义(χ~2=101.50,P<0.001);全身不良反应发生率分别为3.08%和1.86%,两组间差异无统计学意义(确切概率法,P=0.500);局部不良反应发生率分别为2.01%和1.30%,两组间差异无统计学意义(确切概率法,P=0.500)。全身不良反应以发热为主,局部不良反应以触痛为主,不良反应级别主要为Ⅰ级,未观察到严重不良事件。结论人用狂犬病疫苗(Vero细胞)4针和5针接种程序均具有良好的安全性,但4针接种次数少,程序简便,成本低,且受试者依从性好,值得推广使用。

    2016年09期 v.29 940-942+949页 [查看摘要][在线阅读][下载 134K]
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  • 浙江金华地区猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫程序的筛选及推广应用

    蒋春燕;张晓菊;张超颖;何海健;余建国;章红兵;

    目的筛选现阶段浙江金华地区猪场常用的3种猪繁殖与呼吸综合征疫苗[高致病性蓝耳弱毒活疫苗(JXA1-R株)、弱毒活疫苗(CH-1R株)和灭活疫苗(NVDC-JXA1株)]的免疫程序,并进行推广应用。方法采集免疫了3种疫苗的38个不同规模猪场猪血清,ELISA法检测蓝耳抗体水平,记录主要的免疫程序(包括猪瘟、蓝耳和口蹄疫)。按筛选出的不同规模猪场适合的蓝耳疫苗免疫程序,选择6家应用不同猪蓝耳病疫苗的猪场进行效果验证与示范,根据这些猪场的养殖规模及免疫情况,进行疫苗或免疫程序的调整,免疫后28 d采血,分离血清,检测蓝耳抗体水平。结果蓝耳、猪瘟和口蹄疫的免疫程序较普遍,并能获得较高的蓝耳抗体水平和抗体合格率,蓝耳疫苗免疫时间一般为15或21日龄。其中高致病性毒株JXA1-R在金华地区的不同规模猪场使用最为广泛,特别是小规模和大规模猪场分别占61%和55%,临床应用以猪瘟-口蹄疫-蓝耳和蓝耳-猪瘟-口蹄疫两种免疫程序为主,且免疫时间分别为65日龄和14日龄,猪群可获得最高的蓝耳抗体水平和抗体合格率。蓝耳活疫苗(CH-1R株)在小、中、大规模猪场的使用率分别达15%、10%和18%,免疫程序为蓝耳、猪瘟和口蹄疫,且21日龄免疫蓝耳疫苗猪群可获得更高的蓝耳抗体水平和抗体合格率。猪蓝耳灭活疫苗(NVDC-JXA1株)也以蓝耳、猪瘟和口蹄疫免疫程序为主,其在小、中、大规模猪场的使用率分别达2%、10%和0%,且在15日龄免疫比在21日龄免疫可获得更高的蓝耳抗体水平。验证效果显示,6家猪场的抗体水平整体均有所提高,抗体效价至少提高12%,抗体合格率平均提高15%。结论大规模猪场采用蓝耳-猪瘟-口蹄疫免疫程序可获得更高的蓝耳抗体水平,中等规模猪场采用蓝耳-猪瘟-口蹄疫,而小规模猪场采用猪瘟-口蹄疫-蓝耳免疫程序可达到更好的免疫效果。

    2016年09期 v.29 943-949页 [查看摘要][在线阅读][下载 205K]
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  • 舌下含服粉尘螨滴剂治疗不同年龄组患者变应性鼻炎的疗效评估

    黄晓蕾;骆丽萍;赵琴琴;虞和永;

    目的评估标准化粉尘螨滴剂舌下特异性免疫治疗(sublingual immunotherapy,SLIT)在不同年龄组患者中的疗效。方法对192例粉尘螨过敏的变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)患者,按照就诊年龄分为低龄组(<14岁,96例)和高龄组(≥14岁,96例)。采用标准化粉尘螨滴剂SLIT治疗1年,并进行临床观察及随访研究。分别在治疗前、治疗6个月、12个月后,评估患儿的鼻部症状评分(total nasal symptoms score,TNSS)、总用药评分(total medication score,TMS)和视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)评分变化。结果治疗前,低龄组与高龄组的鼻炎症状评分、用药评分和VAS评分差异均有统计学意义(P均<0.05);治疗6和12个月后,两组之间各评分结果差异均无统计学意义(P均>0.05)。与治疗前相比,低龄组和高龄组的鼻炎症状评分、用药评分和VAS评分在治疗6和12个月后差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论舌下含服粉尘螨滴剂对不同年龄组的AR患者均有效。

    2016年09期 v.29 950-953页 [查看摘要][在线阅读][下载 143K]
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技术方法

  • 基于吲哚胺2,3-双加氧酶1活性评价人间充质干细胞免疫调控功能的吸光光度法的建立及优化

    纳涛;王盼;刘静;张可华;袁宝珠;

    目的建立一种基于吲哚胺2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)的活性快速评价人间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,h MSCs)免疫调控功能的吸光光度法,并进行优化。方法以含干扰素γ(interferonγ,IFNγ)的完全培养基激活hMSCs,收集hMSCs培养上清,与三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)和对二甲氨基苯甲醛(paradimethylaminobenzaldehyde,PDAB)反应,检测A492值,通过标准曲线计算样品中色氨酸代谢产物犬尿氨酸(kynurenine)的含量,以反映h MSCs所分泌IDO1的酶代谢活性,并对方法中的培养体系(6、12、24、48、96孔板)、IFNγ处理时间(4、8、12、24 h)、培养基使用量(150、200、250、300、350、400、450及500μl)及IFNγ作用浓度(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、5.0及10.0 ng/ml)进行优化。同时验证方法的特异性,并检测样品保存条件及液氮冻存后不同复苏时间对kynurenine浓度的影响。采用优化后的方法分析不同来源、不同代次的hMSCs分泌IDO1的能力。结果确定最佳检测条件为:培养体系为48孔体系,IFNγ处理时间为24 h,培养基使用体积为200μl,IFNγ作用浓度为10.0 ng/ml。该方法可特异性检测IDO1的活性;除常温外,其他样品保存条件对检测结果影响较小;液氮冻存后复苏24 h可检测到与冻存前水平相当的kynurenine。该方法可有效判断不同供体来源的hMSCs在分泌IDO1功能上的差异。结论该方法可快速、特异、稳定地检测hMSCs分泌IDO1的水平,且操作简便,可用于快速评价h MSCs的免疫调控功能。

    2016年09期 v.29 954-960页 [查看摘要][在线阅读][下载 328K]
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  • 麻腮风水痘联合减毒活疫苗中水痘病毒滴定方法的比较

    陈震;杨文震;邱平;许乐燕;石玮;陈哲文;程鹏飞;袁力勇;徐闻青;

    目的探讨麻腮风水痘联合减毒活疫苗(measles,mumps,rubella and varicella combined vaccine,live,MMRV)中水痘病毒在人二倍体细胞(MRC-5和2BS)上蚀斑的形成情况,建立不中和法检测MMRV中水痘病毒滴度,并进行验证。方法观察麻疹、腮腺炎和风疹病毒在人二倍体细胞上形成的细胞病变形态,以及风疹病毒对水痘病毒蚀斑形成的影响;通过完全中和、部分中和以及未中和等方法,检测MMRV中水痘病毒的滴度,最终建立不中和法检测水痘病毒滴度,并对方法进行重复性和准确性验证。结果风疹病毒不高于4.0 lg CCID50/孔时,水痘病毒在MRC-5或2BS细胞中产生的蚀斑形态发生微小改变,但蚀斑数量与完全中和风疹病毒后差异无统计学意义(P>0.5)。采用完全中和、部分中和以及未中和等方法检测MMRV中水痘病毒的滴度差异无统计学意义(P>0.5),且不中和法检测水痘疫苗病毒滴度的重复性(RSD为2.3%)和准确性(回收率为97.8%~100%)均较好。结论在人二倍体细胞(2BS或MRC-5)上,不使用抗血清中和直接进行四联疫苗中水痘病毒的滴度检测完全可行,可替代MMRV中经典的使用抗体中和的病毒滴定方法。

    2016年09期 v.29 961-966+972页 [查看摘要][在线阅读][下载 601K]
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  • 基于人工多表位抗原的恶性疟疾抗血清筛查方法的建立

    姚美雪;邓唯唯;张国强;张佳佳;王恒;

    目的建立基于人工多表位抗原的恶性疟疾抗血清筛查方法。方法以人工多表位抗原M.RCAg-1(malaria random constructed antigen-1)和M.RCAg-3(malaria random constructed antigen-3)作为检测蛋白,建立间接ELISA法和双抗原夹心ELISA法,并对两种方法的抗原包被量、一抗稀释度、封闭液、孵育时间及显色时间进行优化。用两种方法检测恶性疟疾病人和正常人血清抗体水平,比较其敏感度,选出最佳检测方法,并检验其特异性和精密性。结果间接ELISA法最佳检测条件:以0.1μg/孔浓度的抗原包被酶标板120 min,用3%羊血清封闭120 min,加入一抗(1∶200稀释)孵育120 min,加入二抗(1∶20 000稀释)孵育60 min,TMB显色10 min;双抗原夹心ELISA法最佳检测条件:一抗稀释度为1∶20,二抗稀释度为1∶100,其他同间接ELISA法。经敏感性比较,确定以M.RCAg-1为抗原的间接ELISA法为最佳检测方法,且该抗原对间日疟血清抗体无明显交叉反应,该方法的批内和批间精密性试验变异系数(CV)为3.05%~5.82%和4.75%~8.54%,均<10%。结论单独包被M.RCAg-1的间接ELISA法的检出率高,特异性和精密性良好,操作简便,可用于疫区恶性疟疾的血清流行病学筛查。

    2016年09期 v.29 967-972页 [查看摘要][在线阅读][下载 256K]
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  • 差示扫描荧光法快速筛选高浓度人免疫球蛋白液体制剂处方

    张伦;罗坚;周月芳;张纯;李增兰;范云周;余蓉;苏志国;

    目的建立高浓度人免疫球蛋白液体制剂处方的差示扫描荧光(differential scanning fluorimetry,DSF)快速筛选法。方法采用DSF法和差示扫描量热法(differential scanning calorimetry,DSC)法分别测定高浓度人免疫球蛋白制剂的转变中点温度(T_(mid))和变性温度(T_m),比较两种方法的一致性;同时检测人免疫球蛋白制品中聚集体形成量与T_(mid)值的关系;以T_(mid)为指标评价溶液环境对人免疫球蛋白制剂稳定性的影响;ELISA法检测人免疫球蛋白制剂中抗乙肝免疫球蛋白(抗-HBs)活性的影响。结果不同制剂处方中DSF法测定的人免疫球蛋白的T_(mid)值与DSC法测定的T_m值呈线性关系,R~2=0.963;T_(mid)值与制剂中聚集体形成量呈良好的线性关系,R~2=0.933;制剂中蛋白浓度升高,其热稳定性降低,糖和糖醇及氨基酸类稳定剂的稳定效果优于氯化钠及精氨酸和谷氨酸的混合物;甘氨酸和脯氨酸对制剂中抗-HBs活性的保护效果与某些糖类和糖醇类相当。结论 DSF具有蛋白检测浓度范围广、样品用量少和检测速度快等优点,可用于高浓度人免疫球蛋白液体制剂处方的快速筛选。

    2016年09期 v.29 973-977+983页 [查看摘要][在线阅读][下载 270K]
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  • CCID_(50)法检测流感病毒滴度方法的建立及验证

    孙瑶;申镇维;姜春来;孟祥博;徐菲;

    目的建立基于MDCK细胞的三价流感减毒活疫苗病毒滴度检测方法,并进行验证。方法以抗流感病毒血清中和三价流感减毒活疫苗中两种型别病毒,采用CCID_(50)法检测未中和型别病毒感染性滴度,并对方法的专属性、线性、准确性、精密度、耐用性进行验证。结果样品中的辅料成分、其他型别病毒和异源抗病毒血清均不会对病毒滴度测定结果产生干扰;该方法检测H1N1、H3N2和B型流感病毒滴度的线性范围分别为3.81~8.48、3.48~7.65和2.45~6.98 log CCID_(50)/0.2 ml,在线性范围内,线性回归系数(R~2)分别为1、0.994 6和0.994 5;该方法检测3种型别流感病毒滴度重复性和中间精密度的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于15%,平均回收率在85%~115%之间;同一样品不同时间点检出结果差异无统计学意义(P均>0.05)。结论建立的CCID_(50)法专属性、准确度、线性、精密度、耐用性良好,是一种简便、快速、成本低、检测误差小的方法,可用于三价流感减毒活疫苗病毒滴度的检测。

    2016年09期 v.29 978-983页 [查看摘要][在线阅读][下载 218K]
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  • 利用DNA免疫技术制备麻疹病毒抗血清

    权娅茹;崔晓雨;易敏;徐涵;陈震;邱平;李长贵;袁力勇;

    目的利用DNA免疫技术制备特异性麻疹病毒抗血清,用于麻疹减毒活疫苗毒种以及含麻疹病毒疫苗的检定。方法以含麻疹病毒沪-191融合蛋白F和血凝素H基因的重组真核表达载体pGI-F和pGI-H作为免疫原,免疫家兔,制备麻疹病毒抗血清。采用细胞培养法检测抗血清细胞毒性,ELISA法检测抗体滴度,微量细胞病变法检测抗血清的特异性和中和效价。结果麻疹病毒抗血清细胞毒性小,与风疹病毒、腮腺炎病毒、水痘病毒均无交叉反应。抗血清的ELISA效价大于256 000,中和效价为1∶1 024,4倍稀释后仍能完全中和1×10~5 CCID_(50)/ml麻疹病毒。结论 DNA免疫方法可制备高效价、低细胞毒性的麻疹病毒抗血清,该血清可用于麻疹疫苗毒种及含麻疹疫苗的质量控制。

    2016年09期 v.29 984-986页 [查看摘要][在线阅读][下载 166K]
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  • 尘螨变应原治疗性产品鉴别试验解吸附方法的建立

    李喆;张影;徐颖华;杨英超;薄淑英;张瑾;辛晓芳;

    目的建立尘螨变应原治疗性产品鉴别试验的解吸附方法。方法选取两个厂家的尘螨变应原治疗性产品,分别用1 ml 20%柠檬酸溶液、0.4 mol/L磷酸盐溶液和0.5 mol/L EDTA-Na溶液解吸附后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴别试验。将两个厂家各3批尘螨变应原治疗性产品于常温及37℃下分别解吸附16和24 h,进行Western blot鉴别试验。结果两个厂家的制品经3种溶液解吸附后,SDS-PAGE结果均可见相对分子质量约28 000及15 000的组分Ⅰ丝氨酸蛋白酶和组分ⅡNPC家族蛋白目的条带,Western blot结果可见同样大小的与鼠抗螨变应原组分Ⅰ、Ⅱ单克隆抗体特异性结合的蛋白条带,而未解吸附的制品未检测到以上目的条带。3批制品的Western blot鉴定结果相近,表明两种解吸附温度及时间对鉴别试验的结果影响不大。结论尘螨变应原治疗性产品需经解吸附后才能进行鉴别试验,本研究建立的解吸附方法可有效稳定地对制品进行解吸附。

    2016年09期 v.29 987-989+992页 [查看摘要][在线阅读][下载 239K]
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  • 献浆员中呼吸道合胞病毒中和抗体效价分布及高效价血浆筛选

    李曼;管利东;王威;赵卉;孙思才;侯继锋;

    目的分析献浆员中呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)中和抗体效价分布情况,筛选高效价RSV中和抗体血浆,用于制备特异性RSV免疫球蛋白。方法对600份血浆进行倍比稀释,采用微量中和试验法对血浆中的RSV中和抗体效价进行检测,选择合适稀释度作为大规模血浆检测稀释点。以单一稀释度对2 976份血浆的RSV中和抗体进行检测,并对高效价混合血浆进行检测和评价。结果 600份血浆中,血浆RSV抗体效价≥1∶64占65.5%,≥1∶180占18.3%,≥1∶256占11.2%。以1∶200稀释度对2 976份血浆进行筛选,共筛选出463份血浆,占15.5%。463份混合血浆的RSV中和抗体效价达到普通混合血浆的4倍。结论经本方法筛选出高效价的血浆,用于制备特异性RSV免疫球蛋白是可行的。

    2016年09期 v.29 990-992页 [查看摘要][在线阅读][下载 119K]
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  • 高效液相色谱法测定水痘减毒活疫苗中乙二胺四乙酸二钠残留量

    任玉卓;杜岩;王昭;周柏宏;刘志强;

    目的建立检测水痘减毒活疫苗中乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)残留量的高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC),并进行验证。方法采用TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm);流动相:磷酸二氢铵,四丁基氢氧化铵,乙腈溶液;流速:0.8 ml/min;检测波长:257 nm;进样量:20μl。对该方法的系统适用性、专属性、准确性、线性、检测限及定量限及耐用性进行验证。应用建立的方法检测4批水痘减毒活疫苗原液中EDTA-2Na的含量。结果试验的目标峰理论塔板数均在21 000以上,分离度在4.9以上,拖尾因子约1.0;含EDTA-2Na的原液与FeCl_3溶液反应后的色谱图保留时间在11.002 min处出现吸收峰,不含EDTA-2Na的原液未见该峰;EDTA-2Na标准液的浓度在0~40μg/ml范围内,与峰面积呈良好线性关系,回归方程为:y=20.268 11 x+1.276 36,r=0.990 99;加EDTA-2Na的4种浓度的疫苗原液与Fe Cl3溶液反应后的回收率为98.0%~102.0%,RSD为1.55%;最低检测限为0.063μg/ml,最小定量限为0.125μg/ml;流动相pH为2.30、2.36、2.50及7.0时的保留时间分别为11.130、11.303、11.482和12.775。流动相保存1、3、5、7 d的保留时间分别为11.130、11.179、11.259和11.313。4批水痘减毒活疫苗原液中EDTA-2Na的含量分别为0.318 634、0.347 011、0.158 735和0.106 435 ng/μl。结论该方法具有良好的线性、专属性、准确性及耐用性,可用于水痘减毒活疫苗中EDTA-2Na残留量的检测。

    2016年09期 v.29 993-996页 [查看摘要][在线阅读][下载 170K]
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综述

  • 单纯疱疹病毒2型疫苗的研究进展

    徐颖之;郑海发;

    单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)属于疱疹病毒属α疱疹病毒科,是线性双链DNA病毒,主要通过性传播,是生殖器疱疹的主要病原体,HSV-2的感染还可增加HIV感染的风险。使用安全套和抗病毒治疗等措施虽可使HSV-2的传染降低约50%,但未能从根本上杜绝该病毒的传播。目前,对抗HSV-2最为有效和经济的方法是接种HSV-2疫苗,但尚未获得理想的该疫苗产品。本文结合HSV-2的感染机制,对HSV-2的灭活疫苗、减毒活疫苗、复制缺陷疫苗、亚单位疫苗、多肽疫苗、活载体疫苗及DNA疫苗的最新研究进展作一综述,并对HSV-2预防性及治疗性疫苗的研究方向进行讨论。

    2016年09期 v.29 997-1003页 [查看摘要][在线阅读][下载 213K]
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  • microRNA与糖尿病患者下肢动脉硬化的相关性

    孙平;肖乐;龚昆梅;

    临床中发现,越来越多的糖尿病患者并发下肢动脉硬化,临床表现特点有间隙性跛行、休息痛、缺血性坏疽。迄今动脉硬化具体的发病机制尚未阐明,目前较为普遍认同"损伤应激学说"对其发病机制的表述,但未涉及基因调控。由于发病机制在基因调控领域中的空白,不能确定相关基因的干预靶点,影响了对糖尿病下肢动脉硬化的有效预防和治疗。最近10年,microRNA成为基因研究领域中的热点,预计约30%的人类基因均会受microRNA调控,1个microRNA家族可能与多达200个靶基因结合,相比大量的靶基因,起调控作用的microRNA数量要少得多,因此通过microRNA研究糖尿病下肢动脉硬化的发病机制更易进行,同时这也是利用microRNA研究基因表达调控的巨大优势。本文对microRNA的热点及其与糖尿病患者下肢动脉硬化的相关性作一综述。

    2016年09期 v.29 1004-1008页 [查看摘要][在线阅读][下载 161K]
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