中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 金黄地鼠作为狂犬病暴露后疫苗免疫动物模型的应用

    汤重发;石磊泰;俞永新;李玉华;曹守春;李加;吴小红;王云鹏;

    目的以金黄地鼠作为动物模型,评价不同种类狂犬病疫苗在暴露后免疫中的保护效果。方法将不同类型狂犬病疫苗分别免疫两组金黄地鼠,一组为未感染过病毒的健康动物(Pr EP),另一组为感染过CVS株的动物(PEP),免疫后不同时间点通过心脏穿刺采血,RFFIT法测定血清抗体效价。对PEP组动物同时观察其死亡情况,分析各动物抗体水平与保护效果的相关性。另以4.0 lg MICLD_(50)/ml的CVS狂犬病固定毒株感染金黄地鼠左腿腓肠肌,每只0.2 ml,6 h后开始以不同类型狂犬病疫苗按0、3、7、14 d程序免疫,观察疫苗对动物的保护效果。结果暴露后免疫组(PEP)的血清抗体可在第4天出现阳性,第5天达100%,以后持续维持较高水平。未感染的暴露前免疫(Pr EP)动物的抗体水平从第4天开始一直较PEP组低。但PEP组中不同疫苗免疫的各动物中均观察到免疫后第4天及以后的抗体水平与最终该动物的发病死亡无相关性。高效价人用狂犬病疫苗的免疫保护率为80%,但疫苗原液分别稀释2倍和5倍后,保护率分别降至30%和20%。疫苗加PIKA佐剂作相同倍数稀释后,保护率可达80%,疫苗联合使用免疫球蛋白,暴露后保护率可达100%,未免疫的感染对照组动物的死亡率在90%左右。结论以金黄地鼠作为狂犬病暴露后免疫的动物模型可对不同质量疫苗作出有效评价。疫苗的效价与暴露后免疫中的保护作用有相关性,疫苗联合使用免疫球蛋白注射是最佳的暴露后免疫方案;PIKA佐剂在降低疫苗抗原量的同时提高了疫苗的保护作用;暴露后抗体水平未显示与保护效果具有相关性。

    2016年03期 v.29 225-230页 [查看摘要][在线阅读][下载 207K]
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  • 不同佐剂和免疫途径对结核分枝杆菌多表位融合蛋白TP15免疫原性的影响

    李军丽;黄香玉;朱传智;宋庆德;肖漓;高钰;何秀云;

    目的探讨不同佐剂和免疫途径对结核分枝杆菌多表位融合蛋白TP15免疫原性的影响。方法制备多表位融合蛋白TP15,分别以MF59和h BCG单独或联合作为佐剂,经皮下或肌肉注射BALB/c小鼠,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗TP15特异性Ig G、Ig G1和Ig G2a抗体,流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞中多功能CD4~+T细胞含量,夹心ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中细胞因子IL-1β和IL-12的含量。结果多表位融合蛋白TP15免疫小鼠只产生抗TP15特异性Ig G和Ig G1抗体,不产生Ig G2a抗体。MF59和h BCG单独或联合作为TP15抗原佐剂,皮下注射和肌肉注射均能显著提高机体抗TP15特异性Ig G、Ig G1和Ig G2a抗体水平,且复合佐剂MF59+h BCG的免疫效果更佳。MF59和h BCG单独或联合作为TP15抗原佐剂,皮下注射较肌肉注射更有利于产生Ig G2a抗体,其中复合佐剂MF59+h BCG疫苗免疫小鼠产生Ig G2a抗体的效果最佳,且Ig G1/Ig G2a值显著低于肌肉注射。MF59和h BCG单独或联合作为TP15抗原佐剂经皮下免疫小鼠,脾淋巴细胞IL-2~+CD4~+T细胞含量增加,IL-10~+CD4~+T细胞含量减少,腹腔巨噬细胞分泌IL-1β和IL-12水平增强。结论 MF59+h BCG复合佐剂诱导Th1型细胞免疫漂移,且皮下注射免疫效果优于肌肉注射。

    2016年03期 v.29 231-236+241页 [查看摘要][在线阅读][下载 456K]
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基础研究

  • 联合接种多种肺炎球菌热休克蛋白对小鼠抵抗肺炎球菌能力的影响

    游文献;曹炬;

    目的探讨联合接种多种肺炎球菌热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)对小鼠抵抗肺炎球菌能力的影响。方法将3种肺炎球菌HSPs Clp P、Dna J、Gro EL单一及经任意组合后分别经腹腔免疫小鼠,每次免疫接种间隔12~14 d,共接种3次。末次免疫7 d后,经小鼠眼眶采血,分离血清,测定各组小鼠血清抗体滴度,同时设佐剂对照组(AlPO_4)。将单一蛋白免疫组小鼠经鼻腔黏膜分别感染中剂量肺炎球菌2/D39(1.0×10~7 CFU)、3/CMCC31436(3.0×10~7 CFU)、4/TIGR4(2.0×10~7 CFU),所有免疫组小鼠均经鼻腔黏膜分别感染致死剂量肺炎球菌2/D39(2.0×10~8 CFU)、3/CMCC31436(1.0×10~9 CFU)、4/TIGR4(5.0×10~8 CFU),比较各组小鼠的中位生存时间。结果单一蛋白及联合蛋白免疫组小鼠均可产生有效抗体。单一蛋白免疫组小鼠感染3种中等剂量肺炎球菌后的中位生存时间均明显长于佐剂对照组(P<0.001);联合蛋白免疫组小鼠感染不同致死剂量菌株肺炎球菌后的中位生存时间明显长于单一蛋白免疫组(P<0.05)。结论联合接种多种肺炎球菌HSPs可提高小鼠抵抗肺炎球菌能力,为其作用机制的研究奠定了基础。

    2016年03期 v.29 237-241页 [查看摘要][在线阅读][下载 277K]
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  • 克罗诺杆菌IbpA蛋白的表达、纯化及其免疫原性

    赵志晶;梁昊宇;董思国;田万红;王斌;曾明;

    目的表达并纯化克罗诺杆菌Ibp A蛋白,检测其免疫原性。方法提取克罗诺杆菌菌株CMCC45402的基因组,经PCR获得ibp A基因片段,连接至表达载体p ET30a(+),构建重组质粒p ET30a(+)-ibp A。将重组质粒转化E.coli BL21(DE3)菌株,用不同终浓度的IPTG(0.1、0.2、0.5、0.8、1.0 mmol/L)分别于30和37℃诱导表达不同时间(2.5、4、5 h),进行SDS-PAGE及Western blot分析。表达产物经Ni凝胶亲和层析纯化后,经腹腔免疫BALB/c小鼠,每2周加强免疫1次,共2次,末次免疫1周后,经小鼠眼球采血,分离血清,ELISA法检测血清效价。同时检测热激对Ibp A蛋白表达水平的影响。结果重组质粒p ET30a(+)-ibp A经双酶切鉴定证明构建正确。最佳IPTG诱导终浓度为0.2 mmol/L,最佳诱导温度为30℃,最佳诱导时间为5 h。诱导表达产物相对分子质量约24 000,主要以可溶性形式存在,可与抗His-Tag单克隆抗体特异性结合;纯化蛋白的纯度可达96%;小鼠免疫血清效价均可达1:25 000以上。用小鼠血清可检测到热激后克罗诺杆菌Ibp A的表达。结论本实验成功构建了ibp A基因的高效原核表达系统,获得了高纯度重组蛋白,制备了高效价抗血清,为后续ibp A基因和克罗诺杆菌热抗性关系的研究奠定了基础。

    2016年03期 v.29 242-247+251页 [查看摘要][在线阅读][下载 491K]
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  • 腺苷酸激酶4慢病毒过表达质粒的构建及鉴定

    沈欢欢;连帅;计红;杨焕民;孔凡志;

    目的构建腺苷酸激酶4(adenylate kinase 4,AK4)慢病毒过表达质粒,并进行鉴定。方法从Hep G2细胞中扩增AK4基因,将其克隆至载体LV5,构建重组质粒LV5-AK4,经测序鉴定后,将鉴定正确的LV5-AK4和包装质粒p Gag/Pol、p Rev、p VSV-G共转染HEK293T细胞,包装慢病毒;将慢病毒原液进行10倍系列稀释(10~(-1)~10~(-4)),感染HEK293T细胞,检测病毒滴度;慢病毒感染Hep G2细胞,Western blot法检测AK4蛋白的表达水平。结果重组质粒LV5-AK4经测序鉴定证明构建正确,并成功包装成慢病毒,病毒滴度为5×10~8 TU/ml。试验组Hep G2细胞中AK4蛋白的表达水平显著高于空白对照组及阴性对照组(P<0.01)。结论成功构建了携带AK4基因的重组慢病毒过表达质粒,为进一步研究低氧应激细胞中AK4的功能及其分子作用机制奠定了基础。

    2016年03期 v.29 248-251页 [查看摘要][在线阅读][下载 264K]
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  • 链球菌溶血素与真菌果胶酶融合表达及纯化条件的优化

    王建;赵庆新;

    目的优化链球菌溶血素(streptolysin O,SLO)与真菌果胶酶(pectin lyase,PL)的融合表达及纯化条件。方法将活化培养的工程菌以2%接种量接种于发酵液体培养基中,于37℃,200 r/min培养至不同生长期(A_(600)值分别为0.6、0.8和1.0),分别于不同温度(10、15、20、25、30、35和37℃)及加入不同终浓度IPTG(0.05、0.1、0.2、0.4、0.5、0.6、0.8和1.0 mmol/L)条件下诱导表达不同时间(6、12、20、24、36、48和60 h)。将诱导表达的融合蛋白进行Ni离子亲和层析纯化,对纯化中的上样缓冲液(binding buffer,分别含0、5、10、15、20、25、30 mmol/L咪唑)、清洗缓冲液(washing buffer,分别含0、5、10、20、30、40、50、60 mmol/L咪唑)及洗脱缓冲液(elution buffer,分别含100、200、500、1 000 mmol/L咪唑)的咪唑浓度进行优化。结果最佳诱导表达条件为:工程菌培养至A_(600)为0.8时,加入0.4 mmol/L IPTG,于20℃诱导24 h,目的蛋白的相对分子质量约91 500,占全菌总蛋白的38.6%,溶血活性可达4.0×10~7U/ml。最佳纯化条件为:binding buffer和washing buffer最佳咪唑浓度为5和60 mmol/L,elution buffer分别使用200和500 mmol/L咪唑进行阶段性梯度洗脱,纯化产物纯度可达95%。结论成功优化了SLO与PL融合蛋白的表达及纯化条件,纯化后获得了纯度较高的融合蛋白,为进一步研究SLO蛋白的性质及应用奠定了基础。

    2016年03期 v.29 252-256页 [查看摘要][在线阅读][下载 269K]
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  • 重组腺病毒介导的FOXO/MDA-7对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其机制

    任尧;李莹;孙大鹏;

    目的探讨重组腺病毒介导的FOXO/MDA-7对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其机制。方法将MDA-MB-231细胞分为Ad-FOXO/MDA-7组、Ad-FOXO组、Ad-MDA-7组和空白对照组,采用Real-time PCR、q RTPCR和Western blot法检测各组细胞中FOXO和MDA-7基因的转录及蛋白表达水平;MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞的凋亡情况;Transwell法检测细胞的侵袭能力;Western blot法检测细胞中Ras、Raf、MEK和ERK蛋白的表达情况。结果与其他各组相比,转染Ad-FOXO/MDA-7后,MDA-MB-231细胞中FOXO和MDA-7的表达明显增强,细胞的增殖活力和侵袭能力明显被抑制(P<0.05),凋亡率明显升高,细胞中Ras、Raf、MEK和ERK蛋白的表达也明显被抑制。结论重组腺病毒Ad-FOXO/MDA-7能明显促进乳腺癌细胞的凋亡,为乳腺癌的基因治疗提供了新的思路。

    2016年03期 v.29 257-261页 [查看摘要][在线阅读][下载 417K]
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消息

  • 欢迎登录《中国生物制品学杂志》网站

    <正>尊敬的专家、读者、作者及各位同仁:您们好!自2007年8月起,《中国生物制品学杂志》网站(www.zgswj.com.cn,中文域名:中国生物制品学杂志.com)正式运行。本站网页有杂志简介、在线投稿、稿件查询、过期目录、广告合作等您所需要的信息,欢迎登录。

    2016年03期 v.29 261页 [查看摘要][在线阅读][下载 41K]
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基础研究

  • 人APOBEC3H hap Ⅱ在昆虫表达系统中的表达及其纯化

    李婷;王虹;张晓红;董燕;王涛;于晓方;韩雪;

    目的构建重组人APOBEC3H hapⅡ(A3H hapⅡ)杆状病毒表达载体,在昆虫细胞表达系统中表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析柱纯化。方法采用PCR方法扩增A3H hapⅡ基因并加入His标签后,克隆至杆状病毒转移载体p Fast Bac1中,转化E.coli DH10Bac感受态细胞进行重组,构建质粒Bacmid-A3H hapⅡ-His。将质粒转染昆虫细胞sf9获得P1病毒,扩增后获得P3病毒,感染sf9细胞表达目的蛋白,并进行Western blot鉴定。经Ni-NAT树脂亲和层析柱对表达的蛋白进行纯化,并通过免疫共沉淀试验检测A3H hapⅡ-His与其相互作用蛋白HIV-1 Vif之间的特异性结合。结果成功构建了质粒Bacmid-A3H hapⅡ-His;P3病毒感染sf9细胞后成功表达出相对分子质量约20 000的目的蛋白,且能够与HIV-1 Vif特异性结合。结论成功建立A3H hapⅡ昆虫表达体系,为进一步研究A3H hapⅡ与HIV-1 Vif之间的相互作用机制,并针对其相互作用位点设计抗HIV药物奠定了基础。

    2016年03期 v.29 262-265+269页 [查看摘要][在线阅读][下载 267K]
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  • bta-mir-423-5p在胎衣不下奶牛母体胎盘中的差异表达分析及验证

    刘瑶;张雷;郑程远;邹晓;罗春海;刘健莹;付世新;

    目的分析及验证bta-mir-423-5p在胎衣不下奶牛母体胎盘中的差异表达。方法选取各种因素无明显差异,且排除其他疾病影响的胎衣正常排出奶牛(对照组)和胎衣不下奶牛(试验组)各3头,对照组在奶牛产后胎衣排出后,立即采集母体胎盘组织约150 mg,试验组在奶牛产后12 h,收集母体胎盘组织约150 mg。采用Solexa高通量测序技术对两组母体胎盘组织间bta-mir-423-5p的差异表达进行分析;利用Real-time Q-PCR法进行验证。结果试验组奶牛母体胎盘中bta-mir-423-5p的表达量明显低于对照组(P<0.01)。结论 bta-mir-423-5p在胎衣不下奶牛母体胎盘中异常表达,表明其可能参与胎衣不下的发生,为奶牛胎衣不下发病机理的研究提供了实验依据。

    2016年03期 v.29 266-269页 [查看摘要][在线阅读][下载 185K]
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治疗性制剂

  • 重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体突变体质控方法与质量标准的建立

    毕华;李永红;杨靖清;丁有学;范文红;韩春梅;李响;史新昌;裴德宁;饶春明;

    目的建立重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体突变体的质控方法和质量标准。方法利用乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖抑制试验测定重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体突变体的生物学活性;RP-HPLC和SECHPLC测定其纯度;胰酶酶切,HPLC测定其肽图;荧光定量PCR检测E.coli宿主DNA残留量;ELISA法测定宿主蛋白残留量;Edman降解法进行N-末端序列测定;水平等电聚焦电泳法测定等电点;其余检测项目按《中国药典》三部(2010版)规定进行。同时对通常在原液中进行检定的宿主DNA残留、菌体蛋白残留、N-末端序列测定进行初步的方法验证,考察其在成品中进行检测的可行性。结果经初步验证,在成品中进行宿主DNA残留、菌体蛋白残留、N-末端序列测定具有可行性,用建立的方法对重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体突变体成品进行检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》三部(2010版)的要求。结论建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。同时只对成品进行质控的方法和质量标准对同类产品的质量控制具有借鉴意义。

    2016年03期 v.29 270-274+278页 [查看摘要][在线阅读][下载 382K]
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  • 抗促黄体激素释放激素受体单克隆抗体对人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖及凋亡的影响

    张培培;张国利;田园;付玉和;赵鑫;

    目的探讨抗促黄体激素释放激素受体(luteinizing hormone-releasing hormone receptor,LHRHR)单克隆抗体4F3B10对人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖及凋亡的影响。方法利用半定量RT-PCR分析Ishikawa细胞中LHRHR基因m RNA的转录水平,以β2-M基因为内参标准,通过光密度定量扫描比较确定LHRHR基因量。采用CCK-8法检测4F3B10对Ishikawa细胞增殖的影响;利用Annexin V-FITC/PI双染,在流式细胞仪上检测4F3B10对Ishikawa细胞凋亡的影响。结果 Ishikawa细胞中LHRHR的基因量约为内参的67.23%。4F3B10对Ishikawa细胞的增殖具有抑制作用,且呈剂量依赖性;经半数抑制浓度的4F3B10作用Ishikawa细胞48 h后,细胞凋亡率较未经4F3B10作用的细胞显著升高(P<0.05)。结论 4F3B10可有效抑制Ishikawa细胞增殖,并可诱导其凋亡。

    2016年03期 v.29 275-278页 [查看摘要][在线阅读][下载 215K]
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诊断制剂

  • 丙型肝炎病毒企业参考品的建立及初步验证

    戴峻英;伍静;邱金燕;陈燕清;吕馥芬;

    目的建立丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)企业参考品,并进行初步验证。方法用6种HCV检测试剂从149份血浆中筛选阳性、阴性样本,建立HCV企业参考品,并对参考品的稳定性和适用性进行验证。结果建立的HCV企业参考品包括30份阳性参考品、30份阴性参考品、4份检测限参考品和1份重复性参考品。参考品的稳定性和适用性良好。结论建立了HCV企业参考品,对本企业的产品质量控制具有重要作用。

    2016年03期 v.29 279-282页 [查看摘要][在线阅读][下载 244K]
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消息

  • 第六届疫苗中国发展国际峰会将在上海召开

    <正>第六届疫苗中国发展国际峰会将于2016年4月12~13日在上海隆重召开。作为2016年中国最大的疫苗行业国际年会,这次会议几乎涵盖了整个疫苗产业链上的所有行业。会上将通过人用疫苗及兽用疫苗两个论坛,分别探讨中国及新兴市场疫苗行业的最新发展趋势、研发战略、合作机遇、生产技术等热点话题,同时将与政府权威机构共同探讨国家免

    2016年03期 v.29 282页 [查看摘要][在线阅读][下载 34K]
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临床研究

  • 2008~2014年北京市顺义区狂犬病暴露人群流行病学特征分析

    肖雷;王凤双;唐莹;彭枭然;

    目的分析2008~2014年北京市顺义区狂犬病暴露人群流行病学特征,为狂犬病暴露后的正确处置及控制狂犬病的流行提供参考。方法收集北京市顺义区疾病预防控制中心狂犬病免疫预防门诊登记表上就诊人群的暴露和处置信息,并采用描述性流行病学方法对收集的信息进行分析。结果 2008~2014年北京市顺义区共收集狂犬病暴露患者76 484例,暴露后免疫占99.70%;致伤动物主要以犬为主,占致伤总数的87.05%;5~8月份为动物致伤高峰期;各年龄段男性动物致伤比例均高于女性;20~29岁组致伤比例最高,为19.41%;民工、农民和职工占全区致伤者总数的65.88%;致伤部位以下肢和手部居多,分别占44.46%和37.27%;Ⅲ度伤所占比例逐年提高,被动免疫制剂平均使用率为13.67%。流动人口聚集区由于人口密集,养犬密度大,是发生一犬伤多人事件及人狂犬病病例的高发区域。结论应继续加强狂犬病防治知识健康教育;至少选择一家二级及二级以上综合医院设置狂犬病免疫预防门诊,以提高抗狂犬病被动免疫制剂的使用率及伤口处置能力;对于一犬伤多人事件中致伤者和人狂犬病疫情中密切接触者应急接种的狂犬病疫苗、被动免疫制剂的费用应考虑适当给与减免;加强犬只管理,提高动物疫苗接种率。

    2016年03期 v.29 283-287页 [查看摘要][在线阅读][下载 215K]
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消息

临床研究

  • 以百白破疫苗为例探讨北京市朝阳区疑似预防接种异常反应主动监测模式

    丁雪娇;时念民;李丽;芦强;张娇;张芳蕾;董彦宏;韩柏慧;罗凤基;

    目的分析无细胞百白破疫苗(DTa P)接种后疑似预防接种异常反应(adverse event following immunization,AEFI)主动监测和被动监测结果,评价主动监测模式的敏感性。方法通过全国AEFI信息管理系统,收集北京市朝阳区2010~2013年4~6月DTa P AEFI被动监测个案数据;2013年4~6月对朝阳区4家试点社区接种DTa P的儿童实施主动监测,收集AEFI个案数据;比较试点社区AEFI主动监测与同期自身被动监测、同期对照社区被动监测、自身历年被动监测、历年朝阳区被动监测的情况。结果主动监测AEFI报告率为8 561.24/10万,高于同期自身被动监测、同期对照社区被动监测、自身历年被动监测、历年朝阳区被动监测报告率,差异均有统计学意义(P均<0.001);主动监测一般反应报告率为7 491.08/10万,异常反应报告率为118.91/10万,偶合症报告率为951.25/10万,均高于被动监测,差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论 AEFI主动监测敏感性好,与被动监测相比,更能客观、真实、完整地反映疫苗接种后AEFI信息。

    2016年03期 v.29 288-291页 [查看摘要][在线阅读][下载 146K]
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技术方法

  • 酶法结合D500大孔树脂分离纯化粗品肝素

    宋大巍;刘昆;张丽萍;

    目的探讨酶法结合D500大孔树脂吸附交换分离纯化粗品肝素的效果,以替代传统的氧化法。方法以肝素粗品为原料,采用胰蛋白酶水解法去除原料中的蛋白杂质,结合大孔树脂吸附交换精制粗品肝素。通过生色底物法测定精品肝素的效价,并计算效价回收率。结果酶解液用D500大孔树脂分离纯化的最佳动态吸附条件为:吸附温度55℃,肝素溶液的盐浓度2.8°Bé,肝素溶液p H 8.5,进样浓度2.5 mg/ml,流速1.5 ml/min;最佳解吸条件为:解吸温度50℃,洗脱速度1.0 ml/min,洗脱剂浓度19°Bé,p H 8.5。在此条件下制得的精品肝素效价最高达189 IU/mg,比原料(78 IU/mg)提高2.42倍,且效价回收率为97.2%。结论利用蛋白酶结合大孔树脂吸附交换的方法对粗品肝素进行精制,可减少对精制过程中肝素生物效价的破坏,且提高了精品肝素的得率,该方法可替代传统氧化法精制肝素,为粗品肝素的分离纯化提供了新的方法。

    2016年03期 v.29 292-299页 [查看摘要][在线阅读][下载 454K]
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  • 人肠道病毒71型VP4多抗的制备及其应用

    任富利;周辉;王泽鋆;孟胜利;申硕;

    目的制备人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)VP4多抗,并鉴定EV71空心颗粒(empty particle,EP)和实心颗粒(full particle,FP)。方法构建重组表达质粒p GEX-6p-1-VP4,诱导表达并纯化GST-VP4融合蛋白,免疫家兔制备多抗。ELISA法检测抗体效价,免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)和Western blot法鉴定抗体特异性。应用制备的多抗经Western blot法区分EV71 EP与FP。结果质粒p GEX-6p-1-VP4经双酶切及测序鉴定证明构建正确,纯化后的GST-VP4融合蛋白相对分子质量约32 000,以包涵体形式存在。免疫家兔后可获得效价达10~(10)的多抗。兔抗EV71 VP4多抗可识别EV71原核表达及天然病毒颗粒中的VP0、VP4。结论抗EV71 VP4多抗可应用于EV71 EP及FP的鉴定,为EV71的基础研究及疫苗研发提供了新的工具及方法。

    2016年03期 v.29 300-303+307页 [查看摘要][在线阅读][下载 267K]
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  • 两种方法检测人抗凝血酶-Ⅲ活性的对比分析

    苏文萍;王彬;孙双喜;李荣贞;

    目的对比分析两种检测人抗凝血酶-Ⅲ(antithrombin-Ⅲ,AT-Ⅲ)活性的方法。方法分别用手工法和仪器法检测AT-Ⅲ活性,手工法根据《欧洲药典》8.0中AT-Ⅲ含量检测2.7.17项的要求进行检测,仪器法是利用法国STAGO全自动血凝仪及其配套试剂进行检测。同时对两种方法检测结果的直线回归相关系数、重复性、准确性进行验证。结果两种方法的直线回归相关系数均>0.99,RSD均<10%,回收率均在80%~120%之间。结论两种方法的一致性良好,且仪器法更省时省力,效率更高。

    2016年03期 v.29 304-307页 [查看摘要][在线阅读][下载 152K]
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  • 进口胎牛血清中牛病毒性腹泻病毒的分离及鉴定

    王竞晗;李素;何文瑞;赵权;仇华吉;

    目的对进口胎牛血清中的牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)进行分离及鉴定。方法Trizol法提取待检胎牛血清中的病毒RNA后,利用套式RT-PCR扩增BVDV,并利用生物信息学Lasergene 7.0软件对其核苷酸序列进行同源性分析。取生长状态良好的MDBK细胞,按1%比例加入待检胎牛血清,收获F1代BVDV FBS2014,反复冻融3次后,再次接种MDBK细胞,连传4代。采用荧光定量RT-PCR法、间接免疫荧光试验及抗原捕获ELISA法对收获的病毒进行鉴定。结果扩增产物大小均与预期相符,与已报道的BVDV-1 NADL株的核苷酸序列一致性为92.2%,属于BVDV-1a亚型毒株;分离的病毒经鉴定为BVDV,命名为BVDV FBS2014,病毒基因拷贝数为10~4拷贝/μl,感染MDBK细胞可见特异性绿色荧光;各代次的病毒收获液中BVDV的基因拷贝数均大于10~(4.92)拷贝/μl,BVDV抗原检测结果均为阳性。结论购买的进口胎牛血清中成功分离到可致MDBK细胞产生细胞病变的病毒,经鉴定所分离的病毒为BVDV,命名为FBS2014株,该病毒属于BVDV-1a亚型毒株。

    2016年03期 v.29 308-311页 [查看摘要][在线阅读][下载 283K]
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消息

  • 欢迎订阅《中国生物制品学杂志》

    <正>《中国生物制品学杂志》于1988年创刊,由中华人民共和国卫生部主管,系中华预防医学会系列杂志之一,为报道我国生物制品研究开发重大成果和最新进展的国内唯一生物制品专业学术期刊。主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床学等方面的研究、生产、使用和质控等学术文章。主要设有疫苗研究、基础研究、治疗性制剂、诊断制剂、临床研究、技术方

    2016年03期 v.29 311页 [查看摘要][在线阅读][下载 39K]
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综述

  • 新型尘螨过敏原疫苗的研究进展

    李喆;张影;徐颖华;辛晓芳;

    尘螨是导致过敏性哮喘、鼻炎和皮炎等过敏性疾病重要的过敏原来源。脱敏治疗是目前治疗过敏性疾病最为有效的手段。随着对过敏原研究的日益深入,过敏原疫苗的研究越来越得到重视。本文对预防治疗尘螨过敏原相关疾病的DNA疫苗、重组活菌疫苗、重组蛋白疫苗及细菌性疫苗等新型疫苗的研究进展作一简要综述,旨在为过敏原相关疾病的防控提供参考。

    2016年03期 v.29 312-314页 [查看摘要][在线阅读][下载 109K]
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  • 以CHO细胞为基质的重组单克隆抗体生产中无血清培养基的优化

    叶星;毛晓燕;

    重组单克隆抗体药物特异性高且疗效显著,是近年来研究的热点药物之一,在肿瘤的诊断与治疗、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应等方面具有广阔的应用前景。抗体药物治疗的特点是所需剂量大且治疗周期长,因此市场需求量巨大。基于大规模生物反应器的哺乳动物细胞(特别是CHO细胞)培养技术已逐渐成为生产单抗药物的核心技术。哺乳动物细胞培养技术包括工程细胞株的筛选、无血清培养基的开发与优化、生物反应器培养工艺的优化等环节。本文重点介绍无血清培养基的发展、分类及优化策略,旨在为建立经济高效的单抗体药物生产工艺提供参考。

    2016年03期 v.29 315-322页 [查看摘要][在线阅读][下载 264K]
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  • 水痘-带状疱疹疫苗的使用现状及研究进展

    吴根鹏;朱为;

    水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)可引起水痘和带状疱疹(herpes zoster,HZ),具有较高的传染性和发病率。目前V-Oka减毒株是WHO推荐的唯一可用于疫苗生产的毒株。自上市以来,水痘疫苗证实了其良好的有效性和安全性。水痘-带状疱疹疫苗的开发及应用受到国内外生物制药企业的广泛重视。本文现就水痘和HZ的流行病学、疫苗的发展和现状作一综述。

    2016年03期 v.29 323-328+332页 [查看摘要][在线阅读][下载 241K]
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  • 流感病毒蛋白棕榈酰化修饰的研究进展

    高祥;王子健;孙宁宁;刘宁;

    脂类修饰是一种重要的蛋白质翻译后修饰,流感病毒蛋白可发生不同类型的脂酰化修饰,其中棕榈酰化修饰是其脂类修饰的主要形式,棕榈酰化修饰对流感病毒蛋白的运输、疏水性、胞内定位等具有重要意义,同时在流感病毒装配、膜融合时发挥重要作用。目前,对蛋白棕榈酰化修饰的研究方法主要有放射性同位素标记法、酰基-生物素置换法(acyl-biotinyl exchange,ABE)、质谱检测法。本文对流感病毒蛋白棕榈酰化修饰的研究进展及其分析方法作一综述,为进一步了解流感病毒蛋白棕榈酰化的机制提供参考。

    2016年03期 v.29 329-332页 [查看摘要][在线阅读][下载 146K]
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  • 核酸适配体在蛋白质组学研究中的应用

    肖忠华;苗加伟;

    蛋白质组学是大规模、高通量、系统化从整体水平上研究蛋白质组成、活动规律及蛋白质与蛋白质相互作用的新兴学科。随着高通量核酸适配体筛选技术的发展,具有与抗体结合解离常数相似的上千种酸性、碱性、中性蛋白质的核酸适配体得以筛选。这些核酸适配体广泛应用到固定化酶解反应器、蛋白质免疫印迹、免疫共沉淀、蛋白质与蛋白质相互作用及血清(血浆)、组织、细胞等蛋白质组学研究中。本文简要综述单个核酸适配体及核酸适配体微阵列在蛋白质组学研究中的应用。

    2016年03期 v.29 333-336页 [查看摘要][在线阅读][下载 138K]
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消息

  • 征稿

    <正>《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管,中华预防医学会和长春生物制品研究所有限责任公司主办,是中华预防医学会系列杂志之一,月刊。本刊主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预

    2016年03期 v.29 336页 [查看摘要][在线阅读][下载 36K]
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