中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 重组耻垢分枝杆菌NY-ESO-1疫苗的制备及其免疫原性分析

    陈丹丹;高丹;瞿爱东;徐帆洪;

    目的制备重组耻垢分枝杆菌(recombinant Mycobacterium smegmatis,rM.smegmatis)NY-ESO-1疫苗,并分析其在小鼠体内的免疫原性。方法从人睾丸m RNA中扩增NY-ESO-1基因,克隆至携带β半乳糖苷酶信号肽的表达载体,转化M.smegmatis,构建r M.smegmatis。以rM.smegmatis经腹腔免疫小鼠,200μl/只,于第12周用NY-ESO-1加强免疫1次,第3、6、9、12、13周经尾静脉采血1次,分离血清,并于第13周取小鼠脾脏,制备脾淋巴细胞,检测小鼠血清中NY-ESO-1抗体及其亚型、CD4~+、CD8~+T细胞比例、脾细胞增殖能力、IFNγ及IL-2的分泌水平及体外CTL杀伤能力。结果加强免疫后,与NY-ESO-1组比较,rM.smegmatis-p LA71NY组小鼠血清抗体水平差异无统计学意义(P>0.05),CD4~~+及CD8~+T细胞比例、IFNγ及IL-2的分泌水平及体外CTL杀伤能力均显著升高(P<0.05),脾细胞的增殖能力显著下降(P<0.05)。结论 rM.smegmatis NY-ESO-1疫苗在小鼠体内具有良好的免疫原性,为该疫苗用于肿瘤的免疫治疗奠定了基础。

    2015年12期 v.28 1233-1237+1244页 [查看摘要][在线阅读][下载 667K]
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  • 幽门螺旋杆菌尿素酶多表位疫苗CTB-UE的生物信息学分析及其表达

    刘昆梅;秦玉红;奚涛;郭乐;

    目的通过生物信息学软件评价幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶多表位疫苗CTB-UE的抗原结构,并在E.coli中表达、纯化融合蛋白CTB-UE。方法应用生物信息学软件DNAstar、Geno3D、MOE分析Hp尿素酶多表位疫苗CTB-UE的二级结构和三级结构;将人工合成的尿素酶多表位肽基因UE插入含CTB基因的重组质粒p ETC中,构建重组表达质粒p ETCUE,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,通过Ni-NTP镍离子亲和层析纯化重组蛋白CTB-UE,并进行Western blot分析。结果生物信息学软件分析显示,Hp尿素酶多表位疫苗CTB-UE具有合理的结构;重组表达质粒p ETCUE经双酶切和测序鉴定证实,融合基因CTB-UE与设计序列完全一致;表达的融合蛋白CTB-UE相对分子质量约为33 000,主要以包涵体形式表达,表达量占全菌蛋白的22.3%;纯化的融合蛋白CTB-UE纯度达95.6%,可与兔抗Hp多克隆抗体发生特异性结合。结论设计的Hp尿素酶多表位疫苗CTB-UE具有合理的结构,能在E.coli中高效表达,纯化后纯度较高,且具有较强的反应原性,为进一步研究针对尿素酶A、B双亚基的Hp多表位疫苗奠定了基础。

    2015年12期 v.28 1238-1244页 [查看摘要][在线阅读][下载 1081K]
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  • 插入结核抗原基因的重组痘苗病毒对结核分枝杆菌感染恒河猴模型的免疫保护性

    朱琳;张群;唐志佼;张晶;楼觉人;

    目的重组亚牛痘病毒载体疫苗作为卡介苗的加强疫苗对结核病的免疫预防效果。方法将18只雌性中国恒河猴随机分为3组:BCG、BCG+A和BCG+AE组,每组6只,BCG+A和BCG+AE组用4×10~5 CFU的BCG经皮内初免后9周,分别用重组亚牛痘病毒MVA-Ag85a(A)或MVA-Ag85a-ESAT6(AE),按1×10~9 PFU/只的剂量通过皮内加强免疫,BCG组仅用BCG免疫,另设未免疫组(Non-V组):3只雄性中国恒河猴。加强免疫后9周,用结核分枝杆菌H37Rv株通过纤维支气管镜感染所有实验猴右肺下叶,攻毒剂量为41 CFU/只。经24周定期观察记录实验动物的临床表现,并采血进行血清学和免疫学检测。实验猴死亡或第24周处死后,全部尸检并进行病理学组织评分、组织细菌载量计数等检测。结果在实验终点,Non-V组仅存活1只实验猴,而免疫组3组的存活率均为100%。体外免疫试验中,经重组痘苗病毒免疫的试验组表现出抗原特异性IFNγ明显升高(P<0.05);组织病理总评分和细菌载量测定显示,BCG+A组优于BCG组,而BCG+AE与BCG组比较,未表现出优势。结论重组痘苗病毒MVA-Ag85a和MVA-Ag85a-ESAT6均能诱导抗原特异性IFNγ分泌,BCG+A组较BCG单次免疫组有更好的免疫保护趋势;BCG+AE组未表现出较BCG组更好的免疫保护效果。

    2015年12期 v.28 1245-1252页 [查看摘要][在线阅读][下载 973K]
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  • 百日咳毒素参考品的制备及鉴定

    熊小培;卢宏波;蒋强华;王丽婵;徐颖华;骆鹏;谭亚军;侯启明;杨晓明;

    目的制备百日咳毒素(pertussis toxin,PT)参考品,并进行鉴定。方法将百日咳杆菌培养上清经珍珠岩和羟基磷灰石两步吸附层析纯化后获得PT,进行SDS-PAGE、ELISA、斑点免疫印迹及血凝效价检测。结果纯化后PT纯度可达99%以上;相同抗原含量的纯化后PT和NIBSC标准品与PT单克隆抗体均为阳性反应,与FHA单克隆抗体均为阴性反应;纯化后PT和NIBSC标准品均可与PT单克隆抗体产生明显的反应斑点,与FHA单克隆抗体无反应斑点,Sigma公司PT参考品与PT单克隆抗体有明显反应斑点,与FHA单克隆抗体有微弱反应斑点;纯化后PT和Sigma公司PT参考品的血凝效价分别为1∶32和1∶64。结论成功制备了较高纯度的PT,有望作为参考品用于PT抗原含量检测、抗PT血清抗体滴度检测及抗原纯度检测。

    2015年12期 v.28 1253-1255+1260页 [查看摘要][在线阅读][下载 489K]
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基础研究

  • 妇女子宫颈感染人乳头瘤病毒高危亚型HPV52的遗传变异性分析

    张姝;许国章;倪红霞;李永东;

    目的了解宁波地区人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)高危亚型HPV52的分布和癌相关基因E6、E7区基因变异情况。方法收集宁波市社区妇女的宫颈脱落细胞样本进行HPV分型检测,并对其中HPV52亚型阳性株进行癌相关基因测序和序列分析。结果从778份样本中检出HPV52阳性24例,检出率为3.1%。获得E6、E7基因序列分别为21和19条。E6区有3个位点发生碱基颠换:G350T、G356A和A379G,其中G350T和A379G出现率最高,占95.2%;E7区有3个位点发生碱基颠换:C751T、A801G和A849C,其中C751T和A801G出现率最高,占94.7%。系统进化树分析显示,宁波地区HPV52型存在亚洲型和欧洲型。结论宁波社区人群HPV52感染率较高,多数感染者携带病毒的癌相关基因发生变异,应加强对人群HPV感染状况和病毒株变异情况的监测,及时调整宫颈癌防治策略。

    2015年12期 v.28 1256-1260页 [查看摘要][在线阅读][下载 550K]
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  • Vero细胞对狂犬病病毒aGV株的易感性

    赵淑洁;陈立新;刘岩松;朱琨莹;丁丽丽;柴博雅;李春艳;崔文广;苗丽;

    目的探讨WHO引进的Vero细胞对狂犬病病毒(rabies virus,RV)aGV株的易感性。方法将RV aGV按MOI 0.01~0.1感染Vero细胞主代和工作代,显微镜下观察细胞形态;免疫荧光法观察感染24、48、72和96 h细胞内病毒的增殖情况;连续培养15 d,每天取上清液,采用免疫荧光法检测病毒滴度。结果 RV感染Vero细胞可致细胞圆缩病变,病毒感染第7天,病变率约为20%;RV感染Vero细胞主代和工作代24 h单个细胞内可见特异性荧光灶,48 h 20%~30%细胞内可见荧光灶,72 h 60%~80%细胞内可见荧光灶,96 h 90%~100%细胞内可见荧光灶;病毒感染后2~8 d,上清液中检测到的RV滴度均在103~108 FFU/ml之间波动,均为第8天达到高峰,达5.0×108FFU/ml以上。结论 WHO引进的Vero细胞对RV aGV株有较强的易感性,可应用于狂犬病疫苗的规模化生产。

    2015年12期 v.28 1261-1264页 [查看摘要][在线阅读][下载 586K]
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  • MF59佐剂对肠道病毒71型灭活疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响

    张雪梅;吴忠香;徐婧雯;常亚军;邓新强;李宁;徐小宁;董少忠;

    目的探讨MF59佐剂对肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将ICR小鼠随机分成10组:MF59佐剂+不同含量EV71灭活抗原(50 EU、100 EU)组、Al(OH)3佐剂0.5 mg+不同含量EV71灭活抗原(50 EU、100 EU)组和PBS阴性对照组,每组10只,分别经小鼠后肢肌肉和腹腔注射,200μl/只,共免疫2次,间隔4周(0、28 d)。分别于初免和加强免疫后28 d,采集小鼠尾静脉血,分离血清,采用微量中和试验法检测小鼠血清抗体水平。结果除阴性对照组外,各组小鼠血清抗体阳转率及中和抗体GMT值均随免疫剂量和免疫时间的延长呈升高趋势。初免后28 d,抗原含量为50 EU(低剂量)和100 EU(高剂量)各组中和抗体GMT均较低,组间差异均无统计学意义(P>0.05)。加强免疫后28 d,低剂量各组小鼠血清中和抗体GMT与初免比较均略有升高(P>0.05);高剂量各组小鼠血清中和抗体GMT与初免比较均明显升高,其中MF59佐剂肌肉注射组血清中和抗体GMT值最高(274.40),显著高于铝佐剂肌肉注射组(P<0.05)。结论 MF59佐剂可显著增强EV71灭活疫苗诱导小鼠的体液免疫应答。

    2015年12期 v.28 1265-1268页 [查看摘要][在线阅读][下载 490K]
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  • 科尔沁牛乳腺炎临床分离无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a辅助蛋白2基因的克隆及序列分析

    锡林高娃;杜长智;吴金花;于辰龙;布日额;

    目的克隆内蒙古东部地区科尔沁牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a辅助蛋白2(ancillary protein 2,AP2)基因片段,并进行序列分析。方法根据Gen Bank中登录的牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a AP2基因序列,使用生物信息学软件Primer 5.0设计1对特异性引物,以内蒙古东部地区乳源性无乳链球菌临床菌株总DNA为模板,扩增AP2基因片段,与p MD18-T Vector连接,转化至感受态E.coli JM109中,提取质粒,进行PCR及单、双酶切鉴定;将质粒p MD18-T-AP2转化感受态E.coli JM109后,利用DNAStar分析测序结果,并对其推导的氨基酸序列进行抗原可及性分析,Prot Scale在线程序分析其疏(亲)水性。结果质粒p MD18-T-AP2经PCR及单、双酶切鉴定,证明构建正确;扩增的AP2基因序列长度为699 bp,编码233个氨基酸残基,与Gen Bank中登录的无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a AP2基因核苷酸序列相似性达99%,有3个碱基出现变异(402:C→A;563:C→T;467:A→T),氨基酸序列有两处出现变异,分别为178氨基酸(V→A)和216氨基酸(E→V);该序列二级结构α螺旋分布C-末端较多,β折叠较丰富,分布较均匀,无规则卷曲分布在两端,亲水性指数相对较高,抗原性较好。结论成功克隆出内蒙古东部地区科尔沁牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a AP2基因,为进一步研究AP2基因编码蛋白的抗原性奠定了基础。

    2015年12期 v.28 1269-1273页 [查看摘要][在线阅读][下载 1303K]
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  • 卡介苗诱导人外周血单个核细胞Th1活化

    周宏;李欣;刘斌;王祥谷;张东;

    目的探讨卡介苗(BCG)对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)Th1活化的调节作用。方法经密度梯度离心法制备PBMCs悬液,用BCG进行体外刺激。WST1法测定BCG对PBMCs增殖能力的影响;ELISA法检测BCG对PBMCs分泌干扰素γ(interferonγ,IFNγ)及IL-4水平的影响;流式细胞术检测BCG对PBMCs Th1活化的影响。结果经BCG体外刺激后,PBMCs的增殖能力、IFNγ的分泌水平及CD4+IFNγ+细胞比例均显著增加(P<0.05),IL-4的分泌水平显著下降(P<0.05)。结论 BCG可显著诱导PBMCs发生Th1活化,为深入研究BCG的抗肿瘤作用机制奠定了基础。

    2015年12期 v.28 1274-1276页 [查看摘要][在线阅读][下载 537K]
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消息

  • 欢迎订阅《中国生物制品学杂志》

    <正>《中国生物制品学杂志》于1988年创刊,由中华人民共和国卫生部主管,系中华预防医学会系列杂志之一,为报道我国生物制品研究开发重大成果和最新进展的国内唯一生物制品专业学术期刊。主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床学等方面的研究、生产、使用和质控等学术文章。主要设有疫苗研究、基础研究、治疗性制剂、诊断制剂、临床研究、技术方法、研究简报、综述、述评、专题报道、会议快讯、消息等栏目。

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  • 《中国生物制品学杂志》关于启用CNKI腾云期刊协同采编系统的启事

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  • 征稿

    <正>《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管,中华预防医学会和长春生物制品研究所有限责任公司主办,是中华预防医学会系列杂志之一,月刊。本刊主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床医学等方面的研究、生产、使用和质控等学术文章。在选择来稿时注

    2015年12期 v.28 1310页 [查看摘要][在线阅读][下载 375K]
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  • 欢迎关注《中国生物制品学杂志》微信公众号

    <正>《中国生物制品学杂志》微信公众号现已上线,欢迎各位专家、作者、读者以及同仁莅临交流指导。

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  • 第六届疫苗中国发展国际峰会将在上海召开

    <正>第六届疫苗中国发展国际峰会将于2016年4月12~13日在上海隆重召开。作为2016年中国最大的疫苗行业国际年会,这次会议几乎涵盖了整个疫苗产业链上的所有行业。会上将通过人用疫苗及兽用疫苗两个论坛,分别探讨中国及新兴市场疫苗行业的最新发展趋势、研发战略、合作机遇、生产技术等热点话题,同时将与政府权威机构共同探讨国家免疫规划、疫苗审批注册等方面的最新政策动向,旨在通过本

    2015年12期 v.28 1343页 [查看摘要][在线阅读][下载 404K]
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治疗性制剂

  • 小分子阳离子六肽免疫调节活性及其对小鼠感染模型的治疗作用

    沈克飞;郑华;徐登峰;张邑帆;王孝友;

    目的分析小分子阳离子六肽(short cationic hexapeptides,SP6)免疫调节活性及其对小鼠感染模型的治疗作用。方法经小鼠腹腔分别注射不同剂量SP6(25、5、1μg/只),并设生理盐水对照组,于注射后0.5、1、2、4和7 h对腹腔细胞进行细胞计数;于注射SP6后1 h,经小鼠腹腔给予10%墨汁,0.2 ml/只,收集注射墨汁后0.5、1、2、4和7 h小鼠腹腔细胞,观察吞噬细胞的吞噬作用;于注射SP6后1 h,采血并分离血清,ELISA法检测趋化因子和细胞因子水平。将大肠埃希菌K88、葡萄球菌及巴氏杆菌,分别经小鼠