中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 重组耻垢分枝杆菌NY-ESO-1疫苗的制备及其免疫原性分析

    陈丹丹;高丹;瞿爱东;徐帆洪;

    目的制备重组耻垢分枝杆菌(recombinant Mycobacterium smegmatis,rM.smegmatis)NY-ESO-1疫苗,并分析其在小鼠体内的免疫原性。方法从人睾丸m RNA中扩增NY-ESO-1基因,克隆至携带β半乳糖苷酶信号肽的表达载体,转化M.smegmatis,构建r M.smegmatis。以rM.smegmatis经腹腔免疫小鼠,200μl/只,于第12周用NY-ESO-1加强免疫1次,第3、6、9、12、13周经尾静脉采血1次,分离血清,并于第13周取小鼠脾脏,制备脾淋巴细胞,检测小鼠血清中NY-ESO-1抗体及其亚型、CD4~+、CD8~+T细胞比例、脾细胞增殖能力、IFNγ及IL-2的分泌水平及体外CTL杀伤能力。结果加强免疫后,与NY-ESO-1组比较,rM.smegmatis-p LA71NY组小鼠血清抗体水平差异无统计学意义(P>0.05),CD4~~+及CD8~+T细胞比例、IFNγ及IL-2的分泌水平及体外CTL杀伤能力均显著升高(P<0.05),脾细胞的增殖能力显著下降(P<0.05)。结论 rM.smegmatis NY-ESO-1疫苗在小鼠体内具有良好的免疫原性,为该疫苗用于肿瘤的免疫治疗奠定了基础。

    2015年12期 v.28 1233-1237+1244页 [查看摘要][在线阅读][下载 667K]
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  • 幽门螺旋杆菌尿素酶多表位疫苗CTB-UE的生物信息学分析及其表达

    刘昆梅;秦玉红;奚涛;郭乐;

    目的通过生物信息学软件评价幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶多表位疫苗CTB-UE的抗原结构,并在E.coli中表达、纯化融合蛋白CTB-UE。方法应用生物信息学软件DNAstar、Geno3D、MOE分析Hp尿素酶多表位疫苗CTB-UE的二级结构和三级结构;将人工合成的尿素酶多表位肽基因UE插入含CTB基因的重组质粒p ETC中,构建重组表达质粒p ETCUE,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,通过Ni-NTP镍离子亲和层析纯化重组蛋白CTB-UE,并进行Western blot分析。结果生物信息学软件分析显示,Hp尿素酶多表位疫苗CTB-UE具有合理的结构;重组表达质粒p ETCUE经双酶切和测序鉴定证实,融合基因CTB-UE与设计序列完全一致;表达的融合蛋白CTB-UE相对分子质量约为33 000,主要以包涵体形式表达,表达量占全菌蛋白的22.3%;纯化的融合蛋白CTB-UE纯度达95.6%,可与兔抗Hp多克隆抗体发生特异性结合。结论设计的Hp尿素酶多表位疫苗CTB-UE具有合理的结构,能在E.coli中高效表达,纯化后纯度较高,且具有较强的反应原性,为进一步研究针对尿素酶A、B双亚基的Hp多表位疫苗奠定了基础。

    2015年12期 v.28 1238-1244页 [查看摘要][在线阅读][下载 1081K]
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  • 插入结核抗原基因的重组痘苗病毒对结核分枝杆菌感染恒河猴模型的免疫保护性

    朱琳;张群;唐志佼;张晶;楼觉人;

    目的重组亚牛痘病毒载体疫苗作为卡介苗的加强疫苗对结核病的免疫预防效果。方法将18只雌性中国恒河猴随机分为3组:BCG、BCG+A和BCG+AE组,每组6只,BCG+A和BCG+AE组用4×10~5 CFU的BCG经皮内初免后9周,分别用重组亚牛痘病毒MVA-Ag85a(A)或MVA-Ag85a-ESAT6(AE),按1×10~9 PFU/只的剂量通过皮内加强免疫,BCG组仅用BCG免疫,另设未免疫组(Non-V组):3只雄性中国恒河猴。加强免疫后9周,用结核分枝杆菌H37Rv株通过纤维支气管镜感染所有实验猴右肺下叶,攻毒剂量为41 CFU/只。经24周定期观察记录实验动物的临床表现,并采血进行血清学和免疫学检测。实验猴死亡或第24周处死后,全部尸检并进行病理学组织评分、组织细菌载量计数等检测。结果在实验终点,Non-V组仅存活1只实验猴,而免疫组3组的存活率均为100%。体外免疫试验中,经重组痘苗病毒免疫的试验组表现出抗原特异性IFNγ明显升高(P<0.05);组织病理总评分和细菌载量测定显示,BCG+A组优于BCG组,而BCG+AE与BCG组比较,未表现出优势。结论重组痘苗病毒MVA-Ag85a和MVA-Ag85a-ESAT6均能诱导抗原特异性IFNγ分泌,BCG+A组较BCG单次免疫组有更好的免疫保护趋势;BCG+AE组未表现出较BCG组更好的免疫保护效果。

    2015年12期 v.28 1245-1252页 [查看摘要][在线阅读][下载 973K]
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  • 百日咳毒素参考品的制备及鉴定

    熊小培;卢宏波;蒋强华;王丽婵;徐颖华;骆鹏;谭亚军;侯启明;杨晓明;

    目的制备百日咳毒素(pertussis toxin,PT)参考品,并进行鉴定。方法将百日咳杆菌培养上清经珍珠岩和羟基磷灰石两步吸附层析纯化后获得PT,进行SDS-PAGE、ELISA、斑点免疫印迹及血凝效价检测。结果纯化后PT纯度可达99%以上;相同抗原含量的纯化后PT和NIBSC标准品与PT单克隆抗体均为阳性反应,与FHA单克隆抗体均为阴性反应;纯化后PT和NIBSC标准品均可与PT单克隆抗体产生明显的反应斑点,与FHA单克隆抗体无反应斑点,Sigma公司PT参考品与PT单克隆抗体有明显反应斑点,与FHA单克隆抗体有微弱反应斑点;纯化后PT和Sigma公司PT参考品的血凝效价分别为1∶32和1∶64。结论成功制备了较高纯度的PT,有望作为参考品用于PT抗原含量检测、抗PT血清抗体滴度检测及抗原纯度检测。

    2015年12期 v.28 1253-1255+1260页 [查看摘要][在线阅读][下载 489K]
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基础研究

  • 妇女子宫颈感染人乳头瘤病毒高危亚型HPV52的遗传变异性分析

    张姝;许国章;倪红霞;李永东;

    目的了解宁波地区人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)高危亚型HPV52的分布和癌相关基因E6、E7区基因变异情况。方法收集宁波市社区妇女的宫颈脱落细胞样本进行HPV分型检测,并对其中HPV52亚型阳性株进行癌相关基因测序和序列分析。结果从778份样本中检出HPV52阳性24例,检出率为3.1%。获得E6、E7基因序列分别为21和19条。E6区有3个位点发生碱基颠换:G350T、G356A和A379G,其中G350T和A379G出现率最高,占95.2%;E7区有3个位点发生碱基颠换:C751T、A801G和A849C,其中C751T和A801G出现率最高,占94.7%。系统进化树分析显示,宁波地区HPV52型存在亚洲型和欧洲型。结论宁波社区人群HPV52感染率较高,多数感染者携带病毒的癌相关基因发生变异,应加强对人群HPV感染状况和病毒株变异情况的监测,及时调整宫颈癌防治策略。

    2015年12期 v.28 1256-1260页 [查看摘要][在线阅读][下载 550K]
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  • Vero细胞对狂犬病病毒aGV株的易感性

    赵淑洁;陈立新;刘岩松;朱琨莹;丁丽丽;柴博雅;李春艳;崔文广;苗丽;

    目的探讨WHO引进的Vero细胞对狂犬病病毒(rabies virus,RV)aGV株的易感性。方法将RV aGV按MOI 0.01~0.1感染Vero细胞主代和工作代,显微镜下观察细胞形态;免疫荧光法观察感染24、48、72和96 h细胞内病毒的增殖情况;连续培养15 d,每天取上清液,采用免疫荧光法检测病毒滴度。结果 RV感染Vero细胞可致细胞圆缩病变,病毒感染第7天,病变率约为20%;RV感染Vero细胞主代和工作代24 h单个细胞内可见特异性荧光灶,48 h 20%~30%细胞内可见荧光灶,72 h 60%~80%细胞内可见荧光灶,96 h 90%~100%细胞内可见荧光灶;病毒感染后2~8 d,上清液中检测到的RV滴度均在103~108 FFU/ml之间波动,均为第8天达到高峰,达5.0×108FFU/ml以上。结论 WHO引进的Vero细胞对RV aGV株有较强的易感性,可应用于狂犬病疫苗的规模化生产。

    2015年12期 v.28 1261-1264页 [查看摘要][在线阅读][下载 586K]
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消息

  • 欢迎订阅《中国生物制品学杂志》

    <正>《中国生物制品学杂志》于1988年创刊,由中华人民共和国卫生部主管,系中华预防医学会系列杂志之一,为报道我国生物制品研究开发重大成果和最新进展的国内唯一生物制品专业学术期刊。主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床学等方面的研究、生产、使用和质控等学术文章。主要设有疫苗研究、基础研究、治疗性制剂、诊断制剂、临床研究、技术方法、研究简报、综述、述评、专题报道、会议快讯、消息等栏目。

    2015年12期 v.28 1264页 [查看摘要][在线阅读][下载 281K]
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基础研究

  • MF59佐剂对肠道病毒71型灭活疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响

    张雪梅;吴忠香;徐婧雯;常亚军;邓新强;李宁;徐小宁;董少忠;

    目的探讨MF59佐剂对肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将ICR小鼠随机分成10组:MF59佐剂+不同含量EV71灭活抗原(50 EU、100 EU)组、Al(OH)3佐剂0.5 mg+不同含量EV71灭活抗原(50 EU、100 EU)组和PBS阴性对照组,每组10只,分别经小鼠后肢肌肉和腹腔注射,200μl/只,共免疫2次,间隔4周(0、28 d)。分别于初免和加强免疫后28 d,采集小鼠尾静脉血,分离血清,采用微量中和试验法检测小鼠血清抗体水平。结果除阴性对照组外,各组小鼠血清抗体阳转率及中和抗体GMT值均随免疫剂量和免疫时间的延长呈升高趋势。初免后28 d,抗原含量为50 EU(低剂量)和100 EU(高剂量)各组中和抗体GMT均较低,组间差异均无统计学意义(P>0.05)。加强免疫后28 d,低剂量各组小鼠血清中和抗体GMT与初免比较均略有升高(P>0.05);高剂量各组小鼠血清中和抗体GMT与初免比较均明显升高,其中MF59佐剂肌肉注射组血清中和抗体GMT值最高(274.40),显著高于铝佐剂肌肉注射组(P<0.05)。结论 MF59佐剂可显著增强EV71灭活疫苗诱导小鼠的体液免疫应答。

    2015年12期 v.28 1265-1268页 [查看摘要][在线阅读][下载 490K]
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消息

  • 欢迎登录《中国生物制品学杂志》网站

    <正>尊敬的专家、读者、作者及各位同仁:您们好!自2007年8月起,《中国生物制品学杂志》网站(www.zgswj.com.cn,中文域名:中国生物制品学杂志.com)正式运行。本站网页有杂志简介、在线投稿、稿件查询、过期目录、广告合作等您所需要的信息,欢迎登录。

    2015年12期 v.28 1268页 [查看摘要][在线阅读][下载 331K]
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基础研究

  • 科尔沁牛乳腺炎临床分离无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a辅助蛋白2基因的克隆及序列分析

    锡林高娃;杜长智;吴金花;于辰龙;布日额;

    目的克隆内蒙古东部地区科尔沁牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a辅助蛋白2(ancillary protein 2,AP2)基因片段,并进行序列分析。方法根据Gen Bank中登录的牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a AP2基因序列,使用生物信息学软件Primer 5.0设计1对特异性引物,以内蒙古东部地区乳源性无乳链球菌临床菌株总DNA为模板,扩增AP2基因片段,与p MD18-T Vector连接,转化至感受态E.coli JM109中,提取质粒,进行PCR及单、双酶切鉴定;将质粒p MD18-T-AP2转化感受态E.coli JM109后,利用DNAStar分析测序结果,并对其推导的氨基酸序列进行抗原可及性分析,Prot Scale在线程序分析其疏(亲)水性。结果质粒p MD18-T-AP2经PCR及单、双酶切鉴定,证明构建正确;扩增的AP2基因序列长度为699 bp,编码233个氨基酸残基,与Gen Bank中登录的无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a AP2基因核苷酸序列相似性达99%,有3个碱基出现变异(402:C→A;563:C→T;467:A→T),氨基酸序列有两处出现变异,分别为178氨基酸(V→A)和216氨基酸(E→V);该序列二级结构α螺旋分布C-末端较多,β折叠较丰富,分布较均匀,无规则卷曲分布在两端,亲水性指数相对较高,抗原性较好。结论成功克隆出内蒙古东部地区科尔沁牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a AP2基因,为进一步研究AP2基因编码蛋白的抗原性奠定了基础。

    2015年12期 v.28 1269-1273页 [查看摘要][在线阅读][下载 1303K]
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  • 卡介苗诱导人外周血单个核细胞Th1活化

    周宏;李欣;刘斌;王祥谷;张东;

    目的探讨卡介苗(BCG)对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)Th1活化的调节作用。方法经密度梯度离心法制备PBMCs悬液,用BCG进行体外刺激。WST1法测定BCG对PBMCs增殖能力的影响;ELISA法检测BCG对PBMCs分泌干扰素γ(interferonγ,IFNγ)及IL-4水平的影响;流式细胞术检测BCG对PBMCs Th1活化的影响。结果经BCG体外刺激后,PBMCs的增殖能力、IFNγ的分泌水平及CD4+IFNγ+细胞比例均显著增加(P<0.05),IL-4的分泌水平显著下降(P<0.05)。结论 BCG可显著诱导PBMCs发生Th1活化,为深入研究BCG的抗肿瘤作用机制奠定了基础。

    2015年12期 v.28 1274-1276页 [查看摘要][在线阅读][下载 537K]
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治疗性制剂

  • 小分子阳离子六肽免疫调节活性及其对小鼠感染模型的治疗作用

    沈克飞;郑华;徐登峰;张邑帆;王孝友;

    目的分析小分子阳离子六肽(short cationic hexapeptides,SP6)免疫调节活性及其对小鼠感染模型的治疗作用。方法经小鼠腹腔分别注射不同剂量SP6(25、5、1μg/只),并设生理盐水对照组,于注射后0.5、1、2、4和7 h对腹腔细胞进行细胞计数;于注射SP6后1 h,经小鼠腹腔给予10%墨汁,0.2 ml/只,收集注射墨汁后0.5、1、2、4和7 h小鼠腹腔细胞,观察吞噬细胞的吞噬作用;于注射SP6后1 h,采血并分离血清,ELISA法检测趋化因子和细胞因子水平。将大肠埃希菌K88、葡萄球菌及巴氏杆菌,分别经小鼠腹腔注射,0.2 ml/只,3 h后,经小鼠皮下注射SP6溶液(25、5、1μg/只),设生理盐水对照组,观察并记录小鼠接种后精神状态及死亡情况。结果 SP6各剂量组小鼠腹腔细胞数量一直高于对照组,直至注射后7 h。SP6各剂量组小鼠腹腔吞噬细胞在0.5 h前开始活化,0.5 h时观察到吞噬细胞包围、吞噬墨汁颗粒,较对照组吞噬细胞活化时间缩短,吞噬能力增强。SP6注射后1 h,中、低剂量组小鼠血清中鼠巨噬细胞来源趋化因子(macrophage derived chemokine,MDC)、淋巴细胞趋化因子(lymphocyte chemokine,LC)、嗜酸性粒细胞趋化因子(eosinophil chemotactic factor,ECF)、趋化因子(chemotactic factor,CF)、IL-1β、IL-4和TNF-α水平与对照组相当或高于对照组(P>0.05);高剂量组小鼠血清中MDC、LC、ECF、CF、IL-1β、IL-4和TNF-α水平均高于对照组,其中LC、IL-1β、TNF-α水平差异有统计学意义(P<0.05)。除巴氏杆菌外,经SP6治疗,高、中、低剂量组小鼠存活数均高于对照组。结论 SP6可调节小鼠免疫反应,对小鼠感染模型有治疗作用。

    2015年12期 v.28 1277-1281页 [查看摘要][在线阅读][下载 659K]
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  • 新型静注人免疫球蛋白的制备及鉴定

    鲁涛;牟蕾;刘波;王玉;

    目的制备新型静注人免疫球蛋白(IVIG),并对其质量进行鉴定。方法采用超滤浓缩法制备了8批10%IVIG制品,以甘氨酸代替糖类作为稳定剂的主要配方,并优化其浓度(12~18 g/L)。检测10%IVIG制品的总体质量、Ig G亚类分布、Fc活性及稳定性。结果最佳甘氨酸浓度为15 g/L。10%IVIG制品的总体质量均合格,Ig G亚类分布及Fc活性均与5%IVIG制品相似,且该制品在25℃存放6个月和2~8℃存放6年后的总体质量均合格。结论制备的10%IVIG质量优良,且具有良好的稳定性。

    2015年12期 v.28 1282-1284+1293页 [查看摘要][在线阅读][下载 452K]
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诊断制剂

  • HBsAg检测试剂的定量性能分析

    肖健;李克坚;喻剑虹;周诚;蓝海云;辜文洁;

    目的分析7种HBs Ag定量检测试剂的检测线性范围、定量准确性及对3种HBs Ag亚型的最低检出量性能。方法使用世界卫生组织(World Health Organization,WHO)提供的HBs Ag标准品,应用平行线终点稀释方法进行定量,标定高浓度的HBs Ag样品,评价试剂的有效检测范围;以浓度值在5.9~100 IU/ml范围内的样品,评价试剂的定量准确性;检测3种HBs Ag亚型样品,评价试剂对3种亚型(adr、adw、ay)的最低检出量。结果 S试剂检测浓度为1 600 IU/ml的样品时,其相对偏差为-24%,并且随着样品浓度的升高相对偏差增加;K试剂检测浓度大于3 200 IU/ml的样品时,其相对偏差大于-98%;其余5种试剂在线性范围内的相对偏差均小于20%。6种试剂检测浓度为5.9~100 IU/ml的样品时,平均相对偏差的绝对值均小于15%,其中,K试剂为39%。7种试剂对adr、adw最低检出量均达到0.1 IU/ml,试剂间两两比较差异无统计学意义(P>0.05);但L、F、X、K 4种试剂对ay亚型最低检出量高于0.1 IU/ml,对3种亚型最低检出量间的差异有统计学意义(P<0.01)。结论 S试剂定量检测浓度值上限低于标示值2 500 IU/ml;K试剂检测高浓度样品时,存在HOOK效应,其他6种试剂定量测定相对偏差小于20%;4种试剂对ay亚型检测定量值偏低。

    2015年12期 v.28 1285-1288页 [查看摘要][在线阅读][下载 458K]
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临床研究

  • 上海市虹口区青少年人群百日咳全抗体水平监测

    钱晓华;汤素文;李淑华;张莉;张捷;赵根明;

    目的分析上海市虹口区青少年人群中百日咳全抗体水平,为人群百日咳免疫策略提供依据。方法 2010年在上海市虹口区内随机选择6~10岁、11~14岁及15~19岁的健康青少年225人,对青少年百日咳疫苗免疫史和持续≥14 d咳嗽史进行调查。采集静脉血样,分离血清,用ELISA法检测百日咳全抗体Ig G。结果实际纳入研究的对象共214人,百日咳疫苗全程接种率为93.93%,持续2周以上咳嗽患病率为15.42%;青少年人群百日咳全抗体GMT水平为21.88 U/ml,全抗体阳性(Ig G≥50 U/ml)率为26.64%,高抗体水平(Ig G≥100 U/ml)阳性率为15.42%;各年龄组百日咳全抗体GMT(F=19.90)、抗体阳性率(χ2=18.19)和高抗体水平阳性率(χ2=9.73)差异均有统计学意义(P<0.01),随年龄增长均呈显著上升趋势(P<0.01);1年内有持续2周以上咳嗽史人群百日咳全抗体GMT(t=2.505)、抗体阳性率(χ2=7.071)和高抗体水平阳性率(χ2=6.626)均明显高于无2周以上咳嗽史人群(P均<0.05)。结论虹口区青少年人群中存在百日咳感染病例被漏诊或未发现;现行百日咳疫苗免疫程序对青少年不具有持久的保护作用。为虹口区青少年人群的百日咳疫苗免疫策略提供科学依据,有必要进一步开展医院/社区百日咳病例的前瞻性主动监测。

    2015年12期 v.28 1289-1293页 [查看摘要][在线阅读][下载 508K]
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  • 2014年供血浆人群及血液制品戊型肝炎病毒感染情况分析

    叶小书;付道兴;段艳;张双林;李曦;张燕;

    目的分析2014年供血浆人群及血液制品的戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)HEV感染情况。方法采用ELISA法对不同省份(四川省、山东省、山西省)供血浆人群血浆样品进行HEV Ag、HEV Ig M和HEV Ig G的检测,并对HEV Ag阳性供血浆者作追踪分析;对合并血浆及血液制品成品进行HEV Ag检测。结果 36 340份供血浆者样品中有HEV Ag阳性26份(0.07%);3 780份血浆样品中有HEV Ig G阳性1 519份(40.19%),HEV Ig M阳性34份(0.90%)。115批合并血浆样品及113批血液制品成品中的HEV Ag检测结果均为阴性。结论调查的供血浆人群HEV阳性率存在地区差异,血液制品的安全性较高。

    2015年12期 v.28 1294-1296页 [查看摘要][在线阅读][下载 473K]
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技术方法

  • 酸碱“一步法”荧光PCR快速检测乙型肝炎病毒核酸

    程鹏飞;刘绪;余敏;贾振华;代俊;周梦舟;张毅;唐景峰;

    目的建立酸碱"一步法"荧光PCR快速检测乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)核酸。方法对建立的酸碱"一步法"荧光PCR中的核酸释放剂组分及其浓度、释放时间,PCR缓冲液的组分、p H值及防污染体系进行优化。验证该方法的灵敏度及线性范围,与同类试剂盒进行比较,并应用于其他病原体的检测。结果最佳核酸释放剂为:0.4 mol/L KOH,0.3%十二烷基硫酸锂(lithium lauryl sulphate,LLS),0.3%Triton X-100,0.02%Foam Ban和0.5%N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC);最佳PCR缓冲液组分如下:0.5 mol/L Tris-醋酸(p H 7.4),1%甘油,2.5%海藻糖,1 mol/L KCl,0.5 mol/L Mg Cl2,10 mmol/L EDTA、0.2%BSA和0.01%NaN3。建立的方法的最低检测量达1×10~2copies/ml,在1×10~2~1×10~9 copies/ml范围内参考品浓度与Ct值呈良好线性关系,回归方程为:y=-3.36 x+39.469 9,R2=0.999 9。该方法与同类试剂盒的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),不能用于检测解脲脲原体。结论酸碱"一步法"荧光PCR可用于HBV核酸的快速检测,该方法操作简便、快速,抗污染及干扰能力强,具有较高的临床应用价值。

    2015年12期 v.28 1297-1304页 [查看摘要][在线阅读][下载 1318K]
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消息

技术方法

  • STAGO全自动血凝仪在人凝血因子活性测定上的应用

    刘朝阳;方曼莉;徐樱妹;郁佳俊;马雷钧;程鹏飞;

    目的探讨STAGO全自动血凝仪在人凝血因子活性测定上的应用。方法对STAGO全自动血凝仪按照GMP要求进行安装确认(installation qualification,IQ):实施信息核查并记录;运行确认(operational qualification,OQ):准确度、精密度(批内精密度及批间精密度)、干扰试验及参考范围的验证确认;性能确认(performance qualification,PQ):按STAGO凝血分析仪相关SOP检测6份人凝血因子Ⅷ样品活性,并计算6份样品检测值间的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)。结果已核实STAGO全自动血凝仪基本信息,安装环境及安装过程均符合要求,并已进行记录。厂家提供的正常及病理值质控血清测定3次的均值均在厂家提供的质控范围内;批内及批间精密性的变异系数(coefficient of variation,CV)均<10%;随机组与对照组相比平均偏差<10%;20份体检样本的均值、标准偏差(standard deviation,SD)及结果在正常参考范围的例数与总标本数的比例(R值)>0.9。6份人凝血因子Ⅷ样品检测值的RSD值为1.95%。结论经全面的设备确认,STAGO全自动血凝仪符合人凝血因子活性测定的要求。

    2015年12期 v.28 1305-1310页 [查看摘要][在线阅读][下载 520K]
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消息

  • 征稿

    <正>《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管,中华预防医学会和长春生物制品研究所有限责任公司主办,是中华预防医学会系列杂志之一,月刊。本刊主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床医学等方面的研究、生产、使用和质控等学术文章。在选择来稿时注

    2015年12期 v.28 1310页 [查看摘要][在线阅读][下载 375K]
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技术方法

  • 重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子生物学活性测定TF-1细胞/MTT比色法的优化及其验证

    许国杰;周丽红;李丹;田云蕾;于丽娟;刘英华;严永男;李利;

    目的对检测重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte macrophage colony stimulating factor,rh GM-CSF)生物学活性的TF-1细胞/MTT比色法进行优化及验证。方法以rh GM-CSF依赖细胞株TF-1为靶细胞,采用MTT比色法测定rh GM-CSF生物学活性,对比色法中裂解液种类、裂解时间、细胞浓度、MTT作用时间等进行优化,并对优化后的方法进行准确度和精密度验证。结果优化后的TF-1细胞/MTT比色法:将供试品及标准品稀释至18 IU/ml,做2倍系列稀释,共8个稀释度,50μl/孔;加入6×10~5个/ml TF-1细胞悬液,50μl/孔,37℃培养48~52 h;加入MTT溶液,20μl/孔,37℃培养5 h;加入15%SDS裂解液,150μl/孔,裂解过夜,检测A570值。3种不同浓度的rh GM-CSF标准品活性测定结果回收率为104%;rh GM-CSF标准品6次检测活性平均值为18.6 IU/ml,变异系数为5.37%;rh GM-CSF标准品3 d活性检测结果的平均变异系数为5.18%。结论采用优化后MTT比色法检测rh GM-CSF生物学活性,准确度和精密度均较高,可应用于rh GM-CSF活性的检测。

    2015年12期 v.28 1311-1315页 [查看摘要][在线阅读][下载 976K]
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消息

技术方法

  • 反相高效液相色谱法检测重组类病毒颗粒疫苗原液中二硫苏糖醇的残留量

    张学峰;张靖;靳玉琴;陈实;唐芳;李启明;

    目的反相高效液相色谱法(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)检测重组类病毒颗粒(virus-like particles,VLPs)疫苗原液中二硫苏糖醇(DL-dithiothreitol,DTT)的残留量,并对方法进行验证及初步应用。方法按设定的色谱条件对检测重组VLPs疫苗原液中DTT含量的RP-HPLC法进行专属性、精密性、准确性验证,确定方法的最佳线性范围及最低检测限,用该方法检测3批重组HPV单价疫苗原液中的DTT残留量。结果该方法检测DTT时,不受溶液中溶剂和蛋白的干扰;线性范围为1.5~15.0μg/ml(R~2=0.997),最低检测限为1.5μg/ml;该方法检测不同浓度DTT的平均相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均<5%;重组HPV疫苗原液分别加入3、5、10μg/ml的DTT对照品溶液后,经该方法检测的回收率在80%~120%之间。3批次重组HPV单价疫苗原液中的DTT含量均小于1.5μg/ml。结论本实验的RP-HPLC法专属性、精密性良好,且准确可靠,可用于重组HPV疫苗原液中DTT残留量的检测。

    2015年12期 v.28 1316-1319页 [查看摘要][在线阅读][下载 554K]
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  • 两种不同工艺制备的人凝血因子Ⅷ的比较

    余伟;牟蕾;鲁涛;李伟;王黔川;

    目的比较甘氨酸/Na Cl沉淀工艺(盐析工艺)和层析工艺制备的人凝血因子Ⅷ(FⅧ)。方法对盐析工艺和层析工艺制备的工艺过程样品和成品,采用双缩脲法检测蛋白含量,ACL7000血凝仪检测FⅧ凝固活性,并计算比活性,按《中国药典》三部(2010版)要求进行Tween-80残留量、TNBP残留量、外观、可见异物、水分、热原和异常毒性检测。结果层析工艺中以新鲜冰冻血浆为原料制备冷沉淀能较好地保证FⅧ的收率;聚乙二醇沉淀步骤能降低操作体积;层析处理能有效去除杂蛋白,使FⅧ比活至少提高25倍;S/D和80℃72 h病毒灭活处理对FⅧ质量无明显影响。两种工艺制备成品的外观、可见异物、异常毒性和热原检查均符合《中国药典》三部(2010版)相关规定,但层析工艺中FⅧ比活明显高于盐析工艺,并且对TNBP和Tween-80的去除效果更显著。结论层析工艺制备的FⅧ比活、Tween-80和TNBP残留量等关键性指标均优于甘氨酸/Na Cl沉淀工艺,该工艺更适于FⅧ的规模化生产。

    2015年12期 v.28 1320-1323页 [查看摘要][在线阅读][下载 491K]
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  • 应用篮式生物反应器制备森林脑炎灭活疫苗(Vero细胞)

    刘岩松;王华;孙宏亮;安继新;纪权;邢坤鹏;张朔;刘梦妮;邹勇;

    目的探讨篮式生物反应器制备森林脑炎灭活疫苗(Vero细胞)。方法应用14 L篮式生物反应器,以Vero细胞作为森林脑炎病毒增殖的细胞基质,采用片状载体对Vero细胞进行高密度培养,探讨不同细胞接种浓度对生物反应器内细胞密度及病毒产量的影响。连续收获的森林脑炎病毒液经超滤浓缩、1∶4 000(v/v)β-丙内酯灭活、柱层析纯化后,获得疫苗原液,按照《中国药典》三部(2010版)进行相关检测。结果用(5~7.5)×105个/ml细胞浓度接种Vero细胞培养森林脑炎病毒可连续收获30 d以上,平均病毒滴度为8.4 lg LD50/ml;1∶4 000(v/v)β-丙内酯灭活24 h可完全灭活病毒,3批病毒浓缩液灭活验证试验均未检出残余活病毒;柱层析纯化后杂蛋白去除率可达89.56%;疫苗原液经无菌检查合格,其他各项质量指标均符合《中国药典》三部(2010版)规定。结论应用篮式生物反应器培养Vero细胞制备了合格的森林脑炎灭活疫苗,该工艺适用于森林脑炎灭活疫苗的规模化生产。

    2015年12期 v.28 1324-1326+1331页 [查看摘要][在线阅读][下载 548K]
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  • 羟基磷灰石分离纯化抗TNF-α单克隆抗体

    杨辉;马旭通;孙文正;杨彬;王雅秋;林小鹊;

    目的用填料为羟基磷灰石的层析柱纯化抗TNF-α单克隆抗体。方法经protein A为填料的层析柱纯化抗TNF-α单克隆抗体后,通过Do E实验设计,对填料为羟基磷灰石的层析柱的洗脱流速、p H值及盐浓度进行优化,确定最佳洗脱条件后,进行抗TNF-α单克隆抗体的纯化,纯化产物经HPLC及毛细管电泳法检测其浓度、多聚体含量及纯度。结果抗TNF-α单克隆抗体经protein A层析纯化后,回收率达96.1%,纯度为96.0%,多聚体含量下降至1.9%。通过Do E优化,筛选出最佳条件范围为:流速1~3 ml/min,0.25~0.30 mol/L Na Cl,p H 7.0~7.3,选定1 ml/min流速、0.25 mol/L Na Cl、p H 7.0、作为洗脱条件进行纯化,回收率为93.1%,纯度为97.3%,多聚体含量为0,优于参比制剂。结论将羟基磷灰石用于抗TNF-α单克隆抗体的中度纯化,获得符合参比制剂质量的产品。

    2015年12期 v.28 1327-1331页 [查看摘要][在线阅读][下载 732K]
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  • 生产场地变更后双价肾综合征出血热灭活疫苗的动物安全性

    杨红育;赵红丽;戴龙;刘智慧;张雪楠;刘辉;赵亚力;孙宏亮;宋宗明;

    目的观察生产场地变更前、后双价肾综合征出血热灭活疫苗(简称出血热疫苗)的肌肉刺激性,评价该疫苗的动物安全性。方法采用同体左、右侧自身对比法,经新西兰白兔左、右侧大腿股四头肌肌内分别注射氢氧化铝佐剂和出血热疫苗(生产场地变更前、后各3批),均1.0 ml/只,给药1次。于注射后第3天进行大体剖检及病理组织学检查。结果新西兰白兔的出血热疫苗与氢氧化铝佐剂注射侧肌肉刺激性损伤相似,生产场地变更前、后的局部肌肉组织的病理变化无明显差异。结论生产场地变更后的出血热疫苗具有可靠的动物安全性。

    2015年12期 v.28 1332-1333+1338页 [查看摘要][在线阅读][下载 553K]
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  • 总有机碳检测法在血液制品清洁验证中的应用

    方曼莉;梁芳;郁佳俊;马雷钧;金于兰;程鹏飞;

    目的利用总有机碳(total organic carbon,TOC)分析仪建立血液制品清洁验证分析方法。方法制备碳浓度为5、10、15 ppm的牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)溶液,检测TOC值,并计算回收率,验证方法的准确性;制备6份碳浓度为10 ppm的BSA溶液,检测TOC值,计算相对标准偏差(relative standard deviation,RSD),验证方法的重复性;制备碳浓度分别为0、1、2.5、5、10、15和20 ppm的BSA溶液,检测TOC值,验证方法的线性;测定10次TOC检测用水的TOC值,计算SD,确定方法的检测限(limit of detection,LOD)和定量限(limit of quantitation,LOQ);制备碳浓度分别为0、1、2.5、5、10、15和20 ppm的BSA溶液,先以从低到高浓度,再以从高到低浓度顺序分析,检测TOC值,分别计算回归曲线决定系数,确定残留效应;分别在不锈钢和玻璃材质上擦拭取样,检测TOC值,计算回收率及RSD。对清洁后的血液制品生产用设备和器具擦拭取样,检测TOC值,确认清洁效果。结果 3个碳浓度的BSA溶液TOC值回收率均在90%~110%之间,RSD值均小于5%;6份BSA溶液的TOC值的SD为0.202 ppm,RSD为2.13%;碳浓度在0~20 ppm范围内的BSA溶液的加样TOC值与测得TOC值呈良好的线性关系,R2=0.999 5;检测用水的10次TOC检测值的LOD和LOQ值均明显低于10 ppm;两条回归曲线的决定系数的RSD为0.03%;不锈钢和玻璃材质擦拭取样的TOC检测值最低回收率分别为74%和77%,不同工作人员检测结果 RSD均≤20%。血液制品TOC检测擦拭法清洁验证结果均低于2μg/cm2。结论 TOC检测法具有良好的准确性、重复性、灵敏度、线性,血液制品清洁残留量均低于残留限度,达到预计的清洁效果。该方法快捷简便,适用于血液制品的擦拭法清洁验证。

    2015年12期 v.28 1334-1338页 [查看摘要][在线阅读][下载 582K]
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  • 麻疹病毒长-47纯化株(2BS细胞)毒种库的建立

    沈红杰;张宇;黄果勇;李海燕;闫磊;王玮;郑晓丽;

    目的建立以人胚肺二倍体细胞(2BS)为基质的麻疹病毒长-47纯化株毒种库。方法将麻疹病毒长-47纯化株毒种(CEC)主代主种子批适应于2BS细胞,传至第4代和第8代,分别作为主种子批及工作种子批,对毒种进行鉴别试验、无菌试验、支原体检查、外源因子检查和病毒滴度检测,并对主种子批毒种进行猴体神经毒力试验和猴体免疫原性检测。将毒种连续传代,观察各代次病毒的收获时间,并测定病毒滴度,分析毒种的传代稳定性;将主种子批和工作种子批分别置于-20和-70℃保存,不同时间取样,检测病毒滴度,分析毒种保存温度稳定性;选取4个代次毒种(D4、D8、D15、D19)提取病毒核酸,扩增H基因序列,分析H基因在传代过程中的遗传稳定性。结果主种子批和工作种子批毒种鉴别试验、无菌试验、支原体及外源因子检查均符合《中国药典》三部(2010版)要求,病毒滴度分别为5.88和6.00 log CCID50/ml,主种子批毒种具有良好的安全性及免疫原性。麻疹病毒长-47纯化株毒种适应于2BS细胞后,收获病毒时间一般在6~7 d,病毒滴度稳定在5.5~6.5 log CCID50/ml之间。主种子批和工作种子批病毒于-20和-70℃保存10个月,病毒滴度无明显变化。D4~D19代病毒无核苷酸发生改变,与麻疹病毒Chang-47(Gen Bank登录号:EF033071)比对结果显示,D4~D19代病毒核苷酸序列21 nt由G→C,属于同义突变,同源性达99.9%。结论建立了麻疹病毒长-47纯化株(2BS)毒种库,并按照《中国药典》三部(2010版)要求进行了全面检定,为制备以人胚肺二倍体细胞为基质的麻疹减毒活疫苗奠定了基础。

    2015年12期 v.28 1339-1343页 [查看摘要][在线阅读][下载 592K]
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消息

  • 第六届疫苗中国发展国际峰会将在上海召开

    <正>第六届疫苗中国发展国际峰会将于2016年4月12~13日在上海隆重召开。作为2016年中国最大的疫苗行业国际年会,这次会议几乎涵盖了整个疫苗产业链上的所有行业。会上将通过人用疫苗及兽用疫苗两个论坛,分别探讨中国及新兴市场疫苗行业的最新发展趋势、研发战略、合作机遇、生产技术等热点话题,同时将与政府权威机构共同探讨国家免疫规划、疫苗审批注册等方面的最新政策动向,旨在通过本

    2015年12期 v.28 1343页 [查看摘要][在线阅读][下载 404K]
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技术方法

  • CHO-K1细胞簇集法检测百日咳毒素毒性的优化及验证

    曹方;刘海昌;王磊;马伟;潘玲玲;李强;王良超;胡文龙;

    目的对CHO-K1细胞簇集法检测百日咳毒素(pertussis toxin,PT)毒性进行优化及验证。方法以国家PT标准品为参考品,将PT标准品倍比稀释后与CHO-K1细胞混合培养,显微镜观察PT能引起CHO-K1细胞簇集的程度。对细胞浓度、孵育时间进行优化,并对方法的特异性、敏感度、重复性进行验证。结果方法的最佳细胞浓度为2.5×105个/ml,最佳孵育时间为24 h。只有PT活性成分能使CHO-K1细胞发生簇集,最低检测限为10 pg/ml;2名试验员6次检测结果表明,该方法重复性良好。结论 CHO-K1细胞簇集法可及时、准确地检测出生产过程中PT含量,适用于百日咳发酵过程监测。

    2015年12期 v.28 1344-1346页 [查看摘要][在线阅读][下载 642K]
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综述

  • 流行性脑脊髓膜炎疫苗研究进展

    蔡昆;叶建君;官旭华;占发先;

    脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)感染可引起流行性脑脊髓膜炎和败血症,病死率约10%,幸存病人可能伴有严重后遗症,如四肢瘫痪、智力发育迟滞、听力丧失等,自发现至今,仍未得到有效控制。近年来,伴随生物技术的发展,流脑多糖疫苗和多糖结合疫苗的研究和开发也取得了诸多进展,有更多疫苗有望通过临床试验进入市场。本文就Nm疫苗及在研疫苗临床试验的研究进展作一综述。

    2015年12期 v.28 1347-1352页 [查看摘要][在线阅读][下载 570K]
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  • 乙型肝炎病毒核心蛋白病毒样颗粒作为疫苗载体的研究进展

    白靓;成岩;曹瑞珍;

    乙型肝炎病毒核心蛋白(hepatitis B virus core protein,HBc)可自发形成二十面体的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)结构,VLPs结构有利于诱发特异性的体液和细胞免疫反应。将外源性抗原表位插入至HBc的N-末端、C-末端或其内部免疫显性区,可诱导机体产生针对外源性抗原的特异性免疫应答。本文对HBc作为疫苗载体的结构基础、设计方法、佐剂效应及其应用等内容作一综述。

    2015年12期 v.28 1353-1357+1360页 [查看摘要][在线阅读][下载 587K]
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专题报道

  • 生物制品批签发管理现状与展望

    萧在澜;张静;

    <正>生物制品批签发是国家药品管理机构或其授权单位根据批生产检定记录的审核和试验检测的结果,对即将上市销售的生物制品进行批放行的制度,是生物制品大规模使用前最重要的一项技术保障[1]。1批签发管理制度的建立1992年,WHO推荐疫苗生产国实施批签发制度,1998年进一步将其作为生物制品管理的6项关键职能之一。我国于2001年开始试行批签发制度[2],

    2015年12期 v.28 1358-1360页 [查看摘要][在线阅读][下载 460K]
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