中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 肠道病毒71型与乙型肝炎病毒联合疫苗免疫原性的初步评价

    陈梦娇;杨晓蕾;刘龙丁;郑惠文;罗娜;尹晓晓;李洪哲;邓燕;李在晗;孙明波;杨净思;

    目的初步评价肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)与乙型肝炎(简称乙肝)病毒(hepatitis B,HBV)联合疫苗中两种抗原之间的相互作用及其免疫小鼠诱导的特异性免疫应答水平。方法将EV71灭活疫苗抗原和重组HBV疫苗抗原(HBs Ag)按常规剂量,采用直接吸附法吸附Al(OH)3佐剂,配制成EV71-HBV联合疫苗,并设单苗组、佐剂对照组和空白对照组(PBS),分别于0、28 d各经腓肠肌免疫BALB/c小鼠1次,于初免后第2、4周和第2剂免疫后第2、4、8周经尾动脉采血,分离血清,采用双抗体夹心ELISA法检测血清中Anti-HBs水平,微量中和试验检测血清中EV71中和抗体效价;并于初免后第3、4周和第2剂免疫后第1、2、4周取小鼠脾脏,分离脾单个核细胞(mononuclear cell,MNC),采用酶联免疫斑点试验(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)检测MNC中抗原特异性IFNγ的分泌水平。结果第2剂免疫后第2周,各疫苗组小鼠血清EV71中和抗体和Anti-HBs阳转率均达100%,各检测时间点疫苗组间抗体效价差异均无统计学意义(P>0.05),佐剂对照组和空白对照组抗体均无阳转。各疫苗组分泌IFNγ的斑点形成细胞(spot forming cell,SFC)数在5个检测时间点有所波动,第2剂免疫后第1周,所有疫苗组IFNγ分泌水平均明显升高,达5个检测时间点的峰值,第2剂免疫后第2周显著下降,但在第2剂免疫后第4周又小幅升高;除第2剂免疫后第2周EV71-HBV联合疫苗组SFC数显著高于EV71单苗组外(P<0.05),其他检测时间点EV71-HBV联合疫苗组与单苗组的SFC数差异均无统计学意义(P>0.05);佐剂对照组和空白对照组的ELISPOT检测结果均为阴性。结论一定剂量的EV71和HBV联合疫苗可诱导小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答,两种抗原间未发现相互作用。

    2015年04期 v.28 329-333+338页 [查看摘要][在线阅读][下载 231K]
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  • 不含硫柳汞流感病毒裂解疫苗的稳定性

    赵大鹏;姚为民;谷丽娟;孙丽娟;孙宇;郭雪;杨旭;陈忠强;商凤云;范宇红;王亚军;张雪梅;

    目的比较相同生产工艺条件下制备的含硫柳汞和无硫柳汞流感病毒裂解疫苗的稳定性,分析硫柳汞对该疫苗稳定性的影响。方法采用WHO发布的2010/2011北半球季节性生产用推荐疫苗株,按照相同生产工艺,制备无硫柳汞(实验组)和含硫柳汞(对照组)流感病毒裂解疫苗各3批,按照企业注册标准进行成品检定,合格后,分别在2~8℃和37℃条件下放置不同时间,进行稳定性试验。结果两组疫苗成品检测结果均符合本公司质量标准。在37℃条件下,两组疫苗的血凝素(HA)含量均有不同程度下降,保存14 d,实验组疫苗H1N1、H3N2、B型HA含量平均降幅分别为20.9%、22.2%和25.9%,对照组平均降幅分别为21.2%、22.1%和25.8%;在2~8℃条件下,两组疫苗HA含量均缓慢下降,保存18个月,实验组疫苗H1N1、H3N2、B型HA含量平均降幅分别为15.2%、17.8%和23.1%,对照组平均降幅分别为15.3%、18.0%和23.0%;但两组疫苗HA含量均在《中国药典》三部(2010版)质量标准范围内,且同一抗原型别的HA平均降幅无明显差异。结论采用相同毒株和工艺制备的含硫柳汞和无硫柳汞流感病毒裂解疫苗,各项质量指标均符合《中国药典》三部(2010版)质量标准,取消疫苗中的硫柳汞,对流感病毒裂解疫苗的稳定性无影响。

    2015年04期 v.28 334-338页 [查看摘要][在线阅读][下载 167K]
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基础研究

  • HIV-1 Vpu蛋白在毕赤酵母中的表达和纯化

    王娇;刘伟;胡秦;李泽琳;曾毅;

    目的在毕赤酵母中表达并纯化人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)辅助调节蛋白Vpu。方法从质粒p CDNA3.1-vphu中PCR扩增vphu基因,插入毕赤酵母表达载体p PICZαA,构建重组表达质粒p PICZαA-vphu,转化巴斯德毕赤酵母野生型X33菌株,经甲醇诱导表达带有6×His标签的重组Vpu蛋白。表达产物经Ni-Agarose 6×His标签纯化柱纯化。表达和纯化产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果重组表达质粒p PICZαA-vphu经双酶切和测序鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约16 000,主要存在于细胞内;纯化后杂蛋白减少,与抗VPU抗体和抗His标签抗体均可结合,浓度为224μg/ml。结论利用毕赤酵母表达系统成功表达并纯化了HIV-1 Vpu蛋白,纯化的蛋白具有良好的抗原活性,为进一步研究其结构和功能以及靶点药物筛选模型的建立奠定了基础。

    2015年04期 v.28 339-343页 [查看摘要][在线阅读][下载 350K]
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消息

  • 2015中国(南京)国际生物医药产业博览会

    <正>随着Biotech China在境内外宣传力度的不断加大,引起了国内外生物医药行业组织的广泛关注,先后有美国、加拿大、瑞士、德国、澳大利亚、芬兰、苏格兰、以色列、印度、韩国及中国台湾等国家和地区组团参展,展会国际化程度进一步提升。2015中国(南京)国际生物医药产业博览会将于2015年9月3~5日在南京国际博览中心展出。

    2015年04期 v.28 343页 [查看摘要][在线阅读][下载 34K]
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基础研究

  • 硫酸软骨素B佐剂对甲型肝炎病毒疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响

    王陈芸;孙静;李萍;余柄廷;李建芳;李彦涵;王海漩;乌美妮;胡凝珠;胡云章;

    目的探讨硫酸软骨素B(chondroitin sulfate B,CSB)佐剂对甲型肝炎病毒((hepatitis A virus,HAV)疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响,以评价其佐剂效果。方法将ICR小鼠随机分成9组:甲型肝炎减毒活疫苗Hep A-l18 EU+不同剂量CSB(5、25、45、65、85、105μg)组、阴性对照组(生理盐水)、抗原对照组(Hep A-l 18 EU)和铝佐剂对照组[Hep A-l 18 EU+Al(OH)3300μg],每组8只,各组均经皮下注射ICR小鼠,200μl/只。于免疫后的第4、8、12和16周,采用间接ELISA法检测小鼠血清中抗-HAV特异性Ig G抗体水平。在实验期间,观察小鼠的健康状况,并于免疫16周后,取CSB 65μg组及阴性对照组小鼠肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、心脏各主要器官,制备病理切片,进行对比观察。结果各组小鼠免疫后第4、8、12、16周,均产生抗-HAV Ig G抗体,除阴性对照组外,抗体水平均随时间的延长逐渐升高,于第8周达峰值,此后逐渐下降。CSB 65μg组抗体可长时间维持在高水平,至免疫后第12、16周,均高于抗原对照组(P<0.05),略高于铝佐剂对照组,最佳浓度为65μg/只。实验期间,各组小鼠均未出现异常;CSB65μg组小鼠肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、心脏组织均未观察到病变。结论 CSB可明显增强HAV抗原诱导小鼠的体液免疫应答,具有成为新型疫苗佐剂的研发价值。

    2015年04期 v.28 344-347页 [查看摘要][在线阅读][下载 246K]
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消息

  • 欢迎登录《中国生物制品学杂志》网站

    <正>尊敬的专家、读者、作者及各位同仁:您们好!自2007年8月起,《中国生物制品学杂志》网站(www.zgswj.com.cn,中文域名:中国生物制品学杂志.com)正式运行。本站网页有杂志简介、在线投稿、稿件查询、过期目录、广告合作等您所需要的信息,欢迎登录。

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基础研究

  • 细胞因子信号抑制因子1基因真核高表达质粒的构建及其在NOK细胞中的表达

    许雅鑫;吴彬;游锦梅;李钰;Yang Yong;陈显久;

    目的构建细胞因子信号抑制因子1(suppressors of cytokine signaling 1,SOCS1)基因真核高表达质粒,并在口腔上皮细胞系NOK细胞中进行表达。方法提取健康人外周静脉血基因组DNA,PCR扩增SOCS1基因,与p EGFPN1载体连接,构建重组真核表达质粒p EGFP-N1-SOCS1,用Eco RⅠ和Bam HⅠ双酶切鉴定及测序后,转染NOK细胞,采用荧光显微镜及Western blot法检测转染细胞中SOCS1蛋白的表达。结果重组真核表达质粒p EGFP-N1-SOCS1经双酶切及测序鉴定证实构建正确。p EGFP-N1-SOCS1转染NOK细胞72 h后获得表达,SOCS1蛋白的表达量为(134.67±9.07)%,较转染空质粒组约升高4倍,二者差异有统计学意义(P=0.001)。结论成功构建了SOCS1基因真核高表达质粒,为进一步研究SOCS1的生物学功能奠定了基础。

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  • 人重组催乳素蛋白的原核表达、纯化及其稳定性分析

    刘晓磊;张慧丽;王俊山;韩静;常丽青;鲁琨;王战争;

    目的表达并纯化重组人催乳素(prolactin,PRL)蛋白,并检测其抗原性及稳定性。方法以商品化的PRL c DNA为模板,PCR扩增目的基因,定向克隆至质粒p ET25中,构建重组原核表达质粒PRL-p ET25b,转化大肠埃希菌后诱导表达,产物经Ni-NTA亲和层析柱纯化,SDS-PAGE鉴定后,采用Bradford法测定蛋白浓度,PRL定量试剂盒分析抗原性,置-20、4和37℃9 d后,分析稳定性。结果重组表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的重组PRL蛋白相对分子质量约30 000,以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的15%,纯度大于90%,总蛋白浓度为0.796 mg/ml。重组PRL蛋白于-20、4和37℃放置9 d,浓度变化较小,偏差在10%以内。结论获得了高纯度的重组PRL融合蛋白,抗原性及稳定性均较好,可应用于试剂盒标准品或校准品的制备。

    2015年04期 v.28 352-355页 [查看摘要][在线阅读][下载 199K]
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  • 钝顶螺旋藻别藻蓝蛋白α、β亚基基因的克隆及其原核表达

    姜晓杰;高金亮;祁美荣;徐萌杰;王文杰;李炜;

    目的克隆钝顶螺旋藻别藻蓝蛋白(allophycocyanin,APC)α、β亚基的基因序列,分别构建该蛋白的α和β亚基的原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行表达。方法 PCR扩增钝顶螺旋藻APC基因(apc)序列,克隆至p GEM-T easy载体中,测序分析插入片段的正确性。以克隆的apc基因为模板,分别扩增APC的α和β亚基的编码基因apc A和apc B,测序分析正确后,分别克隆入表达载体p GEX-4T-1中,构建重组质粒p GEX-4T-apc A和p GEX-4T-apc B。将重组质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3)p Lys S感受态细胞中,IPTG诱导表达,表达产物经Glutathione Sepharose TM 4Fast Flow树脂纯化,Bradford法测定纯化蛋白的浓度。结果成功克隆了钝顶螺旋藻的APCα和β亚基的编码基因apc A和apc B,构建的重组质粒经测序证明构建正确,表达的融合蛋白α-APC-GST和β-APC-GST的相对分子质量均为43 000,其中α-APC-GST主要以可溶性形式存在,表达量占菌体总蛋白的32.1%,纯化后的蛋白纯度达85%,蛋白浓度为0.3 mg/ml;β-APC-GST主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的31.4%,纯化后的蛋白纯度达65.4%,蛋白浓度为0.1 mg/ml。结论已成功克隆并在大肠埃希菌中表达了钝顶螺旋藻APC的α和β亚基。

    2015年04期 v.28 356-359+363页 [查看摘要][在线阅读][下载 347K]
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  • 大流行流感疫苗稳定剂的筛选

    周庆玲;于晶;谢英林;李春艳;韩云飞;李杨;董焕;岳振奇;汪一名;胡晓明;管洪超;于洪涛;

    目的筛选大流行流感疫苗的稳定剂。方法将流感病毒株Influenza A/Vietnam/1194/2004(H5N1)接种Vero细胞制备5批疫苗原液,加入Al(OH)3吸附制备成品疫苗。取同一批疫苗原液,分成5份,分别加入吐温-80(20μg/ml)及0.5%、1%和2%人血白蛋白稳定剂,以不加入稳定剂的疫苗原液作为空白对照,于37℃放置4周,检测流感病毒的血凝滴度,筛选疫苗的稳定剂;将加入筛选出的稳定剂的5批疫苗原液及3批成品疫苗于37℃放置不同时间,检测血凝素(hemagglutinin,HA)含量。结果不加入稳定剂的疫苗原液37℃放置1周后,血凝滴度明显下降;加入20μg/ml吐温-80和0.5%人血白蛋白的疫苗原液37℃放置1周后,血凝滴度亦明显下降;而加入1%和2%人血白蛋白的疫苗原液于37℃放置4周,血凝滴度仍未下降,后续试验选择1%人血白蛋白作为疫苗稳定剂。加入1%人血白蛋白的5批疫苗原液于37℃放置1~4周与放置前比较,HA含量差异均无统计学意义(P>0.05);加入1%人血白蛋白的3批成品疫苗37℃放置6周,疫苗HA含量有下降趋势,37℃放置1~5周,相邻两周间HA含量差异无统计学意义(P>0.05),放置5周,HA含量下降幅度≤1μg/ml。结论 1%人血白蛋白对流感病毒具有良好的稳定作用。

    2015年04期 v.28 360-363页 [查看摘要][在线阅读][下载 151K]
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  • 人膜联蛋白A3的原核表达及纯化

    王冰;高萍;牛诚诚;李善玉;

    目的原核表达人膜联蛋白(annexin,ANX)A3(ANX A3),并进行纯化。方法提取人胎盘样品总RNA,反转录建立c DNA文库,用KOD-Plus高保真DNA聚合酶扩增anx A3基因编码区全长,连接至克隆载体p EASY-Blunt上,测序鉴定。用primix extaq酶重新扩增anx A3基因,与表达载体p EASY-E1连接,构建重组表达质粒p EASY-anx A3,转化E.coli Transetta DE3,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经6×His纯化介质及Bio-Rad Bio Logic Duo Flow Chromatography Systems纯化后,经SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果重组表达质粒经菌落PCR鉴定,阳性克隆可扩增出972 bp的目的片段,与NCBI中Gen Bank上报道的anx A3序列完全一致。纯化的重组蛋白相对分子质量约为36 000,可与鼠Anti 6×His-Tag单克隆抗体特异性结合,浓度为400μg/ml。结论成功构建了重组原核表达质粒p EASY-anx A3,并在E.coli Transetta DE3中表达了重组蛋白,为进一步研究ANX A3在哮喘病的起因和形成中的作用及机制奠定了基础。

    2015年04期 v.28 364-367+371页 [查看摘要][在线阅读][下载 265K]
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治疗性制剂

  • 白皮杉醇和乙酰化白藜芦醇对小鼠辐射损伤的防护作用

    王春燕;齐雪松;佟鹏;郝述霞;吕慧敏;苟巧;

    目的探讨白藜芦醇(resveratrol)衍生物白皮杉醇(piceatannol)和乙酰化白藜芦醇(acetylated resveratrol)对小鼠辐射损伤的防护作用。方法将昆明小鼠随机分为8组:正常对照组、照射对照组、白皮杉醇低、中、高剂量(50、100、200 mg/kg)组和乙酰化白藜芦醇低、中、高剂量(50、100、200 mg/kg)组,每组6只。小鼠经5.5 Gy 60Coγ射线一次性全身照射前2 h灌胃给药,对照组均灌服含2%DMSO的生理盐水溶液。照射后24 h,观察小鼠脾脏和胸腺系数、外周血淋巴细胞数量和百分率、血浆超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力及骨髓嗜多染红细胞微核率的变化。结果与正常对照组相比,照射对照组小鼠脾脏和胸腺系数、外周血淋巴细胞数量和百分率及血浆SOD活力均显著降低(P<0.05或P<0.01),骨髓嗜多染红细胞微核率显著升高(P<0.01)。与照射对照组相比,白皮杉醇和乙酰化白藜芦醇各剂量组脾脏系数均显著增高(P<0.05或P<0.01),但胸腺系数差异无统计学意义(P>0.05);乙酰化白藜芦醇中、高剂量组外周血淋巴细胞数量和淋巴细胞百分率均显著升高(P<0.05或P<0.01);白皮杉醇中、高剂量组以及乙酰化白藜芦醇各剂量组血浆SOD活力均显著升高(P<0.05或P<0.01);白皮杉醇及乙酰化白藜芦醇各剂量组骨髓嗜多染红细胞微核率均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论白藜芦醇衍生物白皮杉醇和乙酰化白藜芦醇均对小鼠具有一定的辐射损伤防护作用,其作用机制与提高机体免疫能力、清除活性氧(reactive oxygen species,ROS)、保护造血组织免于辐射诱发的损伤有关。

    2015年04期 v.28 368-371页 [查看摘要][在线阅读][下载 148K]
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诊断制剂

  • 肺炎链球菌表面蛋白A的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备

    徐悦玥;蔡冉;马颖;尚彦红;袁敬宇;张素芬;李越希;

    目的原核表达、纯化肺炎链球菌表面蛋白A(pneumococcal surface protein A,Psp A),并制备多克隆抗体。方法应用ANTHEWIN、DNAstar等分子生物学软件,对Psp A氨基酸序列进行分析,筛选出抗原表位富集区(第33~109个氨基酸),选用原核生物偏爱的密码子优化基因序列,化学合成全新的基因序列pspa,插入质粒p GEX-4T-2和p ET28a(+)中,构建重组表达质粒p GEX-4T-2-pspa和p ET28a(+)-pspa,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。分别纯化带有GST标签和His标签的Psp A重组蛋白GST-Psp A和His-Psp A,以His-Psp A作为免疫原,经背部多点免疫新西兰大耳白兔,间接ELISA法检测血清抗体效价,Western blot法检测血清抗体特异性。结果两种重组表达质粒p GEX-4T-2-pspa和p ET28a(+)-pspa经双酶切鉴定构建正确;表达的两种重组蛋白GST-Psp A和His-Psp A相对分子质量分别约为33 000和18 000,均为可溶性表达,纯化后目的蛋白条带均无降解,纯度约为95%,蛋白浓度分别为2和0.2 mg/ml;制备的兔抗血清效价较高,可达1∶200 000,且特异性较好。结论原核表达并纯化了肺炎链球菌Psp A融合蛋白,并制备了特异性良好的高效价兔抗血清,为下一步建立肺炎链球菌快速检测技术奠定了基础。

    2015年04期 v.28 372-376+382页 [查看摘要][在线阅读][下载 315K]
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临床研究

  • 森林脑炎灭活疫苗加强免疫效果的临床观察

    何淑云;王轶文;乔建国;付博;范学彬;姜崴;

    目的评价森林脑炎灭活疫苗加强免疫后的免疫效果。方法选择吉林市森林脑炎发病率较高的蛟河市、舒兰市既往有森林脑炎疫苗基础免疫史的400名8岁及以上健康人群,于基础免疫后18个月,进行1剂加强免疫,加强免疫1个月后,采集受试者静脉血,分离血清,使用森林脑炎Ig G ELISA试剂盒测定血清Ig G抗体水平。结果 400名受试者中,失访61人,共339人完成加强免疫,男女比例为3.35∶1;抗体阳性325人,阳性率为95.87%,GMC为3 391 VIEU/ml,其中8~16岁、17~59岁及60岁以上年龄组抗体阳性率差异无统计学意义(P>0.05),但GMC差异有统计学意义(P<0.01),男、女抗体阳性率及GMC差异均有统计学意义(P<0.05)。结论受试者加强免疫后抗体阳性率较高,产生了高滴度的保护性抗体。

    2015年04期 v.28 377-378页 [查看摘要][在线阅读][下载 90K]
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  • 2009~2013年上海市虹口区含麻疹成分疫苗预防接种不良事件监测分析

    杨彦基;钱晓华;黄洋;

    目的了解2009~2013年上海市虹口区含麻疹成分疫苗(measles containing vccine,MCV)预防接种不良事件(adverse event following immunization,AEFI)的发生情况及反应特征,评价MCV接种的安全性。方法通过中国免疫规划监测信息管理系统,收集上海市虹口区2009年1月1日至2013年12月31日报告的MCV AEFI个案数据,采用描述性方法进行流行病学分析。结果共报告MCV AEFI个案595例,报告发生率为371.9/10万剂次,其中一般反应532例(89.6%),第1剂次518例(87.2%),388例(65.3%)发生在接种当天。异常反应报告以过敏性皮疹为主,报告发生率为35.6/10万剂次。严重事件2例,为血小板减少性紫癜、急性脊髓炎,报告发生率均为0.6/10万剂次。MV在接种2 d及2 d以上发生的例数多于MR和MMR。不同季度采取的监测形式、不同监测形式所报告的AEFI类型无差别。结论上海市虹口区使用的MCV疫苗具有很好的安全性,但尚需对严重事件的发生提高警惕。应积极提高辖区MCV成人及免疫薄弱人群的接种率,从而有效控制近年来高发的麻疹疫情。

    2015年04期 v.28 379-382页 [查看摘要][在线阅读][下载 145K]
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  • 保定市两种甲型肝炎疫苗安全性和有效性的比较

    左志平;

    目的比较冻干甲型肝炎减毒活疫苗、灭活疫苗的安全性、有效性及预防接种的易实施性。方法对保定市2014年应完成甲型肝炎疫苗全程免疫的出生日期在2011年1月1日~12月31日的儿童,统计疫苗全程接种率、报告一般反应发生率、接种成本,并采集接种完甲型肝炎减毒活疫苗后满1个月及接种完甲型肝炎灭活疫苗第2剂后满1个月的儿童的血清样本,检测抗-HAV抗体水平。结果不考虑其他因素,甲型肝炎减毒活疫苗接种1剂即为全程免疫,条件全程接种率为100%,甲型肝炎灭活疫苗须接种完2剂才为全程免疫,条件全程接种率为65.53%;按接种剂次比较,两种疫苗一般反应发生率差异无统计学意义(P>0.05),但按接种人数比较,甲型肝炎灭活疫苗一般反应发生率为107.97/10万,高于甲型肝炎减毒活疫苗的30.29/10万(P<0.05);两种疫苗的血清抗-HAV阳转率均约95%(P>0.05);甲型肝炎灭活疫苗的接种费用约为甲型肝炎减毒活疫苗的5倍。结论在保定市,两种疫苗具有相同的有效性,从接种经济负担、疫苗的安全性、接种的易实施性方面,甲型肝炎减毒活疫苗要优于甲型肝炎灭活疫苗。

    2015年04期 v.28 383-384+389页 [查看摘要][在线阅读][下载 114K]
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技术方法

  • 吸附无细胞百白破联合疫苗成品内毒素含量检测

    卫辰;裴宇盛;晁哲;骆鹏;谭亚军;王丽婵;马霄;侯启明;

    目的对氢氧化铝佐剂吸附的无细胞百白破联合疫苗(diphtheria,tetanus and acellular pertussis combined vaccine,adsorbed,DTa P)成品中内毒素含量进行测定,确定将内毒素检查方法纳入2015版《中国药典》中百白破类疫苗质量标准的可行性和必要性。方法参考《中国药典》三部(2010版)附录ⅫE建立动态浊度法,测定解吸附前后DTa P中细菌内毒素含量,并进行标准曲线的可靠性及干扰试验验证。结果该方法在0.005~10 EU/ml范围内线性较好,r=-0.997 1。干扰试验样品回收率在50%~200%。实测样品内毒素值从低于检测限至433 EU/ml。不同厂家及同一厂家不同批次产品解吸附前后的内毒素测定值差异显著,CV值在36.9%~89.0%之间。结论该方法可靠性、线性、回收率、灵敏度均符合要求,为进一步制定DTa P相关质量标准提供参考。现有热原检测方法不能全面反映DTa P成品中内毒素水平,有必要将内毒素检测纳入DTa P质量标准,以更好地控制疫苗安全性。

    2015年04期 v.28 385-389页 [查看摘要][在线阅读][下载 169K]
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  • C、Y、W 135群脑膜炎球菌荚膜多糖化学结构核磁共振检测方法的建立

    李阿妮;于旭博;罗树权;胡浩;孔素娟;袁菲;杨英英;刘方蕾;吴兵;陈作江;赵志强;谢贵林;

    目的建立基于核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)技术检测C群脑膜炎球菌荚膜多糖(group C meningococcal capsular polysaccharide,GCMP)、Y群脑膜炎球菌荚膜多糖(GYMP)和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖(GWMP)化学结构的方法。方法建立1H-NMR检测方法:使用布鲁克600 MHz超导傅里叶核磁共振谱仪,配置5 mm BBO正向宽带高分辨液体探头。脉冲程序为水峰压制(zgpr),温度为298 K(25℃)。具体参数设置如下:中心频率约为4.7 ppm;图谱宽度为7 211 Hz;采样时间为2.272 s;弛豫延迟时间为2 s;扫描次数为512次;信号经傅里叶转换后加入1.0 Hz的窗口函数,检测结果使用Topspin 3.0软件进行处理。验证该方法的专属性、重复性及中间精密性。结果 5批GCMP、GYMP和GWMP检测结果的CV值均小于0.35%;3个浓度GCMP、GYMP和GWMP在相同的操作条件下以及不同工作日间、不同实验员间的检测结果的CV值均小于0.35%。结论建立的1H-NMR检测方法简便、快速、准确,检测GCMP、GYMP和GWMP具有极高的专属性、重复性和中间精密性,适用于疫苗生产研究中GCMP、GYMP和GWMP样品的定性结构鉴定。

    2015年04期 v.28 390-397页 [查看摘要][在线阅读][下载 283K]
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  • 细胞培养/链特异性RT-PCR方法检测甲型肝炎减毒活疫苗病毒滴度

    夏青娟;徐艳玲;李树林;禇东琳;候丽娟;翁滨;肖想;邱璐;徐晓霞;刘令九;

    目的建立检测甲型肝炎减毒活疫苗病毒滴度的细胞培养/链特异性逆转录聚合酶链式反应(strand-specific reverse transcriptase-polymerase chain reaction,strand-specific RT-PCR)方法。方法根据甲型肝炎病毒(HAV)L-A-1株基因组序列,设计5条特异性引物。将甲型肝炎减毒活疫苗原液感染2BS细胞,收获增殖高峰期的HAV,提取RNA,进行2轮链特异性PCR扩增,检测HAV复制过程中的负链RNA,通过Reed-Muench公式计算HAV病毒滴度,并对建立的细胞培养/链特异性RT-PCR法进行特异性及敏感性验证,同时用该方法检测4批冻干甲型肝炎减毒活疫苗病毒滴度,并与《中国药典》三部(2010版)中甲型肝炎减毒活疫苗病毒滴度检测方法(细胞培养时间为28 d/ELISA法)进行比较。结果 HAV负链RNA经2轮扩增获得阳性扩增条带,大小与预期相符。该方法检测HAV复制过程中的负链RNA,特异性、敏感度均较好。两种方法检测的病毒滴度接近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论建立的细胞培养/链特异性RT-PCR方法检测周期短,灵敏度、特异性好,可用于疫苗的滴度检测。

    2015年04期 v.28 398-401页 [查看摘要][在线阅读][下载 249K]
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  • 脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素(CRM197)结合物中游离多糖含量检测方法的建立及验证

    朱涛;朱婉玉;宇学峰;毛慧华;邵忠琦;

    目的建立一种脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素(CRM197)结合物中游离多糖含量的检测方法,并进行验证。方法根据脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,Na DC)在酸性条件下可沉淀蛋白的原理,分别对标准蛋白溶液和CRM197蛋白溶液进行酸沉淀处理,考察其蛋白沉淀效果;向脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素结合物中标加多糖衍生物,计算加标回收率,验证方法的准确性;分别采用Na DC沉淀法处理脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素(A、C、Y、W135群)结合物,检测其游离多糖含量,试验重复6次,验证方法的重复性;向标准蛋白溶液中标加不同浓度的Na DC溶液,验证Na DC对蛋白检测的干扰,考察方法的耐用性。结果不同浓度的标准蛋白溶液经Na DC沉淀法处理后,蛋白浓度在100~300μg/ml范围内,沉淀中蛋白回收率在90%~110%之间,蛋白浓度大于300μg/ml的样品回收率显著降低;4种脑膜炎球菌多糖-CRM197结合物标加多糖衍生物后,再经Na DC沉淀法处理后的游离多糖含量回收率均在80%~110%之间;4种脑膜炎球菌多糖-CRM197结合物6次检测结果的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均<15%;当溶液中Na DC的浓度不高于2%时,对蛋白检测无干扰。结论 Na DC沉淀法准确性、重复性和耐用性良好,可用于脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素结合物中游离多糖含量的测定。

    2015年04期 v.28 402-405+410页 [查看摘要][在线阅读][下载 179K]
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  • 检测人血浆蛋白α_1-蛋白酶抑制剂活性的弹性蛋白酶动态显色法的优化及其验证

    周雁翔;周志军;林连珍;彭焱;邹莉;胡勇;邹炜;李策生;

    目的优化检测人血浆蛋白α1-蛋白酶抑制剂(α1-protease inhibitor,α1-PI)活性的弹性蛋白酶动态显色法,并进行验证。方法以微量滴定板为载体,将不同浓度的α1-PI与特定量的猪胰弹性蛋白酶(porcine pancreaselastase,PPE)混合,测定剩余的弹性蛋白酶催化特定底物的强度,判定样品中α1-PI的含量,通过比较不同浓度酶和底物的组合中标准曲线的线性范围,确定最佳反应条件。对优化的动态显色法进行准确度、精密度验证,并确定标准曲线的线性范围。采用优化后的方法对α1-PI制备工艺进行监控,并筛选冻干配方。结果 PPE与底物的浓度选择分别为0.2 U/ml和1.2 mg/ml。该方法检测α1-PI的线性范围在2~14μg/ml之间,r>0.99。各浓度样品检测结果的CV均<4%,回收率在99.4%~104.3%之间,准确性较好;同一样品由同一个实验员在同一试验中连续测定6次的CV为1.8%,同一样品由不同的实验员在不同日期内分别测定3次的CV为1.8%,重复性较好。纯化工艺过程中各样品比活均符合《欧洲药典》规定的>0.7,总回收率为62.9%;筛选出可较好保护α1-PI活性的配方。结论优化后的弹性蛋白酶动态显色法可用于工艺样品中α1-PI活性的检测。

    2015年04期 v.28 406-410页 [查看摘要][在线阅读][下载 208K]
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  • b型流感嗜血杆菌结合疫苗中蔗糖含量检测方法的建立及验证

    杨烨;廖丹;谢姗姗;李青耘;王静;

    目的建立测定b型流感嗜血杆菌结合疫苗中蔗糖含量的旋光法,并对方法进行验证。方法建立旋光法,检测b型流感嗜血杆菌结合疫苗中的蔗糖含量,并对方法进行专属性、线性范围、重复性、准确性、耐用性和稳定性验证。结果 b型流感嗜血杆菌结合疫苗中其他组分对蔗糖旋光度无干扰;蔗糖浓度在2~10 mg/ml范围内与旋光度具有良好的线性关系(r=0.999 998);重复测定供试品溶液6次,相对标准偏差(RSD)为0.46%;低、中、高浓度的供试品平均回收率分别为99.18%、99.14%、98.95%;温度在10~30℃范围内对旋光度无明显影响;样品于20℃放置5 h内旋光度无明显变化。结论建立了旋光法检测b型流感嗜血杆菌结合疫苗中蔗糖含量的方法,该方法操作简单快速,在确定的限度范围内具有较好的专属性、重复性、准确性、耐用性和稳定性。

    2015年04期 v.28 411-413+417页 [查看摘要][在线阅读][下载 159K]
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  • 重组抗表皮生长因子受体单克隆抗体生物学活性检测方法的建立

    刘培培;廖辉辉;刘伟旭;陈香;谭青乔;

    目的建立重组抗表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体生物学活性检测方法。方法利用A-431细胞,对系列梯度稀释的重组抗EGFR单克隆抗体参考品和供试品进行检测,通过四参数方程进行拟合,计算二者的半数有效浓度(EC50)及供试品的相对比活性,并对该方法进行专属性、精密度(重复性、中间精密度)和准确度验证。结果重组抗EGFR单克隆抗体供试品及参考品在该方法中均存在明显的量效关系,四参数拟合的曲线呈典型的反S型曲线。人Ig G1亚型免疫球蛋白(阴性对照)与A-431细胞无交叉反应,不呈现与重组抗EGFR单克隆抗体供试品相似的剂量-反应曲线;同一名试验人员重复6次检测结果的RSD为5%,同一名试验人员3个工作日检测结果的RSD为4%,3名试验人员3次检测结果的RSD为10%,不同浓度的3个供试品溶液生物学活性理论值和检测值的相对误差分别为10%、8%和12%,均满足方法验证的可接受标准。结论成功建立了重组抗EGFR单克隆抗体生物学活性检测方法,该方法专属性较强,精密度良好,准确度较高,可作为重组抗EGFR单克隆抗体生物学活性的常规检测方法。

    2015年04期 v.28 414-417页 [查看摘要][在线阅读][下载 208K]
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  • 测定过氧化氢酶活性的分光光度法的建立及验证

    廖丹;杨烨;李青耘;谢姗姗;王静;

    目的建立测定23价肺炎球菌多糖疫苗的关键原辅材料—过氧化氢酶活性的方法,并进行验证。方法分别采用高锰酸钾滴定法和紫外分光光度法测定过氧化氢酶活性,并对紫外分光光度法进行重复性、日间精密度、不同人员间精密度、耐用性、线性验证。结果两批样品重复测定6次结果的RSD均<5%;两批样品两名检测人员3日内的检测结果以及两批样品不同工作日间的检测结果差异均无统计学意义(P>0.05),样品日间和人员间检测结果的RSD均<5%;在20~30℃温度范围内该方法耐用性良好,在p H 7.0~7.5范围内耐用性良好;该方法在样品浓度为0.2~1.6μl/ml之间的线性关系良好。结论分光光度法重复性、日间精密度、不同人员间精密度良好,且操作简便,结果可靠,适用于过氧化氢酶的质量控制。

    2015年04期 v.28 418-421+425页 [查看摘要][在线阅读][下载 195K]
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  • 检测鹿新孢子虫感染的双抗夹心Dot-ELISA方法的建立及其应用

    田来明;杨滨僮;李智鹏;张桐嘉;宫鹏涛;李建华;王全楷;杨举;李赫;张西臣;

    目的建立检测鹿新孢子虫感染的双抗夹心Dot-ELISA方法,并进行初步应用。方法以双抗夹心ELISA方法的A490值对应Dot-ELISA方法显色结果的方式,建立双抗夹心Dot-ELISA方法检测结果判定标准,确定HRP标记的抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体1H11、包被抗体(抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体1A1)、待测血清的最佳工作浓度,并对该方法的特异性、重复性及灵敏度进行验证。用建立的方法检测79份鹿血清,并与双抗夹心ELISA方法进行比较。结果确定该方法 HRP-H11抗体的最佳稀释度为1∶100,包被抗体最适工作浓度为0.3μg/片,待测血清稀释度为1∶8。自然感染犬新孢子虫的鹿阳性血清的敏感性稀释度为1∶64,与弓形虫阳性血清无交叉反应,敏感性、特异性较强;自然感染新孢子虫的鹿阳性血清3次检测结果重复性较好。该方法检测的76份鹿血清中,阳性12份,阳性率为15.2%,与双抗夹心ELISA方法检测结果一致。结论建立的双抗夹心Dot-ELISA方法可用于检测鹿群感染新孢子虫循环抗原,为新孢子虫病的诊断提供了新的方法。

    2015年04期 v.28 422-425页 [查看摘要][在线阅读][下载 222K]
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  • 病毒灭活血浆中MB残留量检测

    杨春晖;边国慧;阳红;梁启忠;周群刚;李长清;

    目的检测病毒灭活处理血浆中亚甲蓝(methylene blue,MB)残留量。方法将4家采供血机构(A、B、C、D)提供的血浆样品经2个不同型号的一次性病毒灭活装置处理后,采用固相萃取方法分别提取病毒灭活血浆及标准品中MB,利用高效液相色谱法检测MB含量。结果 4家采供血机构病毒灭活血浆MB平均残留量分别为(0.29±0.11)、(0.26±0.09)、(0.09±0.03)和(0.10±0.02)μmol/L。两种不同型号滤器对MB的滤除率分别为91%和73%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论目前我国病毒灭活血浆中MB残留量基本符合质量要求,但不同的采供血机构及不同滤器处理的血浆样品间MB残留量仍存在明显差异。

    2015年04期 v.28 426-428+437页 [查看摘要][在线阅读][下载 156K]
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综述

  • 核酸适体筛选方法的研究进展

    徐龙峰;王丽;

    核酸适体是能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合的寡核苷酸序列,可识别的靶分子范围非常广,理论上自然界存在的任何物质均可通过指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术,筛选到其相应的核酸适体。近年来,在传统SELEX技术的基础上,新的SELEX技术不断出现,如毛细管电泳SELEX(capillary electrophoresis SELEX,CE-SELEX)、荧光磁珠SELEX(Flu Mag SELEX)、自动化SELEX(automated SELEX)、细胞-SELEX(cell-SELEX)、消减SELEX(subtractive SELEX)技术等。这些新技术的出现,在不断完善SELEX技术的同时,也极大地推动了适体技术在各学科领域中的发展及应用。本文对核酸适体的筛选方法进行了总结和展望,为核酸适体的筛选提供了参考。

    2015年04期 v.28 429-433页 [查看摘要][在线阅读][下载 176K]
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专题报道

  • 2001~2010年桂平市狂犬病流行趋势分析

    易铭友;余翠霞;

    <正>狂犬病是由狂犬病病毒侵犯中枢神经系统为主引起的急性人兽共患传染病,人类狂犬病多因被犬、猫或野生动物咬伤感染所致,病死率达100%,严重危害人类生命安全[1]。为了解广西省桂平市狂犬病的发生和流行趋势,本文对桂平市2001~2010年辖区内发生的狂犬病疫情,按发病时间、职业、性别、年龄、地区分布等因素进行分析,现将结果报道如下。1资料人口资料来自统计局人口公布数据;疫情资料来

    2015年04期 v.28 434-437页 [查看摘要][在线阅读][下载 101K]
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  • 白喉相关疫苗关键质量参数的比较

    董国霞;田霖;谭亚军;侯启明;马霄;

    <正>白喉相关疫苗自应用以来显著降低了白喉的发病率,对相关疾病的控制起到了重要的作用。与其相关的白破、百白破等疫苗为我国免疫规划疫苗及WHO扩大免疫计划(Expanded Program on Immunization,EPI)疫苗,应用广泛。目前,基础免疫阶段在我国市场上使用的白喉相关疫苗主要有国产吸附无细胞百白破联合疫苗、进口吸附无细胞百白破灭活脊髓灰质炎和b型流感嗜血杆菌联合疫苗。本文主

    2015年04期 v.28 438-440页 [查看摘要][在线阅读][下载 81K]
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  • 肠道病毒71型与乙型肝炎病毒联合疫苗免疫原性的初步评价

    陈梦娇;杨晓蕾;刘龙丁;郑惠文;罗娜;尹晓晓;李洪哲;邓燕;李在晗;孙明波;杨净思

    目的 初步评价肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)与乙型肝炎(简称乙肝)病毒(hepatitis B,HBV)联合疫苗中两种抗原之间的相互作用及其免疫小鼠诱导的特异性免疫应答水平。方法 将EV71灭活疫苗抗原和重组HBV疫苗抗原(HBsAg)按常规剂量,采用直接吸附法吸附A(lOH)3佐剂,配制成EV71-HBV联合疫苗,并设单苗组、佐剂对照组和空白对照组(PBS),分别于0、28 d各经腓肠肌免疫BALB/c小鼠1次,于初免后第2、4周和第2剂免疫后第2、4、8周经尾动脉采血,分离血清,采用双抗体夹心ELISA法检测血清中Anti-HBs水平,微量中和试验检测血清中EV71中和抗体效价;并于初免后第3、4周和第2剂免疫后第1、2、4周取小鼠脾脏,分离脾单个核细胞(mononuclear cell,MNC),采用酶联免疫斑点试验(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)检测MNC中抗原特异性IFNγ的分泌水平。结果 第2剂免疫后第2周,各疫苗组小鼠血清EV71中和抗体和Anti-HBs阳转率均达100%,各检测时间点疫苗组间抗体效价差异均无统计学意义(P>0.05),佐剂对照组和空白对照组抗体均无阳转。各疫苗组分泌IFNγ的斑点形成细胞(spot forming cell,SFC)数在5个检测时间点有所波动,第2剂免疫后第1周,所有疫苗组IFNγ分泌水平均明显升高,达5个检测时间点的峰值,第2剂免疫后第2周显著下降,但在第2剂免疫后第4周又小幅升高;除第2剂免疫后第2周EV71-HBV联合疫苗组SFC数显著高于EV71单苗组外(P<0.05),其他检测时间点EV71-HBV联合疫苗组与单苗组的SFC数差异均无统计学意义(P>0.05);佐剂对照组和空白对照组的ELISPOT检测结果均为阴性。结论 一定剂量的EV71和HBV联合疫苗可诱导小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答,两种抗原间未发现相互作用。

    2015年04期 329-333+338页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 不含硫柳汞流感病毒裂解疫苗的稳定性

    赵大鹏;姚为民;谷丽娟;孙丽娟;孙宇;郭雪;杨旭;陈忠强;商凤云;范宇红;王亚军;张雪梅

    目的 比较相同生产工艺条件下制备的含硫柳汞和无硫柳汞流感病毒裂解疫苗的稳定性,分析硫柳汞对该疫苗稳定性的影响。方法 采用WHO发布的2010/2011北半球季节性生产用推荐疫苗株,按照相同生产工艺,制备无硫柳汞(实验组)和含硫柳汞(对照组)流感病毒裂解疫苗各3批,按照企业注册标准进行成品检定,合格后,分别在2~8℃和37℃条件下放置不同时间,进行稳定性试验。结果 两组疫苗成品检测结果均符合本公司质量标准。在37℃条件下,两组疫苗的血凝素(HA)含量均有不同程度下降,保存14 d,实验组疫苗H1N1、H3N2、B型HA含量平均降幅分别为20.9%、22.2%和25.9%,对照组平均降幅分别为21.2%、22.1%和25.8%;在2~8℃条件下,两组疫苗HA含量均缓慢下降,保存18个月,实验组疫苗H1N1、H3N2、B型HA含量平均降幅分别为15.2%、17.8%和23.1%,对照组平均降幅分别为15.3%、18.0%和23.0%;但两组疫苗HA含量均在《中国药典》三部(2010版)质量标准范围内,且同一抗原型别的HA平均降幅无明显差异。结论 采用相同毒株和工艺制备的含硫柳汞和无硫柳汞流感病毒裂解疫苗,各项质量指标均符合《中国药典》三部(2010版)质量标准,取消疫苗中的硫柳汞,对流感病毒裂解疫苗的稳定性无影响。

    2015年04期 334-338页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • HIV-1 Vpu蛋白在毕赤酵母中的表达和纯化

    王娇;刘伟;胡秦;李泽琳;曾毅

    目的 在毕赤酵母中表达并纯化人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)辅助调节蛋白Vpu。方法 从质粒pCDNA3.1-vphu中PCR扩增vphu基因,插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,构建重组表达质粒pPICZαA-vphu,转化巴斯德毕赤酵母野生型X33菌株,经甲醇诱导表达带有6×His标签的重组Vpu蛋白。表达产物经Ni-Agarose 6×His标签纯化柱纯化。表达和纯化产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果 重组表达质粒pPICZαA-v phu经双酶切和测序鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量<16 000,主要存在于细胞内;纯化后杂蛋白减少,与抗VPU抗体和抗His标签抗体均可结合,浓度为224μg/ml。结论 利用毕赤酵母表达系统成功表达并纯化了HIV-1 Vpu蛋白,纯化的蛋白具有良好的抗原活性,为进一步研究其结构和功能以及靶点药物筛选模型的建立奠定了基础。

    2015年04期 339-343页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 硫酸软骨素B佐剂对甲型肝炎病毒疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响

    王陈芸;孙静;李萍;余柄廷;李建芳;李彦涵;王海漩;乌美妮;胡凝珠;胡云章

    目的 探讨硫酸软骨素B(chondroitin sulfate B,CSB)佐剂对甲型肝炎病毒((hepatitis A virus,HAV)疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响,以评价其佐剂效果。方法 将ICR小鼠随机分成9组:甲型肝炎减毒活疫苗HepA-l18 EU+不同剂量CSB(5、25、45、65、85、105μg)组、阴性对照组(生理盐水)、抗原对照组(HepA-l 18 EU)和铝佐剂对照组[HepA-l 18 EU+A(lOH)3300μg],每组8只,各组均经皮下注射ICR小鼠,200μl/只。于免疫后的第4、8、12和16周,采用间接ELISA法检测小鼠血清中抗-HAV特异性IgG抗体水平。在实验期间,观察小鼠的健康状况,并于免疫16周后,取CSB 65μg组及阴性对照组小鼠肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、心脏各主要器官,制备病理切片,进行对比观察。结果 各组小鼠免疫后第4、8、12、16周,均产生抗-HAV IgG抗体,除阴性对照组外,抗体水平均随时间的延长逐渐升高,于第8周达峰值,此后逐渐下降。CSB 65μg组抗体可长时间维持在高水平,至免疫后第12、16周,均高于抗原对照组(P<0.05),略高于铝佐剂对照组,最佳浓度为65μg/只。实验期间,各组小鼠均未出现异常;CSB65μg组小鼠肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、心脏组织均未观察到病变。结论CSB可明显增强HAV抗原诱导小鼠的体液免疫应答,具有成为新型疫苗佐剂的研发价值。

    2015年04期 344-347页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 细胞因子信号抑制因子1基因真核高表达质粒的构建及其在NOK细胞中的表达

    许雅鑫;吴彬;游锦梅;李钰;Yang Yong;陈显久

    目的 构建细胞因子信号抑制因子1(suppressors of cytokine signaling 1,SOCS1)基因真核高表达质粒,并在口腔上皮细胞系NOK细胞中进行表达。方法 提取健康人外周静脉血基因组DNA,PCR扩增SOCS1基因,与pEGFP-N1载体连接,构建重组真核表达质粒pEGFP-N1-SOCS1,用EcoR玉和BamH玉双酶切鉴定及测序后,转染NOK细胞,采用荧光显微镜及Western blot法检测转染细胞中SOCS1蛋白的表达。结果 重组真核表达质粒pEGFP-N1-SOCS1经双酶切及测序鉴定证实构建正确。pEGFP-N1-SOCS1转染NOK细胞72 h后获得表达,SOCS1蛋白的表达量为(134.67±9.07)%,较转染空质粒组<升高4倍,二者差异有统计学意义(P=0.001)。结论 成功构建了SOCS1基因真核高表达质粒,为进一步研究SOCS1的生物学功能奠定了基础。

    2015年04期 348-351页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 人重组催乳素蛋白的原核表达、纯化及其稳定性分析

    刘晓磊;张慧丽;王俊山;韩静;常丽青;鲁琨;王战争

    目的 表达并纯化重组人催乳素(prolactin,PRL)蛋白,并检测其抗原性及稳定性。方法 以商品化的PRLcDNA为模板,PCR扩增目的基因,定向克隆至质粒pET25中,构建重组原核表达质粒PRL-pET25b,转化大肠埃希菌后诱导表达,产物经Ni-NTA亲和层析柱纯化,SDS-PAGE鉴定后,采用Bradford法测定蛋白浓度,PRL定量试剂盒分析抗原性,置-20、4和37℃9 d后,分析稳定性。结果 重组表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的重组PRL蛋白相对分子质量<30 000,以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的15%,纯度大于90%,总蛋白浓度为0.796 mg/ml。重组PRL蛋白于-20、4和37℃放置9 d,浓度变化较小,偏差在10%以内。结论 获得了高纯度的重组PRL融合蛋白,抗原性及稳定性均较好,可应用于试剂盒标准品或校准品的制备。

    2015年04期 352-355页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 钝顶螺旋藻别藻蓝蛋白α、β亚基基因的克隆及其原核表达

    姜晓杰;高金亮;祁美荣;徐萌杰;王文杰;李炜

    目的 克隆钝顶螺旋藻别藻蓝蛋白(allophycocyanin,APC)α、茁亚基的基因序列,分别构建该蛋白的α和茁亚基的原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行表达。方法PCR扩增钝顶螺旋藻APC基因(apc)序列,克隆至pGEM-Teasy载体中,测序分析插入片段的正确性。以克隆的apc基因为模板,分别扩增APC的α和茁亚基的编码基因apcA和apcB,测序分析正确后,分别克隆入表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒pGEX-4T-apcA和pGEX-4T-apcB。将重组质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞中,IPTG诱导表达,表达产物经Glutathione SepharoseTM4Fast Flow树脂纯化,Bradford法测定纯化蛋白的浓度。结果 成功克隆了钝顶螺旋藻的APCα和茁亚基的编码基因apcA和apc B,构建的重组质粒经测序证明构建正确,表达的融合蛋白α-APC-GST和茁-APC-GST的相对分子质量均为43 000,其中α-APC-GST主要以可溶性形式存在,表达量占菌体总蛋白的32.1%,纯化后的蛋白纯度达85%,蛋白浓度为0.3 mg/ml;茁-APC-GST主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的31.4%,纯化后的蛋白纯度达65.4%,蛋白浓度为0.1 mg/ml。结论 已成功克隆并在大肠埃希菌中表达了钝顶螺旋藻APC的α和茁亚基。

    2015年04期 356-359+363页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 大流行流感疫苗稳定剂的筛选

    周庆玲;于晶;谢英林;李春艳;韩云飞;李杨;董焕;岳振奇;汪一名;胡晓明;管洪超;于洪涛

    目的 筛选大流行流感疫苗的稳定剂。方法 将流感病毒株Influenza A/Vietnam/1194/2004(H5N1)接种Vero细胞制备5批疫苗原液,加入A(lOH)3吸附制备成品疫苗。取同一批疫苗原液,分成5份,分别加入吐温-80(20μg/ml)及0.5%、1%和2%人血白蛋白稳定剂,以不加入稳定剂的疫苗原液作为空白对照,于37℃放置4周,检测流感病毒的血凝滴度,筛选疫苗的稳定剂;将加入筛选出的稳定剂的5批疫苗原液及3批成品疫苗于37℃放置不同时间,检测血凝素(hemagglutinin,HA)含量。结果 不加入稳定剂的疫苗原液37℃放置1周后,血凝滴度明显下降;加入20μg/ml吐温-80和0.5%人血白蛋白的疫苗原液37℃放置1周后,血凝滴度亦明显下降;而加入1%和2%人血白蛋白的疫苗原液于37℃放置4周,血凝滴度仍未下降,后续试验选择1%人血白蛋白作为疫苗稳定剂。加入1%人血白蛋白的5批疫苗原液于37℃放置1~4周与放置前比较,HA含量差异均无统计学意义(P>0.05);加入1%人血白蛋白的3批成品疫苗37℃放置6周,疫苗HA含量有下降趋势,37℃放置1~5周,相邻两周间HA含量差异无统计学意义(P>0.05),放置5周,HA含量下降幅度臆1μg/ml。结论1%人血白蛋白对流感病毒具有良好的稳定作用。

    2015年04期 360-363页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 人膜联蛋白A3的原核表达及纯化

    王冰;高萍;牛诚诚;李善玉

    目的 原核表达人膜联蛋白(annexin,ANX)A3(ANX A3),并进行纯化。方法 提取人胎盘样品总RNA,反转录建立cDNA文库,用KOD-Plus高保真DNA聚合酶扩增anx A 3基因编码区全长,连接至克隆载体pEASY-Blunt上,测序鉴定。用primix extaq酶重新扩增anx A 3基因,与表达载体pEASY-E1连接,构建重组表达质粒pEASY-anx A 3,转化E.c oliTransetta DE3,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经6×His纯化介质及Bio-Rad BioLogic DuoFlow Chromatography Systems纯化后,经SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果 重组表达质粒经菌落PCR鉴定,阳性克隆可扩增出972 bp的目的片段,与NCBI中GenBank上报道的anx A 3序列完全一致。纯化的重组蛋白相对分子质量<为36 000,可与鼠Anti 6×His-Tag单克隆抗体特异性结合,浓度为400μg/ml。结论 成功构建了重组原核表达质粒pEASY-anx A 3,并在E.coliTransetta DE3中表达了重组蛋白,为进一步研究ANX A3在哮喘病的起因和形成中的作用及机制奠定了基础。

    2015年04期 364-367+371页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 白皮杉醇和乙酰化白藜芦醇对小鼠辐射损伤的防护作用

    王春燕;齐雪松;佟鹏;郝述霞;吕慧敏;苟巧

    目的 探讨白藜芦醇(resveratrol)衍生物白皮杉醇(piceatannol)和乙酰化白藜芦醇(acetylated resveratrol)对小鼠辐射损伤的防护作用。方法 将昆明小鼠随机分为8组:正常对照组、照射对照组、白皮杉醇低、中、高剂量(50、100、200 mg/kg)组和乙酰化白藜芦醇低、中、高剂量(50、100、200 mg/kg)组,每组6只。小鼠经5.5 Gy60Coγ射线一次性全身照射前2 h灌胃给药,对照组均灌服含2%DMSO的生理盐水溶液。照射后24 h,观察小鼠脾脏和胸腺系数、外周血淋巴细胞数量和百分率、血浆超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力及骨髓嗜多染红细胞微核率的变化。结果 与正常对照组相比,照射对照组小鼠脾脏和胸腺系数、外周血淋巴细胞数量和百分率及血浆SOD活力均显著降低(P<0.05或P<0.01),骨髓嗜多染红细胞微核率显著升高(P<0.01)。与照射对照组相比,白皮杉醇和乙酰化白藜芦醇各剂量组脾脏系数均显著增高(P<0.05或P<0.01),但胸腺系数差异无统计学意义(P>0.05);乙酰化白藜芦醇中、高剂量组外周血淋巴细胞数量和淋巴细胞百分率均显著升高(P<0.05或P<0.01);白皮杉醇中、高剂量组以及乙酰化白藜芦醇各剂量组血浆SOD活力均显著升高(P<0.05或P<0.01);白皮杉醇及乙酰化白藜芦醇各剂量组骨髓嗜多染红细胞微核率均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论 白藜芦醇衍生物白皮杉醇和乙酰化白藜芦醇均对小鼠具有一定的辐射损伤防护作用,其作用机制与提高机体免疫能力、清除活性氧(reactive oxygen species,ROS)、保护造血组织免于辐射诱发的损伤有关。

    2015年04期 368-371页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 肺炎链球菌表面蛋白A的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备

    徐悦玥;蔡冉;马颖;尚彦红;袁敬宇;张素芬;李越希

    目的 原核表达、纯化肺炎链球菌表面蛋白A(pneumococcal surface protein A,PspA),并制备多克隆抗体。方法 应用ANTHEWIN、DNAstar等分子生物学软件,对PspA氨基酸序列进行分析,筛选出抗原表位富集区(第33~109个氨基酸),选用原核生物偏爱的密码子优化基因序列,化学合成全新的基因序列pspa,插入质粒pGEX-4T-2和pET28a(+)中,构建重组表达质粒pGEX-4T-2-pspa和pET28a(+)-pspa,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。分别纯化带有GST标签和His标签的PspA重组蛋白GST-PspA和His-PspA,以His-PspA作为免疫原,经背部多点免疫新西兰大耳白兔,间接ELISA法检测血清抗体效价,Western blot法检测血清抗体特异性。结果 两种重组表达质粒pGEX-4T-2-pspa和pET28a(+)-pspa经双酶切鉴定构建正确;表达的两种重组蛋白GST-PspA和His-PspA相对分子质量分别<为33 000和18 000,均为可溶性表达,纯化后目的蛋白条带均无降解,纯度<为95%,蛋白浓度分别为2和0.2 mg/ml;制备的兔抗血清效价较高,可达1:200 000,且特异性较好。结论 原核表达并纯化了肺炎链球菌PspA融合蛋白,并制备了特异性良好的高效价兔抗血清,为下一步建立肺炎链球菌快速检测技术奠定了基础。

    2015年04期 372-376+382页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 森林脑炎灭活疫苗加强免疫效果的临床观察

    何淑云;王轶文;乔建国;付博;范学彬;姜威

    目的 评价森林脑炎灭活疫苗加强免疫后的免疫效果。方法 选择吉林市森林脑炎发病率较高的蛟河市、舒兰市既往有森林脑炎疫苗基础免疫史的400名8岁及以上健康人群,于基础免疫后18个月,进行1剂加强免疫,加强免疫1个月后,采集受试者静脉血,分离血清,使用森林脑炎IgG ELISA试剂盒测定血清IgG抗体水平。结果400名受试者中,失访61人,共339人完成加强免疫,男女比例为3.35:1;抗体阳性325人,阳性率为95.87%,GMC为3 391 VIEU/ml,其中8~16岁、17~59岁及60岁以上年龄组抗体阳性率差异无统计学意义(P>0.05),但GMC差异有统计学意义(P<0.01),男、女抗体阳性率及GMC差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 受试者加强免疫后抗体阳性率较高,产生了高滴度的保护性抗体。

    2015年04期 377-378页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 2009~2013年上海市虹口区含麻疹成分疫苗预防接种不良事件监测分析

    杨彦基;钱晓华;黄洋

    目的 了解2009~2013年上海市虹口区含麻疹成分疫苗(measles containing vccine,MCV)预防接种不良事件(adverse event following immunization,AEFI)的发生情况及反应特征,评价MCV接种的安全性。方法 通过中国免疫规划监测信息管理系统,收集上海市虹口区2009年1月1日至2013年12月31日报告的MCV AEFI个案数据,采用描述性方法进行流行病学分析。结果 共报告MCV AEFI个案595例,报告发生率为371.9/10万剂次,其中一般反应532例(89.6%),第1剂次518例(87.2%),388例(65.3%)发生在接种当天。异常反应报告以过敏性皮疹为主,报告发生率为35.6/10万剂次。严重事件2例,为血小板减少性紫癜、急性脊髓炎,报告发生率均为0.6/10万剂次。MV在接种2 d及2 d以上发生的例数多于MR和MMR。不同季度采取的监测形式、不同监测形式所报告的AEFI类型无差别。结论 上海市虹口区使用的MCV疫苗具有很好的安全性,但尚需对严重事件的发生提高警惕。应积极提高辖区MCV成人及免疫薄弱人群的接种率,从而有效控制近年来高发的麻疹疫情。

    2015年04期 379-382页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 保定市两种甲型肝炎疫苗安全性和有效性的比较

    左志平

    目的 比较冻干甲型肝炎减毒活疫苗、灭活疫苗的安全性、有效性及预防接种的易实施性。方法 对保定市2014年应完成甲型肝炎疫苗全程免疫的出生日期在2011年1月1日~12月31日的儿童,统计疫苗全程接种率、报告一般反应发生率、接种成本,并采集接种完甲型肝炎减毒活疫苗后满1个月及接种完甲型肝炎灭活疫苗第2剂后满1个月的儿童的血清样本,检测抗-HAV抗体水平。结果 不考虑其他因素,甲型肝炎减毒活疫苗接种1剂即为全程免疫,条件全程接种率为100%,甲型肝炎灭活疫苗须接种完2剂才为全程免疫,条件全程接种率为65.53%;按接种剂次比较,两种疫苗一般反应发生率差异无统计学意义(P>0.05),但按接种人数比较,甲型肝炎灭活疫苗一般反应发生率为107.97/10万,高于甲型肝炎减毒活疫苗的30.29/10万(P<0.05);两种疫苗的血清抗-HAV阳转率均<95%(P>0.05);甲型肝炎灭活疫苗的接种费用<为甲型肝炎减毒活疫苗的5倍。结论 在保定市,两种疫苗具有相同的有效性,从接种经济负担、疫苗的安全性、接种的易实施性方面,甲型肝炎减毒活疫苗要优于甲型肝炎灭活疫苗。

    2015年04期 383-384+389页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 吸附无细胞百白破联合疫苗成品内毒素含量检测

    卫辰;裴宇盛;晁哲;骆鹏;谭亚军;王丽婵;马霄;侯启明

    目的 对氢氧化铝佐剂吸附的无细胞百白破联合疫苗(diphtheria,tetanus and acellular pertussis combined vaccine,adsorbed,DTaP)成品中内毒素含量进行测定,确定将内毒素检查方法纳入2015版《中国药典》中百白破类疫苗质量标准的可行性和必要性。方法 参考《中国药典》三部(2010版)附录狱E建立动态浊度法,测定解吸附前后DTaP中细菌内毒素含量,并进行标准曲线的可靠性及干扰试验验证。结果 该方法在0.005~10 EU/ml范围内线性较好,r=-0.997 1。干扰试验样品回收率在50%~200%。实测样品内毒素值从低于检测限至433 EU/ml。不同厂家及同一厂家不同批次产品解吸附前后的内毒素测定值差异显著,CV值在36.9%~89.0%之间。结论 该方法可靠性、线性、回收率、灵敏度均符合要求,为进一步制定DTaP相关质量标准提供参考。现有热原检测方法不能全面反映DTaP成品中内毒素水平,有必要将内毒素检测纳入DTaP质量标准,以更好地控制疫苗安全性。

    2015年04期 385-389页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖化学结构核磁共振检测方法的建立

    李阿妮;于旭博;罗树权;胡浩;孔素娟;袁菲;杨英英;刘方蕾;吴兵;陈作江;赵志强;谢贵林

    目的 建立基于核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)技术检测C群脑膜炎球菌荚膜多糖(group C meningococcal capsular polysaccharide,GCMP)、Y群脑膜炎球菌荚膜多糖(GYMP)和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖(GWMP)化学结构的方法。方法 建立1H-NMR检测方法:使用布鲁克600 MHz超导傅里叶核磁共振谱仪,配置5 mm BBO正向宽带高分辨液体探头。脉冲程序为水峰压制(zgpr),温度为298 K(25℃)。具体参数设置如下:中心频率<为4.7 ppm;图谱宽度为7 211 Hz;采样时间为2.272 s;弛豫延迟时间为2 s;扫描次数为512次;信号经傅里叶转换后加入1.0 Hz的窗口函数,检测结果使用Topspin 3.0软件进行处理。验证该方法的专属性、重复性及中间精密性。结果5批GCMP、GYMP和GWMP检测结果的CV值均小于0.35%;3个浓度GCMP、GYMP和GWMP在相同的操作条件下以及不同工作日间、不同实验员间的检测结果的CV值均小于0.35%。结论 建立的1H-NMR检测方法简便、快速、准确,检测GCMP、GYMP和GWMP具有极高的专属性、重复性和中间精密性,适用于疫苗生产研究中GCMP、GYMP和GWMP样品的定性结构鉴定。

    2015年04期 390-397页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 细胞培养/链特异性RT-PCR方法检测甲型肝炎减毒活疫苗病毒滴度

    夏青娟;徐艳玲;李树林;禇东琳;候丽娟;翁滨;肖想;邱璐;徐晓霞;刘令九

    目的 建立检测甲型肝炎减毒活疫苗病毒滴度的细胞培养/链特异性逆转录聚合酶链式反应(strand-specific reverse transcriptase-polymerase chain reaction,strand-specific RT-PCR)方法。方法 根据甲型肝炎病毒(HAV)L-A-1株基因组序列,设计5条特异性引物。将甲型肝炎减毒活疫苗原液感染2BS细胞,收获增殖高峰期的HAV,提取RNA,进行2轮链特异性PCR扩增,检测HAV复制过程中的负链RNA,通过Reed-Muench公式计算HAV病毒滴度,并对建立的细胞培养/链特异性RT-PCR法进行特异性及敏感性验证,同时用该方法检测4批冻干甲型肝炎减毒活疫苗病毒滴度,并与《中国药典》三部(2010版)中甲型肝炎减毒活疫苗病毒滴度检测方法(细胞培养时间为28 d/ELISA法)进行比较。结果HAV负链RNA经2轮扩增获得阳性扩增条带,大小与预期相符。该方法检测HAV复制过程中的负链RNA,特异性、敏感度均较好。两种方法检测的病毒滴度接近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 建立的细胞培养/链特异性RT-PCR方法检测周期短,灵敏度、特异性好,可用于疫苗的滴度检测。

    2015年04期 398-401页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素(CRM197)结合物中游离多糖含量检测方法的建立及验证

    朱涛;朱婉玉;宇学峰;毛慧华;邵忠琦

    目的 建立一种脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素(CRM197)结合物中游离多糖含量的检测方法,并进行验证。方法 根据脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,NaDC)在酸性条件下可沉淀蛋白的原理,分别对标准蛋白溶液和CRM197蛋白溶液进行酸沉淀处理,考察其蛋白沉淀效果;向脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素结合物中标加多糖衍生物,计算加标回收率,验证方法的准确性;分别采用NaDC沉淀法处理脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素(A、C、Y、W135群)结合物,检测其游离多糖含量,试验重复6次,验证方法的重复性;向标准蛋白溶液中标加不同浓度的NaDC溶液,验证NaDC对蛋白检测的干扰,考察方法的耐用性。结果 不同浓度的标准蛋白溶液经NaDC沉淀法处理后,蛋白浓度在100~300μg/ml范围内,沉淀中蛋白回收率在90%~110%之间,蛋白浓度大于300μg/ml的样品回收率显著降低;4种脑膜炎球菌多糖-CRM197结合物标加多糖衍生物后,再经NaDC沉淀法处理后的游离多糖含量回收率均在80%~110%之间;4种脑膜炎球菌多糖-CRM197结合物6次检测结果的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均<15%;当溶液中NaDC的浓度不高于2%时,对蛋白检测无干扰。结论NaDC沉淀法准确性、重复性和耐用性良好,可用于脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素结合物中游离多糖含量的测定。

    2015年04期 402-405+410页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 检测人血浆蛋白α_1-蛋白酶抑制剂活性的弹性蛋白酶动态显色法的优化及其验证

    周雁翔;周志军;林连珍;彭焱;邹莉;胡勇;邹炜;李策生

    目的 优化检测人血浆蛋白α1-蛋白酶抑制剂(α1-protease inhibitor,α1-PI)活性的弹性蛋白酶动态显色法,并进行验证。方法 以微量滴定板为载体,将不同浓度的α1-PI与特定量的猪胰弹性蛋白酶(porcine pancreaselastase,PPE)混合,测定剩余的弹性蛋白酶催化特定底物的强度,判定样品中α1-PI的含量,通过比较不同浓度酶和底物的组合中标准曲线的线性范围,确定最佳反应条件。对优化的动态显色法进行准确度、精密度验证,并确定标准曲线的线性范围。采用优化后的方法对α1-PI制备工艺进行监控,并筛选冻干配方。结果PPE与底物的浓度选择分别为0.2 U/ml和1.2 mg/ml。该方法检测α1-PI的线性范围在2~14μg/ml之间,r>0.99。各浓度样品检测结果的CV均<4%,回收率在99.4%~104.3%之间,准确性较好;同一样品由同一个实验员在同一试验中连续测定6次的CV为1.8%,同一样品由不同的实验员在不同日期内分别测定3次的CV为1.8%,重复性较好。纯化工艺过程中各样品比活均符合《欧洲药典》规定的>0.7,总回收率为62.9%;筛选出可较好保护α1-PI活性的配方。结论 优化后的弹性蛋白酶动态显色法可用于工艺样品中α1-PI活性的检测。

    2015年04期 406-410页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • b型流感嗜血杆菌结合疫苗中蔗糖含量检测方法的建立及验证

    杨烨;廖丹;谢姗姗;李青耘;王静

    目的 建立测定b型流感嗜血杆菌结合疫苗中蔗糖含量的旋光法,并对方法进行验证。方法 建立旋光法,检测b型流感嗜血杆菌结合疫苗中的蔗糖含量,并对方法进行专属性、线性范围、重复性、准确性、耐用性和稳定性验证。结果b型流感嗜血杆菌结合疫苗中其他组分对蔗糖旋光度无干扰;蔗糖浓度在2~10 mg/ml范围内与旋光度具有良好的线性关系(r=0.999 998);重复测定供试品溶液6次,相对标准偏差(RSD)为0.46%;低、中、高浓度的供试品平均回收率分别为99.18%、99.14%、98.95%;温度在10~30℃范围内对旋光度无明显影响;样品于20℃放置5 h内旋光度无明显变化。结论 建立了旋光法检测b型流感嗜血杆菌结合疫苗中蔗糖含量的方法,该方法操作简单快速,在确定的限度范围内具有较好的专属性、重复性、准确性、耐用性和稳定性。

    2015年04期 411-413+417页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 重组抗表皮生长因子受体单克隆抗体生物学活性检测方法的建立

    刘培培;廖辉辉;刘伟旭;陈香;谭青乔

    目的 建立重组抗表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体生物学活性检测方法。方法 利用A-431细胞,对系列梯度稀释的重组抗EGFR单克隆抗体参考品和供试品进行检测,通过四参数方程进行拟合,计算二者的半数有效浓度(EC50)及供试品的相对比活性,并对该方法进行专属性、精密度(重复性、中间精密度)和准确度验证。结果 重组抗EGFR单克隆抗体供试品及参考品在该方法中均存在明显的量效关系,四参数拟合的曲线呈典型的反S型曲线。人IgG1亚型免疫球蛋白(阴性对照)与A-431细胞无交叉反应,不呈现与重组抗EGFR单克隆抗体供试品相似的剂量-反应曲线;同一名试验人员重复6次检测结果的RSD为5%,同一名试验人员3个工作日检测结果的RSD为4%,3名试验人员3次检测结果的RSD为10%,不同浓度的3个供试品溶液生物学活性理论值和检测值的相对误差分别为10%、8%和12%,均满足方法验证的可接受标准。结论 成功建立了重组抗EGFR单克隆抗体生物学活性检测方法,该方法专属性较强,精密度良好,准确度较高,可作为重组抗EGFR单克隆抗体生物学活性的常规检测方法。

    2015年04期 414-417页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 测定过氧化氢酶活性的分光光度法的建立及验证

    廖丹;杨烨;李青耘;谢姗姗;王静

    目的 建立测定23价肺炎球菌多糖疫苗的关键原辅材料—过氧化氢酶活性的方法,并进行验证。方法 分别采用高锰酸钾滴定法和紫外分光光度法测定过氧化氢酶活性,并对紫外分光光度法进行重复性、日间精密度、不同人员间精密度、耐用性、线性验证。结果 两批样品重复测定6次结果的RSD均<5%;两批样品两名检测人员3日内的检测结果以及两批样品不同工作日间的检测结果差异均无统计学意义(P>0.05),样品日间和人员间检测结果的RSD均<5%;在20~30℃温度范围内该方法耐用性良好,在pH 7.0~7.5范围内耐用性良好;该方法在样品浓度为0.2~1.6μl/ml之间的线性关系良好。结论 分光光度法重复性、日间精密度、不同人员间精密度良好,且操作简便,结果可靠,适用于过氧化氢酶的质量控制。

    2015年04期 418-421+425页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 检测鹿新孢子虫感染的双抗夹心Dot-ELISA方法的建立及其应用

    田来明;杨滨僮;李智鹏;张桐嘉;宫鹏涛;李建华;王全楷;杨举;李赫;张西臣

    目的 建立检测鹿新孢子虫感染的双抗夹心Dot-ELISA方法,并进行初步应用。方法 以双抗夹心ELISA方法的A490值对应Dot-ELISA方法显色结果的方式,建立双抗夹心Dot-ELISA方法检测结果判定标准,确定HRP标记的抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体1H11、包被抗体(抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体1A1)、待测血清的最佳工作浓度,并对该方法的特异性、重复性及灵敏度进行验证。用建立的方法检测79份鹿血清,并与双抗夹心ELISA方法进行比较。结果 确定该方法HRP-H11抗体的最佳稀释度为1:100,包被抗体最适工作浓度为0.3μg/片,待测血清稀释度为1:8。自然感染犬新孢子虫的鹿阳性血清的敏感性稀释度为1:64,与弓形虫阳性血清无交叉反应,敏感性、特异性较强;自然感染新孢子虫的鹿阳性血清3次检测结果重复性较好。该方法检测的76份鹿血清中,阳性12份,阳性率为15.2%,与双抗夹心ELISA方法检测结果一致。结论 建立的双抗夹心Dot-ELISA方法可用于检测鹿群感染新孢子虫循环抗原,为新孢子虫病的诊断提供了新的方法。

    2015年04期 422-425页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 病毒灭活血浆中MB残留量检测

    杨春晖;边国慧;阳红;梁启忠;周群刚;李长清

    目的 检测病毒灭活处理血浆中亚甲蓝(methylene blue,MB)残留量。方法 将4家采供血机构(A、B、C、D)提供的血浆样品经2个不同型号的一次性病毒灭活装置处理后,采用固相萃取方法分别提取病毒灭活血浆及标准品中MB,利用高效液相色谱法检测MB含量。结果4家采供血机构病毒灭活血浆MB平均残留量分别为(0.29±0.11)、(0.26±0.09)、(0.09±0.03)和(0.10±0.02)μmol/L。两种不同型号滤器对MB的滤除率分别为91%和73%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 目前我国病毒灭活血浆中MB残留量基本符合质量要求,但不同的采供血机构及不同滤器处理的血浆样品间MB残留量仍存在明显差异。

    2015年04期 426-428+437页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 核酸适体筛选方法的研究进展

    徐龙峰;王丽

    核酸适体是能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合的寡核苷酸序列,可识别的靶分子范围非常广,理论上自然界存在的任何物质均可通过指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术,筛选到其相应的核酸适体。近年来,在传统SELEX技术的基础上,新的SELEX技术不断出现,如毛细管电泳SELEX(capillary electrophoresis SELEX,CE-SELEX)、荧光磁珠SELEX(FluMag SELEX)、自动化SELEX(auto原mated SELEX)、细胞-SELEX(cell-SELEX)、消减SELEX(subtractive SELEX)技术等。这些新技术的出现,在不断完善SELEX技术的同时,也极大地推动了适体技术在各学科领域中的发展及应用。本文对核酸适体的筛选方法进行了总结和展望,为核酸适体的筛选提供了参考。

    2015年04期 429-433页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 2001~2010年桂平市狂犬病流行趋势分析

    易铭友;余翠霞

    2015年04期 434-437页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 白喉相关疫苗关键质量参数的比较

    董国霞;田霖;谭亚军;侯启明;马霄

    2015年04期 438-440页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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