中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 以白喉毒素无毒变异体蛋白CRM197和破伤风类毒素为载体的Y群脑膜炎球菌多糖结合物对小鼠的免疫原性

    陈玉秋;张梦霏;何建东;陶佳明;范荣坤;李福有;白锐琼;黄镇;

    目的探讨以天然白喉毒素无毒变异体蛋白CRM197和破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)为载体的Y群脑膜炎球菌多糖(group Y meningococcal polysaccharide,MenYPS)结合蛋白对小鼠的免疫原性。方法将MenYPS用1,6-己二酰肼(1,6-adipic acid dihydrazide,ADH)进行衍生,制备MenYps-ADH衍生物,将MenYPS-ADH衍生物在碳二亚胺[N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDAC]的作用下,分别与CRM197和TT共价结合,制备3批MenYPS-CRM197和MenYPS-TT结合物,采用琼脂双扩散法检测结合物中多糖抗原的血清型特异性。经BALB/c小鼠大腿内侧皮下注射制备的衍生物及结合物,2.5μg/只,0、14、28 d各免疫1次,分别于第7、21和35天经小鼠眼眶采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清GMT。参考《中国生物制品规程》(2000版)进行无菌试验及异常毒性试验。结果制备的3批MenYPS-CRM197和MenYPS-TT结合物可与MenYPS诊断血清产生沉淀线。MenYPSTT和MenYPS-CRM197免疫小鼠3次后,均产生较高的滴度,MenYPS-TT和MenYPS-CRM197结合物第2、3次免疫小鼠后产生的GMT均明显高于MenYPS-ADH衍生物,差异有统计学意义(P均<0.05),而两种结合物GMT差异无统计学意义(P均>0.05);MenYPS-TT和MenYPS-CRM197结合物第2次免疫后产生的GMT均明显高于第1次免疫后,第3次免疫后明显高于第2次免疫后,差异均有统计学意义(P均<0.01)。无菌试验符合《中国生物制品规程》(2000版)相关要求;异常毒性试验中,豚鼠和小鼠观察7 d后,均无异常反应,体重增加,无死亡。结论 MenYPS与CRM197和TT的结合物均能诱导BALB/c小鼠产生较高的抗体水平,且产生了免疫记忆。

    2014年04期 v.27 441-443+447页 [查看摘要][在线阅读][下载 232K]
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  • 非限制性核酸内切酶对狂犬病疫苗中Vero细胞DNA的去除作用

    崔燕平;何荣;戚凤春;何晓燕;陈坤;任国辉;汤峰;徐琳;周佳丽;

    目的评价非限制性核酸内切酶对狂犬病疫苗中Vero细胞DNA的去除效果。方法将不同终浓度的Benzonase非限制性核酸内切酶加入狂犬病病毒收获液中,在PBS或Tris两种缓冲体系下,以不同温度酶解不同时间,经分子筛层析纯化后,采用罗氏Ⅱ型高效地高辛DNA标记和检测试剂盒检测狂犬病病毒收获液中DNA的残留量,用确定的酶处理条件,采用酶检测试剂盒检测狂犬病病毒收获液中非限制性核酸内切酶的残留量,采用ELASA法检测抗原含量。结果非限制性核酸内切酶的处理浓度为50~90 U/ml,缓冲体系为PBS或Tris,经37℃处理2~3 h,转入18~26℃处理12~18 h酶解,再经分子筛层析纯化后,狂犬病病毒收获液中的Vero细胞DNA去除率在80%以上,病毒抗原回收率在75%以上;用确定的酶处理条件处理狂犬病病毒收获液,可使狂犬病病毒与Benzonase非限制性核酸内切酶完全分离。结论采用非限制性核酸内切酶可有效去除狂犬病疫苗中Vero细胞残留DNA。

    2014年04期 v.27 444-447页 [查看摘要][在线阅读][下载 244K]
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基础研究

  • 利用翻译延伸因子1-α启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒16L1蛋白

    金晓媚;姚宇峰;黄惟巍;杨旭;孙文佳;刘存宝;龙琼;马雁冰;

    目的利用翻译延伸因子1-α(translation elongation factor 1-α,TEF1-α)启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)16 L1蛋白。方法从毕赤酵母GS115中扩增组成型TEF1-α启动子(PTEF1-α)基因,通过基因重组替换商业化表达质粒pPink-HC和pPink-LC的启动子PAOX1;在PTEF1-α下游分别克隆绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和HPV 16 L1基因,构建重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1;将重组质粒电转化感受态毕赤酵母PichiaPink strain 1,培养不同时间后,荧光显微镜下观察GFP的表达;分别在YPD、YPG、YPM、YPSor培养基中培养pTEF-16 L1转化菌,检测菌体在不同培养基中的增殖情况;Western blot检测HPV 16 L1蛋白的表达水平。结果重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1经双酶切鉴定和序列分析表明构建正确;荧光显微镜检测显示,在不同培养时间PTEF1-α指导了GFP的成功表达,且表达量随培养时间的延长而降低;重组毕赤酵母在YPD和YPG培养基中生长迅速;4种培养基中均有HPV 16 L1蛋白的特异性表达,且在YPG和YPSor培养基中获得了HPV 16 L1蛋白较持续的表达。结论成功实现了组成型启动子PTEF1-α控制的HPV16 L1蛋白的表达,为HPV疫苗的低成本及方便生产提供了一个可供选择的有效方案。

    2014年04期 v.27 448-452+457页 [查看摘要][在线阅读][下载 428K]
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  • 混菌共培养发酵产物对胃腺癌SGC-7901细胞的体外抑制作用

    卢存龙;张园园;刘爱民;高娜;杨超;程双怀;

    目的探讨巨大芽胞杆菌(Bacillus megaterium)和蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)分别与金针菇(Flammulina velutiper)共培养发酵产物对胃腺癌SGC-7901细胞的体外抑制作用。方法将金针菇接种于固体发酵培养基(啤酒糟、甘蔗渣和梨渣的比例为5∶4∶1)中培养5 d,再分别接种巨大芽胞杆菌和蜡样芽胞杆菌发酵培养5 d,提取发酵产物,MTT法检测发酵产物对SGC-7901细胞的体外抑制作用。结果巨大芽胞杆菌和金针菇共发酵产物经121℃处理后,对SGC-7901细胞的抑制率为77.75%;蜡样芽胞杆菌与金针菇的发酵产物经121℃处理后,对SGC-7901细胞的抑制率为78.88%,分别比巨大芽胞杆菌和蜡样芽胞杆菌单独培养的固体发酵产物经121℃处理后的抑制率提高了11.45倍和13.04倍,比金针菇单独培养的固体发酵产物经121℃处理后对SGC-7901细胞的抑制率(52.02%)分别提高了49.46%和51.63%。结论巨大芽胞杆菌和蜡样芽胞杆菌分别与金针菇共培养的发酵产物对胃腺癌SGC-7901细胞具有较高的抑制作用,为抗肿瘤药物的筛选及指导临床应用开辟了更广阔的前景。

    2014年04期 v.27 453-457页 [查看摘要][在线阅读][下载 327K]
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  • 甲型副伤寒沙门菌噬菌体的分离及其生物学特性的分析

    毛普加;冯金;洪愉;黄芬;井申荣;曾韦锟;

    目的分离甲型副伤寒沙门菌(副甲菌)噬菌体(副甲噬菌体),并分析其生物学特性。方法从昆明某医院污水中分离副甲噬菌体,并采用噬斑形成法检测其滴度;透射电镜下观察浓缩纯化后的副甲噬菌体形态;分析副甲噬菌体对不同pH(1~12)和不同温度(40、50、60、70、80℃)作用的敏感性;培养副甲菌和副甲噬菌体,以不同培养时间为横坐标,对应的噬菌体滴度为纵坐标,绘制一步生长曲线,并测定爆发量、最佳MOI及副甲菌突变率;提取副甲噬菌体基因组,酶切分析副甲噬菌体核酸,SDS-PAGE分析副甲噬菌体外壳蛋白;采用热酚法提取脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),采用苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)法提取外膜蛋白(outer membrane protein,OMP),初步分析副甲噬菌体的受体。结果在医院的污水中分离出的副甲噬菌体,经双层平板计数可见大小不一、透明的噬斑,滴度在109~1010 PFU之间,透射电镜观察可见长尾和一个头部;副甲噬菌体在pH值3~10之间滴度较高,40℃以上,随温度上升滴度明显降低,在80℃几乎无活性副甲噬菌体存在;副甲噬菌体感染潜伏期为20 min,爆发期为50 min,爆发量129,最佳MOI为0.2,副甲菌突变率为5.8×10-7~2.2×10-6;副甲噬菌体基因组的单酶切产物均可见33 bp的特异条带,SDS-PAGE分析可见4条主带;LPS、OMP能与副甲噬菌体结合,是副甲噬菌体的受体。结论副甲噬菌体为长尾噬菌体,基因组为dsDNA,大小为33 bp,最佳MOI为0.2,受体位点为LPS和OMP。

    2014年04期 v.27 458-462+466页 [查看摘要][在线阅读][下载 445K]
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  • 两种佐剂甘草酸二铵和苦参素对甲型肝炎病毒抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响

    王霄;罗婷;李虹娟;段志青;王陈芸;王海漩;胡云章;胡凝珠;

    目的探讨两种佐剂甘草酸二铵和苦参素对甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将两种佐剂均按低(100μg)、中(500μg)、高(1 mg)3个剂量,分别与18 EU HAV抗原混合,免疫ICR小鼠,并设生理盐水对照组(生理盐水200μl)、HAV抗原对照组(HAV抗原18 EU)和铝佐剂对照组(HAV抗原18 EU+铝佐剂300μg),共9组,均经腹部皮下多点注射,共免疫1次。分别于免疫后第4、8、12、16周采血,分离血清,采用ELISA法检测抗-HAV IgG抗体水平。免疫后第16周处死小鼠,分别取甘草酸二铵和苦参素最佳剂量组及生理盐水对照组小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织,进行病理观察。结果免疫后第4、8、12、16周,除生理盐水对照组外,其他各组小鼠血清中均可检测到抗-HAV IgG抗体,且抗体水平除甘草酸二铵中剂量组和苦参素低剂量组外,均在第8周达峰值;甘草酸二铵各剂量组小鼠的血清抗体水平均明显高于HAV抗原对照组(P<0.05),其中甘草酸二铵低剂量组的抗体水平最高,且在第8周时超过铝佐剂对照组;苦参素各剂量组小鼠免疫后各周血清抗-HAV IgG抗体水平均显著高于HAV抗原对照组(P<0.05),其中苦参素低剂量组抗体水平最高,其抗体水平在第12周达峰值。实验期间,各组小鼠均未出现异常表现,各组织均未发现病理改变。结论甘草酸二铵和苦参素均能明显增强HAV抗原诱导小鼠体液免疫应答的水平,具有成为新型疫苗佐剂的研发价值。

    2014年04期 v.27 463-466页 [查看摘要][在线阅读][下载 451K]
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  • 吉林省汉坦病毒宿主动物携带病毒的遗传进化分析

    范胜涛;高晓龙;李元果;应瑛;国娇;张钊伟;刘红;吴静;杨松涛;赵永坤;秦川;高玉伟;夏咸柱;

    目的对吉林省汉坦病毒(Hantavirus,HV)宿主动物携带病毒进行遗传进化分析。方法采集吉林省不同地区鼠肺样品,应用间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定出HV感染的阳性样本,利用Trizol试剂提取病毒RNA,RT-PCR法扩增阳性样本中M和S片段基因,并进行测序,应用DNASTAR软件对M和S片段基因的核苷酸同源性进行分析,并与汉城病毒(Seoul virus,SEOV)参考株进行比较;利用MegAligh软件进行蛋白序列中氨基酸差异性分析;利用MEGA 5.0软件进行系统发生分析。结果共捕获719只啮齿动物,其中褐家鼠(R.norvegicus)555只,黑线姬鼠(A.agrarius)74只,小家鼠(M.musculus)90只,HV抗原阳性率为1.39%(10/719);10份阳性样本中,7份来自褐家鼠,2份来自小家鼠,1份来自黑线姬鼠。用全长S引物扩增得到的10株病毒全长S基因片段,经同源性分析比较发现,各序列间的核苷酸同源性在92.8%~95.1%之间,与其他SEOV核苷酸同源性在90.2%~94.7%之间;用M引物扩增得到的部分基因片段,经同源性分析比较发现,各序列间的核苷酸同源性在96.5%~99.5%之间,而与其他SEOV核苷酸同源性在91.5%~97.7%之间;10株病毒全部属于SEOV。黑线姬鼠G蛋白365~769位点间有5个氨基酸差异位点(V494L、C546S、Y626C、M630L和V637I),小家鼠G蛋白365~769位点间主要有5个氨基酸差异位点(C378G/R、F420L、Q436P/R、E535G/A和C589G/W),但同种间在378、436、535和589位点也有差异;黑线姬鼠N蛋白1~430位点间存在P298L变异;小家鼠N蛋白变异位点较多,主要在M24K/N、A37D、I140M、M173K、D192E、L219V、P229A、D237E、H265Y、V284L、T333S、A389G和V425E变异。分离得到的10株病毒根据不同的来源地可分为两个不同的进化分支。结论研究表明吉林省宿主动物携带的HV仍以SEOV为主,其遗传进化呈现多样性。

    2014年04期 v.27 467-471+475页 [查看摘要][在线阅读][下载 473K]
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  • 甲磺酸去铁胺佐剂对甲型肝炎病毒抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响

    罗婷;李虹娟;王霄;段志青;李萍;王海漩;胡凝珠;胡云章;

    目的探讨甲磺酸去铁胺(deferoxamine,DFO)佐剂对甲型肝炎病毒(hepatitis A virus antigen,HAV)抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将不同剂量的DFO(0.6、1、4、8 mg)佐剂分别与HAV抗原18 EU混合,免疫ICR小鼠,并设生理盐水对照组(生理盐水200μl)、HAV抗原对照组(HAV 18 EU)、铝佐剂对照组(铝佐剂300μg+HAV抗原18 EU)和复合佐剂组(HAV抗原18 EU+DFO 1 mg+铝佐剂150μg),均经腹部皮下多点注射,0.2 ml/只,共免疫1次。分别于免疫后第4、8、12、16周,采用间接ELISA法检测小鼠血清中抗-HAV IgG水平,并进行安全性试验。结果除生理盐水对照组外,其他各组小鼠血清在各时间点均能检测到抗-HAV IgG;除DFO 0.6 mg组外,抗体滴度均在第8周达峰值;不同剂量DFO组的抗体水平均明显高于HAV抗原对照组,其中DFO 4 mg和8 mg组在8~16周时抗体水平显著高于HAV抗原对照组,且差异有统计学意义(P<0.05),但与铝佐剂对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);在8~16周时,同一时间DFO 4 mg、DFO 8 mg和复合佐剂组的抗体水平较高,并能维持较长时间,至第16周时仍能达到与铝佐剂对照组相当的水平。结论 DFO佐剂能显著增强HAV抗原诱导小鼠的体液免疫应答,有望开发为一种可替代铝佐剂的新型佐剂。

    2014年04期 v.27 472-475页 [查看摘要][在线阅读][下载 447K]
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  • 旋毛虫与肝癌细胞相关基因CK-1的原核表达及鉴定

    左绍志;张桐嘉;常乐;杨滨僮;宫鹏涛;李建华;杨举;李赫;张国才;张西臣;

    目的原核表达旋毛虫与肝癌细胞相关基因CK-1,并进行鉴定。方法以旋毛虫cDNA为模板,PCR扩增CK-1基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-CK-1,转化感受态大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG分别诱导表达3、4、5 h,表达产物进行12%SDS-PAGE分析。以纯化的旋毛虫肌幼虫免疫小鼠制备鼠抗旋毛虫肌幼虫阳性血清,以H7402细胞免疫小鼠制备鼠抗H7402全细胞蛋白阳性血清,以重组CK-1蛋白免疫小鼠制备鼠抗CK-1蛋白阳性血清,分别以其作为一抗,进行Western blot鉴定。结果重组表达质粒pET-28a(+)-CK-1经双酶切及测序鉴定证明构建正确;IPTG最佳诱导时间为4 h,表达的重组CK-1蛋白以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的37.5%;重组CK-1蛋白可被鼠抗旋毛虫肌幼虫阳性血清和鼠抗H7402全细胞蛋白阳性血清识别,鼠抗CK-1蛋白阳性血清可识别旋毛虫肌幼虫蛋白和H7402全细胞蛋白,在相对分子质量38 500处均可见特异性条带,表明重组CK-1蛋白是一个交叉抗原,且具有良好的反应原性。结论原核表达了旋毛虫CK-1基因,为进一步研究旋毛虫的抗肿瘤效应奠定了基础。

    2014年04期 v.27 476-479+483页 [查看摘要][在线阅读][下载 406K]
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  • 3种免疫调节性寡聚脱氧核苷酸佐剂体外免疫活性的比较

    张梦霏;王丽丽;丁敏;李伟;周长征;徐娅妮;李镭;魏云林;杨喆;

    目的比较用于乙型肝炎疫苗的3种寡聚脱氧核苷酸(CpG-oligodeoxynueleotide,CpG ODN)佐剂体外的免疫活性。方法分别将CpG ODN 684(沃森公司)、CpG ODN 1018(Dynavax公司)和CpG ODN 7909(Coley公司)序列体外刺激免疫人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)和人树突状细胞系GEN,采用氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法检测人PBMC增殖活力,ELISA法检测GEN细胞中IL-6和IFNα水平。结果 CpG ODN 7909、CpG ODN 1018和CpG ODN 684诱导人PBMC的增殖水平明显高于未刺激的对照组,差异有统计学意义(P<0.000 1),其中CpG ODN 684和CpG ODN 7909序列诱导人PBMC的增殖水平相似,略高于CpG ODN 1018序列;3种CpG ODN在体外对免疫细胞均具有明显的活化作用,其中CpG ODN 684和CpG ODN 7909序列体外活化免疫细胞产生的IL-6和IFNα水平相似,但高于CpG ODN 1018序列。结论沃森公司CpG ODN 684序列体外活化免疫细胞功能与Coley公司CpG ODN 7909序列相似,略优于Dynavax公司CpG ODN 1018序列。

    2014年04期 v.27 480-483页 [查看摘要][在线阅读][下载 427K]
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  • 小脑症1基因过表达对人肺癌细胞A549凋亡的影响

    张冀;吴晓彬;麦力;袁成福;刘革力;易发平;卜友泉;宋方洲;

    目的探讨小脑症1(microcephalin 1,MCPH1)基因过表达对人肺癌细胞A549凋亡的影响。方法将质粒pcDNA3.1(-)/MCPH1转染肺癌细胞株A549,并设阴性对照组[pcDNA3.1(-)质粒转染]和未转染组。转染48 h后,采用qRT-PCR法检测各组细胞中MCPH1基因mRNA的转录水平;转染72 h后,Western blot法检测各组细胞中MCPH1蛋白的表达水平,流式细胞术分析细胞的凋亡情况。结果质粒pcDNA3.1(-)/MCPH1转染A549细胞后,均可明显上调细胞中MCPH1基因mRNA和蛋白的表达,与阴性对照组和未转染组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);质粒pcDNA3.1(-)/MCPH1转染组细胞凋亡率[(16.82±1.29)%]较阴性对照组[(6.27±0.88)%]和未转染组[(5.36±0.43)%]明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MCPH1过表达后可明显促进A549细胞的凋亡,为进一步研究MCPH1基因在肺癌细胞凋亡中的作用及其机制奠定了基础。

    2014年04期 v.27 484-487页 [查看摘要][在线阅读][下载 453K]
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  • 重组毒素rCCK8PE38的构建、表达及其细胞杀伤活性

    高世奇;宋杰;胡盼;冯小丽;佟伟华;柳增善;

    目的在大肠埃希菌中表达重组毒素rCCK8PE38,并检测其对结肠癌细胞的杀伤活性。方法采用分子生物学技术将反向翻译的8肽胆囊收缩素(cholecystokinin8,CCK8)与绿脓杆菌外毒素(pseudomonas exotoxin,PE)38基因融合,构建重组表达质粒pET-rCCK8PE38,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。通过细胞杀伤试验检测表达的重组毒素rCCK8PE38对结肠癌细胞、其他癌细胞系和一些正常细胞的杀伤活性。结果重组表达质粒pET-rCCK8PE38经双酶切证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为40 000,表达量约占全菌总蛋白的40%;重组毒素rCCK8PE38对结肠癌细胞HCT-8有明显的杀伤效果,对其他癌细胞系和正常细胞无杀伤活性。结论成功在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达了重组毒素rCCK8PE38,其可高效特异地识别并杀伤结肠癌细胞HCT-8。

    2014年04期 v.27 488-491页 [查看摘要][在线阅读][下载 434K]
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  • 籽鹅卵泡颗粒细胞α-烯醇化酶基因RNA干扰表达质粒的构建及鉴定

    张虹亮;计红;耿仁德;薛琳琳;杨焕民;王建发;司鸿飞;王慧;甘艺;

    目的构建籽鹅卵泡颗粒细胞α-烯醇化酶(α-enolase,ENO1)基因RNA干扰表达质粒,并进行鉴定。方法利用RNAi Designer等网络在线RNA干扰设计软件设计3条可能会干扰籽鹅卵泡颗粒细胞ENO1基因表达的插入DNA序列:shRNA-ENO1-350、shRNA-ENO1-892、shRNA-ENO1-591,将体外合成的3条干扰序列分别与线性化的pGPU6/GFP/Neo载体连接,构建ENO1 RNA干扰表达质粒,在Lipofectamine 2000的介导下转染原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞,转染48 h后,荧光倒置显微镜下观察GFP的表达;实时荧光定量PCR和Western blot法检测转染细胞中ENO1基因mRNA的水平及蛋白的表达水平。结果 pGPU6/GFP/Neo-shDNA重组质粒经单酶切及测序证实构建正确;转染后48 h,转染重组质粒的颗粒细胞在荧光倒置显微镜下可见较强的绿色荧光,转染效率可达60%;与培养液组、转染试剂组和无关序列干扰组(shNC)相比,shRNA-ENO1-350组颗粒细胞中ENO1基因mRNA水平和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),其他各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建了籽鹅卵泡颗粒细胞ENO1基因RNA干扰表达质粒,在原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞中,其表达量显著下降,为后续有关ENO1功能的研究奠定了基础。

    2014年04期 v.27 492-497页 [查看摘要][在线阅读][下载 580K]
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  • 人源细胞色素P450 2E1与细胞色素P450氧化还原酶的共表达

    徐彬彬;张海风;刘秀;赵勤;王俊平;单杰;

    目的利用大肠埃希菌(E.coli)表达系统异源表达细胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1,CYP2E1),并与细胞色素P450氧化还原酶(cytochrome P450 oxidoreductase,POR)实现共表达,使其具有代谢活性,为药物代谢的研究提供单一性的酶源。方法以人肝组织RNA为模板,RT-PCR扩增CYP2E1基因,插入pCW空载体,构建重组表达质粒pCW-2E1,转化E.coli DH5α,IPTG诱导表达,表达产物经Western blot鉴定;利用双启动子原理构建CYP2E1与POR共表达的重组质粒pCW-2E1-POR,采用对氨基苯酚法检测CYP2E1重组酶的代谢活性,并对不同培养时间(18、28、38 h)的代谢活性进行比较。结果质粒pCW-2E1经PCR鉴定,证明构建正确;表达的重组人CYP2E1蛋白相对分子质量约56 000,主要以可溶性形式表达。质粒pCW-2E1-POR经PCR及酶切鉴定,证明构建正确;导入质粒pCW-2E1-POR的重组菌提取的蛋白样品具有明显的代谢活性,培养18、28、38 h后,代谢活性均值分别为(0.195±0.004)、(0.189±0.003)和(0.192±0.004)nmol/(min·mg),差异无统计学意义(P>0.05),但与导入质粒pCW-2E1的重组菌提取的蛋白样品的代谢活性相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了具有代谢活性的CYP2E1重组酶,且3个培养时间段之间的代谢活性无明显差异。

    2014年04期 v.27 498-502页 [查看摘要][在线阅读][下载 499K]
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  • 内皮素-1对人子宫肌层成纤维细胞表型分化的影响

    段赵宁;唐良萏;牟晓玲;张婧;

    目的探讨内皮素-1(endothelin-1,ET-1)对人子宫肌层成纤维细胞向成肌纤维细胞转化的影响。方法原代培养人子宫肌层成纤维细胞,经免疫细胞化学法鉴定后,将细胞分为实验组和对照组,实验组分别以0.1、1、10、100 nmol/L ET-1作用24 h,另以10 nmol/L ET-1分别作用6、12、24、48 h,设未处理细胞作为对照,采用实时定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和Western blot法检测各组细胞α-SMA mRNA及蛋白的表达水平。结果人子宫肌层成纤维细胞的α-SMA蛋白染色呈阴性,波形蛋白染色呈阳性;不同浓度ET-1作用细胞24 h后,均可检测到α-SMA mRNA及蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),其中10 nmol/L ET-1实验组表达量最高,与0.1和1 nmol/L ET-1实验组相比,差异有统计学意义(P<0.05);经10 nmol/L ET-1作用不同时间的实验组,α-SMA mRNA及蛋白均有表达,与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05),其中以作用48 h实验组表达最高,与作用6、12、24 h实验组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 ET-1可促进子宫肌层成纤维细胞向成肌纤维细胞的转化。

    2014年04期 v.27 503-507页 [查看摘要][在线阅读][下载 485K]
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  • 科尔沁牛中性粒细胞防御素5的原核表达及纯化

    锡林高娃;陈鹏;乌日汗;吴金花;布日额;

    目的原核表达科尔沁牛中性粒细胞防御素5(bovine neutrophilβ-defensin 5,BNBD5),并进行纯化。方法用Trizol试剂提取牛外周血中性粒细胞总RNA,RT-PCR法扩增BNBD5的cDNA序列,与pMD18-T载体连接,构建重组克隆质粒pMD18-T-BNBD5,并进行测序,应用DNA Star生物分析软件对科尔沁牛BNBD5与其他物种(绵羊、山羊、驯鹿、家鼠、人类、鳜鱼、中华蜜蜂)β防御素的核苷酸序列进行同源性比较及进化树分析;对科尔沁牛与其他品种牛(新疆荷斯坦牛、印度水牛、荷兰弗里斯兰牛)β防御素的BNBD5核苷酸序列进行进行同源性比较及进化树分析;将构建正确的重组克隆质粒pMD18-T-BNBD5亚克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒pET-30a-BNBD5,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG诱导表达后,利用Ni离子亲和柱纯化,SDS-PAGE鉴定表达产物和纯化产物。结果通过PCR扩增获得了195 bp的BNBD5全长cDNA序列,为一个完整的开放阅读框(ORF),与GenBank中登录的BNBD5编码区序列(AJ278799)相似性达93.4%,推导该序列编码45个氨基酸残基,并含有防御素的特征性分子结构,即在特定位置上有6个保守的半胱氨酸残基;共有13处碱基出现突变,导致其推导的氨基酸序列出现8处变异,但6个保守型半胱氨酸位点均未出现变异。与其他物种的BNBD5核苷酸序列同源性分析表明,科尔沁牛与山羊、绵羊同源性最高,达80%以上;与中华蜜蜂同源性最低,在10%以下。与其他品种牛的BNBD5核苷酸序列同源性分析表明,科尔沁牛与新疆荷斯坦牛同源性最高,达90%以上;与荷兰弗里斯牛的同源性最低,约66%。质粒pET-30a-BNBD5经PCR及单双酶切鉴定证明构建正确,表达及纯化蛋白相对分子质量约10 000,主要以可溶性形式表达,表达量占菌体总蛋白的25.1%,纯化产物含量达2.15 mg/ml。结论成功表达并纯化了科尔沁牛BNBD5。

    2014年04期 v.27 508-512+518页 [查看摘要][在线阅读][下载 666K]
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  • 肝癌细胞上清液对成纤维细胞表达α-平滑肌肌动蛋白、环氧合酶-2和肝细胞生长因子的影响

    杜文俊;李德卫;谢言;

    目的观察小鼠肝癌细胞上清液对成纤维细胞增殖及表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的影响。方法制备小鼠成纤维细胞,并分别用普通培养液、小鼠肝癌细胞上清液的条件培养液及含转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的培养液培养成纤维细胞。采用MTT法检测3种培养液培养的成纤维细胞的增殖活力;RT-PCR和免疫组织化学法检测3种培养液培养的成纤维细胞中α-SMA、COX-2、HGF基因mRNA的转录水平及蛋白的表达情况。结果条件培养液及含TGF-β1的培养液对成纤维细胞的增殖均有促进作用,但条件培养液的促进作用更强。普通培养液培养的成纤维细胞在第5天时α-SMA基因mRNA的转录水平最高,含TGF-β1的培养液及条件培养液培养的成纤维细胞在第3天时α-SMA基因mRNA的转录水平最高,且明显高于普通培养液在第5天时的转录水平,第3天以后转录水平稳定;普通培养液培养的成纤维细胞中无COX-2和HGF转录;条件培养液及含TGF-β1的培养液培养的成纤维细胞在第5天时COX-2和HGF基因mRNA的转录水平最高,第5天后无明显下降。不同培养液培养的成纤维细胞中α-SMA蛋白在胞浆、胞膜均有不同程度的表达;普通培养液培养的成纤维细胞中COX-2和HGF蛋白不表达,而含TGF-β1的培养液及条件培养液培养的成纤维细胞中COX-2和HGF蛋白为阳性表达,表达部位均为胞浆。结论小鼠肝癌细胞上清液能有效、稳定地将成纤维细胞激活为稳定表达COX-2和HGF的肌成纤维细胞,其有望成为在细胞移植中促进移植细胞存活及血管重建的细胞。

    2014年04期 v.27 513-518页 [查看摘要][在线阅读][下载 613K]
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  • P4HB基因真核表达质粒的构建及在人肺腺癌A549细胞中的表达

    孙玲玲;林丽珠;周京旭;

    目的构建人P4HB基因真核表达质粒,并检测其在人肺腺癌A549细胞中的表达。方法采用RT-PCR法从正常人肝细胞HL7702中扩增P4HB基因片段,插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-P4HB,在脂质体LipofectamineTM 2000介导下转染A549细胞,通过G418加压筛选,建立稳定转染细胞系,通过qPCR和Western blot法检测转染细胞中P4HB基因mRNA的水平及蛋白的表达水平。结果重组真核表达质粒pcDNA3.1-P4HB经双酶切(BamHⅠ/EcoRⅠ)和测序证实构建正确;质粒pcDNA3.1-P4HB转染的A549细胞中P4HB基因mRNA的水平为空载体转染的细胞和未转染细胞的102倍;质粒pcDNA3.1-P4HB转染的A549细胞中P4HB蛋白的表达量(1.71)较未转染的A549细胞(1.11)明显升高。结论成功构建了P4HB基因真核表达质粒pcDNA3.1-P4HB,转染A549细胞后,P4HB基因在mRNA水平和蛋白水平均出现了较强的表达,表明P4HB基因已稳定转染入A549细胞中。本实验为进一步研究P4HB对人肺癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响奠定了基础。

    2014年04期 v.27 519-523页 [查看摘要][在线阅读][下载 533K]
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消息

  • 欢迎登录《中国生物制品学杂志》网站

    <正>尊敬的专家、读者、作者及各位同仁:您们好!自2007年8月起,《中国生物制品学杂志》网站(www.zgswj.com.cn,中文域名:中国生物制品学杂志.com)正式运行。本站网页有杂志简介、在线投稿、稿件查询、过期目录、广告合作等您所需要的信息,欢迎登录。

    2014年04期 v.27 523页 [查看摘要][在线阅读][下载 82K]
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基础研究

  • 大鼠抑郁行为的性差异与下丘脑-垂体-肾上腺轴功能及脑源性神经营养因子表达的相关性

    秦丽娟;汪丽佳;刘丹;刘任;周岐新;

    目的探讨慢性轻度不可预见性刺激(chronic unpredicted mild stress,CUMS)致大鼠抑郁行为的性差异与下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴(hypothalamic-pituitary-adrenalaxis,HPA)功能和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)表达的相关性。方法将60只SD大鼠(雌雄各半)经open-field法筛选后,随机分为雌性对照组(CF)、雄性对照组(CM)、雌性模型组(SF)及雄性模型组(SM),每组15只。CF和CM组5只/笼;SF组和SM组采用孤养及CUMS方式建立大鼠抑郁模型。通过高架迷宫和糖水消耗试验评价大鼠焦虑抑郁行为程度;放射免疫法检测大鼠血清中皮质酮(corticosterone,CORT)的含量;荧光定量PCR和Western blot法分别检测大鼠海马BDNF和下丘脑促肾上腺皮质激素释放因子(corticotropin-releasing factor,CRF)mRNA的转录水平和蛋白的表达水平。结果与CF和CM组相比,SF和SM组大鼠糖水偏爱率、进入高架迷宫开臂次数、向下探究次数和在开臂停留时间均显著减少(P<0.05),血清中CORT含量增高(P<0.01),海马BDNF mRNA的转录水平和蛋白表达水平显著下降(P<0.01),下丘脑CRF mRNA的转录水平和蛋白表达水平显著升高(P<0.05);SM组大鼠糖水偏爱率、进入高架迷宫开臂和闭臂次数、直立及向下探究次数、中央区停留时间、血清中CORT含量及下丘脑CRF mRNA的转录水平和蛋白表达水平均显著低于SF组(P<0.05),而在闭臂停留时间显著长于SF组(P<0.05)。结论 CUMS致大鼠焦虑抑郁行为的性别差异与HPA轴功能和BDNF表达有关,为进一步研究抑郁症的性别差异机制及寻找可能的防治措施提供了实验依据。

    2014年04期 v.27 524-528页 [查看摘要][在线阅读][下载 512K]
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  • 牛Ⅱ型链球菌vanB2基因真核表达质粒的构建及其在宫颈癌HeLa细胞中的表达

    刘燕;布日额;锡林高娃;白靓;

    目的构建牛Ⅱ型链球菌(Streptococcus bovis biotypeⅡ)van B2基因真核表达质粒,并在宫颈癌HeLa细胞中进行表达。方法以牛Ⅱ型链球菌基因组为模板,采用PCR法扩增van B2基因,克隆至真核表达载体pVAX-1中,构建重组表达质粒pVAX-1-van B2。采用FuGENE HD Transfection Reagent试剂盒将重组表达质粒转染HeLa细胞,转染48 h后,RT-PCR法检测转染细胞中van B2基因mRNA的转录;间接免疫荧光法和Western blot法检测转染细胞中van B2蛋白的表达。结果重组表达质粒pVAX-1-van B2经双酶切及测序鉴定构建正确;重组表达质粒转染HeLa细胞48 h后,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,RT-PCR及Western blot分析分别可见570 bp及相对分子质量20 900的目的条带。结论成功构建了牛Ⅱ型链球菌van B2基因的真核重组表达质粒,并在HeLa细胞中成功表达。本实验为进一步研究牛Ⅱ型链球菌对抗生素的耐药性机制及其与van B2基因的相关性奠定了基础。

    2014年04期 v.27 529-532页 [查看摘要][在线阅读][下载 466K]
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消息

  • 征稿

    <正>《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管,中华预防医学会和长春生物制品研究所有限责任公司主办,是中华预防医学会系列杂志之一,月刊。本刊主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床医学等方面的研究、生产、使用和质控等学术文章。在选择来稿时注

    2014年04期 v.27 532页 [查看摘要][在线阅读][下载 88K]
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基础研究

  • 低氧诱导因子-1α促进人甲状腺未分化癌FRO细胞侵袭转移的分子机制

    杨俊艳;王旎;刘智敏;董超然;刘小花;

    目的探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)对人甲状腺未分化癌FRO细胞侵袭转移的影响,并探讨其分子机制。方法用5%O2的低氧培养箱培养FRO细胞不同时间(0、2、4、8、12 h),倒置显微镜下观察细胞形态的变化,Western blot法检测细胞中上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关蛋白HIF-1α、Snail、E-cadherin、Vimentin、MMP2的表达;另设FRO细胞常氧组、HIF-1α特异性抑制剂3-(5’-羟甲基-2’-呋喃基)-1-苯甲基吲哚(YC-1)+常氧组、YC-1+低氧组、常氧+HIF-1α激活剂氯化钴(CoCl2)组,采用Western blot法检测各组细胞中HIF-1α和EMT相关蛋白的表达,Transwell侵袭和迁移试验检测各组细胞的侵袭和迁移能力。结果随着低氧培养时间的延长,FRO细胞逐渐发生间质样改变,低氧12 hHIF-1α、Snail、Vimentin、MMP2蛋白的表达量较0 h显著升高(P<0.01),上皮细胞特征性蛋白E-cadherin的表达持续降低(P<0.01)。YC-1+低氧组与低氧组比较,HIF-1α、Snail、Vimentin、MMP2蛋白的表达量显著降低(P<0.01),E-cadherin蛋白的表达量显著升高(P<0.05)。低氧组和常氧+CoCl2组与常氧组比较,HIF-1α蛋白的表达量显著升高(P<0.01);常氧+CoCl2组与常氧组比较,Snail、Vimentin、MMP2蛋白的表达量显著升高(P<0.01),E-cadherin蛋白的表达量显著降低(P<0.01);常氧+CoCl2组与低氧组比较,HIF-1α、Snail、Vimentin蛋白的表达量显著升高(P<0.01),E-cadherin蛋白的表达量显著降低(P<0.01),MMP2蛋白的表达量差异无统计学意义(P>0.05)。低氧组和常氧+CoCl2组的穿膜细胞数和迁移细胞数均较常氧组显著增多(P<0.01)。结论低氧使FRO细胞中HIF-1α高表达,HIF-1α可上调Snail、Vimentin和MMP2的表达,下调E-cadherin的表达,对FRO细胞的侵袭转移具有促进作用。

    2014年04期 v.27 533-537+543页 [查看摘要][在线阅读][下载 675K]
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治疗性制剂

  • 人参多糖对鼻咽癌细胞CNE-2裸鼠移植瘤的放疗增敏作用及其可能的机制

    范家铭;李静;姜蓉;王亚平;李春莉;黄江菊;

    目的探讨人参多糖(ginseng polysaccharide,GPS)对人鼻咽癌细胞CNE-2裸鼠移植瘤的放疗增敏作用及可能的机制。方法取对数生长期的鼻咽癌CNE-2细胞,经裸鼠背部皮下注射,1×107个/(0.2 ml·只),待瘤体最大径为4~6 mm时,取20只模型裸鼠,随机分为4组:对照组(经腹腔注射生理盐水)、放疗组(每次每只裸鼠经肿瘤局部给予5 Gy X射线照射,每3 d照射1次,共3次)、GPS组(经腹腔注射GPS,30 mg/kg,每次0.3 ml,每72 h给药1次,共5次)和GPS联合放疗组(经腹腔注射GPS,30 mg/kg,每次0.3 ml,每72 h给药1次,共5次;末次给药48 h后开始放疗,每只每次经肿瘤局部给予5 Gy X射线照射,每3 d照射1次,共3次)。开始给药3周后处死裸鼠,取瘤体,称重,测量肿瘤的长、短径,计算肿瘤体积及抑制率;HE染色观察移植瘤组织病理学改变;Real-time PCR检测移植瘤组织中β-catenin基因mRNA的转录水平;免疫组织化学和Western blot法检测移植瘤组织中β-catenin蛋白的表达水平。结果与对照组相比,GPS组、放疗组和GPS联合放疗组的肿瘤体积及瘤重均明显下降(P<0.05),抑制率分别为29.87%、52.60%和74.68%;镜下观察可见,GPS联合放疗组细胞凋亡明显,多数细胞核完全溶解,细胞结构消失,坏死的肿瘤组织呈现均质红染表现;GPS联合放疗组移植瘤中β-catenin mRNA及蛋白的表达水平均显著下降(P均<0.05)。结论 GPS可抑制CNE-2细胞在裸鼠体内的生长,且对鼻咽癌的放疗具有增敏作用,其机制可能与抑制β-catenin的表达有关。

    2014年04期 v.27 538-543页 [查看摘要][在线阅读][下载 593K]
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诊断制剂

  • adr和adw亚型HBsAg单克隆抗体的制备

    马锐;张国强;李津;张德有;王曦;张小刚;王远征;魏静;赵铠;

    目的制备adr和adw亚型乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)单克隆抗体,并用其区分两亚型HBsAg。方法利用杂交瘤细胞融合技术制备adr和adw亚型HBsAg单克隆抗体,采用间接ELISA法进行筛选;优化鉴别试验抗原包被剂量,并对HBsAg亚型鉴别试验进行验证。结果共获得抗两亚型HBsAg的单克隆抗体7株;鉴别试验抗原的最佳包被剂量为10μg;1H6和4D3株单抗检测2份编盲adw亚型HBsAg样品的adwA450/adrA450值均大于2,判定其为adw亚型;1E9株单抗检测2份编盲adr亚型HBsAg样品adrA450/adwA450值均大于2,判定其为adr亚型;3A5株单抗检测4份编盲样品的adrA450/adwA450值和adwA450/adrA450值均小于2,未能区分两亚型HBsAg。结论抗adr亚型单抗1E9株及抗adw亚型单抗1H6株和4D3株可用于adr亚型汉逊酵母乙肝疫苗研制过程中HBsAg亚型的鉴别。

    2014年04期 v.27 544-547页 [查看摘要][在线阅读][下载 434K]
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临床研究

  • 1993~2013年疫苗接种不良反应的文献分析

    张延炀;路明霞;王燕;叶莹;马雅婷;王长双;张肖肖;郭万申;

    <正>按科学的免疫程序,有计划地给儿童接种疫苗,对有效保障儿童健康起到了巨大的作用。但是,疫苗作为一种生物制品,对于接种疫苗的个体来说是一种异物,接种后有可能引起一系列的生理功能紊乱、病理变化及免疫反应[1],如未能得到足够关注和及时处置,不仅给受种者带来损害,还会影响公众对疫苗的信任,给计划免疫政策的实施带来阻力。本文在中国全文期刊数据库和万方数据库中,检索1993~2013年公开发表的疫苗接种后不良反应相关个案报道,从中提取发表年份、篇名、发表杂志名称、作者及其单位、接种疫苗种类、临床诊断、处理情况、病人转归,并将以上资料输入Excel软件,对文献及个案的分布特征进行科学严谨的分析,深入了解不良反应的类型及处置方法,为制定预防接种不良反应应对策略提供数据。现将结果报道如下。

    2014年04期 v.27 548-549页 [查看摘要][在线阅读][下载 245K]
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技术方法

  • 细胞工厂在制备口服脊髓灰质炎减毒活疫苗中的应用

    王红燕;张晋;金歌;佟丁丁;沈莉;郑小滨;柯伟华;

    目的采用细胞工厂替代转瓶培养Sabin株脊髓灰质炎病毒,制备脊髓灰质炎减毒活疫苗。方法用细胞工厂和15 L转瓶分别培养人二倍体细胞(2BS),扩增至36代后,分别接种0.20 MOI的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎工作代毒种,待细胞病变达100%时收获病毒液,加入保护剂(4.5 mol/L氯化镁溶液),制备单价疫苗,分别将Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3个型别的单价疫苗按照病毒数10∶1∶6的比例混匀,制备成三价疫苗半成品,分装入1 ml西林瓶中(每瓶为10人份剂量),即为疫苗成品。采用微量滴定法测定疫苗原液及成品的病毒滴度,同时进行其他各项检定,并考察疫苗成品的稳定性。结果采用相同的感染复数接种病毒,细胞工厂制备的3个型别疫苗原液的病毒滴度均高于转瓶制备的疫苗原液,Ⅰ型平均滴度高0.17 log10CCID50/ml,Ⅱ型平均滴度高0.33 log10CCID50/ml,Ⅲ型平均滴度高0.27 log10CCID50/ml;细胞工厂制备的疫苗成品3个型别的病毒滴度均高于转瓶制备的疫苗,三价疫苗的平均滴度均高于6.24 log10CCID50/ml,符合国内外标准;疫苗原液及疫苗成品的其他各项检定均合格;细胞工厂制备的3批疫苗成品于37℃放置2 d,疫苗的总病毒含量不低于6.24 log10CCID50/0.1 ml,且病毒滴度下降未超过0.5 log10CCID50/0.1 ml,于2~8℃放置9个月,疫苗的总病毒含量仍不低于6.24 log10CCID50/0.1 ml,均符合WHO的标准要求。结论利用细胞工厂替代转瓶培养2BS细胞制备脊髓灰质炎减毒活疫苗,可获得高于转瓶培养3个型别疫苗的滴度,且工艺稳定,质量可控,可用于规模化脊髓灰质炎减毒活疫苗的生产。

    2014年04期 v.27 550-554页 [查看摘要][在线阅读][下载 527K]
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消息

  • 欢迎参加2014中国(南京)国际生物医药产业博览会

    <正>近年来,我国生物医药产业蓬勃发展,国家《生物产业"十二五"规划》提出在"十二五"末,生物产业产值达到4万亿,其中生物医药产业产值达到3.6万亿。在《江苏省生物技术和新医药产业规划纲要(2009~2012年)》的指引下,江苏生物医药产业发展迅猛,多项产业指标均名列全国前茅。江苏省生物医药产业已形成泰州、连云港、南京、苏州、无锡、常州等六大产业基地,产值占全省总量的2/3。江苏省共承担国家重大新药创制专项项目154项,累计获新药证书的数量占全国1/6,新药研发的数量和质量都居全国前列,进入世界500强的13家制药企业已有10家落户江苏。

    2014年04期 v.27 554页 [查看摘要][在线阅读][下载 133K]
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技术方法

  • 磁珠分离结合定量PCR法检测单克隆抗体产品中CHO细胞DNA残留量

    王兰;李萌;郭玮;于传飞;高凯;

    目的利用磁珠分离法结合定量PCR技术,建立单克隆抗体产品中CHO细胞DNA残留量的检测方法,并进行验证及初步应用。方法通过磁珠分离法提取样品中的残留DNA,再利用Taqman探针法对样品和标准DNA进行定量PCR测定,根据标准曲线对样品中的DNA残留量进行分析。对建立的方法进行种属特异性、准确性及精密性验证,并对5个厂家15批单克隆抗体类产品中的残留DNA进行测定。结果该方法检测CHO细胞DNA残留的最低准确定量浓度可达1×10-3 pg/μl,DNA含量在1×10-3~102 pg/μl范围内曲线线性良好,标准曲线的相关系数为0.994;该方法能特异性地检测CHO细胞DNA,对其他种属的DNA无扩增反应;该方法检测不同DNA加标量样品的DNA回收率相近,均值均在90%以上,3次测定的相对标准偏差均小于20%,92.6%加标样品的DNA回收率在70%~130%之间;该方法检测15批单克隆抗体类产品的DNA残留量均小于100 pg/剂量,符合《中国药典》三部(2010版)有关CHO细胞残余DNA的要求。结论磁珠分离法可解决残留DNA检测中样品前处理的技术难点,定量PCR法能够简便、快速、准确地对不同工艺的单克隆抗体产品中CHO细胞DNA残留进行定量测定。

    2014年04期 v.27 555-558页 [查看摘要][在线阅读][下载 515K]
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  • 人血浆载脂蛋白AⅠ冻干品干热法灭活病毒的效果验证

    卞炯;何毅明;吴玮;刁武平;朱威;

    目的采用干热法对纯化的人血浆载脂蛋白AⅠ(apolipoprotein AⅠ,ApoAⅠ)冻干品进行病毒灭活处理,并对灭活效果进行验证。方法将脂包膜病毒伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、辛德毕斯(Sindbis)病毒及非脂包膜病毒脑心肌炎(encephalomyocarditis,EMC)病毒按1∶9(v∶v)的比例分别加至3批ApoAⅠ样品中,冻干后于水浴中(100±1)℃加热30 min灭活,分别于加热后5、10、20、30 min取样,检测病毒滴度,绘制病毒灭活动力学曲线,并检测干热法灭活病毒对目的蛋白理化性质及生物活性的影响。结果干热法对ApoAⅠ样品中的脂包膜和非脂包膜病毒均可有效灭活,灭活20 min后,3种指示病毒的滴度均迅速下降;干热法灭活后,冻干品的外观、复溶时间、复溶后澄明度、目的蛋白的平均回收率(95.44%)均符合要求,样品的SDS-PAGE、Western blot图谱、免疫电泳行为、二级结构和生物活性均无显著变化。结论干热法能有效灭活脂包膜和非脂包膜病毒;在ApoAⅠ纯化工艺中采用S/D法和干热法两步病毒灭活步骤,可保证制品的安全性。

    2014年04期 v.27 559-563页 [查看摘要][在线阅读][下载 549K]
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  • 大鼠脂肪干细胞两种培养方法的比较

    李婷;李勇;李晓东;

    目的采用组织块培养法和胶原酶消化法体外培养大鼠脂肪干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs),并对两种培养方法进行比较分析。方法分离SD大鼠腹股沟处脂肪组织,分别采用组织块培养法和胶原酶消化法获取ADSCs,并对其进行原代培养和传代培养,观察细胞形态,比较细胞的产量和增殖能力;分别用化学成脂诱导剂和化学成骨诱导剂诱导ADSCs分化,观察其分化情况,并计算成脂量。结果组织块培养法和胶原酶消化法培养ADSCs的成功率分别为79%和53%,获得的第4代ADSCs多为成纤维细胞样,长梭形或纺锤形,无形态学差异,传至第8代,细胞生长状态良好,传代后细胞性状均一,生物学特性稳定;培养第7天,组织块培养法每毫克脂肪组织获得的细胞产量高于胶原酶消化法,差异有统计学意义(P<0.05);第4代ADSCs生长曲线均为相似的"S"型,细胞倍增时间分别为96.56和95.84 h;ADSCs均可向脂肪细胞和骨细胞方向分化,培养第7天,两组间成脂量差异无统计学意义(P>0.05)。结论脂肪组织块培养法是更适合的体外获取ADSCs的方法。

    2014年04期 v.27 564-567页 [查看摘要][在线阅读][下载 457K]
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综述

  • 治疗性单克隆抗体表达载体的设计与优化策略

    安晨;毛晓燕;

    治疗性单克隆抗体的市场需求日益增长,因此如何分离得到高产的稳定表达细胞株及缩短研发过程成为此类研究的热点。在整个治疗性单克隆抗体的研发过程中,哺乳动物细胞表达载体的设计及其优化作为第一步就显得尤为重要。本文从基因转录水平的作用元件、作用方式、基因扩增与筛选标签及位置效应与整合位点的优化对治疗性单克隆抗体表达载体的设计与优化策略作一综述。

    2014年04期 v.27 568-573页 [查看摘要][在线阅读][下载 527K]
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  • 骨髓间充质干细胞在肾衰竭治疗方面的研究进展

    王海霞;赵巍;冯业童;刘朋飞;

    肾衰竭(kidney failure,KF)是临床常见肾脏疾病,常由肾毒性物质或肾脏严重缺血等因素引起,根据其发病时程,可进一步分为急性肾衰竭(acute kidney failure,AKF)和慢性肾衰竭(chronic kidney failure,CKF)。近年来,随着各项医疗技术的发展,许多疾病均得到了有效控制,但是,KF这种疾病尚未得到有效治疗,相关的死亡率也未得到明显改善,其发病率甚至有逐年增高的趋势。目前,相关研究表明,骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)对KF具有一定的治疗作用。本文就近年来BMSCs在KF治疗方面的研究进展作一综述。

    2014年04期 v.27 574-577页 [查看摘要][在线阅读][下载 463K]
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  • 血小板相关因子在血栓性疾病中的作用

    赵艳芳;刘琳;邬云红;

    血栓性疾病(thrombotic disease)已成为全球人类死亡的主要原因,每年约720万人死于该病。而血小板(blood platelet)的功能与血栓性疾病的发生发展密切相关,如血小板相关组织因子(tissue factor,TF)、Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)、血小板表面Fc受体γ链(Fc receptor gamma-chain)、平均血小板体积(mean platelet volume,MPV)、P选择素(p-selectin)、血小板膜糖蛋白V(glycoprotein V,GPV)以及血小板内皮细胞黏附分子-1(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1)等均参与血栓形成过程。本文就血小板相关因子在血栓性疾病中的作用作一综述,为临床心血管疾病的治疗提供参考。

    2014年04期 v.27 578-581页 [查看摘要][在线阅读][下载 441K]
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消息

  • 欢迎参加第16届上海国际生物技术与医药研讨会(BIO-FORUM 2014)

    <正>第16届上海国际生物技术与医药研讨会(BIO-FORUM2014)将于2014年5月22~24日在上海跨国采购会展中心继续举办。本届大会将邀请近100位生物技术与医药领域的国内外知名学者、企业高层、技术精英,以及来自各国政府监管机构、风险投资等领域的专家出席,就新药研发、临床研究、生物医学工程等领域内的新技术、新发展以及国际技术转移、成果转化、金融激励等进行交流、研讨,并开展项目推介与路演。近600位行业精英将共同参与。大会将由大会主题报告、专题分会、企业专题会、一对一配对、展览展示等多个活动组成。

    2014年04期 v.27 581页 [查看摘要][在线阅读][下载 139K]
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专题报道

  • 病毒性肝炎相关职业人群戊型肝炎疫苗认知度及接种意愿调查

    刘威;闵莉;张秋芬;

    <正>戊型病毒性肝炎(简称戊肝)是由戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)感染引起的急性病毒性肝炎。我国是戊肝高发地区,国家卫生和计划生育委员会传染病报告系统统计显示,我国戊肝发病人数呈明显上升趋势,2012年首次超过甲型肝炎,成为急性肝炎的第一大病因[1]。戊肝平均住院治疗费用在各类病毒性肝炎中最高(约2万元以上)[2],加重了患者的负担。在科技部、卫计委、教育部等各级领导的关心与支持下,2012年10月27日,全球首支戊肝疫苗在

    2014年04期 v.27 582-584页 [查看摘要][在线阅读][下载 409K]
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消息

  • 欢迎订阅《中国生物制品学杂志》

    <正>《中国生物制品学杂志》于1988年创刊,由中华人民共和国卫生部主管,系中华预防医学会系列杂志之一,为报道我国生物制品研究开发重大成果和最新进展的国内唯一生物制品专业学术期刊。主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床学等方面的研究、生产、使用和质控等学术文章。主要设有疫苗研究、基础研究、治疗性制剂、诊断制剂、临床研究、技术方法、研究简报、综述、述评、专题报道、会议快讯、消息等栏目。

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