中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 我国人用狂犬病疫苗株病毒糖蛋白生物信息学分析

    李加;曹守春;石磊泰;唐建蓉;田宏;高向东;董关木;

    目的测定我国人用狂犬病疫苗株4aGV、CTN-1V和PV2061株病毒糖蛋白G基因序列,并对其进行生物信息学分析。方法 RT-PCR扩增3株病毒糖蛋白G基因,分别克隆至pGEM-T载体中,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,进行测序。应用DNAstar MegAlign软件分析3株病毒糖蛋白的同源性,AntheProt 5.0及DNAstar Protean软件分析3株病毒糖蛋白的结构及潜在B细胞抗原表位的差异。结果 4aGV、CTN-1V和PV2061株病毒均属基因Ⅰ型狂犬病病毒;其糖蛋白G区基因同源性为76.0%~88.4%,G区ORF基因同源性为84.4%~91.5%,氨基酸序列同源性为90.5%~92.2%;3株病毒糖蛋白前19位氨基酸中均存在潜在信号肽结构,其中第19位氨基酸为三者潜在信号肽断裂位点,第17位氨基酸为4aGV株病毒糖蛋白潜在信号肽断裂位点;3株病毒糖蛋白分别在第463~476、464~475及463~475位氨基酸存在潜在可折叠螺旋的疏水性区域,为明显跨膜区域;4aGV、CTN-1V和PV2061株病毒糖蛋白氨基酸残基均富含潜在α螺旋、β折叠及卷曲结构,其比例分别为30%、31%、39%,28%、30%、41%和29%、30%、41%,易发生扭曲、折叠,形成丰富的二级结构;3株病毒糖蛋白潜在B细胞抗原表位位置与数量相似。结论已对3株人用狂犬病疫苗株G基因进行了全面生物信息学分析,为完善我国人用狂犬病疫苗生产用毒种的质控标准提供了支持。

    2012年03期 v.25 257-261页 [查看摘要][在线阅读][下载 409K]
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  • 两株灭活轮状病毒疫苗的免疫效果

    吴晋元;易山;张光明;李鸿钧;谢天宏;李思成;郜岩;贾琴妹;杨星;赵晓南;孙茂盛;

    目的研究轮状病毒(Rotavirus,RV)P[8]G1和P[2]G3株灭活疫苗的免疫原性及不同血清型间的交叉识别作用。方法采用Vero细胞转瓶培养RV,经纯化灭活、佐剂吸附等工艺,制备RV P[8]G1和P[2]G3株灭活疫苗,分别经肌内免疫Wistar大鼠和猕猴,采用ELISA法和微量病毒中和试验检测大鼠和猕猴血清中RV特异性抗体效价和中和抗体效价,流式细胞术检测猕猴血液中CD4+和CD8+T细胞的数量。结果 P[8]G1和P[2]G3株疫苗样品的RV抗原含量分别为10 240和5 120 EU/ml;免疫2次后,P[8]G1和P[2]G3株疫苗诱导大鼠产生的血清IgG抗体GMT分别为(43 407.71±1 654.51)和(41 520.61±2 047.61),诱导猕猴产生的血清IgG抗体GMT分别为(13 654.45±3 125.27)和(10 350.68±997.83);单一血清型疫苗免疫后产生的中和抗体具有型间交叉识别作用;2株疫苗免疫猕猴后均能刺激其CD4+T淋巴细胞增殖,CD8+T淋巴细胞无明显变化。结论 2株RV灭活疫苗均具有良好的免疫原性及型间交叉识别作用。

    2012年03期 v.25 262-265页 [查看摘要][在线阅读][下载 319K]
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  • 斯氏艾美耳球虫兰州株Rhomboid基因的克隆及原核表达

    曲晗;宫鹏涛;张西臣;张国才;杨举;李赫;李建华;

    目的克隆并原核表达斯氏艾美耳球虫(Eimeria stiedai,E.stiedai)兰州株Rhomboid基因。方法通过分析基因保守区设计引物,采用RT-PCR方法与3′RACE技术相结合,扩增获得兔斯氏艾美耳球虫Rhomboid基因cDNA全序列,并对其进行序列分析;将获得的Rhomboid基因克隆至原核表达载体pET-28a中,转化E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果 Rhomboid基因开放阅读框全长774 bp,编码257个氨基酸残基,预测蛋白质相对分子质量和等电点分别为28 120和8.64,与鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tellan)Rhomboid蛋白氨基酸序列的同源性为84.44%;构建的重组原核表达质粒pET-Rhomboid经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为29 000,并可与兔抗E.stiedai阳性血清发生特异性反应。结论成功克隆并表达了Rhomboid基因,为其生物学功能及以其作为斯氏艾美耳球虫疫苗候选基因的研究奠定了基础。

    2012年03期 v.25 266-269页 [查看摘要][在线阅读][下载 280K]
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  • 气单胞菌二联灭活疫苗生产工艺的初步建立

    陶家发;任燕;罗霞;赖迎迢;康光辉;张悠;石存斌;吴淑勤;

    目的初步建立嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和温和气单胞菌(Aeromonas sobria)二联灭活疫苗的生产工艺。方法用50 L发酵罐培养嗜水气单胞菌和温和气单胞菌,确定发酵培养时间、甲醛灭活浓度及与佐剂乳化比例,对制备的疫苗进行质量检测,并分析佐剂与无佐剂二联灭活疫苗的免疫效果。结果 50 L发酵罐培养嗜水气单胞菌和温和气单胞菌菌株10~12 h时,A650值达峰值;0.3%的甲醛于37℃灭活24 h,可完全灭活菌液;以灭活菌液与佐剂1∶1.5比例混合较合适;制备的佐剂二联灭活疫苗各项质量指标均合格,免疫保护效果优于无佐剂二联灭活疫苗。结论已初步建立嗜水气单胞菌和温和气单胞菌二联灭活疫苗的生产工艺。

    2012年03期 v.25 270-272页 [查看摘要][在线阅读][下载 144K]
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  • 重组人B7-H1IgV工程菌生物学特性的稳定性

    陈霖;李伯安;毛远丽;张伟;张英起;

    目的检测重组人B7-H1IgV(rhB7-H1)工程菌生物学特性的稳定性。方法将重组质粒pQE30-B7-H1IgV转化的大肠杆菌rhB7-H1/DH5α工程菌连续传代50代,每隔10代进行工程菌B7-H1IgV蛋白表达量检测、扫描电镜观察、革兰染色、各项生化反应及质粒的酶切鉴定。结果各代工程菌中B7-H1IgV蛋白的表达量均为菌体总蛋白的10%左右;各代工程菌提取的质粒双酶切后均可见381 bp的目的基因片段;各代工程菌均呈典型的大肠杆菌形态,革兰染色显示为阴性杆菌,各项检测结果与原始菌种无显著差异。结论该工程菌生物学特性稳定,可作为生产用菌种用于大规模生产。

    2012年03期 v.25 273-275页 [查看摘要][在线阅读][下载 338K]
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基础研究

  • 高尔基体囊泡转运蛋白P115基因沉默对胃癌细胞凋亡的影响及其机制

    屈玉玲;易永芬;邓玮;文雪;闫田静;

    目的探讨高尔基体囊泡转运蛋白P115基因沉默对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响及其可能的相关机制。方法将含p115基因的重组质粒p115 shRNA-1318转染BGC-823细胞,并设shNC(阴性对照)转染组和空白对照组,免疫荧光显微镜检测转染效果;RT-PCR法检测细胞中p115和巨噬细胞游走抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)基因mRNA的转录水平;Western blot检测细胞中P115、MIF及核内肿瘤抑制蛋白质P53的表达水平;MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的分布。结果转染后48 h,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达,表明转染成功;与对照组相比,p115 shRNA-1318组细胞中的p115和MIF基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05),细胞核内P53蛋白的表达水平明显增加(P<0.05),细胞的增殖活力明显下降(P<0.05),细胞凋亡数量明显增加(P<0.05),G1/G2期细胞数量明显增多,S期细胞数量明显减少(P<0.05)。结论沉默p115基因可促进胃癌细胞的凋亡,其调控机制可能是通过调控MIF因子来完成的。

    2012年03期 v.25 276-280+289页 [查看摘要][在线阅读][下载 485K]
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  • 旋毛虫新生幼虫期特异性T314基因真核表达质粒的构建及表达

    于建立;白雪;吴秀萍;刘明远;

    目的构建旋毛虫(Trichinella spirais)新生幼虫期特异性T314基因真核表达质粒,并在BHK细胞中进行表达。方法从旋毛虫新生幼虫RNA中通过RT-PCR技术扩增无信号肽T314全长基因,定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1中,构建重组真核表达质粒T314-pEGFP-N1,脂质体法转染BHK细胞,荧光显微镜观察EGFP的表达,Western blot检测T314融合蛋白的表达。结果重组真核表达质粒T314-pEGFP-N1经双酶切及测序证实构建正确;转染的BHK细胞48 h转染效率最高;表达的T314融合蛋白可与旋毛虫感染的猪血清发生特异性反应。结论已成功构建了T314基因重组真核表达质粒T314-pEGFP-N1,并在BHK细胞中融合表达,为进一步研究旋毛虫包囊形成机制奠定了基础。

    2012年03期 v.25 281-284页 [查看摘要][在线阅读][下载 285K]
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  • 超声微泡介导ABCB1a基因siRNA质粒转染的效率及对ABCB1a和P-gp表达的影响

    何昀;李奇林;温晟;刘东尧;李明勇;王强;魏光辉;

    目的研究超声微泡介导ABCB1a基因siRNA质粒转染L2RYC细胞的效率以及对ABCB1a水平和P-糖蛋白(P glycoprotein,P-gp)表达的影响。方法制备脂质微泡;设计4对siABCB1a序列,并构建4种真核表达质粒pSES-siABCB1a;转染L2RYC细胞(单纯质粒组、质粒+微泡组、质粒+超声组、质粒+微泡+超声组),另设空白对照组。采用流式细胞术检测质粒的转染效率;实时荧光定量PCR及Western blot检测转染后L2RYC细胞中ABCB1a基因及P-gp的表达。结果 4种pSES-siABCB1a质粒经PCR、双酶切及测序证实构建正确;质粒+微泡+超声组pSES-siABCB1a质粒可高效转染L2RYC细胞,可见荧光表达,转染效率为(49.35±5.89)%;转染后ABCB1a基因mRNA及P-gp的表达均明显降低(P<0.05)。结论超声微泡可促进外源基因体外转染L2RYC细胞,siABCB1a能有效抑制ABCB1a基因和P-gp的表达。

    2012年03期 v.25 285-289页 [查看摘要][在线阅读][下载 324K]
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  • 戊型肝炎病毒RdRp基因真核表达质粒的构建及表达

    黄芬;禹文海;马天武;井申荣;曾韦锟;华修国;

    目的构建戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)RdRp基因真核表达质粒,并检测其在PLC/PRF/5、A549和HepG2 3种细胞中的表达,为后续RdRp的研究提供实验依据。方法利用RT-nPCR法从阳性HEV粪便中扩增RdRp基因片段,插入pcDNA3.0真核表达载体中,并在其3′端插入EGFP报告基因,构建融合表达质粒pcDNA3.0-RdRp-EGFP,脂质体法转染PLC/PRF/5、A549和HepG2细胞,荧光显微镜观察报告基因的表达,RT-nPCR检测RdRp基因mRNA的转录情况,Westernblot检测RdRp蛋白的表达。结果重组表达质粒经酶切鉴定和测序证实构建正确;RdRp基因和蛋白在A549和HepG2细胞中可高效、特异性表达。结论成功构建了RdRp基因真核表达质粒,并在A549和HepG2培养细胞中大量表达,为进一步研究RdRp在HEV复制过程中的功能奠定了基础。

    2012年03期 v.25 290-293页 [查看摘要][在线阅读][下载 288K]
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  • 自噬在熊果酸抑制人脐静脉内皮细胞增殖中的作用

    毕娟娟;何林;余音;郭倩;叶秀峰;

    目的研究自噬在熊果酸(Ursolic acid,UA)抑制人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖中的作用,探讨UA抑制血管生长的机制。方法体外培养HUVECs,分别采用不同浓度的UA和自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)+UA联合处理,采用MTT法检测UA对HUVECs增殖的抑制作用及其联合3-MA对HUVECs存活率的影响;透射电镜观察细胞的超微结构;微管相关蛋白1轻链3(Microtubule-associated protein 1 light chain 3,MAP1-LC3)免疫荧光和流式细胞术检测UA对HUVECs自噬表达水平的影响;RT-PCR检测自噬相关基因Beclin1和MAP1-LC3B转录水平的变化。结果 UA可抑制HUVECs增殖,且呈剂量依赖性;HUVECs经UA处理后,自噬泡数量明显增加;经UA处理后,可上调HUVECs中MAP1-LC3蛋白的表达水平,MAP1-LC3阳性细胞的荧光强度较对照组明显增强;UA处理HUVECs不同时间可上调MAP1-LC3B及Beclin1 mRNA的转录水平;而UA联合3-MA处理后,HUVECs的增殖抑制作用明显增强。结论UA抑制HUVECs增殖,并诱导其发生自噬,自噬在此过程中起保护性作用,抑制自噬可明显增强UA诱导的HUVECs死亡。

    2012年03期 v.25 294-299页 [查看摘要][在线阅读][下载 474K]
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  • 与乳腺癌细胞MCF-7相关的旋毛虫TS498基因的克隆与表达

    任保彦;左绍志;高江明;付成福;张旭;宫鹏涛;李建华;张西臣;

    目的克隆与乳腺癌MCF-7细胞相关的旋毛虫TS498基因,并进行原核表达。方法从含TS498基因的噬菌体文库中PCR扩增TS498基因,亚克隆入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-TS498,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。结果扩增的旋毛虫TS498基因与GenBank中登录的基因序列同源性为100%,重组表达质粒pET-28a-TS498经双酶切和测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约23 000,表达量约占菌体总蛋白的20%,能够被兔抗旋毛虫肌幼虫阳性血清识别。结论成功克隆并在大肠杆菌中表达了与MCF-7细胞相关的旋毛虫TS498基因,为进一步研究其特性和功能奠定了基础。

    2012年03期 v.25 300-303页 [查看摘要][在线阅读][下载 240K]
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  • 外源性S100A6对黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡的影响及其机制

    陈英华;孙双双;卫佳;李星星;游莉;邹正渝;黎玉叶;何通川;周兰;

    目的探讨外源性S100A6对黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法采用MTT、台盼蓝拒染、Hoechst、Western blot、免疫细胞化学、免疫荧光和荧光素酶活性分析法检测S100A6对B16细胞增殖、凋亡、β-catenin的水平和分布、β-catenin/TCF4转录活性及经典Wnt信号途径(即Wnt/β-catenin信号)的下游靶基因c-myc表达的影响。结果 GST-hS100A6可抑制B16细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖性;GST-hS100A6作用72 h后,B16细胞的凋亡率较GST对照组增加1.43倍;携带S100A6基因的重组腺病毒AdS100A6作用72 h后,B16细胞中β-catenin的表达量较对照腺病毒AdGFP组增加43.9%;GST-hS100A6可使B16细胞中β-catenin的表达增加,且以胞核增加为主;GST-hS100A6作用后,B16细胞的β-catenin/TCF4转录活性增至GST对照组的7.4倍,且该信号途径的靶基因之一c-myc的表达也增加70.4%。上述结果与GST对照组之间的差异均有统计学意义(P均<0.05或0.01)。结论 S100A6具有抑制黑色素瘤增殖、促进凋亡和上调其Wnt/β-catenin信号途径活性的作用,且上调Wnt/β-catenin信号途径活性可能是S100A6对黑色素瘤抑制性作用的机制之一。

    2012年03期 v.25 304-308页 [查看摘要][在线阅读][下载 464K]
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  • 恒河猴粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的基因合成、原核表达及纯化

    刘娟;陈丹;李璐;刘新颖;王冉;史洪娜;王维龙;沈林;刘勇;李鼎锋;

    目的人工合成恒河猴粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Macaca mulatta granulocyte-macrophage colony stimulatingfactor,mGM-CSF)基因,在大肠杆菌中高效表达并纯化。方法根据大肠杆菌遗传密码子偏爱性优化设计并合成mGM-CSF基因,克隆至原核表达载体pET-43.1a(+)中,构建重组表达质粒pET-43.1a-mGM-CSF,转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL,IPTG诱导表达。表达的重组mGM-CSF蛋白经Sephacryl S-200分子筛层析纯化,复性后,Western blot检测其反应原性,MTT法检测其生物学活性。结果重组表达质粒pET-43.1a-mGM-CSF经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为15 000,表达量约占菌体总蛋白的30%,主要以包涵体形式存在;纯化复性后的重组蛋白纯度可达95%以上,并可与大鼠抗人GM-CSF单克隆抗体特异性结合,比活性为1.2×107IU/mg。结论在大肠杆菌中高效表达了重组mGM-CSF蛋白,纯化复性后的蛋白具有良好的生物学活性。

    2012年03期 v.25 309-313页 [查看摘要][在线阅读][下载 288K]
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  • Y-盒结合蛋白-1基因对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡及侵袭能力的影响

    邱欣欣;涂植光;孔飞飞;陈光辉;成凤;匡文斌;钟梁;

    目的观察Y-盒结合蛋白-1(Y-box binding protein-1,YB-1)基因对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法通过脂质体介导的方法将YB-1 shRNA重组质粒pGSi2和阴性对照质粒HK转染MDA-MB-231细胞,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中YB-1、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9在mRNA和蛋白水平的表达;MTT法及流式细胞术检测细胞增殖活力、细胞周期及凋亡的变化;Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化。结果 pGSi2组MDA-MB-231细胞较HK组细胞YB-1 mRNA及蛋白的表达水平均明显降低(P<0.01);沉默YB-1表达可以抑制MDA-MB-231细胞增殖,诱导其凋亡,且细胞侵袭能力及MMP-2和MMP-9的表达也较HK组明显下降(P均<0.05)。结论YB-1 shRNA可以沉默MDA-MB-231细胞中YB-1的表达,抑制细胞增殖,诱导其凋亡,并抑制细胞侵袭能力及MMP-2和MMP-9的表达。

    2012年03期 v.25 314-317+323页 [查看摘要][在线阅读][下载 426K]
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  • 代谢性胰岛素抵抗对肥胖大鼠心肌缺血/再灌注耐受性的影响

    段雅倩;周波;孙芳;毛锦宁;吴豪杰;陈运贞;张素华;

    目的探讨代谢性胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)对肥胖大鼠心肌缺血/再灌注(Myocardial ischemia/reperfusion,MI/R)耐受性的影响。方法将Wistar大鼠随机分为对照组(Cont组)、罗格列酮组(Rosi组)和肥胖组(Obes组),Rosi组给予高脂饲料喂养的同时灌胃罗格列酮,Obes组给予高脂饲料喂养,并灌胃相同剂量的生理盐水。检测各组大鼠血浆中各项生化指标、心肌组织总甘油三酯(Triglyceride,TG)的含量及胰岛素敏感性。制备大鼠MI/R模型,并取Obes组和Rosi组大鼠,输注磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)抑制剂渥曼青霉素,分别记为Obwt组和Wort组,检测各组大鼠心脏血流动力学指标的变化;伊文蓝染色测定大鼠心肌缺血面积,2,3,5一氯化三苯四氮唑(TTC)染色测定心肌梗死面积;原位末端标记凋亡细胞(TUNEL)法分析心肌细胞凋亡;Western blot法检测心肌中PKB/Akt和GluT-4蛋白的表达水平。结果 MI/R前,与Cont组相比,Obes组大鼠心肌TG及血浆中游离脂肪酸(Free fatty acid,FFA)、TG和空腹胰岛素(Fasting insulin,FINS)水平均显著升高(P<0.05或P<0.01),葡萄糖输注率(Glucose infusion rate,GIR)显著降低(P<0.01);而Rosi组大鼠血浆中TG、FFA和FINS水平较Obes组显著降低(P<0.01),GIR显著升高(P<0.01)。与Cont组相比,Obes组大鼠MI/R后,心功能恢复差,梗死面积扩大,心肌细胞凋亡增多,并伴PKB/Akt和GluT-4表达水平下降;Rosi组与Obes组比,MI/R恢复能力增强,梗死面积缩小,细胞凋亡减少,PKB/Akt和GluT-4表达水平增加。Wort组大鼠可逆转Rosi组的抗凋亡作用,下调PKB/Akt和GluT-4的表达水平;而Obwt组大鼠MI/R后,心功能、心肌细胞凋亡数及PKB/Akt和GluT-4表达水平与Obes组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论肥胖大鼠心肌IR增加了MI/R时的易损性,与PI3K-PKB-GluT-4信号通路下调、心肌细胞凋亡增加及心功能恶化密切相关。

    2012年03期 v.25 318-323页 [查看摘要][在线阅读][下载 441K]
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治疗性制剂

  • 重组免疫毒素EBI3-Luffin P1原核表达质粒的构建、表达及其生物学活性

    吴昊;陆强;高闻达;陈柳茜;任翠平;沈际佳;

    目的构建重组免疫毒素EBI3-Luffin P1的原核表达质粒,在大肠杆菌中进行表达,纯化后初步检测其生物学活性。方法从质粒pET-32a-EBI3中扩增EBI3基因,与合成的Luffin P1基因连接,克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET-32a-EBI3-Luffin P1,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组EBI3-Luffin P1蛋白经亲和层析纯化后,Western blot检测其反应原性,体外试验初步鉴定其生物学活性。结果重组质粒pET-32a-EBI3-Luffin P1经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组EBI3-Luffin P1蛋白相对分子质量约为50 000,主要以包涵体形式存在,诱导8 h表达量可达菌体总蛋白的44%;纯化的重组蛋白纯度约为98%,可与EBI3蛋白免疫小鼠血清发生特异性反应,并可显著抑制小鼠脾脏细胞分泌IFNγ。结论成功构建了重组免疫毒素EBI3-Luffin P1的原核表达质粒,表达并纯化了重组蛋白,为进一步研究其在缓解、治疗免疫性疾病及红白血病中的作用奠定了基础。

    2012年03期 v.25 324-328页 [查看摘要][在线阅读][下载 408K]
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  • 重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白质控方法和质量标准的建立

    高凯;陶磊;史新昌;裴德宁;王兰;李响;饶春明;王军志;

    目的建立重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白(TACI-Fc)的质控方法和质量标准。方法采用以B淋巴细胞刺激因子作为配体的受体结合法测定TACI-Fc的生物学活性;反向液相色谱(RP-HPLC)法测定蛋白含量及纯度;ELISA法分别测定残留CHO细胞蛋白和蛋白A;胰蛋白酶酶切后分析肽图;其余检测项目均按《中国药典》三部(2010版)规定进行。结果用建立的方法对重组人TACI-Fc原液和成品进行检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》三部(2010版)的要求。结论建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。

    2012年03期 v.25 329-332页 [查看摘要][在线阅读][下载 215K]
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  • 染料木黄酮对大鼠慢性栓塞性肺动脉高压的减缓作用及其机制

    张玉坤;王导新;李长毅;

    目的研究染料木黄酮对大鼠慢性栓塞性肺动脉高压(Chronic thromboembolic pulmonary hypertension,CTEPH)的减缓作用及对肺组织一氧化氮合酶(Endothelial nitric oxide synthase,eNOS)水平的影响,并探讨其可能的机制。方法雄性SD大鼠麻醉后,经颈静脉回输体外制备的自体血栓栓子,2周后同法进行二次栓塞,将造模成功的大鼠分为染料木黄酮治疗组、栓塞4周组和8周组。全程腹腔注射抗纤维溶解剂氨甲环酸,达目标日期后,采用右心导管法检测平均肺动脉压;开胸取心肺组织,心脏左右心室、室间隔分别称重后,计算右心室肥厚指数,电镜下观察肺小动脉结构变化;Western blot法检测肺组织中eNOS水平。结果染料木黄酮治疗组及栓塞8周组大鼠平均肺动脉压及右心室肥厚指数较栓塞4周组明显升高(P均<0.01),染料木黄酮组较栓塞8周组显著降低(P<0.01);染料木黄酮治疗组及栓塞8周组大鼠肺小动脉结构重塑(平滑肌细胞明显增殖);染料木黄酮治疗组大鼠肺组织中eNOS水平较栓塞4周和8周组明显升高(P<0.01)。结论染料木黄酮能减缓大鼠慢性栓塞性肺动脉高压的进展,其机制可能与其上调eNOS的水平有关。

    2012年03期 v.25 333-335+339页 [查看摘要][在线阅读][下载 366K]
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  • 奇异变形杆菌噬菌体的分离鉴定及其生物学特性分析

    孙盟盟;宋天一;胡士华;刘悦;孙延波;

    目的分离鉴定奇异变形杆菌噬菌体,并分析其生物学特性。方法以奇异变形杆菌为宿主菌,采用双层琼脂噬斑法从居民区生活污水中分离针对奇异变形杆菌的噬菌体;噬菌体经纯化后,通过负染法电镜观察其形态及大小;将噬菌体和宿主菌以10∶1的比例混合共培养,测定噬菌体的一步生长曲线;提取噬菌体核酸并进行酶切分析。结果共分离出4株噬菌体,分别命名为PrM-01、PrM-02、PrM-03和PrM-04,在双层琼脂平板上可形成圆形、透明、边界清晰、直径约2~3 mm的噬斑,经反复纯化后,其滴度范围在(1.2~2.3)×1012PFU/ml;电镜观察显示,噬菌体的头部呈二十面体立体对称,直径约40 nm,尾部长约30 nm;PrM-04的一步生长曲线表明,噬菌体在裂解宿主菌时,潜伏期为15 min,暴发时间为25 min,裂解量为3.2×104;酶切分析显示,其基因组大小约为26 000 bp,且具有EcoRⅠ、HindⅢ和BamHⅠ多个酶切位点。结论成功分离出4株针对奇异变形杆菌的噬菌体,其表现出特异性高、裂解性强的毒性噬菌体特征。

    2012年03期 v.25 336-339页 [查看摘要][在线阅读][下载 387K]
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  • 全反式维甲酸对大鼠急性肺损伤的治疗作用及肺组织中基质金属蛋白酶-9表达的影响

    张媛梅;张婷;周向东;

    目的探讨全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)对大鼠急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)的治疗作用及肺组织中基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响。方法将SD大鼠随机分为生理盐水对照组、ALI组和ATRA干预组,后两组经尾静脉注射5 ml/kg的脂多糖(LPS)复制ALI模型,ALI组在注射LPS前5 d,每天以植物油灌胃1次,0.5 ml/(kg.次),注射LPS后,经腹腔注射植物油,1 ml/kg;ATRA干预组在注射LPS前5 d,每天以含30 mg/kg ATRA的植物油灌胃1次,0.5 ml/(kg.次),注射LPS后,经腹腔注射含5 mg/kg ATRA的植物油,1 ml/kg。对照组在整个实验过程中均注射生理盐水(0.5 ml/kg)。腹腔注射ATRA 8 h后,处死各组大鼠,测定大鼠动脉血氧分压(PaO2)、支气管肺泡灌洗液(Bronchial alveolar lavage fluid,BALF)中蛋白含量、肺组织湿/干比重(W/D),并观察肺组织形态,采用RT-PCR和免疫组化法分别检测肺组织中MMP-9基因mRNA和蛋白的表达。结果与生理盐水对照组相比,ALI组大鼠肺组织炎性细胞明显增多,动脉PaO2明显降低(P<0.05),W/D、BALF中蛋白含量、肺组织中MMP-9基因mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01);与ALI组相比,ATRA干预组大鼠肺组织炎症反应减轻,W/D、BALF中蛋白含量、肺组织中MMP-9基因mRNA及蛋白的表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01),其动脉PaO2也明显改善(P<0.05)。结论 ATRA对大鼠ALI具有治疗作用,其机制可能是通过降低MMP-9的表达实现的。

    2012年03期 v.25 340-344页 [查看摘要][在线阅读][下载 432K]
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  • 卡介菌多糖核酸对小鼠免疫功能的影响

    孙宝华;宋水燕;房丽君;董纪英;薛云;周华伟;陆璐;颜淑芹;

    <正>20世纪80年代,我国自主研发的卡介菌多糖核酸(BCGpolysaccharide nucleic acid,BCG-PSN)是采用热酚法从BCG中提取其有效成分而制成的免疫调节剂,临床上广泛用于预防和治疗慢性气管炎、感冒和哮喘等疾病,具有较好的疗效。本实验以BCG-PSN免疫小鼠,观察其对小鼠免疫功能的影响,现将结果报道如下。取ICR小鼠(6~8周龄,雌性)120只,随机分为4组,每

    2012年03期 v.25 344页 [查看摘要][在线阅读][下载 45K]
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诊断制剂

  • 人细小病毒B19结构蛋白VP1的表达及IgM间接ELISA检测方法的初步建立

    梁莉莉;叶祥忠;周厚清;张娜;李良红;李益民;刘岩峰;

    目的原核表达并纯化人细小病毒B19(Human parvovirus B19,HPVB19)结构蛋白VP1,并初步建立IgM ELISA检测方法,用于B19病毒感染的检测。方法采用PCR法从B19 IgM阳性血清中扩增VP1基因片段,亚克隆至表达载体pGEX-2T中,构建重组表达质粒pGEX-2T-VP1,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经疏水纯化后进行Western blot分析。以纯化的重组蛋白包被酶标板,建立IgM间接ELISA检测方法,确定Cut-off值,并进行初步应用。结果重组原核表达质粒经双酶切鉴定构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量为61 000,主要以包涵体形式存在,纯度为96%,可与B19 IgG阳性血清发生特异性反应;建立的间接ELISA方法 Cut-off值为0.102,灵敏度为91.7%,特异性为98.6%,与对照试剂检测结果的符合率为97.1%;用建立的方法检测4 500份健康献血者及39份类风湿性关节炎患者血清的B19 IgM抗体,阳性率分别为1.04%和10.3%。结论原核表达并纯化了HPVB19 VP1蛋白,并初步建立了IgM间接ELISA检测方法,为B19病毒感染的早期诊断提供了参考。

    2012年03期 v.25 345-348+356页 [查看摘要][在线阅读][下载 256K]
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临床研究

  • 佛山市南海区免疫规划儿童免疫水平的监测与分析

    曾鸿;黄志雄;张桂玲;陈妙芬;吕海韵;梁洁雅;

    目的了解佛山市南海区免疫规划儿童的免疫水平,评价疫苗免疫效果,为进一步做好免疫规划工作提供科学依据。方法于2009~2011年,采用分层随机抽样调查法对佛山市南海区1~7岁年龄组共420名儿童进行乙型肝炎、脊髓灰质炎、白喉、破伤风、百日咳、麻疹等免疫规划相关疾病的抗体水平检测,并进行统计学分析。结果 420名儿童中,乙肝表面抗体阳性率为73.33%,脊髓灰质炎Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体的阳性率分别为96.43%、95.95%和97.38%,百日咳抗体阳性率为60.71%,白喉抗体阳性率为78.57%,破伤风抗体阳性率为85.48%,麻疹抗体阳性率为98.33%。结论本次检测人群中,脊髓灰质炎抗体和麻疹抗体维持在较高水平,已形成稳固有效的免疫屏障;白喉、破伤风抗体水平基本达到可控制疫情流行的标准;乙肝(抗-HBs)、百日咳抗体阳性率偏低,显示其免疫屏障不牢固,存在疾病流行的潜在风险。

    2012年03期 v.25 349-352页 [查看摘要][在线阅读][下载 151K]
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  • 胃癌组织中食管癌相关基因4启动子区的甲基化及其临床意义

    王玉彬;巴彩凤;

    目的探讨胃癌组织中食管癌相关基因4(Esophageal cancer-related gene 4,ECRG4)启动子区的甲基化情况及其临床意义。方法应用甲基化特异性PCR(Methylation specific-PCR,MSP-PCR)法,检测49份胃癌组织、30份癌旁组织和15份正常组织标本中ECRG4基因启动子区的甲基化情况,并分析其与临床病理特征之间的相关性。结果胃癌组织[69.4%(34/49)]和癌旁组织[53.3%(16/30)]ECRG4基因甲基化检出率均明显高于正常组织[6.7%(1/15)](P<0.01);Ⅲ+Ⅳ期ECRG4基因甲基化检出率[80%(24/30)]明显高于Ⅰ+Ⅱ期[52.6%(10/19)](P<0.05),表明ECRG4基因甲基化检出率与病理分期相关,而与患者年龄、性别及淋巴结转移无相关性(P>0.05)。结论 ECRG4基因启动子区异常甲基化与胃癌的发生发展密切相关,可作为胃癌早期辅助诊断的分子标志物之一。

    2012年03期 v.25 353-356页 [查看摘要][在线阅读][下载 217K]
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  • 载脂蛋白E和血红素加氧酶-1在人脑胶质母细胞瘤中的表达及其意义

    雷荟仔;余天平;罗红池;李昱;

    目的研究载脂蛋白E(Apoprotein E,ApoE)和血红素加氧酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)在胶质母细胞瘤中的表达,并探讨二者在胶质母细胞瘤发生发展中的作用。方法收集人脑胶质母细胞瘤患者肿瘤组织标本41份及胶质母细胞瘤旁脑组织标本14份,采用免疫组化法检测组织标本中ApoE和HO-1蛋白的表达情况,分析ApoE和HO-1的表达与患者临床病理特征之间的相关性。结果 ApoE和HO-1蛋白在胶质母细胞瘤中表达的阳性率(82.9%和92.7%)与瘤旁正常组织(均为7.1%)相比,差异均有统计学意义(P均<0.001),且ApoE与HO-1的表达呈正相关(rs=0.321,P<0.05);患者性别、年龄、术前KPS评分、手术切除范围、肿瘤大小、术后放化疗情况与ApoE、HO-1蛋白的表达无相关性。结论 ApoE和HO-1与胶质母细胞瘤的发生发展密切相关,为判断胶质母细胞瘤的预后及治疗提供了新的参考。

    2012年03期 v.25 357-360页 [查看摘要][在线阅读][下载 197K]
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  • 血清肿瘤标志物联合检测在胰腺癌诊断中的应用价值

    杨锐;太京华;金珍婧;潘留兰;牟文玲;

    目的探讨血清肿瘤标志物糖类抗原(Carbohydrate antigen,CA)242(CA242)、CA724联合检测在胰腺癌诊断中的应用价值。方法采用放射免疫法分别检测34例胰腺癌、26例慢性胰腺炎患者及60名健康体检者的血清CA242和CA724水平。结果进展期胰腺癌组血清中CA242和CA724的水平均明显高于早期胰腺癌组、慢性胰腺炎组和正常对照组(P均<0.01),早期胰腺癌组、慢性胰腺炎组和正常对照组之间CA242和CA724的水平差异无统计学意义(P>0.05);胰腺癌患者血清中CA242、CA724单独和联合检测的敏感性分别为61.7%、57.3%和84.9%,特异性分别为91.0%、87.6%和90.3%。结论血清肿瘤标志物CA242、CA724的定量测定是诊断胰腺癌敏感、特异的指标,但其早期敏感性较差;其测定结果与胰腺癌的分期及预后明显相关;联合检测可使其敏感性明显提高,而特异性无明显改变。

    2012年03期 v.25 361-363页 [查看摘要][在线阅读][下载 131K]
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  • 溶血磷脂酸受体1在人脑胶质瘤组织中的表达及意义

    杨志青;刘辉;许万振;李蕴潜;

    目的探讨溶血磷脂酸受体1(Lysophosphatidic acid receptor 1,LPAR1)在人脑胶质瘤组织中的表达及意义。方法收集临床切除的经病理证实的良性胶质瘤组织、恶性胶质瘤组织及正常脑组织,采用RT-PCR法及免疫组织化学染色法检测各组脑组织中LPAR1在mRNA及蛋白水平的表达,并分析LPAR1表达与脑胶质瘤临床病理特征之间的相关性。结果正常脑组织、良性胶质瘤组织、恶性胶质瘤组织中均有LPAR1 mRNA及蛋白的表达;胶质瘤组织中LPAR1 mRNA及蛋白的表达水平均明显高于正常脑组织,差异有统计学意义(P<0.05),且恶性胶质瘤组织中LPAR1蛋白的表达水平明显高于良性胶质瘤组织(P<0.05);LPAR1的表达与脑胶质瘤临床病理分级相关,而与年龄、性别、肿瘤部位无关。结论 LPAR1在脑胶质瘤组织中表达增高,可能在胶质瘤发生发展的过程中发挥重要作用。

    2012年03期 v.25 364-366页 [查看摘要][在线阅读][下载 296K]
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技术方法

  • 重组人源化兔抗血管内皮生长因子单克隆抗体生物学活性检测方法的建立

    范文红;毕华;饶春明;王军志;

    目的建立重组人源化兔抗血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)单克隆抗体生物学活性检测方法。方法以人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)作为基质细胞,对23支重组人源化兔抗VEGF单抗参比品、24支供试品原液和10支成品进行生物学活性测定,并计算参比品和供试品的IC50值,计算变异系数;对参比品进行活性赋值后,再计算供试品活性,计算变异系数。结果重组人源化兔抗VEGF单抗参比品、原液和成品的IC50值分别为(49.41±23.60)、(47.42±19.45)和(39.13±16.25)ng/ml,变异系数分别为47.76%、41.02%和41.53%;参比品活性赋值为5.08×104U/ml;供试品原液活性为(0.88±0.19)×106U/ml,变异系数为21.6%,供试品成品活性为(1.49±0.41)×106U/支,变异系数为27.5%。结论成功建立了重组人源化兔抗VEGF单抗生物学活性测定方法,确定了参比品的活性单位,为重组人源化兔抗VEGF单抗生物学活性的检测提供了切实可行的方法。

    2012年03期 v.25 367-369+374页 [查看摘要][在线阅读][下载 258K]
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  • 阪崎肠杆菌脂多糖抗原的制备及其生物学特性

    马卫静;李克生;杜惠芬;

    目的采用不同方法提取并纯化阪崎肠杆菌(Enteobacter sakazaii,ES)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)抗原,并对其生物学特性进行鉴定。方法常规培养ES,分别采用热酚水法和冷酚水法提取LPS抗原,收集水相和酚相LPS,采用蒽酮-硫酸法测定LPS多糖含量,紫外光谱法测定核酸含量,Bradford法测定蛋白含量,SDS-PAGE测定相对分子质量;以其免疫小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清抗体效价,并检测其与各种肠道菌单价或多价血清的交叉反应性。结果 ES在相同条件下保存相同时间,采用冷酚水法提取LPS的产率高于热酚水法;所提取的水相和酚相LPS样品相对分子质量分布在14 400~45 000之间,均具有良好的免疫原性,且仅与ES单价血清反应,而与其他各种肠道菌单价或多价血清均不发生反应。结论热酚水法和冷酚水法均可制备免疫原性良好、特异性强的ES LPS抗原,但热酚水法所得样品的糖含量和蛋白含量均高于冷酚水法。

    2012年03期 v.25 370-374页 [查看摘要][在线阅读][下载 253K]
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  • 微波诱变法筛选木聚糖酶高产球毛壳霉菌株

    姚笛;王艳丹;杨健;于长青;钱丽丽;佟丹丹;

    目的微波诱变法筛选遗传稳定的木聚糖酶高产球毛壳霉菌株。方法活化球毛壳霉菌种,制备孢子悬液,在不同功率条件下对其进行辐照处理60 s,选择致死率在80%左右的辐照功率,在此功率条件下对其进行不同时间的微波诱变,经初筛和复筛后,采用DNS法测定木聚糖酶活性,筛选木聚糖酶高产菌株,并分析其传代稳定性。结果在微波辐射时间80 s,功率240 W条件下处理的球毛壳霉孢子,致死率为89.5%;经诱变及菌种筛选,获得1株木聚糖酶高产菌株W80-8,其酶活力为7 520 U/ml,比出发菌株提高了124%;经6次传代培养,W80-8株木聚糖酶活力未见明显降低,未发生原位回复突变。结论成功筛选获得1株遗传稳定的木聚糖酶高产球毛壳霉菌株。

    2012年03期 v.25 375-377页 [查看摘要][在线阅读][下载 165K]
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综述

  • 腺病毒载体的研究进展及其在轮状病毒疫苗研究中的应用

    郜岩;孙茂盛;

    腺病毒载体是一种非常有效的转基因载体,具有高效率、高滴度、低致病性及不整合入宿主细胞染色体等优点,是目前非常具有应用前景的转基因载体。本文就重组腺病毒载体的研究进展、研究中的问题和解决方法及其在轮状病毒疫苗研究中的应用作一综述。

    2012年03期 v.25 378-382页 [查看摘要][在线阅读][下载 178K]
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  • 毒理基因组学在预测肝、肾毒性中的应用现状及研究进展

    潘东升;范玉明;李波;

    毒理基因组学是将基因组信息和技术应用于毒理学研究的一门新兴学科,主要采用以DNA微阵列为代表的高通量技术,其快速发展为毒理学研究提供了新的思路与方法。本文对毒理基因组学在非临床毒理学研究,主要是在预测肝、肾毒性方面的应用现状及研究进展作一综述。

    2012年03期 v.25 383-385页 [查看摘要][在线阅读][下载 141K]
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  • 肠道病毒71型相关动物模型实验的研究进展

    黄坚;王晶晶;刘龙丁;

    人肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)是导致人类手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)的主要致病原。HFMD已成为严重影响儿童健康的公共卫生问题之一,因此,尽快了解EV71的致病机理及研制安全有效的疫苗是当前急需解决的问题,而建立相关动物模型是研究EV71致病机理以及评价EV71疫苗安全性和有效性的重要一步。本文就目前EV71常用动物模型的研究进展作一综述。

    2012年03期 v.25 386-388页 [查看摘要][在线阅读][下载 119K]
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产品介绍

  • 康宁HYPERFlask多层细胞培养瓶大规模培养甲型流感病毒

    <正>传统甲型流感病毒的大规模生产是采用T-175培养瓶。为了提高病毒产量,需要一次性使用大量的组织培养瓶以达到要求的数量。康宁公司开发的HYPERFlash多层细胞培养瓶共有10层,在相同的体积内具有10倍于T-175培养瓶的生长面积,有利于甲型流感病毒的大规模培养,可大大提高培养效率。我们将3种甲型流感病毒(WSN、H1N1和H3N2)分别感

    2012年03期 v.25 272页 [查看摘要][在线阅读][下载 38K]
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消息

  • 第14届上海国际生物技术和医药研讨会通知

    <正>为推动我国生物技术与医药的研发和产业化,及时了解国内外生物医药技术的最新动态和发展趋势,上海市现代生物与医药产业办公室将在2012年5月9~11日,在上海国际会议中心继续举办"第14届上海国际生物技术与医药研讨会(BIO-FORUM2012)"。本届大会主题为"聚焦生物医药创新,培育战略新兴产业",将邀请近100位生物技术与医药领域的国内外知名学

    2012年03期 v.25 284页 [查看摘要][在线阅读][下载 46K]
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  • 中国首个“生命科学产品外贸公共服务平台”通过国家认证

    <正>为了推进外贸发展方式转变和结构调整,进一步提升我国对外贸易发展质量和水平,财政部会同商务部出台了建设外贸公共服务平台的政策,安排专项资金,支持有实力的企业加快外贸公共服务平台建设。2011年,中原公司的"生命科学产品外贸公共服务平台"在各方面的支持下,顺利通过了

    2012年03期 v.25 388页 [查看摘要][在线阅读][下载 36K]
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