中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 人乳头瘤病毒18型L1蛋白在毕赤酵母中的表达及其病毒样颗粒的免疫原性

    沈琼;雷建强;周朝明;张高峡;

    目的在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒18型(Human papilomavirus 18,HPV18)L1蛋白,纯化病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs),并检测其免疫原性。方法将含HPV18 L1基因的酵母表达质粒pHPV18 L1电转化毕赤酵母X-33,甲醇诱导表达,重组HPV18 L1蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析后,经离子交换层析、分子筛层析纯化,采用SEC-HPLC分析纯度;动态光散射和透射电镜分析粒径分布和结构;并通过小鼠半数有效剂量(ED50)和大鼠抗体滴度测定分析其免疫原性。结果 HPV18 L1蛋白在毕赤酵母中获得了有效表达,相对分子质量约为55 000,可与小鼠抗HPV18 L1单抗特异性结合;经纯化的HPV18 L1 VLPs纯度为99%,且颗粒大小均一,直径约50 nm;经吸附铝佐剂后,免疫小鼠的ED50为0.006 68μg;并可诱导大鼠产生较高的抗体滴度。结论 HPV18 L1可在毕赤酵母中高效表达并自动形成VLPs,该VLPs经纯化、吸附铝佐剂后具有良好的免疫原性,为工业化生产HPV18 L1疫苗奠定了基础。

    2012年02期 v.25 129-133页 [查看摘要][在线阅读][下载 364K]
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消息

  • “2010年版GMP与血液制品生产线设计、建造、管理”研讨会通知

    <正>《2010年版GMP与血液制品生产线设计、建造、管理》研讨会由中国医学装备协会生物工程装备技术专业委员会主办,《中国生物制品学杂志》担任传媒支持。特邀中国药管药监部门、中国生物技术集团、中国医学科学院成都输血研究所等单位的资深专家和赛多利斯斯泰迪生物技术(北京)有限

    2012年02期 v.25 133页 [查看摘要][在线阅读][下载 43K]
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疫苗研究

  • WAVE生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗

    佟芳;赵玉秀;王辉;梁宏阳;马可;马乐;牛志彬;杨阳;刘颖;张月兰;

    目的采用WAVE生物反应器培养Vero细胞制备乙型脑炎病毒灭活疫苗。方法利用2 L WAVE生物反应器和微载体经半连续方式培养Vero细胞,每24 h取样,观察细胞生长情况,实时监测葡萄糖浓度。待细胞长至单层时,以0.03~0.5 MOI接种乙型脑炎病毒。待细胞病变率达25%时,开始收获病毒液,病毒收获液经纯化后,制备乙型脑炎灭活疫苗,按《中国药典》三部(2010版)要求检测各项指标。结果 Vero细胞培养至6 d在微载体上长成致密单层,接种病毒后2 d,细胞病变率达25%,开始收获病毒液,收获量为1 L/d,可连续收获5~7 d,总计5~7 L病毒原液;病毒培养至第4天滴度达峰值,为8.54 LgLD50/ml;制备的乙型脑炎灭活疫苗各项指标均达到《中国药典》三部(2010版)要求。结论初步建立了WAVE生物反应器培养Vero细胞制备乙型脑炎灭活疫苗的方法。

    2012年02期 v.25 134-136页 [查看摘要][在线阅读][下载 293K]
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  • 结核DNA疫苗质粒pVAX1-Rv3407的构建及体外表达

    刘蓉娜;方习静;张爱华;杨晓明;张雅婷;闭兰;

    目的构建结核DNA疫苗质粒pVAX1-Rv3407,并检测其在哺乳动物细胞293T中的表达。方法以基因重组卡介苗(rBCG)AERAS-422基因组为模板,PCR扩增Rv3407基因,构建真核表达质粒pVAX1-Rv3407,转染293T细胞,采用免疫荧光法及Western blot法检测Rv3407蛋白的表达。结果 PCR扩增获得长300 bp的Rv3407基因片段;重组真核表达质粒pVAX1-Rv3407经双酶切及DNA测序证明构建正确;转染48 h后,Rv3407蛋白在293T细胞中有效表达,且主要分布在细胞质中。结论成功构建了结核DNA疫苗质粒pVAX1-Rv3407,为新型结核病疫苗的研制奠定了基础。

    2012年02期 v.25 137-139+147页 [查看摘要][在线阅读][下载 217K]
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基础研究

  • hsa-miR-150慢病毒表达质粒的构建及鉴定

    张俊;张涛;王勃;李少林;

    目的构建hsa-miR-150慢病毒表达质粒,并鉴定其感染肝癌细胞系Hep3B后miR-150的表达水平。方法根据hsa-miR-150序列化学合成hsa-miR-150基因片段,克隆至慢病毒载体pGIPZ上,构建重组慢病毒表达质粒pGIPZ-hsa-miR-150,转染包装细胞293T进行包装,检测病毒滴度。收获并浓缩重组慢病毒颗粒,稳定转染Hep3B细胞,流式细胞术检测GFP的表达率;荧光定量PCR检测miR-150的表达水平。结果重组慢病毒表达质粒pGIPZ-hsa-miR-150经菌落PCR及测序证实构建正确;重组慢病毒的滴度约为5.7×108 TU/ml;稳定转染Hep3B细胞后,GFP的表达率为(97.78±1.14)%,重组慢病毒转染组miR-150的表达水平较空白对照组增加约6倍(P<0.05)。结论成功构建了hsa-miR-150慢病毒表达质粒,其在Hep3B细胞中可高效表达,为进一步研究miR-150的生物学功能奠定了基础。

    2012年02期 v.25 140-143页 [查看摘要][在线阅读][下载 293K]
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  • 人腺苷甲硫氨酸脱羧酶的原核表达及纯化

    张军;韩钰;蔡富强;秦烨;夏燕;王艳林;

    目的克隆人腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosylmethionine decarboxylase,AdoMetDC)cDNA,原核表达并纯化重组AdoMetDC蛋白。方法采用巢式RT-PCR法从人宫颈癌HeLa细胞株总RNA中克隆人AdoMetDC cDNA,插入载体pET-15b中,构建原核表达质粒pET-15b/AdoMetDC,转化大肠杆菌Rossetta(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白在尿素变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化,SDS-PAGE和Western blot法鉴定纯化的重组AdoMetDC蛋白。结果克隆出编码全长人AdoMetDC的cDNA序列,并构建了重组原核表达质粒pET-15b/AdoMetDC;表达的重组AdoMetDC蛋白经SDS-PAGE分析,分别可见相对分子质量约35 000、30 000、14 000的前酶、自催化分裂后的α亚单位和β亚单位;前酶和β亚单位可被Ni-NTA树脂有效纯化;纯化的重组蛋白可被抗His抗体和抗AdoMetDC抗体特异性识别。结论原核表达并纯化了人AdoMetDC,为其功能研究和临床应用奠定了基础。

    2012年02期 v.25 144-147页 [查看摘要][在线阅读][下载 248K]
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  • JTV1基因siRNA重组表达质粒的构建及其对K562细胞增殖的影响

    吴燕;刘北忠;王翀;钟梁;朱丹;王春光;黎亮;高艳军;

    目的构建JTV1基因siRNA重组表达质粒,转染K562细胞,鉴定其干扰作用。方法人工合成靶向JTV1基因的siRNA干扰序列,克隆至载体pGeneSil-1上,构建重组表达质粒pGeneSil-1-JTV1-1.1 siRNA,转染人K562细胞,经G418稳定筛选后,采用RT-PCR及Western blot法分别检测重组表达质粒对K562细胞中JTV1基因转录和翻译的影响;MTT法检测抑制JTV1基因的表达对K562细胞增殖的影响。结果重组表达质粒pGeneSil-1-JTV1-1.1 siRNA经测序证明构建正确;其转染K562细胞后,细胞JTV1基因的转录和翻译水平均明显降低;抑制JTV1的表达可促进K562细胞增殖。结论已成功构建了pGeneSil-1-JTV1-1.1 siRNA质粒,并获得了稳定的JTV1基因表达受抑的K562细胞克隆,为进一步研究JTV1基因的功能及其与肿瘤的相关性奠定了基础。

    2012年02期 v.25 148-151+156页 [查看摘要][在线阅读][下载 484K]
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  • A组人轮状病毒VP3基因的原核表达及鉴定

    张顺;潘小霞;袁静;文喻玲;陈元鼎;

    目的克隆并原核表达A组人轮状病毒(Rotavirus,RV)TB-Chen株结构蛋白VP3基因,并进行分子系统进化和基因分型。方法采用PCR法扩增A组人轮状病毒TB-Chen株VP3编码基因,克隆至pETL载体上,构建重组原核表达质粒pET-VP3,转化大肠杆菌BL21(DE3),并进行表达。表达的重组蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,对VP3基因进行分子系统进化及基因型分析。结果重组表达质粒pET-VP3经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为98 000,以包涵体形式存在;重组VP3蛋白可被抗SA11株全病毒豚鼠免疫血清识别;迄今发现的A组RV VP3可分为7个基因型,TB-Chen株和SA11株VP3基因分别属于M2型和M5型。结论成功原核表达了A组人RV TB-Chen株VP3蛋白,为进一步研究VP3的结构功能及开发新型RV疫苗、诊断试剂和治疗药物奠定了基础。

    2012年02期 v.25 152-156页 [查看摘要][在线阅读][下载 409K]
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  • 乙型肝炎病毒x蛋白基因荧光真核表达质粒的构建及其对人正常肝细胞株L0_2增殖的影响

    钱冠华;董君军;段昌柱;彭惠民;

    目的构建乙型肝炎病毒x蛋白基因荧光真核表达质粒,并检测HBx对人正常肝细胞株L02细胞增殖的影响。方法以pcDNA3-HBV质粒为模板,PCR法扩增HBx基因编码区全长序列,将其克隆至pIRES2-EGFP荧光真核表达载体中,构建重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-HBx,转染L02细胞,筛选稳定表达HBx的细胞,RT-PCR法检测细胞中HBx基因mRNA的转录水平;Western blot法检测细胞中HBx蛋白的表达水平;MTT法检测细胞的增殖活力。结果重组荧光真核表达质粒pIRES2-EGFP-HBx经双酶切和测序证明构建正确,转染该质粒的L02细胞可检测到HBx基因mRNA的转录及蛋白的表达,与空质粒pIRES2-EGFP转染的L02细胞相比,增殖活力明显提高。结论成功构建了HBx基因荧光真核表达质粒,并获得了能稳定表达HBx蛋白的L02细胞株,为进一步研究HBx对细胞周期调控通路的影响及探索HBx导致的与HBV相关的HCC的分子机制奠定了基础。

    2012年02期 v.25 157-160页 [查看摘要][在线阅读][下载 308K]
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  • 激活素受体相互作用蛋白1及2在小鼠巨噬细胞中的表达

    崔雪玲;葛敬岩;李晨光;孙洋;牛立慢;刘海岩;柳忠辉;王轶楠;

    目的探讨激活素受体相互作用蛋白(Activin receptor-interacting protein,ARIP)1及2(ARIP1,2)在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达及作用。方法采用免疫细胞化学染色法检测RAW264.7细胞中ARIP1,2的表达;将质粒CAGA-lux、CMV-gal分别与表达质粒pcDNA3-ARIP1、pcDNA3-ARIP2或空质粒pcDNA3共转染RAW264.7细胞,应用激活素A刺激,检测细胞内报告基因转录荧光素酶的活性;实时定量RT-PCR检测ActRⅡA mRNA的表达。结果免疫细胞化学染色结果显示,小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞表达ARIP1,2;RAW264.7细胞过表达ARIP1,2均能抑制Activin A诱导的特异基因转录;过表达ARIP2可抑制RAW264.7细胞ActRⅡA mRNA的表达,而过表达ARIP1对ActRⅡA mRNA的表达无明显影响。结论 ARIP1,2在小鼠巨噬细胞中共表达,并具有下调激活素信号传导的作用,但其作用方式不同。

    2012年02期 v.25 161-163+167页 [查看摘要][在线阅读][下载 297K]
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  • 稳定表达RAS鸟苷酸释放因子2肺癌细胞株的建立

    王勇;陈虹;卜友泉;

    目的构建带有GFP标签的RAS鸟苷酸释放因子2(RAS guanine nucleotide releasing factor 2,RASGRF2)真核表达质粒,并建立稳定表达RASGRF2的肺癌细胞株。方法用SgfⅠ和NotⅠ双酶切RASGRF2-pCMV6-Myc-DDK质粒,回收RASGRF2基因片段,亚克隆入pCMV6-GFP载体中,构建重组表达质粒RASGRF2-pCMV6-GFP,转染肿瘤细胞H1299,倒置荧光显微镜下观察RASGRF2蛋白的定位。经G418筛选并建立稳定表达RASGRF2的细胞株,RT-PCR及Western blot法检测RASGRF2的表达。结果经双酶切及测序证实RASGRF2基因成功克隆至真核表达载体pCMV6-GFP中;重组RASGRF2-GFP蛋白在H1299细胞中主要在胞质中表达;经RT-PCR及Western blot证实,RASGRF2在H1299细胞中稳定表达。结论成功建立了稳定表达RASGRF2基因的肺癌细胞株,为进一步研究RASGRF2基因的功能奠定了基础。

    2012年02期 v.25 164-167页 [查看摘要][在线阅读][下载 267K]
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  • 人颗粒酶A全长基因的克隆及原核表达

    杜佳妮;陈磊;龙凤英;江文正;

    目的克隆人颗粒酶A(Granzyme A,GzmA)基因,在大肠杆菌中进行表达,并初步优化表达条件。方法通过RT-PCR扩增人GzmA基因,插入原核表达载体pET24a(+)中,构建重组表达质粒pET24a-GzmA,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并对诱导温度、IPTG浓度、诱导时间和开始诱导时菌液A600值进行优化。结果重组表达质粒pET24a-GzmA经双酶切和测序,证实GzmA基因已正确插入载体中,且序列正确;表达的重组蛋白相对分子质量约29 000,且可与小鼠抗His单抗特异性结合;工程菌的最佳诱导温度为37℃,IPTG浓度、诱导时间和开始诱导时菌液A600值对重组蛋白的表达量影响较小。结论成功克隆了人GzmA基因,并在大肠杆菌中进行了表达。

    2012年02期 v.25 168-170+175页 [查看摘要][在线阅读][下载 248K]
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  • Hedgehog信号通路在胃癌侵袭转移中的作用及分子机制

    郝亚琴;欧阳小波;代剑波;王立;

    目的探讨Hedgehog(Hh)信号通路与上皮间质转换(Epithelial-mesenchymal transitions,EMT)在胃癌侵袭转移中的作用及分子机制。方法分别用环靶明、Snail siRNA、空质粒及环靶明+Snail siRNA的混合物处理人胃癌SGC-7901细胞,并设常规培养对照组,48 h后,采用RT-PCR法检测各组细胞中Gli1、Snail及E-cadherin基因mRNA的转录水平;Transwell小室试验检测细胞侵袭能力的变化;异质黏附试验检测各处理因素对细胞异质黏附能力的影响。结果与对照组相比,环靶明干扰组和联合干扰组细胞Gli1基因mRNA的转录水平明显降低(P<0.05),环靶明干扰组、Snail siRNA组及联合干扰组Snail基因mRNA的转录水平明显降低(P<0.05),而E-cadherin基因mRNA的转录水平明显升高(P<0.05);环靶明干扰组、Snail siRNA组及联合干扰组中细胞的侵袭能力及异质黏附能力明显低于对照组(P<0.05)。结论 Hh信号通路可能通过Gli1调控Snail而参与调控EMT的过程,从而在胃癌的侵袭转移中发挥重要作用。

    2012年02期 v.25 171-175页 [查看摘要][在线阅读][下载 411K]
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  • 骨髓间充质干细胞对实验性肝纤维化大鼠的作用及其机制

    周伟;陈鹏飞;吴小翎;姜蓉;徐艳华;

    目的探讨骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植后对实验性肝纤维化大鼠的作用及其机制。方法直接贴壁法分离纯化雄性SD大鼠BMSCs;将30只雌性SD大鼠分为3组:正常组、肝纤维化模型组和BMSCs移植组,模型组和BMSCs移植组经皮下注射40%四氯化碳(CCL4),每周3次,复制大鼠肝纤维化模型,建模8周后,BMSCs移植组经尾静脉移植2×106个BMSCs,3 d后再次移植相同剂量的BMSCs,12周后处死各组大鼠,取外周血,分离血清,检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和白蛋白(ALB)水平;取肝组织进行HE、VG染色,观察肝脏病理变化;免疫组化法和荧光定量PCR法检测肝组织中Ⅰ型胶原(TypeⅠcollagen,ColⅠ)和胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达,荧光定量PCR法检测TGFβ1和Smad3 mRNA的表达。结果 BMSCs移植组较模型组大鼠肝组织纤维化程度明显加重;BMSCs移植组ALT和AST水平较模型组明显升高(P<0.05),ALB水平较模型组明显降低(P<0.05);ColⅠ和GFAP在模型组和BMSCs移植组纤维条索中有大量表达,BMSCs移植组中ColⅠ和GFAP mRNA及蛋白的表达量明显高于模型组(P<0.05);模型组和BMSCs移植组中TGFβ1和Smad3 mRNA的表达量明显高于正常组(P<0.05),且BMSCs移植组中TGFβ1和Smad3mRNA的表达量明显高于模型组(P<0.05)。结论 BMSCs移植可加重大鼠肝纤维化,BMSCs通过上调TGFβ/Smad信号传导通路的TGFβ1和Smad3的表达促进肝纤维化的进展。

    2012年02期 v.25 176-180页 [查看摘要][在线阅读][下载 360K]
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  • IL-17、TGF-β、IL-6 mRNA在感染猪附红细胞体小鼠脾脏中的表达

    田晶;唐欣;巴彩凤;杨蕾芳;

    目的检测BALB/c小鼠感染猪附红细胞体(Mycoplasma suis)后脾脏中白细胞介素-17(Interleukin-17,IL-17)、转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)、白细胞介素-6(IL-6)的变化。方法用纯化的猪附红细胞体感染BALB/c小鼠,设生理盐水对照组,分别于感染后1、3、5、7、9 d后,无菌采集脾脏,RT-PCR法检测小鼠脾脏中IL-17、TGF-β、IL-6 mRNA的表达。结果小鼠感染猪附红细胞体后第1、3、5、7、9天,脾脏中IL-17和IL-6 mRNA的表达量均明显高于对照组(P<0.05),且分别于第5、7天达峰值;感染后第1、3、5、7天,TGF-βmRNA的表达量均高于对照组(P<0.01),且于第3天达峰值;IL-17与IL-6的变化趋势呈正相关(r=0.568),TGF-β与IL-6的变化趋势呈负相关(r=-0.645)。结论小鼠感染猪附红细胞体后出现IL-17、TGF-β、IL-6水平升高的现象,且分别于第5、3、7天达峰值。本研究为附红细胞体病免疫调节机制的研究提供了实验依据,也为临床免疫治疗奠定了理论基础。

    2012年02期 v.25 181-184页 [查看摘要][在线阅读][下载 311K]
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  • 抵抗素在非酒精性脂肪肝大鼠胰岛素抵抗中的作用

    朱良荣;管小琴;祁明美;王立娟;

    目的探讨抵抗素(Resistin)在非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠胰岛素抵抗(Insulinresistance,IR)中的作用。方法采用改良高脂饲料喂养大鼠建立NAFLD IR大鼠模型,以基础饲料喂养的大鼠作为对照组。分别于开始造模后6、8、10周分别采集2组大鼠血清及肝脏组织,测定血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、空腹血糖(Fasting plasma glucose,FPG)和空腹胰岛素(Fasting insulin,FINS)含量,并计算胰岛素敏感性指数(Insulin sensitivity index,ISI);HE染色观察肝脏病理学改变;RT-PCR和Western blot检测肝组织中胰岛素受体底物-2(Insulin receptor substrate-2,IRS-2)、抵抗素(Resistin)和核因子(NF-κB)基因的mRNA转录水平和蛋白的表达水平,并进行相关性分析。结果改良高脂饲料喂养的大鼠一般状况发生改变,显示模型复制成功;TG、TC、ALT和AST值的测定及肝组织学检查证实模型组大鼠存在高血脂和肝功损害,且有IR的现象存在;与对照组比较,模型组Resistin和NF-κB的mRNA转录水平和蛋白表达水平均明显增高,且呈时间依赖性(P<0.05),Resistin与NF-κB的表达呈正相关;IRS-2的mRNA转录水平和蛋白表达水平逐渐下降,且呈时间依赖性(P<0.05),与Resistin的表达呈负相关。结论 NAFLD中IR的发生可能与胰岛素信号通路有关,涉及其始动因素IRS-2的减少和Resistin的增加。Resistin不仅能抑制IRS的磷酸化而影响胰岛素上游信号的正常传导,还可能通过激活NF-κB抑制其下游通路的传导,而加重IR反应。

    2012年02期 v.25 185-189页 [查看摘要][在线阅读][下载 334K]
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  • p16基因真核表达质粒的构建及其在骨肉瘤细胞中的表达

    夏羿凡;余娴;张健;

    目的构建p16基因真核表达质粒,并鉴定其在骨肉瘤U-2OS细胞中的表达。方法提取HeLa细胞总RNA,扩增p16基因,克隆至真核表达质粒pcDNA3-HA中,构建重组表达质粒pcDNA3-HA-p16,转染U-2OS细胞,免疫荧光及Westernblot法鉴定p16/HA的表达。结果重组表达质粒pcDNA3-HA-p16经双酶切及测序证实构建正确;p16/HA在U-2OS细胞中成功表达,且主要分布于细胞核。结论成功构建了p16基因真核表达质粒,并在U-2OS细胞中成功表达。

    2012年02期 v.25 190-192页 [查看摘要][在线阅读][下载 259K]
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治疗性制剂

  • 小檗碱对动脉粥样硬化家兔模型脂代谢及动脉粥样硬化的影响

    罗映;何琦;金磊;周岐新;杨俊霞;

    目的研究小檗碱(Berberine)对动脉粥样硬化家兔模型脂代谢和动脉粥样硬化的影响,并探讨其可能的作用机制。方法采用高脂饲料喂养家兔,建立家兔动脉粥样硬化模型,分别测定小檗碱灌胃前和灌胃后家兔血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;取主动脉,HE染色观察主动脉病理形态学变化;一氧化氮合酶测定试剂盒检测主动脉中诱导型一氧化氮合酶(Inductible nitric oxide synthase,iNOS)活性;实时荧光定量PCR法检测脂肪组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator activated receptorγ,PPARγ)基因的水平。结果模型组家兔血清中TC、TG和LDL-C水平与正常对照组相比明显升高(P<0.05);血管内膜明显增厚,可见脂质沉积和泡沫细胞形成;且主动脉中iNOS活性和脂肪组织中PPARγ基因水平显著升高(P<0.05),经小檗碱干预后,家兔血清中TC、TG和LDL-C水平、主动脉iNOS活性和脂肪组织中PPARγ基因的水平较模型组显著降低(P<0.05),主动脉脂质沉积与泡沫细胞的形成减少且均以低剂量小檗碱作用明显。结论小檗碱具有明显的降血脂和抗动脉粥样硬化作用,其作用机制与抑制iNOS的活性和下调PPARγ基因水平有关。

    2012年02期 v.25 193-196+199页 [查看摘要][在线阅读][下载 380K]
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  • FTY720对Hep-2细胞增殖抑制及诱导程序性死亡作用

    张淑芳;孙吉凤;麻莹;台桂香;

    目的探讨FTY720对体外培养的Hep-2细胞增殖抑制及诱导程序性死亡作用。方法用不同浓度的FTY720(800、1 600、3 200 ng/ml)处理Hep-2细胞,48 h后,采用MTT法检测细胞的增殖活力;瑞士-姆萨染色观察细胞形态的变化;流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况。结果 FTY720对Hep-2细胞增殖的抑制率呈剂量依赖性,当FTY720浓度为3 200 ng/ml时,Hep-2细胞的增殖受到明显抑制,抑制率为(60.900±0.071)%(P<0.05);经FTY720处理的细胞出现程序性死亡形态;FTY720可将Hep-2细胞阻滞于G2期,1 600 ng/ml FTY720组细胞的凋亡率明显升高(P<0.05)。结论一定浓度的FTY720能明显抑制体外培养的Hep-2细胞增殖,调节细胞周期,并诱导其发生程序性死亡。

    2012年02期 v.25 197-199页 [查看摘要][在线阅读][下载 326K]
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  • 川芎嗪对结肠炎模型小鼠血管细胞黏附分子-1表达的影响

    陈文敏;江琼;

    目的研究川芎嗪对结肠炎模型小鼠血管细胞黏附分子-1(Vascular cell adhension molecule-1,VCAM-1)表达的影响,探讨川芎嗪在治疗溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)中的作用。方法将小鼠随机分为正常对照组、模型组和川芎嗪组,采用葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium,DSS)诱导小鼠UC模型,观察UC炎症评价指标[疾病活动指数(Disease activityindex,DAI)、结肠组织形态学及组织学损伤],采用免疫组化法检测VCAM-l在结肠黏膜中的表达。结果与正常对照组比较,模型组的炎症评价指标均明显增高(P<0.01);正常对照组结肠黏膜中几乎不表达VCAM-1,模型组VCAM-1的表达明显升高(P<0.01),而川芎嗪组VCAM-1的表达较模型组明显降低(P<0.01)。结论 DSS诱导的结肠炎模型小鼠中VCAM-1表达增强,川芎嗪具有抑制VCAM-1表达的作用。

    2012年02期 v.25 200-202页 [查看摘要][在线阅读][下载 143K]
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诊断制剂

  • 血管内皮生长因子检测试剂盒质控标准的确定

    李树香;王欣怡;刘敬;周亚;徐静;邹检平;

    目的确定血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)检测试剂盒的质控标准。方法对已制备的VEGF检测试剂盒反应体系的线性范围、最低检出限、精密性、准确性、稳定性进行质量评价,确定质控标准。结果 VEGF检测试剂盒的线性范围为0~400 pg/ml;最低检出限为0 pg/ml;检测不同浓度VEGF样品的批内精密性为9.83%~13.73%,不同时间检测VEGF的批内精密性为5.47%~14.08%,批间精密性为7.88%;检测不同浓度VEGF的回收率为94%~105%,确定试剂盒的质控标准为批内、批间精密性<15%,回收率在90%~110%之间。3批试剂盒于4℃分别放置6个月,各项指标均符合已确定的质控标准。结论已确定了VEGF检测试剂盒的质控标准,为其进一步应用于临床奠定了基础。

    2012年02期 v.25 203-205页 [查看摘要][在线阅读][下载 143K]
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  • 牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

    王蓓蕾;孟日增;王为;钱爱东;

    目的制备牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gB蛋白单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA方法。方法应用重组IBRV gB蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,利用IBRV全病毒免疫家兔制备多克隆抗体,采用方阵滴定法确定兔抗IBRV IgG多抗与单抗的最适工作浓度,建立双抗体夹心ELISA检测方法,并对该方法进行灵敏度和特异性验证。结果获得了1株稳定分泌抗IBRV gB单抗的杂交瘤细胞株,命名为2C4;兔抗IBRVIgG多抗和单抗的最适工作浓度分别为2.620 9和2.634 1μg∕ml,酶标二抗的最适稀释度为1∶30 000;应用建立的双抗体夹心ELISA法对100份IBRV阳性血清样品进行检测,结果均呈阳性,符合率为100%;检测牛口蹄疫病毒、牛流行热病毒、牛副流感3型病毒的结果均呈阴性。结论成功制备了IBRV gB蛋白单克隆抗体,并建立了IBRV双抗体夹心ELISA检测方法,可用于牛传染性鼻气管炎的诊断和流行病学调查。

    2012年02期 v.25 206-208页 [查看摘要][在线阅读][下载 148K]
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临床研究

  • 麻疹减毒活疫苗接种偶合麻疹野病毒感染病例的麻疹病毒基因特征分析

    张帆;周剑惠;陈超;徐鑫;王爽;常新;魏雷雷;于佳动;

    目的分析1例接种麻疹减毒活疫苗第9天出现麻疹样症状病例的麻疹病毒基因特征,以确定是麻疹疫苗相关病例还是偶合麻疹野病毒感染。方法提取该病例咽拭子标本核酸,采用RT-PCR法扩增麻疹病毒核蛋白(Nucleoprotein,NP)基因羧基末端450个核苷酸片段后测序,分析其与全球24个基因型麻疹野病毒代表株、中国疫苗株(Shanghai-191)基因的亲缘关系以及核苷酸、氨基酸序列同源性。结果该病例感染的病毒属于H1a基因亚型麻疹野病毒。与中国H1基因型麻疹野病毒流行株代表株核苷酸和氨基酸序列的同源性较高,分别为97.5%~99.5%和96.6%,而与麻疹病毒中国疫苗株(Shanghai-191)核苷酸和氨基酸序列同源性较低,分别仅为91.2%和86.7%。结论该例接种麻疹减毒活疫苗后出现麻疹样症状的病例为偶合H1基因型麻疹野病毒感染所致,非麻疹疫苗相关病例。

    2012年02期 v.25 209-211页 [查看摘要][在线阅读][下载 313K]
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  • 异基因造血干细胞移植受者外周血单核细胞趋化蛋白-2和IL-12水平变化与急性移植物抗宿主病的相关性

    费晓莉;刘林;

    目的探讨异基因造血干细胞移植(allogeneic hemapoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)受者外周血单核细胞趋化蛋白-2(Monocyte chemoattractant protein-2/C-C motif ligand 8,MCP-2/CCL8)和白细胞介素-12(Interleukin-12,IL-12)水平变化与急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,aGVHD)的相关性,为临床早期诊断aGVHD提供可靠指标。方法 20例行allo-HSCT的患者(实验组)和16例行自体造血干细胞移植患者(对照组)在预处理前(移植前14 d)、预处理后回输干细胞前(移植前1 d)、移植后连续8周每周1次采用ELISA法检测患者血清中MCP-2和IL-12水平;对发生aGVHD的患者,在临床症状出现后检测次数调整为每周2次。结果对照组和实验组患者血清中MCP-2和IL-12水平在预处理前与预处理后回输干细胞前比较,均无明显变化(P>0.05)。对照组和实验组患者移植后7 d时血清中MCP-2和IL-12水平与预处理后回输干细胞前时比较,也无明显变化(P>0.05)。实验组中有6例患者发生aGVHD,于移植后16~52 d出现aGVHD临床症状,与移植后7 d时比较,血清中MCP-2和IL-12水平首次升高时间早于其临床症状出现时间;6例aGVHD患者在诊断时血清中MCP-2和IL-12水平较移植后7 d时明显升高(P<0.05),经抗aGVHD治疗获得缓解后,上述指标又较诊断时明显下降(P<0.05);实验组aGVHD患者血清MCP-2、IL-12水平首次升高时间分别为移植后11~46 d和11~49 d,此段时间内血清MCP-2、IL-2水平显著高于此段时间内未发生aGVHD组和对照组(P<0.05)。实验组未发生aGVHD患者在造血干细胞回输后的第2~8周血清MCP-2、IL-12水平与预处理后回输干细胞前时比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MCP-2和IL-12与aGVHD具有相关性,且其水平变化时间早于临床症状出现时间,检测血清中MCP-2和IL-12水平有助于aGVHD发生的早期诊断。

    2012年02期 v.25 212-216页 [查看摘要][在线阅读][下载 201K]
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  • 四川地区供浆员中巨细胞病毒中和抗体效价的分布及体内持续情况

    杨春;刘兰军;高昌茜;刘瑞熙;秦婷婷;容新宗;张航;

    目的分析四川地区供浆员中巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)中和抗体效价分布及体内持续情况。方法建立CMV中和抗体检测方法,检测四川地区8个浆站采集的2 002份健康人血浆中CMV中和抗体水平,并对其中44位供浆员进行1年跟踪检测;对同一供浆员进行4年长期追踪检测。结果四川地区供浆员血浆CMV中和抗体效价主要分布在1∶16~1∶64之间,阳性率(≥1∶8)高达98.35%,其中效价≥1∶192的占8.04%;44名供浆员CMV中和抗体水平在1年内保持稳定;一名供浆员在4年内CMV中和抗体效价保持较高水平。结论四川地区供浆员中CMV自然感染率较高,部分供浆员CMV中和抗体水平较高,且在较长的时间内保持稳定,本研究为CMV特异性人免疫球蛋白的研制提供了依据。

    2012年02期 v.25 217-219页 [查看摘要][在线阅读][下载 148K]
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  • 自体皮肤成纤维细胞与毛发角蛋白复合填充材料在医学美容中的应用

    赵娟;李希宁;李相军;杨旻;任立群;

    目的探讨自体皮肤成纤维细胞(Fibroblasts,Fbs)与毛发角蛋白(Hair keratin,HK)复合填充材料在面部除皱中的作用,为其在医学美容中的应用提供实验依据。方法采用消化分离法对人Fbs进行原代培养,并按不同比例与HK颗粒进行复合培养,台盼蓝排斥法检测细胞的存活率,MTT法检测细胞的增殖活力,ELISA法检测培养液中Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ,ColⅠ)的含量。将志愿者耳后部Fbs与HK颗粒共培养后回注至面部皱纹真皮层内,观察除皱效果。结果 HK与Fbs的比例为1∶2时,细胞的存活率、增殖活力及培养液中的ColⅠ含量均最高;志愿者术后4周,注射部位手感柔软,顺应性良好,无僵硬、挛缩等情况出现,皱纹的填充效果良好,外形改善明显。结论自体Fbs与HK复合填充材料能明显促进面部皱纹的修复,本研究为其临床应用提供了实验依据。

    2012年02期 v.25 220-223页 [查看摘要][在线阅读][下载 320K]
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  • 非小细胞肺癌组织中核因子-κB-p65 mRNA及基质金属蛋白酶-1的表达及其与肿瘤转移的相关性

    兰四友;张德芬;邓述恺;王荣丽;杨小琼;

    目的探讨核因子-κB-p65(Nuclear factor-κB-p65,NF-κB-p65)与基质金属蛋白酶-1(Matrix metalloproteases-1,MMP-1)在非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其与肿瘤浸润、转移、凋亡的相关性。方法收集50例手术切除的NSCLC组织及15例癌旁正常组织标本,RT-PCR法检测NSCLC及癌旁正常组织中NF-κB-p65 mRNA的表达,免疫组化法检测MMP-1蛋白的表达,TUNEL法检测细胞凋亡指数。结果 NSCLC组织中NF-κB-p65 mRNA的表达量显著高于癌旁正常组织(P<0.05);在腺癌组织中的表达量显著高于鳞癌组织(P<0.05);NSCLC组织中MMP-1蛋白阳性率显著高于癌旁正常组织(P<0.01);NF-κB-p65 mRNA和MMP-1蛋白的表达与TNM分期、分化程度、淋巴结转移、病理类型有关(P<0.05或<0.01),与年龄、性别无关(P>0.05);直线相关分析发现,NSCLC组织中NF-κB-p65 mRNA与MMP-1蛋白的表达相关;NSCLC组织中的细胞凋亡指数显著低于癌旁正常组织,且与NF-κB-p65 mRNA的表达量呈负相关(r=-0.547,P<0.001)。结论 NSCLC组织中NF-κB-p65 mRNA与MMP-1蛋白的表达具有相关性,NF-κB-p65 mRNA的表达与细胞凋亡指数呈负相关,NF-κB-p65通过一定的途径调控MMP-1蛋白的表达,NF-κB与MMP-1共同参与了肿瘤发生、发展的过程,NF-κB-p65发挥抗凋亡作用。

    2012年02期 v.25 224-227+232页 [查看摘要][在线阅读][下载 299K]
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  • 干扰素γ治疗毛细支气管炎的疗效观察

    王敏;梁航;王丽娜;孟繁峥;

    目的观察干扰素γ(Interferonγ,IFNγ)治疗毛细支气管炎的疗效。方法将符合毛细支气管炎诊断标准的患儿80例随机分为治疗组和对照组,每组40例,两组患儿均采用规范综合治疗,治疗组在此基础上加用IFNγ,每日1次,连续5 d,观察两组患儿临床症状和体征消失时间,并检测免疫学指标。结果治疗组临床治疗总有效率明显高于对照组(P<0.01);临床症状、体征消失时间均明显短于对照组(P<0.01或<0.05);血清IgE和IL-4水平较对照组明显降低(P<0.01),而IFNγ水平明显高于对照组(P<0.01)。结论 IFNγ可有效缩短毛细支气管炎的病程,提高治愈率,并可减轻机体的免疫反应。

    2012年02期 v.25 228-229+236页 [查看摘要][在线阅读][下载 148K]
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技术方法

  • 明胶微球的制备

    徐军;陈子扬;单鹏;崔颖杰;马占山;

    目的初步建立明胶微球制备工艺,并检测微球性质。方法按明胶浓度、pH值、硫酸钠浓度不同配比制备明胶微球,根据成球情况(包括微球均匀度、成球率、碎屑量、粘连现象),筛选微球制备最佳条件。以IFNα2b为模型药物,以最佳条件制备明胶微球,检测IFNα2b活性,并计算包封率。结果在50℃条件下,明胶浓度为40 g/L,调节pH值为3.4和3.6,硫酸钠浓度为300 g/L时,制备的明胶微球较好,平均粒径为18μm,直径范围在15~20μm之间的微球占70%以上,包封率在85%以上。结论所制备的明胶微球可用于缓释注射剂的制备。

    2012年02期 v.25 230-232页 [查看摘要][在线阅读][下载 192K]
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  • 氯霉素完全抗原的制备及鉴定

    王颖;安宇;张东杰;姚笛;柳增善;

    目的制备氯霉素(Chloramphenicol,CAP)完全抗原,并对其进行鉴定。方法采用重氮化法制备免疫抗原(CAP-BSA)和检测抗原(CAP-OVA),琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE鉴定其偶联后效果;紫外扫描法分析CAP与BSA和OVA的分子结合比;BCA法测定偶联蛋白的浓度;将CAP-BSA经小鼠腹腔免疫,采血分离血清,间接ELISA法检测小鼠血清抗体效价。结果琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE分析显示,两种完全抗原偶联成功;CAP与BSA和OVA的分子结合比分别为28︰1和21︰1,蛋白浓度分别为3.16和2.28 mg/ml;CAP-BSA能够刺激小鼠产生高效价的抗CAP抗体。结论成功制备了CAP完全抗原,为下一步获得高亲和力和高特异性的单克隆抗体奠定了基础。

    2012年02期 v.25 233-236页 [查看摘要][在线阅读][下载 296K]
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  • 纤维蛋白胶抗体间接ELISA检测方法的建立及初步应用

    蔡阳;任真;何学军;吴华;乔红群;

    目的建立纤维蛋白胶抗体间接ELISA检测方法,并进行初步应用。方法采用纤维蛋白胶作为包被抗原,建立检测纤维蛋白胶抗体的间接ELISA法,优化反应条件,并对方法的精密性及特异性进行验证。采用建立的间接ELISA法检测纤维蛋白胶免疫兔血清抗体。结果间接ELISA法的最佳反应条件为紫外灯管垂直照射酶标板20 min后,选择0.05 mol/L的碳酸氢钠溶液(pH 9.6)作为包被缓冲液,以10μg/ml的纤维蛋白胶4℃包被过夜,以含10%小牛血清的PBS封闭,0.1%PBST为抗体稀释液,纤维蛋白胶多克隆抗体和HRP标记的羊抗兔IgG的工作浓度分别为1∶2 500和1∶4 000,反应条件均为37℃孵育l h,底物显色条件为37℃孵育15 min,终止液为2 mol/L硫酸。该方法精密性良好,特异性较强。以建立的间接ELISA方法检测给药1、2、4、6周的兔血清抗体,发现给药2周后兔血清抗体水平明显升高,6周时开始下降。结论成功建立了纤维蛋白胶抗体间接ELISA检测方法,可用于兔免疫血清纤维蛋白胶抗体的检测。

    2012年02期 v.25 237-240页 [查看摘要][在线阅读][下载 165K]
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  • 中空纤维超滤技术在无细胞百日咳疫苗原液纯化工艺中的应用

    胡业勤;曾凯;龚静;张波;陈静;薛红刚;李新国;项美娟;

    目的应用中空纤维超滤技术纯化脱毒后的无细胞百日咳抗原。方法采用中空纤维超滤法纯化脱毒后的无细胞百日咳抗原,并从纯化样品的纯度、回收率及效价等方面与透析法进行对比。结果超滤法去除无细胞百日咳抗原溶液中脱毒剂和色素的效率更高(3 h内即可完成),且所得原液的回收率较高(92.1%),效价(11.166 IU/ml)也高于透析法(9.211 IU/ml)。结论应用中空纤维超滤技术纯化无细胞百日咳抗原可替代透析工艺。

    2012年02期 v.25 241-242页 [查看摘要][在线阅读][下载 117K]
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综述

  • 全细胞差减筛选法在噬菌体展示文库筛选中的应用

    吴红珍;张林波;

    全细胞差减筛选法是近年来在细胞筛选的基础上发展起来的一项筛选技术,其利用成对的细胞,即两种不同状态的细胞对噬菌体展示文库进行差减筛选,主要用于筛选新的抗原表位、受体、配体、新型疫苗、肿瘤细胞的靶向活性肽、靶向基因载体及受体或酶的激动剂或抑制剂等。本文就其筛选的原理、优缺点、优化及其在噬菌体展示文库筛选中的应用作一综述。

    2012年02期 v.25 243-245+250页 [查看摘要][在线阅读][下载 160K]
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  • 丙型肝炎病毒实验室检测技术的发展及其在不同病程的适用性

    李盛陶;夏雪山;段海平;

    丙型肝炎严重威胁人类健康,丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)感染后表现为较为复杂的病程,由急性期、慢性期直至发展成肝硬化、肝癌,还有隐匿性HCV感染。准确、可靠的HCV实验室检测技术是预防与控制疾病并进行有效病程预后和药物治疗的前提。HCV实验室检测技术发展迅速,灵敏度和检测特异性均有明显提高。针对HCV感染者和丙型肝炎患者的不同病程,各类实验室检测技术也具有不同的适用范围。本文对近年来HCV实验室检测技术的发展及其在不同病程的适用性作一综述。

    2012年02期 v.25 246-250页 [查看摘要][在线阅读][下载 191K]
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述评

  • 轮状病毒疫苗的现状和发展动向

    江保明;杨晓明;徐德启;

    <正>轮状病毒(Rotavirus,RV)感染是引起儿童就诊和住院的主要病种,每年有近53万人因感染RV死亡,而其中的85%发生在发展中国家[1]。据统计,在中国,因腹泻住院的5岁以下儿童中,由RV引起的占50%左右,估计每年约有13 400人死亡,其中约70%发生在农村[2]。由于RV感染的高发病率及对

    2012年02期 v.25 251-253页 [查看摘要][在线阅读][下载 106K]
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专题报道

  • Monoliths整体色谱柱在病毒纯化及疫苗生产中的应用

    陈国明;沈永才;张德有;Charles MY Lim;

    <正>Monoliths整体色谱柱是一种利用原位聚合形成完整连续固定相的新技术,被誉为是第四代层析填料[1-2]。与传统的颗粒填充介质相比,不需要填装,制备简单,载量高,物质传输速度快。近年来,由于能够大量并快速地进行生物大分子的分离,Mono-

    2012年02期 v.25 254-255页 [查看摘要][在线阅读][下载 78K]
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消息

  • 《中国生物制品学杂志》稿约

    <正>《中国生物制品学杂志》于1988年创刊,为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内重要的生物制品专业学术期刊,由国家卫生部主管,中华预防医学会和长春生物制品研究所有限责任公司主办,月刊。1刊载内容和设置栏目本刊主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床

    2012年02期 v.25 256页 [查看摘要][在线阅读][下载 39K]
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  • 《中国药学大辞典》(2008年版)征订启事

    <正>《中国药学大辞典》收集词汇近26 000条,涉及药用动物、植物、矿物、中药和方剂、药用化学物质、化学药物、药剂学、药物化学、中药学和生药学、微生物药学、生物药学、药物分析、药理学和毒理学、医院药学、临床药学、药学史、药事管

    2012年02期 v.25 160页 [查看摘要][在线阅读][下载 45K]
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  • 欢迎登录《中国生物制品学杂志》网站

    <正>尊敬的专家、读者、作者及各位同仁:您们好!自2007年8月起,《中国生物制品学杂志》网站(www.zgswj.com.cn,中文域名:中国生物制品学杂志.com)正式运行。本站网

    2012年02期 v.25 189页 [查看摘要][在线阅读][下载 40K]
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  • 征稿

    <正>《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管,中华预防医学会和长春生物制品研究所有限责任公司主办,是中华预防医学会系列杂志之一,

    2012年02期 v.25 205页 [查看摘要][在线阅读][下载 47K]
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  • 欢迎订阅《中国生物制品学杂志》

    <正>《中国生物制品学杂志》于1988年创刊,由中华人民共和国卫生部主管,系中华预防医学会系列杂志之一,为报道我国生物制品研究开发重大成果和最新进展的国内唯一生物制品专业学术期刊。主要刊载生物制品和生物技术产品相关领

    2012年02期 v.25 211页 [查看摘要][在线阅读][下载 34K]
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  • 《免疫学前沿进展》征订启事

    <正>由中国免疫学会理事长曹雪涛院士牵头、全国免疫学各领域知名专家联合编著的《免疫学前沿进展》,于2009年12月由人民卫生出版社正式出版。免疫学是一门重要的基础学科,与临床医学紧密相关,是生物医学乃至整个生命科学中发展最快的学科之一。《免疫学前沿进展》是国内第一本及时反映国、内外免疫学研究现状与进展的专著。本书的编者都

    2012年02期 v.25 216页 [查看摘要][在线阅读][下载 42K]
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  • 《中国药学术语词库与主题词表》征订启事

    <正>《中国药学术语词库与主题词表》是科技部的重点科技基础性项目。书本产品《中国药学主题词表》是我国第一部涵盖药学及其相关学科主题词的主题词表。对图书文献的编辑、出版、标引、编目、建库、查新、文献数据库建设、数据库检索、咨询服务、信息交换和国内外

    2012年02期 v.25 240页 [查看摘要][在线阅读][下载 37K]
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