中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

基础研究

  • 抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒的构建及其瞬时表达

    胡迪超;张爱华;潘勇兵;端义坤;孙可芳;张银川;杨晓明;

    目的构建抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒,并在哺乳动物细胞中进行瞬时表达。方法采用RLM-RACE法克隆WuT4抗体可变区和信号肽序列,并采用基因拼接法构建嵌合抗体基因真核表达质粒。采用脂质体法瞬时转染HEK293T、CHO-DHFR-和COS-7 3种哺乳动物细胞,ELISA法检测转染细胞上清中嵌合抗体的浓度,流式细胞术、Western blot和Dotblot分析嵌合抗体的抗原结合活性,并对表达的嵌合抗体进行免疫荧光分析。结果成功克隆了WuT4抗体可变区和信号肽序列;抗人CD4嵌合抗体共表达质粒pOptiVEC-T4H和pcDNA3.3-T4L构建正确;表达的嵌合抗体保留了亲本抗体的抗原结合力,并能特异性识别人CD4分子;免疫荧光分析表明,表达的嵌合抗体含人抗体的重、轻链恒定区。结论 已成功构建了抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒,并能在哺乳动物细胞中瞬时表达,为其进一步研究奠定了基础。

    2011年09期 v.24 997-1002页 [查看摘要][在线阅读][下载 368K]
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  • 人乳头瘤病毒58 L1蛋白羧基端核定位信号在毕赤酵母细胞中的入核功能

    姜自军;楼觉人;

    目的研究人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)58晚期蛋白1(L1)羧基端核定位信号在毕赤酵母细胞中的入核功能。方法分别构建全长HPV58L1基因和缺失羧基端核定位信号的HPV58L1基因与绿色荧光蛋白(Green fluores-cent protein,GFP)基因融合的重组表达质粒,在毕赤酵母中表达相应蛋白,用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白在毕赤酵母细胞中的分布情况。结果融合基因表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;表达的融合蛋白没有聚集在毕赤酵母细胞核中,而是随机地分布在毕赤酵母细胞细胞核和细胞质中。结论 HPV58 L1蛋白的羧基端核定位信号在毕赤酵母细胞中不发挥主动入核的功能。

    2011年09期 v.24 1003-1006+1012页 [查看摘要][在线阅读][下载 290K]
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  • 甲型流感病毒血凝素基因在昆虫杆状病毒系统中的表达

    付金奇;郭建强;姚立红;陈爱珺;刘晓宇;张乐萃;张智清;

    目的利用昆虫杆状病毒系统表达甲型流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)蛋白。方法 PCR扩增去除信号肽的甲型H1N1(A/PR/8/34)流感病毒HA基因,与pFastBacdual载体(pFBd)连接,构建转移载体pFBd-HA,转化含Bacmid的DH10Bac感受态细胞,获得穿梭质粒rBacmid-HA。rBacmid-HA转染sf9昆虫细胞,获得重组病毒rBac-HA。采用噬斑形成法检测病毒滴度,PCR法检测重组杆状病毒基因组HA基因,间接免疫荧光法、Western blot法和ELISA法检测HA蛋白的表达。结果穿梭质粒rBacmid-HA经PCR鉴定构建正确;第3代rBac-HA的滴度为3×107 pfu/ml;感染rBac-HA的sf9细胞经PCR扩增可见4 216 bp的特异性条带,间接免疫荧光检测可见绿色荧光,Western blot鉴定与鼠抗甲型流感病毒HA(H1)单抗和鸡抗流感病毒(California株)多抗发生特异性反应,ELISA检测与鼠抗流感病毒(PR8株)多抗特异性结合的能力强于与鸡抗流感病毒(California株)多抗结合的能力。结论 利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达了甲型流感病毒HA蛋白。

    2011年09期 v.24 1007-1012页 [查看摘要][在线阅读][下载 364K]
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  • 小鼠神经细胞cDNA T7噬菌体表面展示文库的构建

    张磊升;高巍;赵魁;贺文琦;宋德光;陆慧君;高丰;

    目的构建小鼠神经细胞cDNA T7噬菌体表面展示文库。方法用Trizol试剂提取原代小鼠神经细胞总RNA,分离、纯化mRNA,经反转录合成其双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoRⅠ/HindⅢ接头,用内切酶EcoRⅠ和HindⅢ消化接头,以形成两端分别带有EcoRⅠ和HindⅢ黏性末端的双链cDNA。经Mini Column进行纯化,收集大小在300 bp以上的双链cDNA片段,将其连接于含有EcoRⅠ和HindⅢ末端的T7Select 10-3b载体上,体外包装后经BLT5403菌株增殖,进行文库扩增。结果所构建的文库库容量为含有3.04×107个重组子,原始滴度为2.8×107 pfu/ml,重组率为92%,扩增后文库滴度为3.5×1010 pfu/ml。对随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,88%的插入片段大于300 bp。结论 成功构建了小鼠神经细胞cDNA T7噬菌体表面展示文库。

    2011年09期 v.24 1013-1015+1021页 [查看摘要][在线阅读][下载 198K]
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  • 双顺反子表达载体DV的构建及其表达效率

    张丽星;张喜珍;王玉倩;刘晨露;夏秋;孔维;于湘晖;张海红;

    目的构建双顺反子表达载体DV,并检测其表达效率。方法以载体VR1012为模板,PCR扩增BGH基因和启动子CMV-intronA基因片段,分别连接至载体VR1012启动子和终止子之间的相应位点上,构建双顺反子表达载体DV。另以质粒pshuttle-luciferase为模板,PCR扩增报告基因luciferase片段,分别连接至DV的两个启动子后,得到质粒DV-luc1和DV-luc2。将质粒DV-luc1、DV-luc2和阳性质粒pshuttle-luciferase分别转染COS-7细胞,Western blot检测luciferase蛋白的表达情况,荧光酶标仪检测luciferase降解底物的水平。结果双顺反子表达载体DV经双酶切鉴定证明构建正确;转染重组质粒DV-luc1和DV-luc2的COS-7细胞中均有luciferase的表达,且表达效率DV-luc2略高于DV-luc1。结论 已成功构建了双顺反子表达载体DV,且载体的第2个启动子的启动效率略高于第1个启动子,为基因治疗、转录调控、多价疫苗等的研究奠定了基础。

    2011年09期 v.24 1016-1021页 [查看摘要][在线阅读][下载 274K]
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  • 申克孢子丝菌双相转换差异表达基因的生物信息学分析

    周汛;杨致邦;肖异珠;

    目的探讨申克孢子丝菌菌丝相(Mycelium,M)和酵母相(Yeast,Y)双相转换的分子机制,筛选与其双相转换相关的差异表达基因。方法应用抑制性消减杂交技术,构建申克孢子丝菌菌丝相和酵母相的正反cDNA消减文库,并对其差异表达的基因进行生物信息学分析。结果 M+Y文库获得751条表达序列标签(Expressed sequence tags,ESTs),经拼接后获得101条非冗余序列(Unigenes);Y+M文库获得875条ESTs,拼接获得249条Unigenes。申克孢子丝菌酵母相和菌丝相的转换伴随着不同菌相细胞差异基因的高表达,这些高表达的差异基因可分为结构基因类、代谢酶类、细胞表面分子类及功能不明的细胞分子。结论 已成功构建申克孢子丝菌双相转换相关的cDNA消减文库,并筛选出部分差异表达基因,为进一步研究申克孢子丝菌致病相关基因奠定了基础。

    2011年09期 v.24 1022-1027页 [查看摘要][在线阅读][下载 313K]
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消息

  • 《医学免疫学实验技术》征订启事

    <正>我国首批国家级医学研究生规划教材之一的《医学免疫学实验技术》(主编柳忠辉),于2008年3月由人民卫生出版社出版。该书由国内16所大学从事相关领域研究的教授参编。全书共分为16章,相关实验技术部分不仅介绍了实验原理和实验流程,还列举了典型实验案例,并重点阐述了实验过程

    2011年09期 v.24 1027页 [查看摘要][在线阅读][下载 44K]
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基础研究

  • 骨髓间充质干细胞移植和直流电刺激对大鼠脊髓损伤的修复作用

    范东艳;王苹;刘然;陈玉丙;

    目的探讨骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植和直流电刺激对大鼠脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)的修复作用。方法采用脊椎骨破坏法制备大鼠SCI模型,将模型大鼠随机分为模型组、BMSCs移植组、电刺激组和电刺激+BMSCs移植组,通过BBB评分、体感诱发电位(Somatosensory evoked potential,SEP)测定和免疫组化法观察不同方法治疗SCI的效果。结果 BMSCs移植后7和14 d,模型组和电刺激组BBB评分与BMSCs移植组和电刺激+BM-SCs移植组相比,差异有统计学意义(P<0.05);电刺激+BMSCs移植组脊髓功能恢复最好。SEP检测,BMSCs移植后14 d,BMSCs移植组和电刺激+BMSCs移植组与其他两组比较,潜伏期幅有明显差异(P<0.05)。采用NF-200标记脊髓神经元,模型组在损伤14 d后,仅见少量的NF阳性细胞;而电刺激组和BMSCs移植组可见大量NF阳性细胞和轴突分布于损伤区周围;电刺激+BMSCs移植组NF阳性细胞明显多于电刺激组和BMSCs移植组(P<0.05)。BMSCs移植组在移植后7 d,局部组织脑衍生的亲神经因子(Brain-derived neurotropic factor,BDNF)表达量明显高于模型组(P<0.05),14 d最强,21 d减弱,电刺激+BMSCs移植组BDNF表达最强(P<0.05)。结论 BMSCs移植联合电刺激能够最大程度地促进SCI修复。

    2011年09期 v.24 1028-1032页 [查看摘要][在线阅读][下载 388K]
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消息

  • 来自ATCC的基因靶向工具

    <正>ATCC发布三个新的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)滋养细胞系,用于支持未分化胚胎干细胞系和iPS细胞系的生长。DR4 MEF(ATCC誖SCRC-1045TM)带有抗生素耐药基因,可以耐受新霉素(G418)、嘌呤霉素、潮霉素和6-硫基鸟嘌呤。SNL76/7(SCRC-1049TM)是一个克隆,来自于具有G418抗性和鼠类LIF高表达的STO细胞系。SNLP 76/7-4(SCRC-1050TM)

    2011年09期 v.24 1032页 [查看摘要][在线阅读][下载 56K]
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基础研究

  • 骨髓间充质干细胞移植对大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用

    徐艳华;李敏;刘俊;姜蓉;汪维伟;

    目的观察骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)移植对大鼠溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)的治疗作用。方法分离、培养、鉴定大鼠MSCs,并以DAPI标记第3代MSCs。将大鼠随机分为3组,A、B组采用免疫复合法诱导UC模型,C组为正常对照组。A组移植标记的MSCs,B组移植PBS。移植后3、7、14 d各组均处死大鼠5只,取结肠组织,光镜观察病理变化,荧光显微镜观察标记细胞的分布,激光共聚焦显微镜观察标记细胞细胞角蛋白(Cytokeratin,CK)的表达。结果 MSCs生长迅速,呈均一的成纤维样细胞,表达CD29和CD90,不表达CD45。移植后7、14 d,A组结肠的修复明显优于B组;移植后3 d,A组结肠即可见移植细胞,至14 d时最多(P<0.05);移植后7、14 d,A组少量移植细胞表达CK。结论 MSCs移植可促进UC大鼠损伤结肠的修复;部分MSCs可分化为结肠上皮细胞,参与损伤的修复。

    2011年09期 v.24 1033-1037页 [查看摘要][在线阅读][下载 424K]
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  • CTLA-4+49A>G基因多态性与中国人群结直肠癌的相关性

    李晓冬;赵金鹏;孙岩岩;

    目的分析中国人群细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(Cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4,CTLA-4)+49位点A>G基因多态性与结直肠癌发生和进展的相关性。方法选取结直肠癌患者248例(疾病组)、结直肠腺瘤患者380例(对照组),采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)检测CTLA-4+49位点基因型。结果疾病组CTLA-4+49位点出现GG纯合子或至少出现1个G等位基因的频率显著高于对照组;与携带CTLA-4+49A/A基因型患者相比,携带CTLA-4+49G/G基因型患者发生结直肠癌的危险性为OR=3.684(95%CI:1.670~8.128);携带A等位基因的患者发生远处转移的几率较高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CTLA-4+49A>G基因多态性与中国人群结直肠癌易感性具有一定的相关性,但对结直肠癌进展的影响不明显。

    2011年09期 v.24 1038-1041页 [查看摘要][在线阅读][下载 198K]
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消息

  • 《免疫学前沿进展》征订启事

    <正>由中国免疫学会理事长曹雪涛院士牵头、全国免疫学各领域知名专家联合编著的《免疫学前沿进展》,于2009年12月由人民卫生出版社正式出版。免疫学是一门重要的基础学科,与临床医学紧密相关,是生物医学乃至整个生命科学中发展最快的学科之一。《免疫学前沿进展》是国内第一本及时反映国、内外免疫学研究现状与进展的专著。本书的编者都是免疫学相关领域学术造诣精深、研究成果卓著的专家,其工作受到国、内外同行的高度关注和认可,有着很高的国内、

    2011年09期 v.24 1041页 [查看摘要][在线阅读][下载 46K]
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基础研究

  • PrP(D178N)无细胞表达、抗原性及结构分析

    汤鑫;万家余;鞠传静;李莎;郝镯;刘文森;李忠义;孟轲音;张晓晶;刘林娜;沈景林;马永和;钱军;

    目的无细胞表达人178位点突变朊蛋白PrP(D178N),并分析其抗原性及结构。方法提取人血液基因组DNA,应用PCR法突变人PrP 178号位点。以正常的PrP为对照组,分别连接至真核表达载体pcDNA3.1上,利用无细胞真核表达系统进行表达。Western blot分析表达的重组蛋白的抗原性,电镜观察抗原结构。结果突变基因重组表达质粒构建正确;表达的PrP(D178N)蛋白相对分子质量约为28 000,对PK酶具有抗性,电镜下可见氧病相关纤维(Scrapie associated fibrils,SAF)存在。结论 已成功无细胞表达了PrP(D178N),为后续其突变后空间构象及致病机理的研究奠定了基础。

    2011年09期 v.24 1042-1045页 [查看摘要][在线阅读][下载 205K]
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  • 恒河猴白细胞介素-4基因的合成、原核表达及纯化

    陈丹;刘娟;黄健;刘新颖;王冉;史洪娜;王维龙;沈林;李鼎锋;

    目的人工合成恒河猴白细胞介素-4(Macaca mulatta Interleukin-4,Mamu IL-4)基因,并在大肠杆菌中高效表达及纯化。方法根据大肠杆菌遗传密码偏爱性优化设计并人工合成Mamu IL-4(mIL-4)基因,克隆入pET43.1a(+)表达载体,构建重组表达质粒pET43.1a-mIL-4,转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL,经IPTG诱导表达。通过阳离子交换层析及稀释复性等步骤对表达的重组mIL-4蛋白进行纯化,纯化产物经Western blot进行鉴定。结果双酶切及测序证实重组表达质粒pET43.1a-mIL-4构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为15 000,表达量约占菌体总蛋白的40%,主要以包涵体形式存在,经纯化复性后纯度可达95%以上;Western blot检测其能与鼠抗mIL-4单克隆抗体特异性结合。结论 在大肠杆菌中高效表达了重组mIL-4蛋白,纯化的蛋白纯度较高,为其生物学活性及佐剂的相关研究奠定了基础。

    2011年09期 v.24 1046-1049+1053页 [查看摘要][在线阅读][下载 257K]
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  • 靶向人转录因子FOXM1基因的shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

    陈国庆;姚珍薇;秦兴发;

    目的构建并鉴定靶向人转录因子FOXM1基因的shRNA慢病毒载体。方法设计合成靶向人FOXM1基因的shRNA序列,通过基因重组技术将其连接到含U6启动子及绿色荧光蛋白基因的慢病毒表达载体pLL3.7中,构建shRNA重组质粒pLL-FOXM1-shRNA。重组质粒经XbaⅠ和NheⅠ双酶切及DNA测序鉴定后,与慢病毒包装质粒混合,与脂质体Lipofec-tamineTM 2000共转染至293T细胞中,孵育72 h后收集上清液,高速离心纯化病毒颗粒,并采用逐孔稀释法测定慢病毒滴度。结果双酶切鉴定及测序结果证实,靶向人FOXM1基因的shRNA序列已成功插入pLL3.7中;在293T细胞中成功包装出慢病毒颗粒,病毒滴度为1×108 TU/ml。结论 已成功构建了靶向人FOXM1基因的shRNA慢病毒载体,为进一步研究FOXM1的分子功能奠定了基础。

    2011年09期 v.24 1050-1053页 [查看摘要][在线阅读][下载 247K]
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  • 牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白的原核表达及纯化

    谭为;聂映;吴仁彪;程黎庆;闫广谋;张西臣;张瑞;

    目的原核表达并纯化牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白。方法以牛型结核分枝杆菌Vallee株全基因组DNA为模板,PCR扩增MPT64基因,克隆至pET-28a(+)载体,构建重组原核表达质粒pET-MPT64,转化至E.coli BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE鉴定后,用Ni-NTA亲和层析纯化,Western blot鉴定纯化蛋白。结果获得的MPT64基因测序结果与GenBank中登录的MPT64基因核苷酸序列同源性为100%;重组表达质粒pET-MPT64经酶切鉴定表明构建正确;表达的重组MPT64蛋白相对分子质量约为26 000,主要以可溶性形式表达,表达量约占全菌总蛋白的11%;纯化的重组MPT64蛋白纯度达93%,可与抗结核牛血清发生特异性反应。结论 成功原核表达并纯化了牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白,其可作为诊断抗原用于新型牛结核病的检测。

    2011年09期 v.24 1054-1056+1060页 [查看摘要][在线阅读][下载 214K]
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  • 髓母细胞瘤中PI3K、AKT及Nrf2的表达及其意义

    林晓;林青;唐俐;刘斌;李昱;

    目的检测髓母细胞瘤中PI3K、AKT及Nrf2蛋白的表达,探讨PI3K/AKT信号传导通路在髓母细胞瘤中的作用机制及其临床意义。方法应用免疫组化Envision二步法检测33例髓母细胞瘤及17例对照脑组织中PI3K、AKT及Nrf2蛋白的表达,分析3种蛋白之间表达的相关性及其与髓母细胞瘤临床病理特征及类型的相关性。结果在33例髓母细胞瘤中,PI3K、AKT及Nrf2蛋白的表达率显著高于对照脑组织(P<0.05);PI3K、AKT及Nrf2蛋白的表达显著相关(P<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤大小及肿瘤类型均无显著相关性(P>0.05)。结论 PI3K/AKT信号传导通路可能对髓母细胞瘤的发生、发展起重要作用,可能成为髓母细胞瘤诊治的新靶点。

    2011年09期 v.24 1057-1060页 [查看摘要][在线阅读][下载 229K]
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  • Notch1信号在小鼠胚胎早期造血发育阶段的表达

    张树君;陈建斌;杨春秀;李芳菲;姜蓉;徐强;

    目的探讨小鼠胚胎早期造血发育阶段Notch1信号的表达。方法采用RT-PCR和Western blot法对小鼠胚胎9.5 d(E9.5)、E10.5、E11.5和E12.5的主动脉-性腺-中肾(Aorta-gonad-mesonephros,AGM)区和胎肝中Notch1信号基因和蛋白的表达水平进行检测。结果 AGM区Notch1基因mRNA的表达量较高,且随孕龄的增大而递减;胎肝中Notch1基因mRNA的表达水平有明显的差异,其中E10.5表达量最低,E11.5表达量最高;在各个时相,AGM区与胎肝中Notch1基因mRNA的表达水平差异均有统计学意义(P<0.05)。Notch1蛋白与Notch1基因mRNA的表达规律相同,但除E9.5外,其他3个时相AGM区与胎肝中Notch1蛋白的表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 Notch1信号在造血祖细胞的发育分化中具有重要作用,规律是由AGM区向胎肝区迁移。

    2011年09期 v.24 1061-1063+1067页 [查看摘要][在线阅读][下载 220K]
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  • 犬干扰素α1基因的修饰及在毕赤酵母中的表达

    王玉;朱艳平;郭霄峰;

    目的修饰犬干扰素α1(Canine interferon alpha1,CaIFNα1)基因,提高其在毕赤酵母中的表达水平及抗病毒活性。方法根据巴斯德毕赤酵母表达系统对密码子的偏爱性,将CaIFNα1基因改造后,克隆至分泌表达载体pPICZαC中,电转化巴斯德毕赤酵母X33,甲醇诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定和氨基酸测序后,检测重组蛋白的表达量及抗水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)的活性。结果重组表达质粒pPICZαC-CaIFNα1经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组CaIFNα1蛋白相对分子质量约为24 000,蛋白氨基酸序列与天然的CaIFNα1氨基酸序列相同,3批重组酵母菌表达产物的蛋白含量分别为0.253、0.198和0.224 mg/ml,在Vero细胞上均无抗VSV活性,在MDCK细胞上的抗VSV活性分别为1.58×108、1.30×108和1.50×108 U/mg。结论 已成功改造了CaIFNα1基因,并在毕赤酵母中实现了高效表达,为大量发酵生产干扰素奠定了基础。

    2011年09期 v.24 1064-1067页 [查看摘要][在线阅读][下载 235K]
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  • 肺癌组织中E-cadherin和Vimentin的表达及其与上皮-间质转化的相关性

    田茗源;王林辉;张雄;罗红池;李昱;

    目的探讨肺癌组织中E-cadherin和Vimentin的表达及其与上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的相关性。方法采用免疫组化SP法检测44例肺癌组织中E-cadherin和Vimentin的表达,并分析二者与肺癌临床特征及EMT之间的相关性。结果肺癌组织中E-cadherin和Vimentin的表达率分别为40.9%和25.0%;中晚期肺癌(Ⅲ-Ⅳ)中E-cadherin的表达率(16.7%)明显低于早期肺癌(Ⅰ-Ⅱ)(50.0%),有淋巴结转移肺癌组织中E-cadherin的表达率(17.6%)低于无淋巴结转移肺癌组织(55.6%),且差异均有统计学意义(P<0.05);中晚期肺癌组织中Vimentin的表达率(58.3%)明显高于早期肺癌组织(12.5%),在有淋巴结转移组的表达率(41.2%)高于无淋巴结转移组(14.8%),且差异均有统计学意义(P<0.05);肺癌组织中E-cadherin与Vimentin的表达呈负相关(r=-0.397,P<0.05)。结论 E-cadherin的表达降低和Vimentin的表达升高与肺癌的淋巴结转移、病理分期相关,E-cadherin和Vimentin参与了EMT过程,在肺癌转移中具有重要作用。

    2011年09期 v.24 1068-1071页 [查看摘要][在线阅读][下载 254K]
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预防制品

  • 痘苗病毒弱毒株广9株的免疫原性分析

    朱蓉;黄维金;王佑春;俞永新;

    目的分析痘苗病毒弱毒株广9株(Vaccinia virus Guang 9 strain,VG9)对BALB/c小鼠的免疫原性。方法用鸡胚成纤维细胞培养痘苗病毒VG9株和天坛株(Vaccinia virus Tian Tan strain,VTT),离心纯化病毒,经小鼠背部皮内免疫后,每周采血,共4次,采用ELISA法检测小鼠血清中抗痘苗病毒特异性抗体效价;中和试验检测免疫后3周和4周小鼠血清中和抗体效价。结果两株痘苗病毒免疫后1周,小鼠血清中即产生抗痘苗病毒特异性抗体,效价均达1∶4 050;至第3周,抗体效价上升至1∶12 150;第4周时,VG9株抗体效价维持在1∶12 150,而VTT株效价可达1∶36 450。两株病毒诱导的中和抗体水平均在免疫后3周达峰值,且具有交叉中和作用,均对VTT株中和效果更好,VG9株诱导产生中和抗体的能力较VTT株略低。结论 痘苗病毒VG9株与VTT株一样,具有良好的免疫原性,皮内免疫均能刺激小鼠产生良好的抗痘菌病毒特异性抗体和中和抗体。

    2011年09期 v.24 1072-1074页 [查看摘要][在线阅读][下载 155K]
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  • 不同种类乙型肝炎疫苗诱导小鼠细胞因子水平的比较

    何鹏;胡忠玉;梁争论;李河民;庄辉;

    目的探讨不同种类乙型肝炎(乙肝)疫苗免疫小鼠后诱导抗原特异性细胞因子反应的差异及单个核细胞产生TH1型细胞因子的能力,评价不同种类乙肝疫苗的免疫原性。方法应用重组汉逊酵母、酿酒酵母、CHO细胞来源的乙肝疫苗分别免疫BALB/c小鼠(H-2d),于免疫后4、7、10、14、25和35 d处死,分离脾单个核细胞(Mononuclear cell,MNC),经HBsAg体外刺激后,采用液相芯片酶联(Luminex)技术测定小鼠IFNγ、IL-2和TNF-α分泌水平。结果 3种乙肝疫苗诱导小鼠产生IFNγ和TNF-α的峰值均出现在免疫后10 d,之后开始下降;IL-2水平呈逐渐上升趋势。免疫后10和14 d,酿酒酵母疫苗组诱导小鼠产生IFNγ的水平显著高于CHO疫苗组(P<0.01);免疫后10、25和35 d,汉逊酵母疫苗组诱导小鼠产生IL-2的水平显著高于CHO疫苗组(P<0.05);免疫后10、14和35 d,酿酒酵母疫苗组诱导小鼠产生TNF-α的水平显著高于CHO疫苗组(P<0.05);免疫后7和25 d,汉逊酵母疫苗组诱导小鼠产生TNF-α的水平显著高于CHO疫苗组(P<0.05)。结论 不同种类乙肝疫苗诱导小鼠的细胞免疫反应强度与变化趋势不同。酵母疫苗诱导的TH1型细胞因子水平高于CHO疫苗。

    2011年09期 v.24 1075-1078页 [查看摘要][在线阅读][下载 232K]
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治疗制品

  • 重组人源化兔抗血管内皮生长因子单克隆抗体的抗原结合活性测定

    范文红;毕华;饶春明;

    目的采用直接ELISA法测定重组人源化兔抗血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)单克隆抗体的抗原结合活性。方法以VEGF-Fc为包被抗原,采用直接ELISA法测定不同浓度重组人源化兔抗vEGF单抗参考品和供试品与抗原的结合活性,根据供试品及参考品的EC50值计算供试品的相对结合力,并分析该法的精密性。结果重组人源化兔抗VEGF单抗供试品及参考品的抗原结合均存在量效关系,且符合四参数方程。同一批次的供试品单抗原液的相对结合活性分别为参考品的(90.43±18.74)%、(123.56±18.40)%和(106.83±18.47)%,均值为(106.94±16.57)%。3次试验的变异系数分别为20.72%、14.89%和17.29%。同一批次的供试品成品的相对结合活性分别为(97.34±18.42)%、(123.30±11.08)%和(93.91±4.57)%,变异系数分别为18.93%、8.96%和4.87%。结论 直接ELISA法精密性良好,操作简便,可用于重组人源化兔抗VEGF单抗抗原结合活性的常规检测。

    2011年09期 v.24 1079-1080+1086页 [查看摘要][在线阅读][下载 203K]
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诊断制品

  • 甲型肝炎病毒单克隆抗体的筛选与初步应用

    高加梅;宋俐霏;李军;张立志;于丹;国泰;

    目的筛选甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)单克隆抗体(MAb),并初步建立HAV双抗体夹心ELISA定量检测方法。方法用抗体亚型鉴定试剂盒鉴定MAb亚型;通过Western blot法鉴定MAb的特异性;SPA亲和层析法纯化MAb腹水,检测MAb的抗原识别表位;细胞培养法检测MAb的中和效价。确定双抗体夹心法包被物与酶标MAb的浓度,初步建立HAV双抗体夹心ELISA定量检测方法,并考察方法的线性范围。结果 12株HAV单抗中,1株为IgM型,3株为IgG3型,3株为IgG2a型,5株为IgG2b型;10株MAb可特异性结合HAV的VP2蛋白;7株MAb识别相同的抗原表位;7号MAb中和效价最高,可达1∶4 096。建立的HAV双抗体夹心ELISA定量检测方法的线性范围为15.625~250 u/ml,R2﹥0.97。结论 筛选出1株特异性好、中和效价较高的IgG2b型MAb,可用于制备酶标抗体和ELISA检测试剂盒,应用于甲肝疫苗中抗原的检测。

    2011年09期 v.24 1081-1083页 [查看摘要][在线阅读][下载 154K]
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临床观察

  • 胸腺五肽治疗低复制状态慢性乙型肝炎的临床疗效

    姜艳玲;沈科书;高雪娟;李艳玲;吴业红;

    目的观察胸腺五肽(Thymopentin,TP-5)治疗低复制状态慢性乙型肝炎的临床疗效。方法将72例HBV-DNA定量检测低于2 000 IU/ml的慢性乙型肝炎患者随机分为两组:治疗组(38例)经肌肉注射TP-5 1 mg,每日1次;对照组(34例)口服护肝片,每日3次。疗程为12周,治疗结束后随访12周。采用PCR法检测两组患者HBV-DNA水平,化学发光法检测乙肝血清标志物变化,全自动生化仪检测肝功能指标,放射免疫法检测肝纤维化指标。结果治疗组在治疗及随访结束后,HBV-DNA阴转率均明显高于对照组(P<0.05),治疗组治疗后肝功能指标和肝纤维化指标均得到明显改善(P<0.01或P<0.05),与对照组治疗后相比,差异也有统计学意义(P<0.05);两组HBsAg阴转率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TP-5可促进低复制状态慢性乙型肝炎HBV-DNA转阴,改善受损肝脏功能,延缓肝纤维化进展。

    2011年09期 v.24 1084-1086页 [查看摘要][在线阅读][下载 150K]
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  • 细胞免疫学和血清学两种方法检测结核分枝杆菌纯蛋白衍生物强阳性者的结果差异

    都伟欣;徐苗;陈保文;杨蕾;沈小兵;周伟忠;王国治;

    目的比较细胞免疫学和血清学两种方法检测结核分枝杆菌纯蛋白衍生物(Purified protein derivative of tuberculin,PPD)皮试强阳性者的结果差异,探讨适于结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)潜伏感染者的筛查方法。方法经志愿者前臂皮内注射PPD 0.1 ml(含5个结核菌素单位),72 h后,选择硬结平均直径≥15 mm的PPD强阳性者,按硬结直径大小分成3个等级,采集静脉血,分离外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)和血清,分别应用T-SPOT.TB和OMEGA结核诊断试剂盒进行细胞免疫学和血清学检测,并比较检测结果的差异。结果 PPD皮试强阳性不同等级人群中,细胞免疫学和血清学检测结果差异均无统计学意义(P﹥0.05);但在所有PPD皮试强阳性者中,两种方法的检测结果差异有统计学意义(P﹤0.01)。结论 细胞免疫学检测方法具有良好的特异性和灵敏度,更适用于MTB潜伏感染者的筛查。

    2011年09期 v.24 1087-1089页 [查看摘要][在线阅读][下载 144K]
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实验技术

  • 低温乙醇法分离正常人血浆组分Ⅳ沉淀中α_1-抗胰蛋白酶的分离纯化

    周雁翔;端义坤;李策生;彭良俊;张爱华;邹汉武;

    目的采用低温乙醇法分离正常人血浆组分Ⅳ沉淀(FractionⅣ,FⅣ)中提取α1-抗胰蛋白酶(α1-Antitrypsin,α1-AT),制备较高纯度的α1-AT制剂。方法 FⅣ沉淀经过滤、ConA Sepharose 4B亲和层析、DEAE Sepharose Fast Flow一步离子交换层析提纯α1-AT,采用SDS-PAGE及区带扫描法分析纯化α1-AT的纯度;紫外分光光度计测定纯化α1-AT蛋白的浓度及回收率;Western blot检测其反应原性;胰蛋白酶抑制实验(TICT)检测纯化α1-AT的活性。结果纯化α1-AT的纯度为97.3%;纯化过程中α1-AT蛋白的平均回收率为20.4%;纯化的α1-AT能与抗人α1-AT抗体特异性结合;平均比活为0.833 PU/mg。结论 从FⅣ中成功纯化获得了纯度较高、具有生物学活性的α1-AT制剂。

    2011年09期 v.24 1090-1093页 [查看摘要][在线阅读][下载 215K]
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消息

  • 《中国医药导刊》(月刊)欢迎订阅、欢迎投稿、欢迎刊登广告

    <正>本刊刊号:CN11-4395/R,ISSN 1009-0959,广告经营许可证:京西工商广字第0111号。国家食品药品监督管理局主管,国家食品药品监督管理局信息中心主办。2009年为月刊,大16开本,160页,每册定价23元。邮发代号2-492。读者可在附近邮局订阅或拨打"11185"电话订阅。开户名:国家食品药品监督管理局信息中心开户行:建设银行北京展览路支行

    2011年09期 v.24 1093页 [查看摘要][在线阅读][下载 51K]
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实验技术

  • 免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗鉴别试验方法的建立

    王娟;赵莉;吴刚;许丽锋;徐静;

    目的建立免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗鉴别试验方法。方法分别应用酸性缓冲液Gly-HCl、HAc-NaAc、Na2HPO4-CA、CA-NaCA和表面活性剂DEA-T处理免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗,采用ELISA法检测处理后疫苗中的HBsAg和HBIG,筛选最佳缓冲液;对鉴别试验的反应条件(pH值、反应时间、反应温度)进行优化;并对鉴别试验的精密性进行验证。结果选择CA-NaCA缓冲液作为免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗鉴别试验的样品处理缓冲液,其既具有解离抗原抗体复合物的作用,又能使铝佐剂与吸附的蛋白质解离;鉴别试验最适pH值为3.0,最佳反应温度为25℃,最佳反应时间为30 min;该鉴别试验方法精密性良好。结论 建立了免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗鉴别试验方法,为该疫苗的检定方法提供了必要的补充。

    2011年09期 v.24 1094-1097页 [查看摘要][在线阅读][下载 179K]
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消息

  • 《中国药学大辞典》(2008年版)征订启事

    <正>《中国药学大辞典》收集词汇近26 000条,涉及药用动物、植物、矿物、中药和方剂、药用化学物质、化学药物、药剂学、药物化学、中药学和生药学、微生物药学、生物药学、药物分析、药理学和毒理学、医院药学、临床药学、药学史、药事管理、信息科学、药学相关学科和专业、技术和设备、教育学名词等方面内容。定价352元。联系方式单位名称:国家食品药品监督管理局信息中心期刊处

    2011年09期 v.24 1097页 [查看摘要][在线阅读][下载 47K]
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实验技术

  • 抗狂犬病病毒糖蛋白单链抗体Fv57多克隆抗体的制备

    谷铁军;张海玉;段冶;韩明明;卫巍;姜春来;吴永革;孔维;

    目的通过凝胶免疫法制备抗狂犬病病毒糖蛋白单链抗体Fv57的多克隆抗体。方法诱导表达Fv57蛋白,SDS-PAGE分离后,分别以KCl和考马斯亮蓝R-250染色,切取含目的蛋白的凝胶,经背部皮下免疫家兔,共免疫4次。第4次免疫后1周采血,分离血清,Western blot分析Fv57蛋白多克隆抗体的特异性,ELISA检测抗体效价。结果表达的Fv57蛋白相对分子质量约26 000;两种染色方法制备的多抗均能与Fv57蛋白特异性结合,与考马斯亮蓝R-250染色法相比,KCl法的非特异性杂带较少,结合效果更好;两种方法制备的多抗效价均在1∶10 000以上。结论 已成功采用凝胶免疫法制备了Fv57多克隆抗体,为检测Fv57与狂犬病病毒糖蛋白的特异性结合奠定了基础。

    2011年09期 v.24 1098-1100页 [查看摘要][在线阅读][下载 165K]
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消息

  • 欢迎登录《中国生物制品学杂志》网站

    <正>尊敬的专家、读者、作者及各位同仁:您们好!自2007年8月起,《中国生物制品学杂志》网站(www.zgswj.com.cn,中文域名:中国生物制品学杂志.com)正式运行。本站网页有杂志简介、在线投稿、稿件查询、过期目录、广告合作等您所需要的信息,欢迎登录。

    2011年09期 v.24 1100页 [查看摘要][在线阅读][下载 55K]
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实验技术

  • 固定金属亲和层析法纯化重组Kringle 5蛋白工艺的建立

    陈显久;解军;张悦红;牛勃;

    目的建立固定金属亲和层析法(Immobilized metal affinity chromatography,IMAC)纯化重组Kringle 5蛋白的工艺,为Kringle 5蛋白的制备及生物学活性研究奠定基础。方法常规制备IMAC蛋白上样样品,分别采用pH梯度洗脱和咪唑梯度洗脱的方法获取Kringle 5蛋白洗脱液,分段收集洗脱样品,SDS-PAGE检测蛋白纯度,Western blot鉴定其反应原性。结果咪唑梯度洗脱法获得的Kringle 5蛋白纯度达98%以上,得率为21.3 mg/柱体积,但不能充分将Kringle 5蛋白与杂蛋白分离;pH梯度洗脱法获得的Kringle 5蛋白纯度在98%以上,得率为62.7 mg/柱体积,且可与杂蛋白充分分离。结论 已建立了重组Kringle 5蛋白的纯化方法,为Kringle 5蛋白的制备及生物学活性研究奠定了基础。

    2011年09期 v.24 1101-1104页 [查看摘要][在线阅读][下载 205K]
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  • 应用母血浆中AIRE基因对唐氏综合征进行产前诊断

    方爱平;陈德珩;文景丽;范海波;王英兰;张悦;胡泓;

    目的应用母血浆中AIRE基因作为胎儿DNA遗传学标记,探讨无创性产前筛查唐氏综合征(Down syndrome,DS)的可行性。方法提取随机选取的45名正常孕妇血浆中游离DNA,同时以15名非妊娠健康妇女血浆游离DNA作为对照,通过巢式甲基化特异性PCR检测游离DNA中AIRE基因的甲基化状态;提取15名产妇胎盘组织和母血单核细胞中的DNA,检测AIRE基因的甲基化状态;采集20例确诊为DS胎儿的高危孕妇外周血,以45名正常孕妇外周血作为对照,检测AIRE基因甲基化状态。结果正常孕妇血浆中AIRE基因的甲基化率比非妊娠健康妇女高(P<0.01);所有产妇胎盘组织中均能检测到AIRE基因的甲基化,而在母血单核细胞中未检测到;在确诊为DS胎儿的高危孕妇外周血中,AIRE基因的甲基化率远远低于正常胎儿孕妇外周血(P<0.01)。结论 应用巢式甲基化特异性PCR技术检测妊娠期母血浆中AIRE基因的甲基化状态对胎儿DS进行非创伤性产前诊断是可行的。

    2011年09期 v.24 1105-1108页 [查看摘要][在线阅读][下载 179K]
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消息

  • 《生物技术药物研究开发和质量控制》(第2版)征订启事

    <正>由中国药品生物制品检定所副所长王军志研究员主编的《生物技术药物研究开发和质量控制》一书自2002年10月首次出版以来,在生物技术药物领域获得了广泛好评。应科学出版社约稿和广大读者要求,主编及编委们对原著进行了补充和修订。第二版仍分为上下两篇,共30章。上篇系统地介绍了生物技术药物的研制、开发和非临床研究的全过程以及贯穿于全过程的质量控制要点和技术要求,同时在原有内容基础上,增加了生物技术药物药效学研究和临床观察的章节,并

    2011年09期 v.24 1108页 [查看摘要][在线阅读][下载 42K]
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综述

  • 非人灵长类疱疹病毒对人的潜在危害

    刘晔;扈荣良;

    非人灵长类动物(Non-human primate,NHP)是开展人类组织结构、免疫、生理和代谢等医学研究必不可少的实验动物之一,但NHP携带多种人兽共患病病毒,对人类健康造成不同程度的威胁,甚至危及生命。本文对非人灵长类疱疹病毒的致病特性及对人类的生物安全性作一综述。

    2011年09期 v.24 1109-1111+1115页 [查看摘要][在线阅读][下载 168K]
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  • 抗肿瘤药物联合作用诱导细胞凋亡的研究进展

    李清;金英花;

    抗肿瘤药物联合作用是通过选择已知或未知作用机制的不同药物,经不同途径协同作用放大较弱的死亡信号,确保发生有效的细胞死亡。本文对抗肿瘤药物联合作用的研究现状、药物选择的基本依据、常用的研究方法作一综述。

    2011年09期 v.24 1112-1115页 [查看摘要][在线阅读][下载 164K]
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述评

  • 病毒灭活疫苗生产工艺要点

    白玉;李敏;高恩明;

    <正>灭活疫苗是指将病原微生物及其代谢产物,利用理化方法处理,使其丧失感染性或毒性而保有免疫原性的一类生物制剂。灭活疫苗可分为灭活的细菌疫苗和灭活的病毒疫苗,本文所涉及的病毒灭活疫苗包括全病毒灭活疫苗、裂解疫苗和亚单位疫苗等。病毒灭活疫苗的生产工艺一般分为病毒的扩增、灭活、纯化和/或裂解。工艺的确定应有充分的理

    2011年09期 v.24 1116-1117页 [查看摘要][在线阅读][下载 60K]
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专题报道

  • 2006~2009年流感疫苗批签发情况总结与质量分析

    刘书珍;邵铭;邱平;袁力勇;方捍华;李长贵;

    <正>流行性感冒(简称流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道感染疾病,具有传染性强、传播速度快的特点。据报道,全球每年约有5%~15%的人口会感染流感病毒,并导致300万~500万的严重病例和50万的死亡病例。接种流感疫苗是预防流感发生与传播的有效手段。2001年12月1日,我国开始实施生物制品国家批签发制度。根据《生物制品批签发管理办法》的规定,国家食品药品监督管理局决定自2006年1月1日起,将生产上市的所有预防用疫苗类制品纳入

    2011年09期 v.24 1118-1120页 [查看摘要][在线阅读][下载 139K]
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