中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

基础研究

  • 人呼吸道合胞病毒F1蛋白的原核表达及纯化

    傅生芳;寇桂英;包红;姜英;陈汉泉;余黎;周旭;

    目的克隆A型人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)兰州分离株F1基因,并进行原核表达和纯化。方法采用RT-PCR方法克隆RSV F1 ORF序列,克隆至pET-42b(+)表达载体,构建重组原核表达质粒pET-42b-F1,转化大肠杆菌Rossata(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用GST亲和层析树脂进行纯化。结果重组原核表达质粒经双酶切及测序证明构建正确;表达的融合蛋白相对分子质量约77 000,表达量约占菌体总蛋白的20%,以包涵体和可溶性两种形式存在;该蛋白可与鼠抗人RSV单抗发生特异性反应,纯化后纯度约为50%。结论已原核表达并纯化了HRSV F1蛋白,为其血清抗体的制备及免疫原性研究奠定了基础。

    2011年08期 v.24 873-876页 [查看摘要][在线阅读][下载 300K]
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  • 羊布氏菌强毒株16M感染小鼠骨髓树突状细胞模型的建立

    李晓艳;王景龙;张瑞;孙春辉;郎需龙;杨艳玲;屈海龙;赵勇坤;王兴龙;

    目的建立羊布氏菌强毒株16M感染小鼠骨髓树突状细胞(Dendritic cell,DC)的模型。方法体外分离C57小鼠骨髓原代细胞,经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte monocyte colony stimulating factor,GM-CSF)和重组人白细胞介素-4(Recombinant human interleukin-4,rhIL-4)诱导分化后,倒置显微镜观察DC形态,流式细胞术鉴定其分化程度。在体外建立羊布氏菌16M感染小鼠骨髓DC模型,间接免疫荧光试验和透射电镜进行鉴定,并进行感染后羊布氏菌16M的重培养及染色观察。结果培养第5天,细胞形态符合髓源DC,伸出长的树突样和伪足样突起;第7天,细胞呈半悬浮,周围有大量突起;体外培养DC的纯度约达70%,符合试验要求。DC在感染后12 h具有最强的吞噬能力,胞内细菌量最少。重培养后经染色,可观察到羊布氏菌16M典型的细菌形态。结论成功构建了羊布氏菌感染小鼠骨髓DC模型,为进一步研究布氏菌与DC的相互作用及胞内寄生机制奠定了基础。

    2011年08期 v.24 877-881页 [查看摘要][在线阅读][下载 905K]
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  • 羊布氏菌P39基因重组真核表达质粒的构建及其免疫效果

    石艳春;韩堃;郑源强;毕力夫;

    目的构建羊布氏菌P39基因重组真核表达质粒,并检测其免疫效果。方法将前期克隆的P39基因片段连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆位点中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39,转化E.coli DH5α,筛选阳性克隆,提取重组质粒,进行双酶切鉴定。以鉴定正确的重组质粒免疫BALB/c小鼠,凝集试验检测小鼠血清特异性抗体水平,ELISA法检测小鼠血清中细胞因子含量,MTT掺入法检测小鼠脾脏淋巴细胞的增殖效应。结果重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39经双酶切鉴定构建正确;该重组质粒能够刺激小鼠产生特异性抗体(抗体峰值滴度为1∶320),显著增加Th1型细胞因子的产生,并能够增强小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应。结论成功构建了羊布氏菌P39基因重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39,该重组质粒能够诱导BALB/c小鼠产生特异性免疫应答。

    2011年08期 v.24 882-884页 [查看摘要][在线阅读][下载 228K]
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  • let-7a对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响

    何晓燕;彭琼乐;张政;彭惠民;

    目的研究let-7a对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其可能的分子机制。方法将A549细胞、稳定转染let-7a重组质粒的A549-let-7a细胞及稳定转染对照质粒的A549-control细胞分别接种至BALB/c裸鼠背部皮下,观察各组细胞在裸鼠体内的生长情况,测量肿瘤体积并绘制生长曲线;30 d后处死裸鼠,取出瘤体,称重并计算抑瘤率;HE染色观察瘤组织的形态学改变;Western blot及免疫组化法检测各组瘤组织中k-Ras蛋白的表达情况。结果与A549细胞组相比,A549-let-7a细胞组裸鼠的瘤体生长速度明显减慢,瘤体重量显著降低(P<0.01),抑瘤率为27.51%,A549-control细胞组差异无统计学意义(P>0.05);HE染色显示,A549-let-7a细胞组癌细胞体积较其他两组减小,核浆比例明显缩小,核分裂相显著减少;Westernblot及免疫组化结果表明,与A549细胞组相比,A549-let-7a细胞组瘤组织中k-Ras蛋白的表达明显降低(P<0.01),而A549-control细胞组中k-Ras蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 let-7a能显著抑制A549细胞在裸鼠体内的生长能力,其机制可能与下调k-Ras蛋白的表达有关。

    2011年08期 v.24 885-888+892页 [查看摘要][在线阅读][下载 376K]
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  • 羊型布氏菌WbkC基因真核表达质粒的构建及鉴定

    王景龙;屈海龙;王秀然;郎需龙;李晓艳;王兴龙;

    目的构建羊型布氏菌脂多糖O-侧链合成必需的甲酰基转移酶WbkC基因真核表达质粒,并进行鉴定。方法提取16M株羊型布氏菌基因组DNA,PCR扩增WbkC基因,克隆至psos载体上,构建诱饵重组质粒psos-WbkC,转化酵母菌株cdc25Hα,进行菌落PCR鉴定,并检测其在酵母双杂交系统中的自激活和定位情况。结果诱饵重组质粒psos-WbkC经PCR双酶切及测序证明构建正确;重组酵母菌经PCR鉴定,可扩增出约780 bp的目的基因;诱饵质粒在酵母双杂交系统中无自激活且定位正确。结论已构建了羊型布氏菌WbkC基因真核表达质粒psos-WbkC,可应用于酵母双杂交系统中,用于寻找巨噬细胞cDNA文库中与WbkC相互作用的蛋白质。

    2011年08期 v.24 889-892页 [查看摘要][在线阅读][下载 231K]
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  • 含阿德福韦酯耐药突变位点的HBV聚合酶逆转录酶区域的原核表达

    谢素兰;黄爱龙;蔡雪飞;胡源;

    目的原核表达含阿德福韦酯(Adefovir,ADV)耐药突变位点的HBV聚合酶逆转录酶(Reverse transcriptase,RT)区域。方法以野生型HBV DNA为模板,PCR扩增HBV聚合酶RT区域,克隆至质粒pHis-SUMO上,构建重组表达质粒SUMO-RTWT,并通过定点突变构建含ADV耐药突变位点(181T/V+236T)的突变质粒SUMO-MT1和SUMO-MT2,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析,并进行表达条件的优化及HBV聚合酶RT区域的结构建模。结果重组表达质粒SUMO-RTWT、SUMO-MT1和SUMO-MT2经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为56 000,可与鼠抗His单克隆抗体发生特异性结合;经表达条件优化后,3种重组质粒在大肠杆菌Roset-ta(DE3)中均获得有效稳定的表达;同源结构建模结果表明,HBV聚合酶RT区域具有典型的DNA聚合酶的结构。结论已成功构建了含ADV耐药突变位点HBV聚合酶RT区域的重组原核表达质粒,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中获得稳定表达的可溶性目的蛋白,为研究ADV的耐药机制奠定了基础。

    2011年08期 v.24 893-897页 [查看摘要][在线阅读][下载 464K]
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  • 稳定表达重组长效促红细胞生成素的CHO-K1细胞株的筛选

    吴建勇;易小萍;张元兴;孙祥明;

    目的将密码子优化的一系列长效促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)基因定点整合至CHO-K1细胞株中,获得高效稳定表达的细胞株。方法对EPO基因定点突变得到Darbepoetin-1序列(专利公开序列)及其同义密码子序列Darbe-poetin-2、Darbepoetin-3,并构建相应重组表达质粒pcDNA5/FRT/dbp(s),采用定点整合技术,转染CHO-K1细胞株,经ELISA和荧光定量PCR法鉴定转染细胞株,比较同一整合位点同义密码子Darbepoetin alfa蛋白表达水平的差异。蛋白样品经蓝胶亲和层析、凝胶过滤和离子交换层析后,进行SDS-PAGE、Western blot及等电聚焦电泳分析。结果重组表达质粒pcDNA5/FRT/dbp(s)经测序鉴定正确;ELISA检测表明,Darbepoetin-2的表达水平明显优于Darbepoetin-1和Darbepoetin-3,最高可达1 845 IU/ml;SDS-PAGE分析显示,纯化的Darbepoetin alfa比rHuEPO具有更高的相对分子质量,可与兔抗人EPO多抗特异性结合,且比rHuEPO具有更高的唾液酸丰度。结论获得了高效稳定表达重组Darbepoetin alfa的CHO-K1细胞株。

    2011年08期 v.24 898-902页 [查看摘要][在线阅读][下载 631K]
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  • 人肝细胞生长因子在毕赤酵母中的分泌表达及其活性

    常冰梅;刘晓军;李美宁;张栋;张悦红;程牛亮;牛勃;

    目的在毕赤酵母中分泌表达人肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF),并检测其活性。方法从真核表达质粒pRC/CMV-HGF中扩增HGF的编码基因,将其克隆入表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K-HGF,电穿孔法转化毕赤酵母菌株KM71,PCR筛选阳性菌株,经甲醇诱导表达重组人HGF(rhHGF)。表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,检测其对原代培养的大鼠肝细胞增殖的影响。结果重组表达质粒pPIC9K-HGF经酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约80 000,表达量占菌体总蛋白的18%,可与兔抗人HGF多抗特异性结合,并可刺激大鼠肝细胞增殖。结论在毕赤酵母菌中成功分泌表达了rhHGF,表达产物具有促进肝细胞增殖的活性。

    2011年08期 v.24 903-906+910页 [查看摘要][在线阅读][下载 349K]
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  • Quil A对O型口蹄疫疫苗的免疫增强作用

    刘燕瑜;任静强;张丹;谭磊;刘存霞;靖杰;刘昊;鲁会军;金扩世;金宁一;

    目的探讨Quil A对口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)疫苗的免疫增强作用。方法将O型FMDV抗体阴性的仔猪随机分为4组:1组首次免疫O型口蹄疫核酸苗pVIRIL18P1,第2次免疫重组鸡痘苗vUTAL3CP1;2组首次免疫Quil A+O型口蹄疫核酸苗pVIRIL18P1,第2次免疫重组鸡痘苗vUTAL3CP1;3组两次均免疫猪O型口蹄疫合成肽疫苗;4组两次均免疫PBS。首次免疫后0、14、42 d,检测猪血清中FMDV VP1结构蛋白抗体及细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFNγ的水平;首次免疫后42 d,检测T淋巴细胞增殖水平。结果 2次免疫后,2组猪血清中FMDV VP1结构蛋白抗体水平、细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFNγ水平及T淋巴细胞增殖率均显著升高。首次免疫后42 d,2组上述指标中除IL-2水平外,与3组和4组比较差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01);除IL-2、IL-10和IFNγ水平外,与1组比较差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01)。结论 Quil A对O型口蹄疫疫苗具有较好的免疫增强作用。

    2011年08期 v.24 907-910页 [查看摘要][在线阅读][下载 198K]
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  • 胶质纤维酸性蛋白和巢蛋白在血管性痴呆大鼠海马中的表达

    余天平;张鹏;张雄;王林辉;田茗源;李昱;

    目的观察胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)和巢蛋白(Nestin)在血管性痴呆成年大鼠海马中的表达情况,探讨二者在血管性痴呆疾病中的作用。方法将SD大鼠随机分为假手术组和模型组,模型组经麻醉、永久性双侧颈总动脉结扎(2VO)建立血管性痴呆大鼠模型,再随机分为术后1、7、14、21和28 d组;假手术组麻醉后只分离双侧颈总动脉而不结扎。不同时间点断颈处死大鼠,取大脑,切片,经苏木素-伊红染色、尼氏染色观察海马神经元的动态变化;免疫组化染色观察GFAP和Nestin在海马区的表达。结果与假手术组相比,模型组术后7 d,海马CA1区和CA3区椎体神经元显著减少,大量胶质细胞增生;术后14、21和28 d,随着脑血流的恢复,椎体神经元的数量逐渐增加,胶质细胞逐渐减少。模型组从术后1 d起,GFAP和Nestin表达即显著增加(P<0.05),GFAP的表达在术后7 d达高峰,Nestin的表达强度比GFAP稍弱一些,在术后14 d达高峰;随着脑血流供应的恢复,在术后21 d和28 d时,Nestin轻微减少,但未完全消失。结论 GFAP和Nestin在血管性痴呆模型大鼠海马中呈动态表达,表明两者在血管性痴呆疾病中可能扮演了保护角色。

    2011年08期 v.24 911-914+920页 [查看摘要][在线阅读][下载 675K]
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  • sh-hnRNP-E2逆转录病毒对32D-P210细胞诱导的白血病模型小鼠的保护作用

    韩红星;张文萍;张秋萍;杨燕;单万水;

    目的探讨sh-hnRNP-E2逆转录病毒对32D-P210细胞诱导的白血病模型小鼠的保护作用。方法建立32D-P210转化细胞株在C3H等基因小鼠体内定殖的慢性粒细胞白血病(Chronic myeloid leukemia,CML)模型,并进行鉴定;sh-hn-RNP-E2逆转录病毒感染32D-P210细胞24 h后,经尾静脉移植入C3H等基因雌性小鼠中,观察sh-hnRNP-E2对CML模型小鼠的保护作用。结果经鉴定已成功建立32D-P210转化细胞株在C3H等基因小鼠体内定殖的CML模型;sh-hnRNP-E2逆转录病毒预感染32D-P210靶细胞,可促进靶细胞向粒系分化,并显著延长模型小鼠的生存期。结论 sh-hnRNP-E2逆转录病毒感染对CML模型小鼠具有显著的保护效应,是一种有效的CML体内治疗策略。

    2011年08期 v.24 915-920页 [查看摘要][在线阅读][下载 610K]
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  • 氢氧化铝吸附炭疽杆菌重组保护性抗原的影响因素

    王革;李睿;王秉翔;

    目的探讨氢氧化铝吸附炭疽杆菌重组保护性抗原(Recombinant protective antigen,rPA)的影响因素。方法取含不同PO43-浓度的PBS和添加EDTA的PBS,分别稀释rPA后,加入氢氧化铝,放置2~8℃及(23±2)℃作用不同时间,检测A280和A260值,计算未吸附的rPA蛋白量,并比较不同溶液中氢氧化铝对rPA的吸附效果。结果氢氧化铝对rPA的吸附率随PO43-浓度的增加而降低;PBS中添加EDTA后,氢氧化铝对rPA的吸附效果明显下降;2~8℃较(23±2)℃的吸附率略有增加,但不同时间的吸附量无明显差异;在H2O中氢氧化铝对rPA的吸附效率比在PBS中高。结论稀释缓冲液和离子强度、EDTA均可影响氢氧化铝与rPA的吸附效果,但吸附温度和时间对吸附的影响不大。

    2011年08期 v.24 921-922+930页 [查看摘要][在线阅读][下载 147K]
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  • 表达鼠干扰素γ的重组卡介苗的构建及鉴定

    刘洪波;吴灿权;谢颖;梁洪;蔡昌学;

    目的构建分泌表达鼠IFNγ(Mouse interferon-gamma,mIFN-γ)的重组卡介苗(Bacillus Calmette-Gu伢rin,BCG),并进行鉴定。方法 PCR扩增BCG抗原85B的信号肽序列,插入E.coli-BCG穿梭载体pBCG3000的启动子下游,构建分泌性重组穿梭质粒S-pBCG3000;以PHA刺激小鼠脾细胞产生的RNA为模板,RT-PCR扩增mIFNγ成熟肽的编码cDNA,插入S-pBCG3000质粒的信号肽序列下游,构建mIFNγ的表达质粒S-pBCG3000-γ;通过电穿孔技术将表达质粒转入BCG,以卡那霉素和PCR筛选重组BCG,ELISA法检测重组BCG培养滤液中的mIFNγ含量,细胞病变抑制法鉴定mIFNγ的生物活性。结果经测序、PCR扩增和酶切鉴定分析,Ag85B信号肽和mIFNγ成熟肽的编码序列均成功克隆并插入到pBCG3000的相应位点,表达质粒转化BCG后获得的重组BCG分泌mIFNγ的含量高达1 234.1 pg/ml,在L929细胞中的抗VSV活性为64 U/ml。结论所构建的重组BCG可分泌具有功能活性的mIFNγ,为进一步研究其免疫效应奠定了基础。

    2011年08期 v.24 923-926页 [查看摘要][在线阅读][下载 239K]
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  • 三七皂甙对慢性血栓栓塞性肺动脉高压大鼠心肌胶原重构的调控

    李长毅;王导新;张玉坤;

    目的探讨三七皂甙(Panax notoginseng saponins,PNS)对慢性血栓栓塞性肺动脉高压(Chronic thromembolismpulmonary hypertension,CTPH)大鼠心肌胶原重构的调控作用及可能的机制。方法利用二次血栓栓塞法建立大鼠CTPH模型,4周后,将正常大鼠分为A、B组,模型大鼠分为C、D组,A、C组经腹腔注射0.9%生理盐水,2 ml/d;B、D组经腹腔注射PNS,100 mg/(kg.d)。每天注射1次,4周后,测定各组大鼠的血流动力学指标、心室游离壁厚度,HE和VG染色观察心肌组织的形态学改变,Western blot检测心肌组织中基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的表达。结果 C组与A组、B组比较,右心室收缩压、右室(RV)/左室(LV)游离壁厚度比、心肌间质胶原增生、MMP-2的表达均明显升高(P<0.05);经PNS干预后,D组右心室收缩压、RV/LV游离壁厚度比、心肌间质胶原增生、MMP-2的表达均明显降低(P<0.05)。结论在CTPH心肌重构过程中,PNS可以逆转右心室重构,其机制可能与上调MMP-2的表达、促进心室间质胶原的降解有关。

    2011年08期 v.24 927-930页 [查看摘要][在线阅读][下载 294K]
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  • CML来源的DC激活的T淋巴细胞对自体CML细胞的杀伤作用

    崔久嵬;牛超;李薇;金浩范;Boyapati Maheoh;王冠军;

    目的探讨慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)来源的树突状细胞(Dendritic cell,DC)激活的T淋巴细胞对自体CML细胞的杀伤作用。方法利用rhGM-CSF、rhIL-4和rhTNF-α体外定向诱导CML患者外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)生成DC,光学显微镜和透射电镜观察所诱导的DC形态特征;流式细胞术进行表型检测;采用FISH和RT-PCR法检测所诱导的DC的白血病源性;MTT法检测其对自体CML细胞的杀伤作用。结果 CML患者PBMC在体外可诱导生成bcr/abl融合基因阳性的DC,其激活的T淋巴细胞对自体CML细胞的杀伤作用明显强于单独应用T淋巴细胞对CML细胞的杀伤作用。结论 CML患者PBMC能够诱导生成白血病源的DC,该DC能够激活T淋巴细胞对CML细胞的特异性杀伤作用。

    2011年08期 v.24 931-934页 [查看摘要][在线阅读][下载 608K]
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  • Hedgehog信号通路阻断对人胃癌细胞SGC-7901侵袭和血管内皮生长因子表达的影响

    欧阳小波;郝亚琴;王立;

    目的探讨Hedgehog(Hh)信号通路阻断对人胃癌细胞SGC-7901侵袭的影响及其可能的机制。方法免疫荧光检测Hh信号通路分子Shh和Gli1蛋白在SGC-7901细胞中的表达;用不同浓度(2.5、5、10μmol/L)的Hh信号通路特异性阻断剂环靶明作用SGC-7901细胞48 h后,Transwell小室试验检测SGC-7901细胞的侵袭能力,半定量RT-PCR检测SGC-7901细胞中Shh、Gli1和血管内皮生长因子(VEGF)基因mRNA的表达。结果 Shh和Gli1蛋白在SGC-7901细胞中高表达;环靶明能显著抑制SGC-7901细胞的侵袭,且呈剂量依赖性;Hh信号通路阻断后,SGC-7901细胞中Shh基因mRNA的表达水平无明显改变,Gli1和VEGF基因mRNA的表达水平显著下降。结论 Hh信号通路分子在SGC-7901细胞中高表达,阻断Hh信号通路可以抑制SGC-7901细胞的侵袭,可能是通过抑制Gli1下调VEGF起作用。

    2011年08期 v.24 935-938页 [查看摘要][在线阅读][下载 502K]
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  • 胃癌组织中分化抑制因子1和血管内皮生长因子的表达与微血管密度的相关性

    王玉彬;巴彩凤;哈敏文;刘寅;

    目的探讨胃癌组织中分化抑制因子1(Inhibitor of DNA binding/differentiation1,ID1)和血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达与微血管密度(Microvessel density,MVD)的相关性。方法采用免疫组化定性分析ID1、VEGF和CD34在胃癌及癌旁非癌组织中的表达及MVD,Western blot半定量分析ID1和VEGF蛋白在胃癌及癌旁非癌组织中的表达。结果胃癌组织中ID1和VEGF的表达及MVD明显高于癌旁非癌组织,且差异均有统计学意义(P均<0.05);ID1表达阳性的胃癌组织的MVD明显高于ID1表达阴性的胃癌组织,且差异有统计学意义(P<0.001)。结论胃癌组织中ID1的表达与VEGF和MVD具有相关性,ID1可能具有促进胃癌血管生成的作用。

    2011年08期 v.24 939-941页 [查看摘要][在线阅读][下载 259K]
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预防制品

  • 广谱流感噬菌体微球疫苗对豚鼠的免疫保护作用

    王海漩;乌美妮;汤洋;李建芳;李彦涵;胡云章;赵蕊蕊;沈霏;段志青;胡凝珠;

    目的探讨广谱流感噬菌体微球疫苗对分别感染H3N2、H1N1和B型流感病毒豚鼠的免疫保护作用。方法以广谱流感噬菌体微球疫苗免疫豚鼠,1个月后采血,间接ELISA法检测豚鼠血清中抗流感病毒IgG抗体的滴度;并于采血后3 d,经滴鼻途径分别攻击3个型别的流感病毒,攻击后3 d,检测豚鼠鼻腔洗液和肺组织中的病毒滴度。结果免疫豚鼠血清中均能检测出抗H1N1、H3N2和B型流感毒株的IgG抗体;分别以H3N2、H1N1和B型流感病毒攻击后3 d,在疫苗组豚鼠鼻腔洗液中检出少量病毒,而肺组织中则未检出,空白对照组豚鼠鼻腔洗液和肺组织中均检出较大量的流感病毒。结论广谱流感噬菌体微球疫苗对感染H3N2、H1N1和B型流感病毒的豚鼠均具有一定的免疫保护效果。

    2011年08期 v.24 942-944页 [查看摘要][在线阅读][下载 135K]
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治疗制品

  • PTD-OD-HA融合蛋白对BALB/c裸鼠皮下K562细胞实体瘤的治疗作用

    季茂胜;黄峥兰;李亚娟;黄世峰;曾建明;刘钉宾;曹唯希;冯文莉;

    目的观察PTD-OD-HA融合蛋白对BALB/c裸鼠皮下K562细胞实体瘤的治疗作用。方法采用皮下注射K562细胞的方法建立裸鼠皮下实体瘤模型,每两天向实体瘤中间部位多点注射200μl浓度为10 mg/ml的PTD-OD-HA融合蛋白,观察裸鼠瘤体生长情况;HE染色观察肿瘤组织病理学变化;TUNEL法和透射电镜观察肿瘤组织细胞的凋亡。结果经PTD-OD-HA治疗的肿瘤体积明显缩小;肿瘤组织切片经HE染色可见细胞核浓缩和细胞染色加深;TUNEL法和透射电镜检测可见肿瘤细胞发生了凋亡的改变。结论在BALB/c裸鼠体内,PTD-OD-HA融合蛋白具有抑制K562细胞增殖和促进其凋亡的作用。

    2011年08期 v.24 945-947页 [查看摘要][在线阅读][下载 248K]
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  • 海妇洁栓对大鼠胚胎发育的影响

    付新华;孙谧;王跃军;梁玉记;

    目的评价海妇洁栓对大鼠胚胎发育的影响。方法将Wistar妊娠大鼠随机分为5组:基质对照组、阳性对照(环磷酰胺7 mg/kg)组、海妇洁栓低(16 mg/kg)、中(32 mg/kg)和高(80 mg/kg)剂量组。基质对照组和海妇洁栓各剂量组孕鼠于妊娠第6天开始经阴道给药,每天1次,连续10 d;阳性对照组孕鼠于妊娠第11天开始经大腿外侧肌肉注射给药,每天1次,连续3 d。于妊娠第20天剖腹取出活胎,观察海妇洁栓对大鼠胚胎发育的影响。结果除阳性对照组外,海妇洁栓各剂量组及基质对照组所有受检胎鼠均未见明显外观畸形;平均体重、身长及尾长虽组间比较差异有统计学意义(P<0.05),但均属于正常生理变化,无生物学及毒理学意义,与海妇洁栓无关;除阳性对照组外,海妇洁栓各剂量组及基质对照组所有受检胎鼠骨骼、主要内脏器官均未见明显异常。结论海妇洁栓剂量在16~80 mg/kg之间对Wistar大鼠胚胎无明显的毒性和致畸作用。

    2011年08期 v.24 948-951页 [查看摘要][在线阅读][下载 171K]
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  • 小檗碱对实验性大鼠结肠癌的防治作用及其与过氧化物增殖物激活受体γ表达的相关性

    吴柯;何百成;周岐新;

    目的观察小檗碱(Berberine,Ber)对实验性大鼠结肠癌的防治作用及其与过氧化物增殖物激活受体γ(Peroxi-some proliferator-activated receptorγ,PPARγ)表达的相关性。方法以二甲肼(1-2 dimethylhydrazine,DMH)40 mg/kg皮下注射加1%葡聚糖硫酸钠(Dextran sodium sulfate,DSS)水溶液饮用诱导形成大鼠结肠癌模型,以罗格列酮(Rosiglitazone,Ros)为阳性对照,观察Ber灌服对大鼠体重、异常隐窝灶(Abrrant crypt foci,ACF)和结肠癌发生率的影响。采用MTT法检测不同浓度Ber对人结肠癌lovo细胞增殖活性的影响;RT-PCR法检测Ber对lovo细胞PPARγ基因mRNA表达的情况。结果 Ber能明显改善结肠癌大鼠的恶液质状态,并阻遏体重减轻,显著减少大鼠结肠ACF数和降低结肠癌的发生率,其作用与Ros相似。Ber可呈浓度和时间依赖性抑制lovo细胞增殖,并降低lovo细胞中PPARγ基因mRNA的表达水平。结论 Ber能抑制大鼠早期ACF的形成和结肠癌发生,其作用机制可能与抑制PPARγ表达有关。

    2011年08期 v.24 952-956页 [查看摘要][在线阅读][下载 552K]
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诊断制品

  • 猪旋毛虫病胶体金检测试纸条的制备

    苑淑贤;姚新华;任科研;李萌;杨金生;苑冬梅;李煜洁;常军亮;杨淑苹;

    目的制备猪旋毛虫病胶体金检测试纸条,并进行验证。方法采用免疫胶体金技术标记猪旋毛虫排泄-分泌(Excretory-secretory,ES)抗原,在AE98NC膜上点上兔抗猪IgG作为检测带,抗ES抗原抗体作为对照带,将NC印膜、胶体金抗原玻璃棉、吸水纸和支持板用胶膜组成试纸条,进行敏感性、特异性和重复性验证,并与ELISA检测方法进行对比。结果试纸条检测38头份猪旋毛虫阳性血清的敏感性为97.37%;检测33头份猪蛔虫阳性血清、26头份猪囊虫阳性血清、21头份猪细颈囊尾蚴阳性血清和98头份猪旋毛虫阴性血清的特异性为98.88%;重复性好;与ELISA检测方法的敏感性和特异性差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论已制备猪旋毛虫病胶体金检测试纸条,该试纸条敏感、特异、简便、快速,可用于猪旋毛虫病的检疫及流行病学调查。

    2011年08期 v.24 957-958+963页 [查看摘要][在线阅读][下载 137K]
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临床观察

  • 血管内皮生长因子、表皮生长因子受体和乳腺癌易感基因-1在非小细胞肺癌中的表达及其意义

    王林辉;田茗源;张雄;罗红池;余天平;张鹏;李昱;

    目的探讨血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、表皮生长因子受体(Epidermal growthfactor receptor,EGFR)和乳腺癌易感基因-1(Breast cancer susceptibility gene-1,BRCA-1)在非小细胞肺癌(Non-small cell lungcancer,NSCLC)中的表达及其意义。方法采用SP免疫组化染色法检测44例NSCLC组织切片中VEGF、EGFR和BRCA-1的表达情况。结果在NSCLC中,VEGF和EGFR的表达率分别为47.73%(21/44)和79.55%(35/44),BRCA-1的表达率为50%(22/44),VEGF和EGFR的表达在不同性别、年龄、组织学类型、淋巴结转移和吸烟情况中差异无统计学意义(P>0.05),但在不同临床分期差异有统计学意义(P<0.05);BRCA-1表达在上述各临床病理特征中差异均无统计学意义(P>0.05),但BRCA-1与VEGF的表达呈正相关(r=0.501,P=0.001);VEGF与EGFR、EGFR与BRCA-1的表达无相关性(P值分别为0.344和0.147)。结论 VEGF、EGFR、BRCA-1与NSCLC的发生发展密切相关,对判断NSCLC的预后及治疗有一定的参考意义。

    2011年08期 v.24 959-963页 [查看摘要][在线阅读][下载 313K]
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实验技术

  • 高效液相色谱法测定生物制品保护剂中蔗糖和乳糖的含量

    雒丽红;高雪军;魏然;朱莉萍;程瑞霞;郑学刚;

    目的建立测定生物制品保护剂中蔗糖和乳糖含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法样品用磺基水杨酸沉淀、离心除去蛋白质,上清液采用氨基柱分离,示差折光检测器进行监测,依外标法建立校正曲线,并对建立的方法进行验证。采用建立的方法测定4种疫苗成品中蔗糖和乳糖的含量。结果蔗糖和乳糖的标准曲线的相关系数r2均达0.999 9以上。该方法能将两种糖完全分离;测定两种糖的特异性较好;该法检测4个浓度的蔗糖和乳糖的平均回收率分别为97.9%和100.5%,变异系数分别为1.28%和0.48%;最低检测限及定量限分别为0.01 mg/ml和0.1 mg/ml;采用该法测定的4种疫苗成品中蔗糖和乳糖的变异系数分别为2.59%和1.44%。结论已建立了测定生物制品保护剂中蔗糖和乳糖含量的HPLC法,该方法定量准确,重复性好,可作为生物制品保护剂中蔗糖和乳糖含量的常规检测方法。

    2011年08期 v.24 964-967页 [查看摘要][在线阅读][下载 221K]
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  • 两种亲和层析方法纯化兔抗CHO细胞蛋白多克隆抗体的比较

    杜洪桥;朱蓉;徐葛林;严家新;

    目的比较两种亲和层析法纯化兔抗CHO细胞蛋白多克隆抗体的效果。方法制备可溶性CHO细胞蛋白,免疫家兔,获得兔免疫血清,采用蛋白A亲和层析和抗原偶联亲和层析两种方法分别纯化兔抗CHO细胞蛋白抗体,ELISA测定抗体效价;SDS-PAGE分析抗体纯度;Western blot分析抗体的特异性。结果兔IgG经蛋白A亲和层析纯化后,ELISA效价约为1∶106,抗体纯度达81.3%;经抗原偶联亲和层析纯化后,ELISA效价可达1∶107,抗体纯度达80.6%。两种方法纯化的抗体特异性均较好。结论抗原偶联亲和层析法更适合纯化兔抗CHO细胞蛋白多克隆抗体。

    2011年08期 v.24 968-970页 [查看摘要][在线阅读][下载 164K]
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  • 顶空气相色谱法测定23价肺炎球菌多糖疫苗中乙醇、丙酮及乙醚的残留量

    赵荣丽;刘少祥;李书津;潘海龙;赵青;

    目的采用顶空气相色谱法测定23价肺炎球菌多糖疫苗中乙醇、丙酮及乙醚的残留量。方法采用顶空气相色谱法,以水为溶剂,甲醇为内标,测定23价肺炎球菌多糖疫苗中乙醇、丙酮及乙醚的残留量,并对该方法进行系统适用性、线性关系、检测限与定量限、精密性、准确性验证及初步应用。结果该方法可使待测组分得到良好分离;测定乙醇、丙酮和乙醚的线性范围分别为:2.660~532.000μg/ml(r=1.000 0)、0.530~105.400μg/ml(r=0.999 8)和0.049~9.760μg/ml(r=0.998 9),检测限分别为0.80、0.16和0.01μg/ml,定量限分别为2.66、0.53和0.05μg/ml,精密性RSD值小于5.0%,平均回收率在95.0%~105.6%之间。该法检测3个批号23价肺炎球菌多糖疫苗中乙醇残留量,均未超过《中国药典》三部(2010版)规定的限度。3批疫苗中均未检出丙酮和乙醚。结论顶空气相色谱法操作简便,准确可靠,可用于23价肺炎球菌多糖疫苗中乙醇、丙酮及乙醚残留量的检测。

    2011年08期 v.24 971-973+976页 [查看摘要][在线阅读][下载 201K]
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  • b型流感嗜血杆菌总抗体ELISA定量检测方法的建立

    李红;李茂光;唐静;梁丽;李亚南;何莉;叶强;

    目的建立定量检测血清中b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)总抗体的ELISA方法,并进行初步验证。方法采用棋盘滴定法确定抗原最佳包被浓度及酶标抗体工作浓度,参考血清的线性范围及适合的底物,并验证方法的特异性、准确性及精密性。结果最佳抗原包被浓度为0.4μg/ml;最佳酶标抗体稀释度为1∶6 000;参考血清的最适线性范围为5~100 ng/ml,R2=0.997 6;选择TMB作为底物。该方法特异性较好,准确性和精密性较高。结论已成功建立了定量测定血清中Hib总抗体的ELISA方法,可逐渐替代测定血清中抗Hib IgG的方法。

    2011年08期 v.24 974-976页 [查看摘要][在线阅读][下载 180K]
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  • 白喉类毒素ELISA检测方法的建立及初步应用

    刘朝阳;景辉;陈艳红;张斌;马相虎;朱金华;

    目的建立白喉类毒素双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。方法以马抗白喉类毒素血清作为包被抗体,HRP标记的白喉絮状反应抗毒素作为酶标抗体,建立白喉类毒素双抗体夹心ELISA检测方法,并对该方法进行重复性、特异性验证、最佳线性范围和检测限确定及初步应用。结果经验证,该方法重复性好,特异性强,白喉类毒素含量在0.976 5~125.000 0 ng/ml之间时线性关系良好,检测限为7.812 ng/ml,该方法检测了3批白喉类毒素原液,与动物实验结果基本相符。结论已建立了白喉类毒素双抗体夹心ELISA检测方法,可用于检测白喉类毒素的含量和抗原性。

    2011年08期 v.24 977-979页 [查看摘要][在线阅读][下载 165K]
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  • 抗人T淋巴细胞猪免疫球蛋白中戊二醛残留量的检测

    夏南;王青青;赖俊;康光明;

    目的建立高效液相色谱测定抗人T淋巴细胞猪免疫球蛋白中戊二醛残留量的方法。方法取供试品,与2,4-二硝基苯肼柱前衍生化,过滤,进样。色谱条件:色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶填充柱;以50%乙腈(乙腈∶水=1∶1)溶液为流动相,流速为0.9 ml/min,检测波长为360 nm,柱温30℃。用该方法检测2批供试品中戊二醛的含量,并确定该方法的检测限、定限量、准确度和精密度。结果该方法检测的2批供试品中戊二醛的含量分别为9.8和7.5μg/ml;该方法的检测限为0.61μg/ml,定量限为2.04μg/ml,在2~20μg/ml范围内,其线性相关系数为0.998 2,检测5、10、15μg/ml戊二醛的回收率分别为102.3%、101.6%和99.2%,相对标准偏差均小于4.0%。结论高效液相色谱法可以简便、准确地检测抗人T淋巴细胞猪免疫球蛋白中戊二醛的残留量,为其生产工艺参数的确定提供了实验依据。

    2011年08期 v.24 980-982页 [查看摘要][在线阅读][下载 124K]
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综述

  • 鸡球虫病疫苗的研究进展

    黄金贵;李运娜;张西臣;

    鸡球虫病是一种主要由艾美耳属球虫引起的细胞内寄生原虫病,给养禽业带来巨大的经济损失。鸡球虫病一直以药物防治为主,但耐药虫株以及药物残留等问题使药物防治受到很大限制,因此,研制安全有效的疫苗成为防治鸡球虫病的主要策略之一。鸡球虫病疫苗包括活疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗、重组卡介苗和佐剂疫苗,本文就鸡球虫病疫苗的研究现状作一综述。

    2011年08期 v.24 983-987页 [查看摘要][在线阅读][下载 214K]
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  • HIV-1耐药性的研究进展

    贾峥;

    HIV-1耐药株的出现是人类艾滋病(AIDS)治疗失败的重要原因之一,HIV-1耐药性的研究对于控制耐药株的流行及临床治疗具有重要意义。本文就HIV-1耐药株的产生、进化和传播,HIV-1的耐药机制及耐药性突变,HIV-1耐药性检测以及新型HIV-1耐药性检测方法等作一综述。

    2011年08期 v.24 988-993页 [查看摘要][在线阅读][下载 216K]
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专题报道

  • 美国授权乙型肝炎疫苗相关专利分析

    苏锦锋;李彩梅;许宁;

    <正>专利是世界上最大的技术信息源,目前,各国每年出版的专利文献占科技出版物的1/4,内容包含了世界科技信息的91%~95%[1]。专利是一项发明的首次公开,其披露的技术信息有80%~94%是从其他途径无法得到的,专利文献中公布的重要发明

    2011年08期 v.24 994-996页 [查看摘要][在线阅读][下载 155K]
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消息

  • 来自ATCC的基因靶向工具

    <正>ATCC发布三个新的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)滋养细胞系,用于支持未分化胚胎干细胞系和iPS细胞系的生长。DR4 MEF(ATCC誖SCRC-1045TM)带有抗生素耐药基因,可以耐受新霉素(G418)、嘌呤霉素、潮霉素和6-硫基鸟嘌呤。SNL76/7(SCRC-1049TM)是一个克隆,来自于具有G418抗性和

    2011年08期 v.24 876页 [查看摘要][在线阅读][下载 50K]
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  • 《医学免疫学实验技术》征订启事

    <正>我国首批国家级医学研究生规划教材之一的《医学免疫学实验技术》(主编柳忠辉),于2008年3月由人民卫生出版社出版。该书由国内16所大学从事相关领域研究的教授参编。全书共分为16章,相关实验技术部分不仅介绍了实验原理和

    2011年08期 v.24 881页 [查看摘要][在线阅读][下载 35K]
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  • 欢迎订阅《中国生物制品学杂志》

    <正>《中国生物制品学杂志》于1988年创刊,由中华人民共和国卫生部主管,系中华预防医学会系列杂志之一,为报道我国生物制品研究开发重大成果和最新进展的国内唯一生物制品专业学术期刊。主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、

    2011年08期 v.24 926页 [查看摘要][在线阅读][下载 45K]
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  • 征稿

    <正>《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管,中华预防医学会和中国生物技术集团公司长春生物制品研究所主办,是中华预防医学会系列

    2011年08期 v.24 941页 [查看摘要][在线阅读][下载 66K]
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  • 2011中国生物制品年会暨第十一次全国生物制品学术研讨会第二轮通知

    <正>为促进中国生物制品事业的发展,为专业研究人员提供交流与合作机会,由中华预防医学会生物制品分会主办、中国生物技术集团公司和国药励展展览有限责任公司承办、国药中生成都生物制品研究所和中国医药生物技术协会疫苗专业委员会协办的"2011中国生物制品年会暨第十一次全国

    2011年08期 v.24 944页 [查看摘要][在线阅读][下载 45K]
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  • 《中国药学术语词库与主题词表》征订启事

    <正>《中国药学术语词库与主题词表》是科技部的重点科技基础性项目。书本产品《中国药学主题词表》是我国第一部涵盖药学及其相关学科主题词的主题词表。对图书文献的编辑、出版、标引、编目、建库、查新、文献数据库建设、数据库检索、咨询服务、信息交换和国内外学术交流等起着重要作用。《中国药学主题词表》共收录正式主题词

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  • 《中国药学大辞典》(2008年版)征订启事

    <正>《中国药学大辞典》收集词汇近26 000条,涉及药用动物、植物、矿物、中药和方剂、药用化学物质、化学药物、药剂学、药物化学、中药学和生药学、微生物药学、生物药学、药物分析、药理学和毒理学、医院药学、临床药学、药学史、药事管理、信息科学、药学相关学科和专业、技术和设备、教育学名

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  • 《免疫学前沿进展》征订启事

    <正>由中国免疫学会理事长曹雪涛院士牵头、全国免疫学各领域知名专家联合编著的《免疫学前沿进展》,于2009年12月由人民卫生出版社正式出版。免疫学是一门重要的基础学科,与临床医学紧密相关,是生物医学乃至整个生命科学中发展最快的学科之一。《免疫学前沿进展》是国内第一本及时

    2011年08期 v.24 970页 [查看摘要][在线阅读][下载 42K]
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  • 中国微生物学会第十次全国会员代表大会征文通知

    <正>由中国微生物学会主办,福建省农业科学院、福建省微生物学会共同承办,福建省微生物研究所、福建省疾病预防控制中心、福建农林大学生命科学院、福州大学生物科学与工程学院协办的"2011年中国微生物学会学术年会暨中国微生物学会第十次全国会员代表大会",定于2011年10月21~25日在福建省福州市举行。

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  • 《中国医药导刊》(月刊)欢迎订阅、欢迎投稿、欢迎刊登广告

    <正>本刊刊号:CN11-4395/R,ISSN 1009-0959,广告经营许可证:京西工商广字第0111号。国家食品药品监督管理局主管,国家食品药品监督管理局信息中心主办。2009年为月刊,大16开本,160页,每册定价23元。邮发代号2-492。读者可在附近邮局订阅或拨打

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