中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

基础研究

  • 脊髓灰质炎病毒Sabin2株结构蛋白VP1在昆虫杆状病毒表达系统中的表达

    刘金花;董关木;安祺;曹守春;孔艳;

    目的在昆虫杆状病毒表达系统中表达脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV)Sabin2株结构蛋白VP1。方法从Sabin2疫苗原液中RT-PCR扩增PV结构蛋白VP1基因,克隆入pFastBac1质粒,转化含杆状病毒穿梭载体Bacmid的E.coliDH10Bac,获得重组杆状病毒表达质粒Bacmid-VP1,在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac-VP1。将第2代rBac-VP1感染sf9细胞,间接免疫荧光法检测VP1蛋白的表达,并优化感染条件。结果重组杆状病毒表达质粒Bacmid-VP1转化子可扩增出3 203 bp的目的片段;第2代rBac-VP1的滴度为6×107 pfu/ml,其感染的sf9细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光,以不同MOI的rBac-VP1感染sf9细胞,VP1蛋白表达量差别不大,而在96 h内,随着感染时间的延长,VP1蛋白的表达量逐渐升高。结论在昆虫杆状病毒表达系统中成功表达了PV Sabin2株结构蛋白VP1,为脊髓灰质炎亚单位疫苗的研制奠定了基础。

    2011年06期 v.24 625-628页 [查看摘要][在线阅读][下载 268K]
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消息

  • 中国生物制品大会暨第十一次全国生物制品学术研讨会征文通知

    <正>为了促进中国生物制品事业的发展,为专业研究人员提供交流与合作机会,中国生物制品大会暨第十一次全国生物制品学术研讨会将于2011年9月22~25日在成都召开。本次会议由中华预防医学会生物制品分会主办,中国生物技术集团公司和国药励展展览有限责任公司承办,国药中生成都生物制品研究所协办。大会将邀请著名专家作相关专题报告,同时面向从事医学生物制品学及相关专业的工作者征集论文。希望有关领域的工作人员踊跃投稿,积极参会交流。

    2011年06期 v.24 628页 [查看摘要][在线阅读][下载 38K]
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基础研究

  • 病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ在毕赤酵母中的表达及其抗HIV-1活性

    莫雪梅;孙晗笑;贾忠伟;李秀英;张光;

    目的在毕赤酵母中表达病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ(Viral macrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ),并检测其抗HIV-1活性。方法通过PCR技术从质粒pQE-vMIP-Ⅱ中扩增vMIP-Ⅱ基因,插入酵母表达载体pPICZaA中,构建表达质粒pPICZaA-vMIP-Ⅱ,转化毕赤酵母菌X33,甲醇诱导表达。表达产物经镍离子亲和层析和分子筛层析纯化后,进行Western blot鉴定,并检测重组vMIP-Ⅱ蛋白对HIV-1诱导的细胞合胞体形成的抑制作用。结果重组表达质粒pPICZaA-vMIP-Ⅱ经酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组vMIP-Ⅱ蛋白的相对分子质量约为8 500,以分泌形式表达于重组酵母菌的发酵上清中;纯化的重组蛋白纯度达97.3%,且可与HRP标记的vMIP-Ⅱ多克隆抗体发生反应;重组vMIP-Ⅱ蛋白组的合胞体数目明显少于阳性对照组(P﹤0.05),其IC50值为1.35 ng/ml。结论已成功在毕赤酵母中表达了重组vMIP-Ⅱ蛋白,其具有较强的抑制HIV-1的活性。

    2011年06期 v.24 629-633页 [查看摘要][在线阅读][下载 409K]
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  • 抑制JTV1基因表达对大黄素引起的K562细胞凋亡的影响及其机制

    吴燕;刘北忠;王翀;朱丹;王春光;金丹婷;高艳军;黎亮;

    目的探讨抑制JTV1基因表达对大黄素引起的人白血病K562细胞系凋亡的影响及其机制。方法将pGene-Sil-1-JTV1-1.1 siRNA重组质粒、pGeneSil-1-N.1阴性对照质粒及pGeneSil-1空载体分别转染人K562细胞,通过集落形成试验检测细胞的增殖能力;各组转染K562细胞经80μmol/L大黄素处理后,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率,RT-PCR法检测细胞中凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc转录水平的变化,Western blot法检测Bcl-2、Bax、C-myc翻译水平的变化。结果抑制JTV1基因的表达后,K562细胞的增殖能力明显提高;抑制JTV1基因表达可使经80μmol/L大黄素处理的K562细胞G1期细胞比例下降,并减轻大黄素引起的细胞凋亡,同时,细胞Bax基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平均明显下降,而Bcl-2基因和C-myc基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平则明显上调。结论抑制JTV1基因表达可能通过上调Bcl-2和C-myc基因的表达,下调Bax基因的表达,促进K562细胞的增殖,并阻止细胞凋亡。

    2011年06期 v.24 634-638页 [查看摘要][在线阅读][下载 548K]
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消息

  • 《医学免疫学实验技术》征订启事

    <正>我国首批国家级医学研究生规划教材之一的《医学免疫学实验技术》(主编柳忠辉),于2008年3月由人民卫生出版社出版。该书由国内16所大学从事相关领域研究的教授参编。

    2011年06期 v.24 638页 [查看摘要][在线阅读][下载 46K]
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基础研究

  • 羊布氏菌SOD基因重组酿酒酵母菌株的构建及鉴定

    王景龙;屈海龙;杨延玲;孙春辉;王秀然;郎需龙;李晓艳;卜昭阳;王兴龙;

    目的构建羊布氏菌超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)基因重组酿酒酵母菌株,并进行鉴定。方法 PCR扩增羊布氏菌16M株SOD基因,与psos载体连接,构建重组表达质粒psos-SOD,转化酿酒酵母菌cdc25H,并进行PCR鉴定、表型验证、自激活及定位情况检验。结果重组真核表达质粒psos-SOD经双酶切和测序证明构建正确;重组酵母菌经PCR可扩增出525 bp的SOD基因条带,其表型正常,无自激活宿主菌的作用,表达蛋白定位正确。结论已成功构建了羊布氏菌SOD基因重组酿酒酵母菌株,为研究布氏菌致病的分子机制奠定了基础。

    2011年06期 v.24 639-642页 [查看摘要][在线阅读][下载 236K]
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消息

  • 来自ATCC的基因靶向工具

    <正>ATCC发布三个新的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)滋养细胞系,用于支持未分化胚胎干细胞系和iPS细胞系的生长。DR4 MEF(ATCC誖SCRC-1045TM)带有抗生素耐药基因,可以耐受新霉素(G418)、嘌呤霉素、潮霉素和6-硫基鸟嘌呤。SNL76/7(SCRC-1049TM)是一个克隆,来自于具有G418抗性和鼠类LIF高表达的STO细胞系。

    2011年06期 v.24 642页 [查看摘要][在线阅读][下载 48K]
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基础研究

  • 重组腺病毒pAd-sTGF-β RⅡ对大鼠心肌梗死后心室重塑的影响

    张玲玲;刘增长;肖培林;苏立;殷跃辉;

    目的研究携带TGF-βRⅡ胞外区基因的重组腺病毒pAd-sTGF-βRⅡ对大鼠心肌梗死(Myocardial infarction,MI)后心室重塑的影响,并探讨其可能的机制。方法结扎SD大鼠左冠状动脉前降支,建立大鼠MI模型,将模型大鼠随机分为MI组(生理盐水)、pAd-sTGF-βRⅡ组(pAd-sTGF-βRⅡ病毒上清液)、空载体组(pAdTrack),并另设假手术组。4周后,取冰冻切片,荧光显微镜下观察sTGF-βRⅡ在大鼠心肌组织中的表达;HE染色观察心肌组织结构;天狼猩红-饱和苦味酸染色法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达;RT-PCR法检测凋亡相关基因bax、bcl-2 mRNA的表达。结果与MI组比较,pAd-sTGF-βRⅡ组大鼠心肌组织总Ⅰ、Ⅲ型胶原、MMP-9蛋白和bax基因mRNA的表达水平均明显降低(P<0.01),α-SMA阳性细胞数亦明显减少,bcl-2基因mRNA表达水平增加(P<0.01)。与假手术组比较,pAd-sTGF-βRⅡ组大鼠心肌组织总Ⅰ、Ⅲ型胶原、MMP-9蛋白和bax基因mRNA的表达水平明显升高(P<0.01),bcl-2基因mRNA的表达水平无明显差异(P>0.05)。结论重组腺病毒pAd-sTGF-βRⅡ干预可改善大鼠MI后心室重塑,其机制可能是通过抑制TGF-β介导的心肌纤维化和心肌细胞凋亡实现的。

    2011年06期 v.24 643-648页 [查看摘要][在线阅读][下载 499K]
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  • TIMP1基因重组真核表达质粒的构建及其在MCF-7细胞中的表达

    李鹏;马艳娇;赵娜;袁婷;宫鹏涛;李建华;欧阳红生;张西臣;

    目的构建3种TIMP1基因重组真核表达质粒,并在人乳腺癌MCF-7细胞中表达。方法将TIMP1基因分别插入3种真核表达载体pcDNA3.1(+)、pVAXⅠ和pEGFP-C1,构建3种重组表达质粒pcDNA3.1(+)-TIMP1、pVAXⅠ-TIMP1和pEGFP-C1-TIMP1,转染MCF-7细胞,采用Real-time PCR和Western blot法检测TIMP1基因在MCF-7细胞中的表达。结果 3种重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;重组表达质粒pEGFP-C1-TIMP1转染MCF-7细胞48 h后,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光,而pcDNA3.1(+)-TIMP1和pVAXⅠ-TIMP1转染的细胞则观察不到绿色荧光;在转染的MCF-7细胞中,TIMP1基因mRNA转录水平和蛋白表达水平从高到低依次为pcDNA3.1(+)-TIMP1、pVAXⅠ-TIMP1和pEGFP-C1-TIMP1。结论已成功构建了3种TIMP1基因重组真核表达质粒,其在MCF-7细胞中的表达量有差异。

    2011年06期 v.24 649-652页 [查看摘要][在线阅读][下载 242K]
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  • GalR2基因真核表达质粒的构建及鉴定

    张丹;杨春;何永林;靳志栋;佘茜;徐蕾;张鹏;

    目的构建GalR2基因真核表达质粒,并在HeLa细胞中表达。方法从C57BL∕6J小鼠海马组织中提取总RNA,RT-PCR法扩增GalR2基因,克隆至pEGFP-C1载体中,构建重组真核表达质粒pEGFP-GalR2。将重组表达质粒转染至HeLa细胞,荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的定位,RT-PCR和Western blot分别检测GalR2基因的转录及表达。结果从C57BL∕6J小鼠海马组织扩增出1 116 bp的GalR2基因;重组表达质粒pEGFP-GalR2经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确;转染细胞融合基因的表达产物定位于细胞核,GalR2基因在mRNA及蛋白水平上均有表达。结论已成功构建了GalR2基因真核表达质粒pEGFP-GalR2,并在HeLa细胞中成功表达了GalR2蛋白,为进一步探讨GalR2的生物学活性奠定了基础,也为寻找抗抑郁药物的靶点提供了新的思路。

    2011年06期 v.24 653-656页 [查看摘要][在线阅读][下载 270K]
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  • Spiegelmer NOX 1255对LHRH-PE40与HeLa细胞上LHRH受体结合的抑制作用

    邓欣;Sven Klussmann;李亘松;聂志伟;宋阳;张国利;朱平;

    目的探讨Spiegelmer NOX 1255对促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素40(Luteinizing hormone-releasing hor-mone-Pseudomonas aeruginosa exotoxin 40,LHRH-PE40)与HeLa细胞上促黄体激素释放激素(LHRH)受体结合的抑制作用。方法分别将25μmol/L的LHRH-PE40、PEA和PE40与HeLa细胞共孵育24 h后,观察细胞的形态学变化;用Spiegelmer NOX1255特异性结合LHRH-PE40上的LHRH,光学显微镜观察Spiegelmer NOX 1255对LHRH-PE40的抑制作用,ELISA检测Spiege-lmer NOX 1255对LHRH-PE40与LHRH受体结合的抑制作用。结果 LHRH-PE40和PEA可直接杀伤HeLa细胞,而PE40不能对HeLa细胞产生毒性作用;Spiegelmer NOX 1255能够结合LHRH-PE40中的LHRH,抑制LHRH-PE40与LHRH受体的结合及PE40的毒性作用。结论 LHRH-PE40对HeLa细胞的毒性作用是通过细胞表面的LHRH受体产生的;Spiegelmer NOX 1255可阻断LHRH-PE40与HeLa细胞表面LHRH受体的结合。

    2011年06期 v.24 657-659+664页 [查看摘要][在线阅读][下载 375K]
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  • Hedgehog信号转导通路对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移的影响及其机制

    隆玲;邓华瑜;韩铭;陈黎;姜蓉;

    目的探讨Hedgehog信号转导通路对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移的影响及其机制。方法应用Hedgehog信号转导通路抑制剂环巴胺(Cyclopamine)处理MDA-MB-231细胞,Transwell小室侵袭迁移实验检测细胞体外侵袭和转移能力;明胶酶谱实验检测细胞MMP-9和MMP-2的活性;Western blot法检测细胞P-c-Jun和MMP-9蛋白的表达;RT-PCR法检测细胞Gli1、c-jun和MMP-9基因mRNA的表达。结果经Cyclopamine处理后,MDA-MB-231细胞的侵袭迁移能力明显下降;MMP-9的活性降低;P-c-Jun和MMP-9蛋白表达降低;Gli1、c-jun和MMP-9基因mRNA的表达水平下降。结论 MDA-MB-231细胞存在Hedgehog信号转导通路的激活;活化的Hedgehog信号转导通路可通过上调c-jun和MMP-9的表达,促进肿瘤细胞的侵袭转移。

    2011年06期 v.24 660-664页 [查看摘要][在线阅读][下载 496K]
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  • H3N2 SIV河南分离株NS1基因的克隆及原核表达

    赵朴;赵坤;贾贝贝;王三虎;刘兴友;姚四新;郑玉姝;

    目的克隆并原核表达猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)非结构蛋白1(Nonstructural protein 1,NS1)基因,为建立人工免疫猪和自然感染猪的鉴别诊断方法奠定基础。方法从 H3N2 SIV河南分离株中提取病毒RNA,RT-PCR扩增NS1基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果测序结果表明,扩增的NS1基因与国内外多株SIV NS1基因序列同源性达98%以上,表达的重组蛋白相对分子质量约为27 000,能与SIV感染猪阳性血清发生特异性反应。结论已成功克隆了H3N2 SIV河南分离株NS1基因,并在E.coli BL21(DE3)中表达了重组NS1蛋白,为建立人工免疫猪和自然感染猪的鉴别诊断方法奠定了基础。

    2011年06期 v.24 665-667页 [查看摘要][在线阅读][下载 184K]
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  • siRNA-NRP1对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用

    彭阳;吴小翎;连海峰;陈鹏飞;芦曦;

    目的探讨神经纤毛蛋白1(Neuropilin 1,NRP1)基因小干扰RNA(siRNA)质粒对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用。方法设计靶向人NRP1基因的siRNA序列,合成一对互补的寡核苷酸,退火后克隆至质粒pGenesil-1.1上,构建重组质粒siRNA-NRP1;将人胃癌细胞SGC7901注入裸鼠右臀部皮下,构建移植瘤模型,成瘤后将重组质粒siRNA-NRP1注入瘤内,观察裸鼠临床表现,并测定裸鼠移植瘤的体积及重量;病理切片观察肿瘤组织及血管生长情况;免疫组化方法观察裸鼠移植瘤中NRP1的表达及微血管密度。结果酶切分析及测序鉴定证实目的寡核苷酸片段已克隆至质粒pGenesil-1.1中;siRNA-NRP1组裸鼠移植瘤的体积及重量均小于对照组(P<0.01);病理切片显示siRNA-NRP1组肿瘤细胞坏死较对照组明显;免疫组化显示siRNA-NRP1组裸鼠移植瘤中NRP1的表达及微血管密度均低于对照组(P<0.01)。结论通过siRNA-NRP1抑制裸鼠胃癌移植瘤中NRP1的表达,可影响裸鼠移植瘤中血管的生成,最终抑制肿瘤的生长。

    2011年06期 v.24 668-671页 [查看摘要][在线阅读][下载 478K]
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  • 肺炎支原体黏附蛋白P1羧基末端的原核表达及纯化

    刘志强;王栋;陈禹保;

    目的原核表达并纯化肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)黏附蛋白P1羧基末端。方法提取MP FH型基因组DNA,以其为模板,PCR扩增P1羧基末端基因,插入原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒,转化E.coli Rosetta,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经镍离子亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE、Western blot和ELISA鉴定。结果重组表达质粒pET-32a-MP-P1C经PCR、双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约55 900,以可溶性形式表达,表达量占菌体总蛋白的47%;纯化的重组蛋白纯度达94%以上,浓度为3.77 mg/ml,可与支原体肺炎患者血清特异性反应,经3 000倍稀释后,仍可与支原体肺炎患者血清发生阳性反应。结论原核表达并纯化了MP黏附蛋白P1羧基末端,为进一步研究MP的致病机制及研发诊断试剂和基因疫苗奠定了基础。

    2011年06期 v.24 672-675页 [查看摘要][在线阅读][下载 294K]
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  • 白芨多糖对小鼠免疫功能的调节作用

    邱红梅;张颖;周岐新;赖舒;

    目的探讨白芨多糖(Bletilla striata polysaccharide,BSPS)对小鼠免疫功能的调节作用。方法提取白芨多糖并测定其含量。通过腹腔注射环磷酰胺100 mg/(kg.d),连续3 d,建立免疫功能低下小鼠模型,观察灌服不同剂量白芨多糖溶液对免疫功能低下小鼠碳廓清试验的影响;采用MTT法测定白芨多糖对刀豆蛋白A(Concanavalin A,Con A)和脂多糖(Lipopoly-saccharide,LPS)诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。结果提取的3批白芨多糖中的多糖含量分别为93.490%、92.280%和92.629%。在碳廓清试验中,与模型组相比,500 mg/(kg.d)白芨多糖能显著提高免疫抑制小鼠的吞噬指数,其作用与100 mg/(kg.d)的左旋咪唑大致相当。淋巴细胞增殖试验中,1、3、10μg/ml的白芨多糖均可显著提升Con A诱导的小鼠T淋巴细胞增殖的能力,白芨多糖终浓度为3μg/ml时,提升作用最为显著;3μg/ml白芨多糖可显著提升LPS诱导的小鼠B淋巴细胞增殖的能力。结论白芨多糖对小鼠的非特异性免疫和特异性免疫反应均有促进作用。

    2011年06期 v.24 676-678页 [查看摘要][在线阅读][下载 168K]
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  • 猪附红细胞体感染小鼠血清IgG和IgE水平的变化

    巴彩凤;谢建中;宋立先;

    目的建立猪附红细胞体感染BALB/c小鼠模型,检测小鼠血清IgG和IgE水平的变化。方法将未感染猪附红细胞体的BALB/c小鼠随机分为3组:A组注射猪附红细胞体阳性血液,B组注射猪附红细胞体阴性血液,C组注射生理盐水。采用镜检和PCR法检测各组小鼠猪附红细胞体感染情况;ELISA法检测各组小鼠血清IgG和IgE水平。结果镜检观察A组小鼠血液中可见猪附红细胞体。PCR结果显示,A组小鼠血液中可扩增出602 bp的特异性条带。在接种后第7和19天,3组小鼠血清IgG水平差异无统计学意义(P>0.05),至第10、13和16天,A组小鼠血清IgG水平明显高于B组和C组(P<0.01),B组明显高于C组(P<0.01);在接种后第10、13和22天,3组小鼠血清IgE水平差异无统计学意义(P>0.05),至第16和19天,A组小鼠血清IgE水平明显高于B组和C组(P<0.01),B组明显高于C组(P<0.01)。结论已成功建立猪附红细胞体感染小鼠模型,IgG和IgE在小鼠抗猪附红细胞体免疫应答中发挥重要作用。

    2011年06期 v.24 679-681页 [查看摘要][在线阅读][下载 265K]
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  • 靶向人原癌基因c-fos的shRNA表达质粒的构建及鉴定

    景志杰;刘田福;师锐赞;

    目的构建靶向人原癌基因c-fos的短发夹RNA(Short hairpin RNA,shRNA)重组真核表达质粒,并进行鉴定。方法构建靶向人c-fos基因的shRNA重组表达质粒Psilencer 3.1-sic-fos,转染乳腺癌MCF-7细胞,采用RT-PCR法检测稳定转染细胞中c-fos基因mRNA的表达。结果重组表达质粒Psilencer 3.1-sic-fos经PCR、双酶切及测序证明构建正确;重组表达质粒在mRNA水平明显抑制了MCF-7细胞c-fos基因的表达(P<0.05)。结论已成功构建了人c-fos基因shRNA重组表达质粒,为深入研究c-fos基因在肿瘤发生、发展过程中的作用提供了技术手段。

    2011年06期 v.24 682-684页 [查看摘要][在线阅读][下载 276K]
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  • PPARα/NO在血管紧张素Ⅳ诱导血管平滑肌细胞增殖中的作用

    王全华;陈加飞;承欧梅;吴芹;蒋青松;

    目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(Peroxisome proliferator-activated receptorα,PPARα)/一氧化氮(Ni-tric oxide,NO)信号通路在血管紧张素Ⅳ(AngiotensinⅣ,AngⅣ)诱导血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖中的作用。方法体外培养大鼠VSMCs,将细胞分为6组:对照组(只加培养基)、AngⅣ组、AngⅣ+非诺贝特(Fenofibrate,FF)组、AngⅣ+FF+MK 886组、AngⅣ+L-arg组和AngⅣ+L-arg+L-NAME组,MTT法检测细胞的增殖;BCA法测定细胞总蛋白含量;Real-time PCR法检测细胞中PPARα和eNOS基因mRNA的表达;Western blot法检测细胞中PPARα蛋白的表达;比色法和硝酸还原法分别检测细胞培养上清中一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase,eNOS)活性和NO浓度。结果 0.1 nmol/L AngⅣ可诱导VSMCs增殖,增加细胞总蛋白含量,PPARαmRNA及蛋白表达明显降低,eNOS基因mRNA表达减少,细胞上清中NOS活性及NO浓度降低;FF和L-arg可逆转AngⅣ的上述作用,并被相应的阻断剂(MK 886和L-NAME)抑制。结论 AngⅣ诱导VSMCs的增殖作用可能与PPARα/NO信号通路受损有关。

    2011年06期 v.24 685-688页 [查看摘要][在线阅读][下载 254K]
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预防制品

  • 重组弓形虫热休克蛋白70鼻内及皮下免疫小鼠诱导的免疫应答比较

    殷丽天;曹蕾;王海龙;孟晓丽;张建红;殷国荣;

    目的比较重组弓形虫热休克蛋白70(rTgHSP70)滴鼻及皮下免疫小鼠诱导的免疫应答及其持续时间。方法将90只BALB/c小鼠随机分为3组:滴鼻组用20μg rTgHSP70滴鼻,皮下组用80μg rTgHSP70皮下免疫,间隔2周加强免疫1次,对照组不处理。末次免疫后第1、2、3、4、5、6周,每组分别处死小鼠5只,ELISA法检测血清IgG水平、鼻咽和肠冲洗液sIgA水平;分离脾淋巴细胞和肠上皮内淋巴细胞(IEL)并计数。结果滴鼻组小鼠血清IgG水平第1~6周高于皮下组和对照组,其中第3~5周差异有统计学意义(P<0.001);皮下组小鼠第3、4周显著高于对照组(P<0.001)。滴鼻组小鼠第3~5周,皮下组小鼠第4~5周鼻咽冲洗液sIgA水平显著高于对照组(P<0.001)。滴鼻组小鼠小肠冲洗液sIgA水平第1~6周显著高于皮下组和对照组(P均<0.001);皮下组小鼠第3、4周显著高于对照组(P<0.001)。滴鼻组小鼠脾淋巴细胞数量第2~4周显著高于对照组(P<0.000 1),3~4周显著高于皮下组(P<0.001);皮下组小鼠第2~4周显著高于对照组(P<0.001)。滴鼻组小鼠IEL数量第1~6周显著高于对照组(P<0.000 1),第3~4周显著高于皮下组(P<0.000 1),皮下组小鼠第1~5周显著高于对照组(P<0.05)。结论 rTgHSP70皮下和滴鼻免疫小鼠均能诱导有效的黏膜和系统免疫应答,且滴鼻免疫的效果优于皮下免疫,是rTgHSP70更为有效的免疫途径。

    2011年06期 v.24 689-692页 [查看摘要][在线阅读][下载 283K]
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  • 皮卡重组乙型肝炎疫苗(汉逊酵母)的稳定性

    李晓宇;高俊清;张燕;金贞姫;刘照惠;

    目的观察皮卡重组乙型肝炎疫苗(汉逊酵母)的稳定性。方法将皮卡重组乙型肝炎疫苗(汉逊酵母)分别于37、25和2~8℃放置不同时间,检测疫苗的体外相对效力(Relative potency,RP)、pH值和纯度的变化,观察其稳定性。结果疫苗于37℃放置45 d,RP略有下降,但仍在合格范围内;25℃放置6个月,RP和pH值均无明显变化;2~8℃放置12个月,RP、pH值和纯度均无明显变化。结论皮卡重组乙型肝炎疫苗(汉逊酵母)稳定性良好。

    2011年06期 v.24 693-694页 [查看摘要][在线阅读][下载 154K]
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治疗制品

  • 重组人尿激酶原纯化工艺病毒去除效果验证

    李世崇;叶华虎;赵国焓;张正光;王代平;胥照平;高丽华;陈昭烈;胡显文;

    目的验证重组人尿激酶原(Prourokinase,Pro-uk)纯化工艺的病毒去除效果。方法采用模拟Pro-uk纯化工艺中阴离子和阳离子交换层析的scale-down模型,以水泡性口炎病毒(Vesivular stomatitis virus,VSV)、脑心肌炎病毒(Encephalo-myocarditis virus,EMCV)、人单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus type-1,HSV-1)为指示病毒,采用细胞病变法评价离子交换层析的病毒去除效果。结果阴离子交换层析对脂包膜病毒VSV和HSV-1的去除能力强,对无脂包膜病毒EMCV的去除能力较弱;阳离子交换层析对VSV和HSV-1的去除能力较弱,对EMCV的去除能力较强。经离子交换层析纯化后,3种指示病毒的累计去除效率均>99.99%(大于4 log10)。结论 Pro-uk纯化工艺中的离子交换层析是控制病毒安全性的有效步骤,其去除效率达到了《生物组织提取制品和真核细胞表达制品的病毒安全性评价技术审评一般原则》规定的安全标准。

    2011年06期 v.24 695-698页 [查看摘要][在线阅读][下载 243K]
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诊断制品

  • 抗人血小板单克隆抗体的制备及其临床应用

    牟忠梅;段生宝;刘颖;李春明;陈喜朋;李勇;

    目的制备抗人血小板单克隆抗体,并应用于临床血小板抗体的筛检及血小板交叉配型。方法以人O型血小板为免疫原,免疫BALB/c小鼠,将NS-1细胞与免疫小鼠脾细胞融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,有限稀释法克隆,并对阳性杂交瘤细胞及其分泌的单克隆抗体进行鉴定;采用亲和层析法纯化单抗,用该单抗建立固相凝集法,检测临床患者血清样本,并与德国欧蒙公司的同类试剂盒(MASPAT)检测结果进行比较。结果获得1株抗人血小板杂交瘤细胞株1C1,其分泌的单抗性能稳定,可特异性针对人血小板糖蛋白Ib/IX,细胞稳定传代8个月以上,培养上清效价大于为1∶106,37℃的稳定性可持续35 d,纯化后的抗体效价可达1∶108。建立的固相凝集法对50例临床血清样本的检测结果与同类试剂盒(MASPAT)一致。结论已制备了抗人血小板单克隆抗体,为其进一步临床应用奠定了基础。

    2011年06期 v.24 699-701页 [查看摘要][在线阅读][下载 146K]
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  • 弓形虫IgG抗体检测试剂用血清国家参考品的制备

    张瑾;辛晓芳;薄淑英;杨英超;张影;王国治;

    目的制备弓形虫IgG抗体检测试剂用血清国家参考品。方法收集弓形虫IgG抗体阳性血清和正常人血清,用6个厂家的弓形虫IgG检测试剂盒进行筛选,并采用染色试验和凝集试验予以确证,采用弓形虫IgG抗体国际标准品对阳性血清进行标定。参考品经协作标定,确定最低检出量标准。结果确定此套血清国家参考品共24份,其中阳性参考品9份(包括最低检出量参考品1份),阴性参考品15份。结论制备了第1套弓形虫IgG抗体检测试剂用血清国家参考品,并建立了相应的质量标准,已被国家有关部门批准正式使用。

    2011年06期 v.24 702-704页 [查看摘要][在线阅读][下载 122K]
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消息

  • 《中国预防医学杂志》征订征稿通知

    <正>《中国预防医学杂志》为中华人民共和国卫生部主管,中华预防医学会主办的预防医学与公共卫生领域权威性学术期刊,国内外公开发行(中国标准刊号:ISSN1009-6639,CN 11-4529/R;邮发代号:2-764)。

    2011年06期 v.24 704页 [查看摘要][在线阅读][下载 37K]
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诊断制品

  • 国产第3代与进口第4代HIV检测试剂的比较

    陈镇周;肖明星;童欣;周筠;陆伟荣;陈婷;

    目的比较国产第3代与进口第4代HIV试剂检测结果的差异,为试剂的选择及设定血液报废标准提供参考。方法按试剂使用说明书的要求操作,用国产第3代(A和B)和进口第4代(C)HIV检测试剂对35 487份常规血液样本进行检测,试剂使用前用中国药品生物制品检定所血清盘进行质量评价。结果 3种试剂均符合质量要求;2个国产试剂和1个进口试剂s/co≥1.0的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),s/co≥0.8的检测结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论从血液安全考虑,建议国产第3代HIV检测试剂将s/co≥0.5作为血液报废标准,进口第4代试剂将s/co≥0.8作为血液报废标准。

    2011年06期 v.24 705-706+714页 [查看摘要][在线阅读][下载 129K]
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临床观察

  • 国产麻腮风联合减毒活疫苗的安全性及免疫原性

    储艳;陆玉忠;陶红;王标;王琰;王树巧;秦洁;徐闻青;

    目的观察国产麻腮风联合减毒活疫苗(MMR)的安全性及免疫原性。方法选择8~15月龄未接种过麻疹、腮腺炎、风疹疫苗的健康儿童共765名,随机分别接种上海生物制品研究所生产的麻疹、腮腺炎(高滴度)、风疹联合减毒活疫苗(沪高MMR)和麻疹、腮腺炎(低滴度)、风疹联合减毒活疫苗(沪低MMR)及国产对照MMR疫苗,观察接种后的安全性及免疫原性。采用ELISA法检测血清中的麻疹、腮腺炎、风疹的IgG抗体水平。结果 765名观察对象全身反应率为18.95%,局部反应率低于0.4%。3组疫苗免疫后麻疹抗体阳转率分别为97.34%、97.18%和95.04%,腮腺炎抗体阳转率分别为94.68%、89.83%和76.60%,风疹抗体阳转率分别为94.68%、94.35%和91.49%。3组疫苗免疫后麻疹抗体几何平均浓度(GMC)分别为6 221.57、5 766.34和5 054.75 mIU/ml,抗体平均增长约200倍;腮腺炎抗体GMC分别为381.33、308.46和207.01 U/ml,抗体平均增长分别约26、22和17倍;风疹抗体GMC分别为81.77、77.61和81.49 IU/ml,抗体平均增长约23倍。各组间麻疹和风疹抗体阳转率、GMC和平均增长倍数差异均无统计学意义(P>0.05),腮腺炎沪高、低MMR与对照MMR疫苗差异均有统计学意义(P<0.05),但沪高、低MMR疫苗间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 3种MMR疫苗的安全性良好,免疫原性麻疹和风疹相似,腮腺炎存在差异,抗体阳转率上海生物制品研究所生产的高滴度腮腺炎MMR疫苗与低滴度腮腺炎MMR疫苗差异无统计学意义。

    2011年06期 v.24 707-710页 [查看摘要][在线阅读][下载 192K]
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实验技术

  • 重组靶向性抗肿瘤融合蛋白EGF-E4orf4毕赤酵母工程菌中试发酵工艺的建立

    孙成金;王健;崔春青;郭鹏;陈祥鹏;张振龙;

    目的建立重组靶向性抗肿瘤融合蛋白EGF-E4orf4毕赤酵母工程菌的中试发酵工艺。方法优化EGF-E4orf4工程菌二级种子培养时间,按5%的比例接种于20 L发酵培养基,设定培养阶段温度为30℃,诱导表达阶段温度为28℃,在发酵过程中通过调节搅拌速度、通气量和罐压等措施使DO维持在20%~35%,采用三步发酵法进行发酵,优化诱导pH值及诱导时间,并在已优化的工艺条件下,稳定发酵3批。结果确定二级种子的培养时间为15 h,最适诱导pH值为6.0,最适诱导时间为48 h;中试发酵3批,菌体A600均值达(327.67±17.96),菌体湿重均值达(308.33±9.07)g/L,EGF-E4orf4表达量均值为(200.00±5.57)mg/L。结论已初步建立了重组EGF-E4orf4毕赤酵母工程菌的中试发酵工艺,为EGF-E4orf4的产业化奠定了基础。

    2011年06期 v.24 711-714页 [查看摘要][在线阅读][下载 269K]
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  • 高通量生物反应器Tubespin培养CHO细胞条件的优化

    谢奎;雷云;黄鹂;王一婷;熊盛;

    目的优化高通量生物反应器Tubespin培养CHO细胞的条件,提高蛋白表达量。方法采用Tubespin生物反应器在不同转速(160、180和200 r/min)和培养体积(5、10、20和35 ml)条件下振荡悬浮培养CHO细胞,测定不同条件下的气体交换速率、细胞密度、细胞活力及蛋白相对表达量,优化细胞培养条件。在最佳培养条件下,向培养基中分别添加30、60和90 mmol/L氯化钠,观察不同浓度氯化钠对细胞密度、细胞活力、摄氧率、溶氧及重组蛋白表达的影响。结果 Tubespin具有良好的气体交换速率,可满足高密度细胞培养的需要;经优化,细胞培养最佳条件为:摇床转速180 r/min,培养体积10 ml,此时细胞生长密度高,较快进入稳定期进行重组蛋白的表达。细胞培养72 h时向培养基中添加60 mmol/L氯化钠,能使重组蛋白的表达量提高1倍。结论优化了Tubespin培养CHO细胞的条件和氯化钠诱导浓度,提高了重组蛋白的产量,为大规模发酵生产奠定了基础。

    2011年06期 v.24 715-719页 [查看摘要][在线阅读][下载 475K]
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  • 重金属铜离子单克隆抗体的制备及其间接竞争ELISA检测方法的建立

    郭常伟;唐勇;向军俭;邹军辉;杨红宇;

    目的制备重金属铜离子单克隆抗体,并建立间接竞争ELISA检测方法。方法利用双功能螯合剂p-SCN-Bn-DTPA将Cu(Ⅱ)与载体蛋白BSA和OVA偶联,制备免疫抗原Cu(Ⅱ)-DTPA-BSA和检测抗原Cu(Ⅱ)-DTPA-OVA,免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合筛选稳定分泌抗重金属Cu(Ⅱ)-DTPA单克隆抗体的杂交瘤细胞株;制备腹水,测定抗体效价,鉴定抗体亚型,并检测其特异性;建立间接竞争ELISA检测方法,并与ICP-AES检测结果进行比较。结果共筛选出3株稳定分泌抗重金属Cu(Ⅱ)-DTPA单克隆抗体的杂交瘤细胞,选择其中的4C2E7株制备腹水。腹水抗体效价为1×106,抗体亚类为IgG1,该抗体除与Co(Ⅱ)、Zn(Ⅱ)和Hg(Ⅱ)存在17.5%、8.75%和1.46%的交叉反应外,与其他7种金属离子的交叉反应率均较低。该法最低检测限为2.0 ng/ml,与ICP-AES法检测结果的总符合率超过94%。结论已成功制备了重金属铜离子单克隆抗体,并建立了间接竞争ELISA检测方法。

    2011年06期 v.24 720-723页 [查看摘要][在线阅读][下载 218K]
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  • 响应面法优化桑黄菌发酵培养基

    朱虎;何长川;张宗举;张帅帅;褚庆环;

    目的利用响应面法对桑黄菌液体发酵培养基进行优化,提高胞外多糖产量。方法应用Plackett-Burman设计和响应面法,对桑黄菌液体发酵培养基成分及其含量进行优化。用Design-Expert软件对实验数据进行多元回归分析,并建立3种主要因素(蛋白胨、酵母粉和磷酸二氢钾)与多糖产量之间的函数关系。用最终优化的配方进行3次验证实验。结果通过快速"登高法"对3个显著因素进行寻优,培养基中3因素最佳浓度为:蛋白胨14.72 g/L、酵母粉11.04 g/L、磷酸二氢钾1.472 g/L,胞外多糖产量最高可达7.04 g/L。3次验证实验所测得的多糖产量分别为6.92、6.86和7.04 g/L,平均值为6.94 g/L,与预测结果基本一致。结论优化的桑黄菌发酵培养基可显著提高胞外多糖产量。

    2011年06期 v.24 724-727页 [查看摘要][在线阅读][下载 318K]
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  • 红色链霉菌发酵产红霉素培养基的响应面优化

    华承伟;于江傲;谢凤珍;

    目的采用响应面法对红色链霉菌(Streptomyces erythreus)发酵产红霉素培养基进行优化。方法利用Design-Expert 8的Min Run Res IV多因子两水平设计,对发酵培养基的有机碳源和氮源的组成进行因素的效应评价,利用最峭攀登搜索法为响应面分析的中心组合设计确定中心区,利用响应面分析得到优化培养基组成。结果淀粉、糊精、豆饼粉和玉米浆因素对红霉素产量有显著影响,其最佳组成为:淀粉5.24%,糊精1.43%,豆饼粉4.56%,玉米浆1.47%。结论利用响应面法已成功优化了红霉素发酵培养基组成的碳源和氮源,摇瓶发酵产红霉素化学效价为6 192 U/ml。

    2011年06期 v.24 728-731+736页 [查看摘要][在线阅读][下载 396K]
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综述

  • 基于微RNAs的抗病毒治疗的研究进展

    张庆华;刘哲伟;

    微RNAs(MicroRNAs,miRNAs)是一类保守的内源性单链小分子非编码RNA,长约22个核苷酸,主要与靶mR-NA碱基互补配对使其翻译抑制或降解,在转录后水平对蛋白编码基因发挥负调控作用,已在许多高等真核生物及某些病毒中得到鉴定。miRNA通路在生理及疾病状态下均参与基因表达调节,而且miRNA在宿主-病毒相互作用中具有重要作用,因此,人类及病毒编码的miRNA必将成为抗病毒治疗的重要靶标。本文对miRNA的生物发生及作用机制、宿主与病毒在miRNA水平的相互作用、宿主及病毒编码的miRNA在抗病毒治疗中的作用作一综述。

    2011年06期 v.24 732-736页 [查看摘要][在线阅读][下载 193K]
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  • 常见腹泻性消化道传染病口服疫苗的研究进展

    李世彬;马永平;

    常见腹泻性消化道传染病通常由细菌、病毒等病原体引起,一般通过水源和食物经消化道传播,引起暴发性流行,尤其易引起婴幼儿发病和死亡。本文对常见细菌性和病毒性致腹泻消化道传染病口服疫苗的研究进展作一综述。

    2011年06期 v.24 737-740页 [查看摘要][在线阅读][下载 167K]
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  • Nrf2/ARE转导通路在中枢神经系统疾病中作用的研究进展

    朱凤臣;蒋电明;

    转录因子红细胞系-2p45相关因子2(Nuclear factor erythroid-2p45-related factor 2,Nrf2)是细胞调节抗氧化应激反应的重要转录因子,其与抗氧化反应元件(Antioxidant response element,ARE)结合,调控第Ⅱ相解毒酶及抗氧化酶基因的表达,是机体抵抗内外氧化应激的关键保护性通路。中枢神经系统氧耗高,多不饱和脂肪酸含量丰富,对氧化应激极为敏感,Nrf2/ARE转导通路在中枢神经系统中作用的研究越来越受到重视。本文对Nrf2/ARE转导通路的调控机制及其在中枢神经系统疾病中作用的最新研究进展作一综述。

    2011年06期 v.24 741-744页 [查看摘要][在线阅读][下载 168K]
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消息

综述

  • 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的研究进展

    安选;刘良忠;胡鹏;

    葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(Glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)是磷酸戊糖途径的主要调节酶,对维持细胞内NADPH和氧化还原反应的平衡起着重要作用。G6PD缺乏症是人类最常见的遗传性细胞酶病,以往的研究多集中在溶血、贫血等方面。近年来,G6PD在细胞水平和发育、疾病进展等方面的重要性越来越受到重视。G6PD活性降低,即细胞内氧化还原平衡的打破,将会导致细胞生长和信号传递的失调,胚胎发育异常,对病毒易感以及促进退行性疾病的发生。有关G6PD与肿瘤、病毒感染、心血管疾病之间相关性的研究也已展开。本文对G6PD的研究新进展作一综述。

    2011年06期 v.24 745-748页 [查看摘要][在线阅读][下载 173K]
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