中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

基础研究

  • 橙皮苷对小鼠急性肝衰竭的保护作用及其机制

    蒋远明;万敬员;龚霞;刘颖菊;孙文娟;高丽佳;

    目的观察橙皮苷对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)联合D-氨基半乳糖(D-Galactosamine,D-GalN)所致小鼠急性肝衰竭(Acute hepatic failure,AHF)的保护作用及其机制。方法小鼠腹腔注射LPS(50μg/kg)和D-GalN(800 mg/kg),复制急性肝衰竭模型,分别用橙皮苷(200 mg/kg)或橙皮苷(200 mg/kg)联合锌原卟啉IX(Zinc protoporphyrin IX,ZnPP)(45 mg/kg)干预。造模后6 h检测肝损伤程度和炎症反应强度,48 h统计小鼠死亡率。结果橙皮苷使AHF小鼠血清转氨酶(ALT和AST)水平下降,肝损伤减轻,生存率提高;血清白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)水平和肝内血红素加氧酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)的表达较AHF小鼠明显增加,肝内HO-1酶活性明显增高;同时,使血清肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平、肝组织中Caspase-3蛋白酶和髓过氧物酶(Myeloperoxidase,MPO)活性较AHF小鼠明显降低。ZnPP不影响橙皮苷促进肝内HO-1酶表达,但通过抑制HO-1酶活性,使橙皮苷抗炎和肝损伤保护作用显著降低。结论橙皮苷主要通过诱导HO-1蛋白表达,使HO-1酶活性增强,从而使炎症反应和肝损伤减轻,对LPS联合D-GalN诱导的AHF产生保护作用。

    2011年02期 v.24 125-129页 [查看摘要][在线阅读][下载 334K]
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  • 狂犬病病毒糖蛋白基因重组慢病毒载体的构建及鉴定

    房丽君;黄世威;王颖;刘晔;张守峰;扈荣良;

    目的构建狂犬病病毒SRV9株糖蛋白基因重组慢病毒表达载体,并进行鉴定。方法将狂犬病病毒SRV9株糖蛋白基因克隆至慢病毒载体pLVX-ZsGreen-IRES上,筛选阳性重组克隆。将质粒pLVX-ZsGreen-IRES-SRV9G、包膜质粒pMD2.G和包装质粒psPAX2共转染293T包装细胞系,通过荧光显微镜观察报告基因表达情况。收集上清,经浓缩后接种293T细胞,进行重组慢病毒感染细胞的鉴定;用限制性内切酶切除质粒pLVX-ZsGreen-IRES-SRV9G绿色荧光蛋白基因,采用直接免疫荧光试验检测狂犬病病毒糖蛋白的表达情况。结果重组慢病毒表达载体经酶切和测序证明构建正确。荧光显微镜下可见重组慢病毒感染的293T细胞有大量绿色荧光出现,病毒滴度为3×107 IU/ml;直接免疫荧光检测表明,糖蛋白基因在293T细胞内获得有效表达。结论成功构建了狂犬病病毒SRV9株糖蛋白基因重组慢病毒载体,为狂犬病基因工程疫苗的研制奠定了基础。

    2011年02期 v.24 130-132+140页 [查看摘要][在线阅读][下载 282K]
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  • 新疆伊犁地区牧羊犬脑内亨德拉病毒感染情况

    王嘉佳;冯裕星;谢亮;张亮;何丰;孙后超;牟君;展群岭;胡永波;朱丹;李雷雷;谢鹏;

    目的分析新疆伊犁地区草原放养牧羊犬脑内亨德拉病毒(Hendravirus,HeV)的感染情况。方法采用一步法实时荧光定量RT-PCR检测HeV核蛋白(N)基因片段,并验证该方法的敏感性和特异性。采用该方法对采自新疆伊犁地区草原放养、未接种HeV疫苗的101例牧羊犬脑组织进行HeV N基因片段检测。结果建立的一步法实时荧光定量RT-PCR检测HeV N基因的最低检出浓度为2.6×102 copies/μl;与其他单股负链RNA病毒,如同属且高度同源的尼帕病毒(Nipah virus,NiV)和博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)等无交叉反应;101份牧羊犬脑组织样本HeV N基因的检测结果均为阴性。结论尚未发现我国新疆伊犁地区天然牧场放养牧羊犬中存在HeV感染的证据,该地区短时间内爆发HeV感染的危险性不大。

    2011年02期 v.24 133-136+145页 [查看摘要][在线阅读][下载 337K]
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  • 普洱茶提取物对宫颈癌HeLa细胞的诱导凋亡作用

    赵航;盛婧雪;李洪广;徐扬;赵璐;盛军;施维;

    目的探讨普洱茶提取物对人宫颈癌HeLa细胞系的诱导凋亡作用及其分子机制。方法应用不同浓度的普洱茶提取物(15、30、60、120、250、500μg/ml)作用HeLa细胞后,采用MTT法检测其对细胞增殖的影响;DAPI染色法分析细胞凋亡形态学变化;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞早期凋亡;Western blot分析pro-caspase-3和pro-caspase-9的变化。结果普洱茶提取物对HeLa细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈浓度依赖性;经普洱茶提取物处理的细胞荧光显微镜下可见典型的凋亡形态学变化,细胞早期凋亡率显著高于未处理的细胞(P<0.05);经普洱茶提取物处理的细胞pro-caspase-3和pro-caspase-9均被活化。结论普洱茶提取物具有可以诱导HeLa细胞凋亡的天然活性成分,且凋亡途径可能依赖于caspase-3、caspase-9相关的线粒体凋亡途径。

    2011年02期 v.24 137-140页 [查看摘要][在线阅读][下载 254K]
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  • 稳定表达核仁磷酸蛋白1突变基因的白血病细胞株的构建及鉴定

    邵会媛;覃凤娴;苗宗玉;陈先春;谭诗;高玉洁;张伶;

    目的构建稳定表达人核仁磷酸蛋白1(Nucleophosmin 1,NPM1)A型突变蛋白(NPM1-mA)的白血病髓性细胞系,并进行鉴定。方法利用xfectTM转染试剂将含人NPM1-mA基因的重组质粒pEGFP-C1-NPM1-mA分别转染THP-1和K562细胞系,G418筛选阳性克隆,建立稳定表达NPM1-mA的白血病细胞株THP-1-mA和K562-mA。采用RT-PCR和Western blot检测细胞NPM1-mA mRNA和蛋白水平的表达,细胞免疫化学法检测NPM1-mA蛋白的亚细胞定位,细胞生长曲线观察细胞体外增殖能力的改变。结果构建的白血病细胞株THP-1-mA和K562-mA的RT-PCR产物均可见446 bp的NPM1-mA基因条带;NPM1-mA蛋白的表达量明显升高;NPM1-mA蛋白存在于构建的2株白血病细胞胞浆中;与空载体转染组和未转染组细胞相比,转染NPM1-mA基因后,THP-1细胞体外增殖能力增强,K562细胞体外增殖能力减弱。结论已成功构建了稳定表达NPM1-mA的两株白血病细胞株THP-1-mA和K562-mA,为进一步研究NPM1基因突变对白血病细胞生物学特性的影响提供了良好的细胞模型。

    2011年02期 v.24 141-145页 [查看摘要][在线阅读][下载 392K]
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  • 鹅细小病毒VP3基因的克隆及序列分析

    姚笛;朱战波;杨焕民;潘兴广;

    目的克隆鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)黑龙江各分离株和疫苗株的VP3基因,并进行序列分析,为小鹅瘟的诊断与防治奠定理论基础。方法根据GenBank中登录的GPV B株全基因序列设计1对特异性引物,PCR扩增、克隆VP3基因,并进行测序和同源性分析。结果克隆的VP3基因大小699 bp,编码233个氨基酸;7个分离株的VP3基因核苷酸序列同源性为99.4%~100%,各分离株与疫苗株的核苷酸序列同源性为98.7%~99.3%,与标准B株的核苷酸序列同源性为97.6%~97.7%,与MDPV核苷酸序列的同源性为80.8%~81.7%;各分离株之间亲缘关系较近,其中QTH分离株与疫苗株亲缘关系最近,氨基酸序列同源性为97.8%,其他分离株与疫苗株的亲缘关系相对较远,氨基酸序列同源性为96.6%~97.4%;所有分离株和疫苗株与标准B株亲缘关系相对较远,与MDPV的亲缘关系最远。结论黑龙江省各分离株与疫苗株的核苷酸和氨基酸序列存在一定的差异。

    2011年02期 v.24 146-148+156页 [查看摘要][在线阅读][下载 624K]
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  • 稳定表达BCR/ABL-T315I的小鼠BP210-T315I细胞株的建立

    王海霞;刘钉宾;彭智;李亚娟;黄世峰;罗红伟;史梦;冯文莉;

    目的构建能稳定表达T315I的BCR/ABL的小鼠BP210-T315I细胞株,并观察该细胞株对酪氨酸激酶抑制剂STI571的敏感性。方法采用PCR法将重组逆转录病毒载体MIGR-P210中的abl基因第944位碱基C定点突变为T,再将该位点突变成功的逆转录病毒载体转染到包装细胞内,收集病毒,感染BaF3细胞,经筛选和亚克隆获得稳定表达T315I的BCR/ABL蛋白的小鼠BP210-T315I细胞。采用RT-PCR、DNA测序和Western blot鉴定abl基因第944位碱基是否发生突变;MTT法检测BP210-T315I细胞对STI571的耐药性。结果 T315I的bcr/abl基因已整合到BaF3细胞基因组中,B210-T315I细胞能稳定表达T315I的bcr/abl基因与蛋白;与BaF3-P210细胞株相比,经STI571处理后,BP210-T315I细胞对STI571明显耐药,其耐药倍数约为100。结论已成功构建稳定表达小鼠T315I的转化细胞株,该细胞株具有对STI571耐药的恶性表型特征。

    2011年02期 v.24 149-152页 [查看摘要][在线阅读][下载 310K]
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  • hCAP-18/LL-37基因转染对RAW264.7细胞活化功能的影响

    刘超;袁红艳;焦淑凡;余磊;常雅萍;

    目的探讨抗菌肽hCAP-18/LL-37基因转染对巨噬细胞RAW264.7活化功能的影响。方法将重组质粒pcD-NA4/Myc-His-hCAP-18/LL-37瞬时转染RAW264.7细胞,MTT法检测细胞的增殖活性;中性红吞噬试验检测细胞的吞噬能力;RT-PCR法分析细胞活化相关分子CD80、CD86、TLR4及细胞因子IL-1β、TNF-αmRNA的转录。结果 hCAP-18/LL-37基因转染可促进经脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)处理的RAW264.7细胞的增殖活性与吞噬能力(P<0.05);可上调RAW264.7细胞CD80、CD86、TLR4、IL-1β、TNF-α基因mRNA的转录水平。结论 hCAP-18/LL-37基因转染可通过促进RAW264.7细胞增殖活性、吞噬能力及活化相关分子表达,调控巨噬细胞的活化功能。

    2011年02期 v.24 153-156页 [查看摘要][在线阅读][下载 244K]
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  • 熊果酸对血管内皮细胞增殖的影响及其机制

    李伟;刘琼;何林;毕娟娟;叶秀峰;

    目的研究熊果酸(Ursolic acid,UA)对人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖及ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1基因mRNA和蛋白表达的影响,探讨熊果酸抑制血管生长的机制。方法体外培养HU-VECs,用不同浓度熊果酸(31.5、62.5、125、250、500μg/ml)处理不同时间(12、24、48 h),MTT法检测细胞增殖抑制率。用125μg/ml熊果酸和100μmol/L PD98059(ERK抑制剂)处理HUVECs 48 h;不同浓度熊果酸处理24 h;125μg/ml熊果酸处理不同时间,RT-PCR和Western blot分别检测HUVECs中ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平。结果不同浓度的熊果酸对HUVECs的增殖均有明显的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;经熊果酸和PD98059处理的HUVECs中ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1基因mRNA和蛋白的表达水平均明显降低,且呈剂量和时间依赖性。结论熊果酸可通过抑制ERK信号转导通路而抑制血管内皮细胞增殖。

    2011年02期 v.24 157-162+168页 [查看摘要][在线阅读][下载 498K]
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  • 大鼠骨髓间充质干细胞体外向血管平滑肌样细胞诱导分化过程中Periostin的表达及其作用

    田雨;杨燕;江德鹏;蒋幼凡;

    目的探讨血小板源性生长因子(Platelet derived growth factor,PDGF)-BB诱导骨髓间充质干细胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)向血管平滑肌样细胞(Vascular smooth muscle-like cells,VSMLCs)分化过程中Periostin的表达及其在促VSMLCs分化中的作用。方法采用全骨髓贴壁培养法分离和培养大鼠BMSCs,取第2代BMSCs分为2组:诱导Ⅰ组(用50 ng/ml PDGF-BB单独向VSMLCs诱导)和诱导Ⅱ组(加入地塞米松1μmol/L、胰岛素1μmol/L、吲哚美辛1μmol/L、3-异丁基-1甲基黄嘌呤0.5 mmol/L,向脂肪样细胞诱导),以大鼠胸大动脉平滑肌细胞作为阳性对照。分别于诱导后7 d和14 d,采用RT-PCR检测细胞中平滑肌肌动蛋白(SMα-actin)、平滑肌肌球蛋白重链(SM MHC)、平滑肌肌钙结合蛋白(SM Calponin)和Periostin mRNA的转录水平,Western blot检测Periostin蛋白的表达水平。结果诱导Ⅰ组细胞的SMα-actin、SM MHC、SMCalponin和Periostin基因mRNA及Periostin蛋白的表达水平14 d比7 d显著增强,且差异有统计学意义(P<0.05);14 d与阳性细胞相比,差异无统计学意义(P>0.05);未诱导组及诱导Ⅱ组在14 d均无表达。结论 PDGF-BB(50 ng/ml)能够单独诱导BMSCs向VSMCs分化,Periostin在此过程中起重要作用。

    2011年02期 v.24 163-168页 [查看摘要][在线阅读][下载 459K]
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  • CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞在类风湿性关节炎及骨关节炎患者外周血和关节液中含量的变化

    洪强;宋秀宇;黄家禹;郭氧;

    目的分析CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Regulatory T cell,Treg)在类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)及骨关节炎(Osteoarthritis,OA)患者外周血和关节液中含量的变化,探讨其在RA中可能的意义。方法以肝素抗凝负压采血管分别抽取36例RA患者、30例OA患者和33名健康人外周静脉血,常规关节穿刺术抽取RA和OA患者膝关节腔积液,采用流式细胞术分别检测CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的百分含量。结果 RA组外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的百分含量显著低于OA组和健康对照组(P<0.05),OA组与健康对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);RA组关节液中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的百分含量显著高于OA组(P<0.01);RA组和OA组关节液中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的百分含量均显著高于自身外周血(P<0.01)。结论 CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞在RA患者中的负性调控作用降低,可能是促进疾病发生发展的一个不可缺少的因素,但在关节液中,可能更主要是表现为炎症发生后的继发性反应。

    2011年02期 v.24 169-172页 [查看摘要][在线阅读][下载 431K]
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  • 一种新型杂合抗菌肽在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性

    王书全;李明;马鸣潇;

    目的在毕赤酵母中表达杂合抗菌肽CA(1-11)CD(12-37)ME(1-18)(ADM),并检测其抗菌活性。方法根据毕赤酵母(Pichia pastoris)偏爱密码子,合成杂合抗菌肽CA(1-11)CD(12-37)ME(1-18)基因,插入pPIC9K载体,构建重组表达质粒pPIC9K-ADM,电转化至毕赤酵母GS115,筛选阳性菌株,甲醇诱导表达,Tricine-SDS-PAGE检测ADM蛋白的表达,并对其抗菌活性进行初步检测。结果重组表达质粒pPIC9K-ADM经双酶切和测序鉴定证明构建正确;阳性酵母转化子的PCR产物可见目的基因条带;杂合抗菌肽在毕赤酵母GS115中获得分泌表达,可溶性蛋白约占菌体总蛋白的13%;且对E.coli DH5α、E.coliJM109和金黄葡萄球菌具有一定的抗菌活性。结论已在毕赤酵母GS115中表达了具有一定抗菌活性的杂合抗菌肽ADM,为相关新药的研究奠定了基础。

    2011年02期 v.24 173-175+178页 [查看摘要][在线阅读][下载 233K]
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  • 自体血小板胶中转化生长因子-β1浓度的影响因素

    朱业华;马春会;郭如华;何其通;谭瑞元;栾晓军;梁明;

    目的探讨自体血小板胶(Autologous platelet-rich gel,APG)中转化生长因子-β1(Transforming growth factor beta1,TGF-β1)浓度的影响因素。方法用一体性塑料血袋分别采集40名健康人的静脉血50 ml,采用两次离心法制备富血小板血浆(Platelet-rich plasma,PRP),用血细胞分析仪检测静脉血和PRP中的血小板数目;将PRP与凝血酶和钙剂混合液按体积比10∶1的比例混合,制备APG,采用ELISA法定量分析APG中的TGF-β1浓度;选择5个参数(年龄、性别、静脉血血小板计数、PRP中血小板平均计数及静脉血制备前保存温度)进行多元线性回归分析。结果 PRP中血小板平均计数[(1 232.23±195.45)×109个/L]约为静脉血[(195.95±42.29)×109个/L]的6倍;APG中TGF-β1的平均浓度为(5.83±2.31)ng/ml,与制备前静脉血保存温度密切相关(P<0.000 5),而与年龄、性别、静脉血血小板计数和PRP中血小板计数无关。结论制备前APG的静脉血样本应保存于室温(20~24℃)下。

    2011年02期 v.24 176-178页 [查看摘要][在线阅读][下载 148K]
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  • 重组融合蛋白IL-3-PE38KDEL对急性髓性白血病细胞增殖和凋亡的影响

    白凤霞;娄世锋;曾瀚庆;廖乐乐;

    目的观察重组融合蛋白IL-3-PE38KDEL对急性髓性白血病(Acute myelocytic leukemia,AML)细胞HL-60(IL-3R阳性)和NB4(IL-3R阴性)增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度的IL-3-PE38KDEL分别作用HL-60和NB4细胞,MTT法检测细胞的增殖抑制作用,计算抑制率及半数抑制浓度(IC50)。将HL-60和NB4细胞分别分为IL-3-PE38KDEL组和IL-3+IL-3-PE38KDEL组,IL-3+IL-3-PE38KDEL组加入IL-3(100 ng/ml),孵育4 h后,IL-3-PE38KDEL组和IL-3+IL-3-PE38KDEL组均加入IC50浓度的IL-3-PE38KDEL,计算细胞增殖抑制率;流式细胞术检测2种AML细胞细胞周期的变化及凋亡情况。结果 IL-3-PE38KDEL对HL-60和NB4细胞的增殖均有抑制作用,且呈浓度依赖性,对HL-60细胞的抑制作用强于NB4细胞(P<0.05),IC50值分别为2.5μg/ml和259.2μg/ml。当IL-3-PE38KDEL浓度为IC50时,经IL-3处理后,对HL-60和NB4细胞增殖的抑制率均值分别为32.20%和49.00%。经IL-3-PE38KDEL作用后的HL-60细胞大部分被阻滞于G1/S期。HL-60细胞IL-3-PE38KDEL组的细胞凋亡率均值(19.71%)显著高于IL-3+IL-3-PE38KDEL组(9.39%)(P<0.05),NB4细胞两组差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论 IL-3-PE38KDEL能抑制IL-3R阳性的AML细胞HL-60增殖,并诱导其凋亡,但对IL-3R阴性的AML细胞NB4的抑制作用较弱。

    2011年02期 v.24 179-183页 [查看摘要][在线阅读][下载 570K]
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  • 金雀异黄酮对脂多糖处理的软骨细胞增殖抑制的拮抗及抗炎作用

    张城;宋勇;张艺;刘琳;李继斌;

    目的观察金雀异黄酮(Genistein,GEN)对脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)处理的软骨细胞增殖抑制的拮抗及抗炎作用。方法体外培养新西兰兔关节软骨细胞,将细胞分为正常对照组、LPS单独处理组(10μg/ml)及LPS(10μg/ml)+不同剂量GEN(1、5、10、15μg/ml)处理组,采用MTT法检测各组细胞的增殖活性,RT-PCR法检测各组细胞相关炎性因子IL-1β、诱导型一氧化氮合酶iNOS、转录调节因子p53基因mRNA的表达。结果剂量为1μg/ml的GEN能拮抗软骨细胞经LPS处理后引起的增殖活性降低,且能抑制经LPS处理后软骨细胞IL-1β、iNOS、p53基因mRNA的表达。结论 GEN对LPS处理的软骨细胞可能具有拮抗其增殖抑制及抗炎的作用。

    2011年02期 v.24 184-186+194页 [查看摘要][在线阅读][下载 261K]
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预防制品

  • 重组丙型肝炎病毒腺病毒载体疫苗rAd/E2的构建及鉴定

    李小凤;于花;蓝佳明;张永红;谢立新;刘云宁;尹玉蕾;金玉怀;

    目的构建含丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)E2基因的复制缺陷型重组腺病毒载体疫苗,并进行鉴定。方法以含HCV(1a亚型)E2基因的质粒pEGFP-HCV/E1E2为模板,PCR扩增E2基因,扩增产物与pGEM-T载体连接,测序正确后双酶切亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/E2,Pme I酶切线性化后,与骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌内同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd/E2,PacⅠ酶切线性化后,脂质体LipofectamineTM 2000介导转染HEK293细胞进行包装,获得重组腺病毒rAd/E2,在HEK293细胞内扩增,利用报告基因GFP的表达监测病毒包装及感染效率,PCR、RT-PCR和Western blot对重组腺病毒进行鉴定,并测定各代病毒的滴度。结果测序结果证明HCV E2基因序列正确;重组腺病毒质粒pAd/E2经酶切证明重组成功;PCR、RT-PCR及Western blot结果均证实重组腺病毒rAd/E2构建正确;第4代重组腺病毒的滴度为7.5×108 pfu/ml。结论已成功构建了重组HCV腺病毒rAd/E2,为丙型肝炎疫苗的研制提供了新的途径。

    2011年02期 v.24 187-191页 [查看摘要][在线阅读][下载 386K]
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  • 鼬獾狂犬病病毒分离株的培养及其免疫原性

    刘晔;房丽君;赵敬慧;张守峰;张菲;扈荣良;

    目的对分离的鼬獾狂犬病病毒BHK-21细胞适应株进行毒力和免疫原性检测,为兽用狂犬病疫苗的生产奠定基础。方法将分离获得的鼬獾狂犬病病毒野毒株JX08-45在BHK-21细胞上连续传代,采用直接免疫荧光法测定病毒滴度(TCID50);PCR法检测外源病毒和支原体。以β-丙内酯灭活病毒液,将灭活的病毒液免疫犬,采用FAVN法检测狂犬病病毒中和抗体水平,分析其免疫原性。结果鼬獾狂犬病病毒野毒株JX08-45在体外培养至130代时,病毒滴度可达1.0×107.75 TCID50/ml;未从狂犬病病毒JX08-45株中扩增出犬瘟热病毒、细小病毒、冠状病毒、腺病毒和支原体的特异性核酸;灭活的病毒液接种犬后产生的中和抗体可持续1年以上,且均在0.5 IU/ml以上。结论鼬獾狂犬病病毒野毒株JX08-45经BHK-21细胞传代适应性较好,病毒滴度较高,且具有较好的免疫原性,已具备制备疫苗的基本条件。

    2011年02期 v.24 192-194页 [查看摘要][在线阅读][下载 182K]
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治疗制品

  • 骨髓间充质干细胞对辐射诱发胸腺损伤修复中cyclin-D1和p53基因mRNA转录水平的影响

    王洪艳;刘丽萍;龚守良;张红梅;齐亚莉;陈玉丙;

    目的探讨骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对辐射诱发小鼠胸腺损伤修复过程中cyclin-D1和p53基因mRNA转录水平的影响,为阐明BMSCs在肿瘤发生发展过程中的作用提供理论依据。方法全骨髓贴壁法体外分离、培养C57BL/6小鼠BMSCs。将C57BL/6小鼠随机分为3组:正常对照组、辐射组和辐射+BMSCs组,辐射组和辐射+BMSCs组行1.75 Gy X线全身照射,每周1次,连续4周,复制电离辐射诱发的胸腺损伤模型;辐射+BMSCs组末次照射后,经尾静脉注入BMSCs,0.2 ml/只,细胞浓度为2.0×106个/ml。3个月后处死各组小鼠,取胸腺组织,采用RT-PCR法检测各组小鼠胸腺组织cyclin-D1和p53基因mRNA的转录水平,流式细胞术检测细胞周期。结果辐射组小鼠胸腺组织cyclin-D1基因mRNA的转录水平高于正常对照组,但差异无统计学意义(P>0.05),而p53基因mRNA的转录水平明显高于正常对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。辐射+BMSCs组小鼠胸腺组织cyclin-D1和p53基因mRNA的转录水平低于辐射组,但差异无统计学意义(P>0.05)。辐射组小鼠胸腺G1期细胞百分比(29.81%)明显低于正常对照组(55.39%),辐射+BMSCs组小鼠胸腺G1期细胞增多(72.08%)。结论 BMSCs可通过抑制cyclin-D1的过度表达和p53基因的突变,使损伤小鼠胸腺细胞停留在G1期进行修复,进而促进组织的修复,抑制肿瘤的增殖。

    2011年02期 v.24 195-198页 [查看摘要][在线阅读][下载 320K]
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  • 川芎嗪对脓毒症诱导的急性肺损伤小鼠血管内皮生长因子水平变化的影响

    刘丹;周发春;

    目的研究川芎嗪(Tetramethylpyrazine,TMP)对脓毒症诱导的小鼠急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)的保护作用以及对血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)水平变化的影响。方法将小鼠随机分为假手术组(Sham组)、脓毒症组(Sep组)、治疗对照组(NS组)、TMP-A组和TMP-B组,Sep组、NS组、TMP-A组和TMP-B组采用盲肠结扎穿刺术(Cecal ligation and puncture,CLP)复制脓毒症相关性ALI模型,造模成功后,TMP-A组和TMP-B组分别经腹腔注射100 mg/kg和40 mg/kg TMP,Sham组和NS组经腹腔注射等量生理盐水,Sep组不作处理。分别于造模后0、12、24和48 h取材,HE染色观察小鼠肺组织病理学变化;ELISA检测小鼠血浆中VEGF含量变化;Western blot检测小鼠肺组织VEGF蛋白水平。结果 TMP组小鼠在造模后12 h时肺组织病理变化与Sep组相比有所减轻,24 h时肺泡水肿、肺出血及中性粒浸润均明显减轻,48 h时TMP作用最理想;TMP组小鼠血浆VEGF水平造模后24 h开始低于Sep组(P<0.05),48 h持续下降,已接近Sham组水平;TMP组小鼠肺组织VEGF蛋白水平在造模后24 h比Sep组明显升高,但低于Sham组(P<0.05);100 mg/kg TMP的效果优于40 mg/kg;小鼠肺组织VEGF水平与血浆VEGF水平呈负相关(P<0.05)。结论 TMP能够有效减轻脓毒症所致ALI,这一作用与降低血浆VEGF水平,恢复肺组织VEGF蛋白水平有关。

    2011年02期 v.24 199-202页 [查看摘要][在线阅读][下载 252K]
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消息

  • 征稿

    <正>《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管,中华预防医学会和中国生物技术集团公司长春生物制品研究所主办,是中华预防医学会系列杂志之一,月刊。

    2011年02期 v.24 202页 [查看摘要][在线阅读][下载 41K]
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治疗制品

  • 乌司他丁和泰索帝对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响及其机制

    高峰;孙治君;赵晓亮;罗杰;

    目的探讨乌司他丁(Ulinastatin for injection,UTI)和泰索帝(Taxotere,TXT)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231(ER-)增殖、侵袭及血管内皮生长因子-C(Vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)、碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblastgrowth factor,bFGF)、神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)mRNA转录水平的影响。方法体外培养MDA-MB-231细胞,随机分为4组:对照组(只加RPMI1640培养液)、UTI组(终浓度800 U/ml)、TXT组(3.7μg/ml)、UTI+TXT组(800 U/ml UTI+3.7μg/ml TXT)。给药后24、48、72 h,采用MTT法检测细胞增殖水平;24 h,采用Transwell侵袭小室法检测细胞侵袭能力,实时荧光定量PCR法检测细胞VEGF-C、bFGF、NGF基因mRNA的转录水平。结果 UTI、TXT及UTI+TXT呈时间依赖性抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P均<0.05),并显著抑制MDA-MB-231细胞的侵袭能力(P均<0.01)及VEGF-C、bFGF、NGF基因mRNA的转录水平(P均<0.05);TXT组与UTI+TXT组NGF基因mRNA转录水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);对细胞增殖、侵袭及VEGF-C、bFGF、NGF基因mRNA转录的抑制作用UTI+TXT>TXT>UTI。结论 UTI和TXT均可显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭,UTI可增强TXT的抑制作用,其机制可能与下调VEGF-C、bFGF、NGF mRNA的表达有关。

    2011年02期 v.24 203-207页 [查看摘要][在线阅读][下载 241K]
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消息

  • “血液制品生产技术与装备”研讨会

    <正>"血液制品生产技术与装备"研讨会,由中国医学装备协会生物工程装备技术专业委员会主办,《中国生物制品学杂志》担任传媒支持。特邀国内外血液制品著名企业和知名专家做专题报告,会议定于2011年4月13日至14日在北京天伦松鹤大酒店举办,现将有关事宜通知如下:

    2011年02期 v.24 207页 [查看摘要][在线阅读][下载 44K]
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诊断制品

  • 镉离子单克隆抗体的制备及其阻断ELISA检测方法的建立

    张海棠;王申锋;姜金庆;王自良;刘耀东;王淑云;

    目的制备重金属镉离子(Cd2+)单克隆抗体,并建立Cd2+残留阻断ELISA检测方法。方法用异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE)螯合Cd2+合成Cd-ITCBE半抗原,异硫氰酯法制备免疫抗原Cd-ITCBE-BSA和检测抗原Cd-ITCBE-OVA,并进行鉴定;用Cd-ITCBE-BSA免疫BALB/c小鼠,经细胞融合后,间接ELISA和阻断ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备Cd2+单抗,并进行鉴定;建立检测Cd2+残留的阻断ELISA法,并进行验证。结果 Cd-ITCBE-BSA和Cd-ITCBE-OVA中BSA与OVA含量分别为7.1和6.7 mg/ml,Cd2+含量分别为191.7和130.1μg/ml;共筛选出1A3、2B7、2E10、4F3 4株杂交瘤细胞,其中2E10株分泌的Cd2+单抗效价最高,细胞培养上清和腹水的间接ELISA效价分别达1∶4.32×102和1∶5.12×105,亲和常数(K)a也最高,为7.58×108 L/mol,对Cd2+的半数抑制浓度(IC50)为16.3μg/L;建立的阻断ELISA法的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合;最低检测限为5μg/L;饲料样、猪尿样的平均添加回收率分别为92.9%和88%,平均变异系数分别为12.35%和12.45%;与Hg2+的交叉反应率为96.5%,与其他化合物未见交叉反应;试剂可在4℃保存180 d。结论已成功制备了高亲和力的Cd2+单抗,并建立了快速、简便、敏感、特异的Cd2+残留阻断ELISA检测方法。

    2011年02期 v.24 208-212页 [查看摘要][在线阅读][下载 278K]
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临床观察

  • 国产b型流感嗜血杆菌结合疫苗PRP-TT加强免疫效果评价

    李亚南;乔瑞洁;李红;刘佳;王浩;史晓玲;叶强;谢贵林;

    目的评价国产b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗PRP-TT的加强免疫效果。方法分别用安儿宝和呵儿贝两种Hib结合疫苗,对在广西柳州市常住儿童进行3、4、5月龄3针免疫,1年后,进行第4剂加强免疫。分别于3针免疫1年后和加强免疫1个月后采血,分离血清,采用ELISA和体外杀菌实验(Serum bactericidal assay,SBA)分别检测免疫前后血清IgG抗体浓度和加强免疫后SBA抗体滴度。结果安儿宝和呵儿贝疫苗3针免疫1年后,血清IgG抗体几何平均数浓度(Geometric mean concentrations,GMCs)分别为3.17μg/ml和3.00μg/ml,二者差异无统计学意义(P>0.05);其中,IgG抗体浓度在1.00μg/ml以上的血清所占的比例分别为79%(62/78)和76%(115/152),二者差异无统计学意义(P>0.05)。加强免疫后1个月,两种疫苗免疫血清中IgG抗体GMCs分别为71.33μg/ml和65.35μg/ml,二者差异无统计学意义(P>0.05);IgG抗体浓度均能100%达1.00μg/ml以上。两种疫苗加强免疫后的血清IgG抗体浓度与各自加强免疫前比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。加强免疫后,两种疫苗免疫血清的SBA抗体滴度分别为5 263和4 637,二者差异无统计学意义(P>0.05)。两种疫苗免疫后血清IgG抗体浓度和SBA抗体滴度均具有相关性(r值分别为0.696和0.689,P<0.05)。结论 3针免疫1年后,两种疫苗免疫血清中IgG抗体仍保持较高的水平,第4剂加强免疫后,抗体水平迅速显著升高,100%达1.00μg/ml以上,且具有有效的体外杀菌功能。

    2011年02期 v.24 213-215+224页 [查看摘要][在线阅读][下载 212K]
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实验技术

  • 曲妥珠单克隆抗体生物学活性检测方法的建立及比较

    周朝明;马新兴;周婧怡;林军;

    目的建立4种检测曲妥珠单克隆抗体Trastuzumab生物学活性的方法,并进行比较。方法利用表面等离子共振技术(Surface plasmob resonance,SPR)建立Trastuzumab的BIAcore分析方法,同时建立抗体对人乳腺癌SKBR3细胞增殖抑制活性的检测方法、基于SKBR3细胞的抗体结合特性检测方法及抗体与ErbB2抗原结合活性的ELISA检测方法,验证各方法的重复性,并对不同检测方法进行比较。结果 BIAcore法的偶联最佳pH值为5.0,样品浓度为0.05~5.00 nmol/L,动力学常数(KD)为0.19 nmol/L;Trastuzumab体外抑制SKBR3细胞增殖的半数有效浓度(EC50)为0.145μg/ml(R2>0.98);基于SKBR3细胞的抗体结合特性的EC50值为0.124μg/ml(R2>0.98);Trastuzumab抗体与ErbB2抗原结合活性的EC50值为0.143μg/m(lR2>0.98);4种检测方法重复性较好,检测结果基本一致。结论 4种检测方法均能有效地反映Trastuzumab的生物学活性,为快速、简便地筛选曲妥珠单克隆抗体提供了多种检测方法。

    2011年02期 v.24 216-220页 [查看摘要][在线阅读][下载 607K]
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  • 免疫毒素ScFv(anti HER2)-PE38的复性与纯化

    王国华;程云章;

    目的建立免疫毒素ScFv(anti HER2)-PE38的分离纯化工艺。方法免疫毒素ScFv(anti HER2)-PE38变性后,进行金属螯合柱层析复性和纯化,再用分子筛层析进行精纯,SDS-PAGE分析纯化产物。结果包涵体形式存在的免疫毒素ScFv(anti HER2)-PE38以8 mol/L尿素溶解效果较好;当复性梯度为稀释液从0到100%,共用时150 min,流速为2 ml/min时,复性效果较好,复性后的目的蛋白纯度可达95%以上;以凝胶柱Superdex 200进行分子筛层析效果较好,纯化产物的纯度可达98%以上。结论已建立了免疫毒素ScFv(anti HER2)-PE38的分离纯化工艺,为进一步的研究奠定了基础。

    2011年02期 v.24 221-224页 [查看摘要][在线阅读][下载 310K]
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  • 微量滴定板上的弹性蛋白酶动态显色法检测α_1-蛋白酶抑制剂活性

    周志军;林连珍;方亮;周雁翔;李策生;彭良俊;

    目的建立微量滴定板上的弹性蛋白酶动态显色法(以下简称微量滴定板法),用于α1-蛋白酶抑制剂(α1-Pro-teinase inhibitor,α1-PI)的活性检测。方法以微量滴定板为载体,将不同量的α1-PI样品与定量的弹性蛋白酶混合,通过适宜的显色底物对剩余的弹性蛋白酶活性进行测定。用酶标仪测定405 nm处A值的变化,分析试验的有效性,并计算α1-PI样品的活性。优化微量滴定板法的实验条件。用BCS凝集分析仪检测α1-PI的活性,确认样品的工作浓度。采用两种方法检测19份样品的α1-PI活性,分析二者的相关性。结果微量滴定板法的最优实验条件为:样品加样体积50μl,标准曲线范围为(2~14)μg/ml;弹性蛋白酶稀释度为1∶1 400,体积100μl;孵育时间15 min;底物稀释度为1∶10,体积50μl;连续监测A405值10 min。微量滴定板法和BCS法检测19份样品的相关系数大于0.99。结论微量滴定板法检测α1-PI活性的时间更短,同一样品不同稀释度之间检测结果的变异率更低,且检测结果与BCS法相关性良好,可替代全自动的BCS法,降低检测成本。

    2011年02期 v.24 225-229页 [查看摘要][在线阅读][下载 288K]
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  • 人尿液中exosomes的分离及鉴定

    李艳艳;张渊;代义;邱峰;秦霞;邱宗荫;

    目的分离人尿液中的exosomes,并对其超微形态学和免疫特性进行鉴定。方法以超速离心法分离健康志愿者混合尿液中的exosomes,通过负染电镜和免疫电镜技术对exosomes进行鉴定,运用1-D SDS-PAGE对其蛋白质组分进行分离。结果 4℃,17 000×g离心15 min后的上清液于4℃,200 000×g离心1 h可得到纯度较高的exosomes。负染电镜可见exosomes为扁平或球形小体,直径主要在60 nm左右;免疫电镜显示,黑色胶体金颗粒均匀分布在exosomes球形体表面,因其具有很高的电子密度而呈现为清晰可辨的黑点;1-D SDS-PAGE分析显示,exosomes高丰度条带主要分布于相对分子质量90 000~110 000之间,且出现了数条清晰的、相对分子质量在30 000~60 000之间的条带,小于30 000的条带明显减弱。结论已建立了从人尿液中分离exosomes的方法,为进一步研究潜在的疾病相关生物标志物奠定了基础。

    2011年02期 v.24 230-232+236页 [查看摘要][在线阅读][下载 410K]
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综述

  • 肠道病毒71型疫苗的研发现状及进展

    姚昕;毛群颖;梁争论;

    近年来,手足口病(Hand foot mouth disease,HFMD)在我国呈持续流行态势。其中,肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)感染引起的严重和死亡病例已成为政府和社会高度关注的公共卫生问题。研发疫苗是控制该病流行的唯一有效措施。目前,我国已有多个单位开展了EV71疫苗的研发工作,本文就EV71疫苗研发的必要性、可行性、研发的难点及研发进展作一综述。

    2011年02期 v.24 233-236页 [查看摘要][在线阅读][下载 151K]
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  • 猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的安全性及新型疫苗的研究进展

    邢海云;梅林;赵建增;高英杰;

    猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是影响养猪业的重大传染病,应用PRRS弱毒疫苗免疫是主要的预防措施。尽管各种PRRS弱毒疫苗已在我国使用,但PRRS仍持续流行,每年均有不同程度的暴发,且造成巨大的经济损失。最新研究提示,基因缺失疫苗能有效提升猪对PRRS的特异性免疫力。本文就PRRS弱毒疫苗在使用过程中可能存在的安全隐患及新型疫苗的研究进展作一综述。

    2011年02期 v.24 237-240页 [查看摘要][在线阅读][下载 199K]
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  • 1型糖尿病易感基因的研究进展

    李雅静;郑源强;张纪岩;石艳春;

    1型糖尿病的病因和发病机制较复杂,至今仍未完全明确。近年的研究认为其发病与遗传因素密切相关。SH2B3、TC-PTP和RGS1是已经全基因组关联分析证实的有关1型糖尿病的易感基因。本文就与1型糖尿病相关的主要易感基因的研究进展作一综述。

    2011年02期 v.24 241-244页 [查看摘要][在线阅读][下载 159K]
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  • DNA疫苗及其在传染病控制中的应用

    郭永豪;郭万申;蒋红丽;

    疫苗在人类抵御传染性疾病的过程中扮演着重要角色,DNA疫苗在应对突发性新型传染病方面具有独特的优势。近年来,随着对DNA疫苗研究的不断深入,DNA疫苗的安全性和有效性均得到了极大的提高。虽然目前尚无人用DNA疫苗应用于临床,但在畜牧养殖业已有了初步的探索。本文对DNA疫苗的发展及其作用机制、优势、安全性、改进及其临床应用情况作一综述。

    2011年02期 v.24 245-247页 [查看摘要][在线阅读][下载 120K]
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述评

  • 狂犬病疫苗株生物学特性的探讨

    徐德启;郭恒;扈荣良;

    <正>狂犬病(Rabies)是一种危害严重的人兽共患病毒病。尽管应用狂犬病疫苗控制狂犬病在世界范围内已取得了显著成效,但每年全球仍有1千多万人接受暴露后治疗,约55 000人死亡,其中约40%是儿童,而且死亡人数在很大程度上被低估。狂犬病的高致死性使其成为第七个重要的全球感染性疾病。

    2011年02期 v.24 248-249页 [查看摘要][在线阅读][下载 83K]
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