中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

基础研究

  • 中国北方部分地区猪圆环病毒Ⅱ型分子流行病学调查

    梅林;邢海云;郭春丽;张社民;梁志选;赵建增;高英杰;

    目的 分析中国北方部分地区猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine circovirus type 2,PCV2)的分子流行病学特征。方法收集2006~2008年间北京、山西、山东、河北4省(市)PCV2 DNA阳性病料共16份,分别进行PCV2 ORF1和ORF2核苷酸序列的扩增、克隆和测序,并利用分子生物学软件进行分子遗传学分析。结果本研究中的16株PCV2 ORF1、ORF2核苷酸序列及推导的氨基酸序列与参考株的同源性分别为97.1%~99.8%和98.4%~99.7%及89.6%~99.4%和88.1%~99.1%;2006~2008年间中国北方与南方以及2002~2005年间北方的PCV2流行情况基本相似,绝大多数属于1AB基因亚群;近年来,中国北方流行的PCV2(1AB基因亚群)中,有11/14集中在单独一个侧枝;在中国北京出现了2C基因亚群的PCV2野毒株,经分析可能从欧洲国家引入。结论从基因水平来讲,PCV2 1AB基因亚群是目前最高效的疫苗株,但这种局面未来可能会发生改变。

    2011年01期 v.24 1-4页 [查看摘要][在线阅读][下载 280K]
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  • 内源性危险信号低分子量硫酸乙酰肝素的免疫佐剂作用

    兰芸;王海漩;乌美妮;胡凝珠;胡云章;

    目的 研究内源性危险信号低分子量硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)的免疫佐剂作用。方法按照HS的免疫剂量、免疫途径和免疫程序将ICR小鼠分组,同时设HBsAg对照组和铝佐剂对照组,分别于末次免疫后4、8、12、16、20和24周,采用ELISA法检测小鼠血清中的特异性IgG抗体水平;选择体液免疫效果最佳的剂量组免疫BALB/c小鼠,同时设空白对照组、抗原对照组和铝佐剂对照组,于末次免疫后8周,采用乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞杀伤活性。结果空白对照组小鼠在各检测时间点均未见IgG抗体产生。除第4组外,各实验组抗体滴度均在末次免疫后第8周达峰值,随着时间的推移,抗体水平呈下降趋势。第43组抗体水平升高快,峰值高,持续时间长;在实验剂量范围内,随着HS剂量的增加,针对HBsAg的特异性抗体水平也增加;HS的最佳剂量为100μg;皮下注射HS的免疫增强作用最佳,优于肌肉和鼻腔免疫;免疫程序对HS的佐剂作用影响不大。HS能诱导小鼠产生特异性的CTL细胞免疫效应,细胞杀伤活性显著高于空白对照组、抗原对照组及铝佐剂对照组(P﹤0.001)。结论 HS具有免疫佐剂作用,既能有效增强特异性体液免疫应答,又能显著诱导CTL细胞免疫效应,是一种优于铝佐剂的潜在人用疫苗佐剂。

    2011年01期 v.24 5-9页 [查看摘要][在线阅读][下载 216K]
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  • HIV-1 HXB2株Tat核心碱性区多肽Tat_(38-61)的原核表达及其免疫反应性

    庞强;曹洁;陈秋莉;王锦红;张华群;黄德胜;葛宜兵;潘卫;

    目的 构建HIV-1 Tat核心碱性区多肽Tat38-61重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白并进行纯化及免疫反应性检测。方法采用PCR法从HIV-1 HXB2株Tat1-101基因中扩增编码Tat38-61的基因序列,克隆至原核表达载体pET32a(+)中,构建重组原核表达质粒pET32a(+)-Tat38-61。转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经Ni2+-NTA柱亲和层析法纯化后,ELISA法鉴定其免疫反应性。结果重组原核表达质粒pET32a(+)-Tat38-61经双酶切及测序表明构建正确;SDS-PAGE分析显示,在相对分子质量约21 300处可见目的 蛋白条带,表达量占菌体总蛋白的67.4%,主要以可溶形式表达;纯化后融合蛋白的纯度可达97%以上;ELISA结果显示,该融合蛋白与兔抗PEPTIDE-Tat1-101血清及HIV阳性血清均呈特异性反应。结论已成功构建了HIV-1 Tat核心碱性区多肽Tat38-61的重组原核表达质粒,表达并纯化了PET32a(+)-Tat38-61融合蛋白,该融合蛋白碱性区表位得到较好的保留,为Tat38-61噬菌体突变文库的构建及亲和筛选奠定了基础。

    2011年01期 v.24 10-13+24页 [查看摘要][在线阅读][下载 298K]
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  • 重组靶向毒素hIL6(T22)-PE38在大肠杆菌中的表达及其细胞毒性

    彭超;李岩松;何晶龙;郭德军;

    目的 在大肠杆菌中表达、纯化重组靶向毒素hIL6(T22)-PE38,并检测其细胞毒性。方法以PHis-hIL6(T22)-PE38质粒为模板,PCR扩增hIL6(T22)-PE38基因,插入表达载体pET-28a(+)的NcoⅠ和XhoⅠ多克隆位点,构建重组表达质粒,分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)、Rosettablue(DE3)和BL21(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达,并对表达条件进行优化。表达产物经亲和层析纯化后,检测其细胞毒性。结果重组表达质粒pET-28a-hIL6(T22)-PE38经双酶切和测序证明构建正确。表达的重组毒素相对分子质量约56 000,在大肠杆菌Rosettablue(DE3)中表达量最高。最适诱导表达条件为:1 mmol/L IPTG 28℃诱导4 h。重组毒素能选择性地杀伤人骨髓瘤细胞U266和鼠骨髓瘤细胞SP2/0,体外对U266和SP2/0细胞的IC50分别为0.5~1.0和1.0~1.5μg/ml。结论重组靶向毒素hIL6(T22)-PE38在大肠杆菌中成功获得可溶性表达,纯化的蛋白可明显选择性杀伤U266和SP2/0细胞。

    2011年01期 v.24 14-19+29页 [查看摘要][在线阅读][下载 794K]
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  • 大鼠骨髓间充质干细胞向肝样细胞的定向诱导分化

    陈鹏飞;吴小翎;周伟;彭阳;芦曦;

    目的 探讨肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)和碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growthfactor,bFGF)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)分化为肝样细胞的可行性。方法取SD大鼠股骨骨髓,直接贴壁法分离纯化BM-MSCs,并体外传代,流式细胞术和成骨诱导对其进行鉴定。取第3代BM-MSCs,分为2组:实验组用HGF(20 ng/ml)和bFGF(10 ng/ml)进行诱导,阴性对照组不加诱导剂,倒置显微镜下观察细胞形态变化;RT-PCR法检测诱导后细胞甲胎蛋白(Alpha fetoprotein,AFP)和白蛋白(Albumin,ALB)基因mRNA的转录水平;免疫细胞化学染色法检测诱导后细胞的AFP和ALB蛋白的表达。结果第3代BM-MSCs表型标志和功能特性均符合MSCs的特点。BM-MSCs经HGF和bFGF诱导后呈肝样细胞形态。实验组细胞可检测出AFP和ALB基因mRNA的表达。实验组细胞诱导后第7天,AFP蛋白开始表达,第14天时表达降低,第21天时不表达;ALB于诱导后第14天出现表达,并随诱导时间的延长表达逐渐增加。结论 HGF和bFGF具有体外诱导BM-MSCs向肝样细胞分化的作用。

    2011年01期 v.24 20-24页 [查看摘要][在线阅读][下载 349K]
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  • 人乳头状瘤病毒16亚型E6E7基因重组腺病毒的构建及其在小鼠骨髓源树突状细胞中的表达

    焦庆昉;潘巍巍;易发平;卜友泉;刘革力;陈全;朱勇;宋方洲;

    目的 构建人乳头状瘤病毒16亚型(Human papillomavirus 16,HPV16)E6E7基因重组腺病毒,并在小鼠骨髓源树突状细胞(Dendritic cell,DC)中表达。方法双酶切质粒pET-32a(+)-E6E7获得E6E7,基因片段,插入腺病毒穿梭质粒pAd-Track-CMV中,转染HEK293细胞,扩增病毒,经同源重组、包装后获得重组腺病毒pAd-E6E7,转染体外培养的小鼠骨髓源DC,激光共聚焦显微镜观察转染的小鼠DC的形态,流式细胞术检测转染前后小鼠DC表面标志物(CD40、CD86、MHCⅡ和CD11C),Western blot检测E6蛋白的表达。结果双酶切及测序证实,重组腺病毒质粒pAd-E6E7构建正确,插入的E6E7基因片段序列正确;转染HEK293细胞48 h,倒置荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达,重组腺病毒的滴度为3×107 CCID50/ml;重组腺病毒pAd-E6E7感染后DC的状态与成熟DC表面标志物(CD40、CD86、MHCⅡ和CD11C)相符合,感染后的DC表面有许多树枝状、刺状突起,符合成熟DC的表面形态;感染后的DC中存在E6蛋白的表达。结论已成功构建了HPV16 E6E7基因重组腺病毒表达质粒,其能在小鼠骨髓源DC中表达。

    2011年01期 v.24 25-29页 [查看摘要][在线阅读][下载 385K]
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  • 3种茶提取物对MCF-7细胞增殖、凋亡的影响及其与蛋白激酶B的相关性

    赵航;盛婧雪;李全顺;吕勇;盛军;施维;

    目的 探讨红茶、绿茶及普洱茶提取物对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响及其与蛋白激酶B(Protein ki-nase B,PKB)的相关性。方法用不同浓度的3种茶提取物处理MCF-7细胞不同时间,MTT法检测其对MCF-7细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响;实时定量PCR检测细胞PKB基因mRNA的转录水平。结果 3种茶提取物对MCF-7细胞的增殖均具有明显的抑制作用,且呈时间、剂量依赖性;3种茶提取物处理的细胞早期凋亡率均高于未处理细胞,PKB基因mRNA的表达量明显降低。结论 3种茶提取物均含有可以抑制PKB转录活性的天然成分,并可诱导MCF-7细胞凋亡;其中绿茶诱导MCF-7细胞凋亡效果最明显。

    2011年01期 v.24 30-33页 [查看摘要][在线阅读][下载 477K]
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  • HpaA-VacA IgY对小鼠胃内感染幽门螺杆菌的预防作用

    夏丽君;杨致邦;黄伟;张任飞;蒋仁举;蒋英;

    目的 研究HpaA-VacA IgY对小鼠幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)胃内定植及引起炎症的预防作用,为制备集预防和治疗H.pylori感染为一体的IgY制剂奠定基础。方法将BALB/c小鼠随机分为阳性对照组、阴性对照组、感染预防组和炎症预防组,阳性对照组灌喂含108 cfu/ml H.pylori的菌液;阴性对照组灌喂布氏肉汤代替H.pylori菌液;感染预防组灌喂不同剂量的IgY后,再灌喂同等剂量的菌液;炎症预防组灌喂同等剂量的菌液后,再灌喂不同剂量的IgY。通过胃黏膜H.pylori培养和组织切片染色镜检观察H.pylori定植及炎症反应程度。结果 HpaA-VacA IgY剂量为6 mg/只时,对H.pylori感染的预防率为88.9%,预防效果较好,当HpaA-VacA IgY的剂量为8 mg/只时,能完全预防H.pylori感染及其所引起的胃黏膜炎症。结论小鼠口服HpaA-VacA IgY具有预防和治疗H.pylori感染的作用,可用于制备防治H.pylori感染的口服制剂。

    2011年01期 v.24 34-36+40页 [查看摘要][在线阅读][下载 436K]
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  • LHRH-PE40对黑色素瘤A375细胞的诱导凋亡作用

    邓欣;刘莹;张国利;朱平;宋阳;

    目的 研究促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素(Luteinizing hormone releasing hormone-Pseudomonas aeru-gionosa exotoxin 40,LHRH-PE40)对黑色素瘤A375细胞的诱导凋亡作用。方法用LHRH-PE40处理A375细胞,透射电镜观察细胞结构的改变;DNA ladder和流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果经LHRH-PE40作用后,透射电镜观察可见A375细胞核聚集于一侧;DNA ladder检测发现,A375细胞的DNA电泳图像呈梯形条带;流式细胞术检测结果显示,A375细胞出现明显的二倍体峰,细胞周期也发生了相应的改变。结论 LHRH-PE40对A375细胞的细胞毒性作用可以有效诱导A375细胞凋亡。

    2011年01期 v.24 37-40页 [查看摘要][在线阅读][下载 433K]
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  • JTV1基因真核表达质粒的构建及其在K562细胞中的表达

    吴燕;刘北忠;王翀;钟梁;朱丹;王春光;金丹婷;高艳军;黎亮;

    目的 构建JTV1基因真核表达质粒并稳定转染人白血病细胞系K562,检测转染细胞中JTV1基因mRNA和蛋白的表达水平及其对K562细胞增殖的影响。方法从人外周血单个核细胞中克隆JTV1基因,并将其插入pcDNA3.1表达载体中,构建真核重组表达质粒pcDNA3.1-JTV1,经脂质体介导转染K562细胞,采用RT-PCR和Western blot法鉴定转染细胞中JTV1基因mRNA和蛋白的表达水平;MTT法检测JTV1稳定表达对K562细胞增殖的影响。结果重组表达质粒pcDNA3.1-JTV1经双酶切及测序证实,目的基因已插入质粒中;人JTV1基因能在K562细胞中稳定表达;JTV1具有抑制K562细胞增殖的作用。结论已成功构建了JTV1基因真核表达质粒,并获得了稳定表达人JTV1基因的K562细胞克隆,为进一步研究人JTV1基因的功能及其与白血病细胞增殖及凋亡的相关性提供了细胞模型。

    2011年01期 v.24 41-44页 [查看摘要][在线阅读][下载 260K]
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  • 几种理化因子对狂犬病病毒分离株感染力影响的再检测

    潘铁骊;张菲;张守峰;扈荣良;

    目的 分析几种理化因子对狂犬病病毒街毒分离株感染力的影响。方法将2006年分离的1株狂犬病街毒BD06株适应细胞后的第18代毒株暴露于不同的理化条件下,通过接种BHK-21细胞测定其病毒滴度(TCID50),观察其感染力的变化。结果 BD06株狂犬病病毒在100℃作用10 s和56℃作用2 min可以完全灭活,在37℃可存活6 d,4℃可存活2周,-20℃以下可存活半年以上;病毒置紫外线灯下30 cm处2 min内全部被灭活;在pH 6~10的中性环境下能够存活,在pH 5以下的弱酸性和pH 11以上的碱性环境中,10 min内可完全灭活;病毒对胰酶稳定;30%以上的丙酮在20 min,2倍体积的氯仿在5 min,75%的乙醇在2 min,0.05%的甲醛在6 h,10%的甲醛在5 min内均可将病毒全部灭活。结论分析了几种理化因子对狂犬病病毒BD06株感染力的影响,为生产实践中灭活狂犬病病毒或消毒提供了参考。

    2011年01期 v.24 45-47页 [查看摘要][在线阅读][下载 203K]
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  • 抗坏血酸与乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的相关性

    卫惠杰;张徽;刘莹;唐熹;

    目的 探讨抗坏血酸与乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的相关性。方法分别用0.5、1.0、2.0和4.0mmol/L的抗坏血酸处理MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞增殖水平;RT-PCR检测细胞p53和bcl-2基因mRNA的转录水平;West-ern blot检测细胞P53和bcl-2蛋白的表达;流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果不同浓度的抗坏血酸均可明显抑制MDA-MB-231细胞增殖,促进其凋亡,并使细胞p53基因mRNA转录水平及P53蛋白的表达水平明显升高,而bcl-2基因mRNA转录水平及bcl-2蛋白表达水平明显降低,且均呈剂量依赖性。结论抗坏血酸能抑制MDA-MB-231细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能是通过上调P53,下调bcl-2介导的。

    2011年01期 v.24 48-51页 [查看摘要][在线阅读][下载 364K]
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  • 内源性血管生成抑制因子Arresten基因原核表达条件的优化

    唐海英;郑金平;陈显久;解军;

    目的 优化内源性血管生成抑制因子Arresten基因的原核表达条件。方法从健康产妇的胎盘组织中提取总RNA,RT-PCR扩增Arresten基因,构建重组表达质粒pBV220-Arr,分别转化感受态E.coli JM109、DH5α、BL21、BL21(DE3),诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物,筛选出最优表达菌种,并对其菌体培养温度和时间、诱导温度和时间及溶解氧量进行优化。结果重组表达质粒pBV220-Arr经酶切及测序证明构建正确,重组表达质粒在E.coli JM109、DH5α、BL21、BL21(DE3)4种菌中诱导2和4 h,均能表达出Arresten蛋白,诱导表达4 h,E.coli BL21(DE3)目的 蛋白表达量最高,湿菌重也明显大于其他菌种。E.coli BL21(DE3)/pBV220-Arr的最佳表达条件为:在500 ml培养瓶中加入100 ml LB氨苄阳性培养基,菌体于30℃培养4 h后,再42℃诱导表达4 h。结论优化了Arresten基因工程菌的表达条件,为重组Arresten蛋白的大量表达提供了参考。

    2011年01期 v.24 52-55+60页 [查看摘要][在线阅读][下载 440K]
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  • NIRF蛋白的原核表达及纯化

    杨艳;金方敏;钱冠华;段昌柱;

    目的 原核表达NIRF基因,并纯化NIRF蛋白。方法 PCR扩增全长NIRF基因,克隆入原核表达质粒pGEX-4T-1中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,并用GST 4B球珠亲和纯化目的蛋白。结果重组表达质粒pGST-NIRF经酶切鉴定证明构建正确。22℃条件下培养,菌体A600值达1.8时,加入终浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导7 h,能使GST-NIRF在上清中大量表达;纯化的重组GST-NIRF蛋白纯度达85%以上,可与GST抗体和NIRF抗体发生特异性结合。结论已成功在大肠杆菌中表达了GST-NIRF蛋白,纯化的蛋白可用于NIRF的生物功能活性研究。

    2011年01期 v.24 56-60页 [查看摘要][在线阅读][下载 342K]
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  • 小牛血清去蛋白注射液对局灶性脑缺血大鼠脑血管化学储备能力的影响

    刘博;闵连秋;

    目的 探讨小牛血清去蛋白注射液对局灶性脑缺血大鼠脑血管化学储备能力的影响。方法将健康SD大鼠随机分为假手术组、单纯缺血组和小牛血清去蛋白注射液(Deproteinized calf blood serum injection,DCBSI)组。DCBSI组于术前3 d经大鼠腹腔注射DCBSI(2 ml/kg),每日1次,末次给药时间为术前5 h。复制大鼠局灶性脑缺血模型,并分别于术后3、6、24、48和72 h进行超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活力及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量的检测。结果与假手术组相比,单纯缺血组和DCBSI组大鼠脑组织匀浆SOD活力均明显降低(P<0.05),且随着缺血时间的延长而呈逐渐降低趋势,于48 h达最低;MDA含量均明显升高(P<0.05),且随着缺血时间的延长而呈逐渐升高趋势,于48 h达最高。与单纯缺血组相比,DCBSI组大鼠脑组织匀浆SOD活力均明显升高(P<0.05),MDA含量均明显降低(P<0.05)。结论小牛血清去蛋白注射液能够提高局灶性脑缺血大鼠脑血管的化学储备能力。

    2011年01期 v.24 61-63页 [查看摘要][在线阅读][下载 150K]
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预防制品

  • 弧菌福尔马林灭活条件的初步研究

    陶家发;赖迎迢;任燕;康光辉;张悠;石存斌;吴淑勤;

    目的 初步研究弧菌福尔马林灭活条件,为弧菌灭活疫苗的生产工艺提供参数。方法对弧菌培养菌液添加不同浓度的福尔马林,于不同温度下测定灭活时间;采用摇瓶和发酵罐培养弧菌,在28℃比较灭活效果,并检测弧菌灭活疫苗原液的安全性。结果福尔马林对弧菌的最低抑菌浓度为0.025%,不同浓度的福尔马林及不同温度所需的灭活时间不同,福尔马林浓度越大,灭活时间越短,加热能缩短灭活时间。摇瓶和罐灭活效果检测显示,在28℃,0.3%的福尔马林24 h可完全灭活,弧菌二联灭活疫苗原液的安全性符合要求。结论 0.3%福尔马林在28℃灭活24 h,是比较理想的弧菌灭活方法。

    2011年01期 v.24 64-66页 [查看摘要][在线阅读][下载 131K]
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  • Ag85B-ESAT6重组腺病毒肺结核疫苗的遗传稳定性

    吴漾;由庆睿;卫巍;姜德华;姜春来;

    目的 分析Ag85B-ESAT6重组腺病毒(rADV-Ag85B-ESAT6)肺结核疫苗的遗传稳定性。方法将纯化的重组腺病毒rADV-Ag85B-ESAT6在HEK293细胞上连续传代20次,观察细胞病变情况;PCR扩增及序列比对分析重组腺病毒基因的稳定性;Western blot分析重组腺病毒Ag85B-ESAT6融合蛋白的表达稳定性。结果重组腺病毒rADV-Ag85B-ESAT6引起HEK293细胞病变的速度和形态均未发生明显变化;第10代和第20代重组腺病毒均可扩增出1 322 bp的外源基因片段和860 bp的重组腺病毒特征基因E2b片段,野生型腺病毒引物未扩增出特征条带;Western blot分析表明,第10代和第20代重组腺病毒rADV-Ag85B-ESAT6在相对分子质量约47 000处可见Ag85B-ESAT6融合蛋白表达条带。结论重组腺病毒rADV-Ag85B-ESAT6在体外传代20次,表现出良好的基因结构稳定性。

    2011年01期 v.24 67-69+74页 [查看摘要][在线阅读][下载 237K]
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治疗制品

  • 人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白重组CHO细胞生产工艺及质控方法的建立

    刘亚楠;吴建国;宓现强;陈晓虹;曹传平;朱军峰;管晏清;宋红梅;唐亮;郑玲莉;鞠佃文;陶群;

    目的 利用国产无血清培养基T22,建立人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(rhTNFR:Fc)重组CHO细胞大规模生产工艺及质控方法。方法用500 L生物反应器培养重组CHO细胞,通过深层过滤、亲和层析、离子交换层析、疏水层析等方法纯化表达上清中的目的 蛋白,超滤浓缩制成原液,并按照《中国药典》三部(2010版)及现有的质控方法和标准建立相应的质控方法。结果重组CHO细胞在500 L生物反应器中培养15 d左右,细胞密度最高可达8.6×106个/ml,收获时细胞活力为70%左右,rhTNFR:Fc蛋白表达量可达3.3 g/L;纯化的目的 蛋白纯度可达98%以上,总收率超过30%;各项质量指标均符合新药申报标准。结论建立的rhTNFR:Fc重组CHO细胞生产工艺及质控方法稳定可靠,使用国产培养基大大降低了生产成本。

    2011年01期 v.24 70-74页 [查看摘要][在线阅读][下载 403K]
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  • 姜黄素对脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用及对细胞间黏附分子-1和肿瘤坏死因子-α表达的影响

    徐昉;杨远征;刘琼;

    目的 研究姜黄素对脓毒症小鼠急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)的保护作用及对细胞间黏附分子-1(Intercel-lular adhesion molecule-1,ICAM-1)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响。方法将SD小鼠随机分为假手术组(Sham组)、脓毒症组(Sep组)、二甲基亚砜组(DMSO组)和姜黄素组(Cur组)。采用盲肠结扎穿刺术(Cecal ligation andpuncture,CLP)复制脓毒症相关性ALI模型,造模24 h后,Cur组给予200 mg/(kg.d)姜黄素,Sham和Sep组给予等量生理盐水,DMSO组给予等量DMSO,均经腹腔注射给药。HE染色观察小鼠肺组织病理形态学变化;ELISA法检测小鼠血浆中ICAM-1和TNF-α含量的变化;Western blot分析小鼠肺组织中ICAM-1和TNF-α蛋白的表达。结果 Cur组小鼠在给药后12 h肺组织病理变化与Sep组相比有所减轻,48 h姜黄素作用达最强,且各种病理改变明显减轻,部分肺组织已恢复到正常形态;Cur组小鼠血浆中lCAM-1的含量在给药后6、12、24和48 h均明显低于Sep组(P<0.05),Cur组小鼠血浆中TNF-α的含量在给药后24 h明显低于Sep组(P<0.05);给药后24 h,Cur组小鼠肺组织中ICAM-1和TNF-α蛋白的表达水平与Sep组相比明显降低(P<0.05);DMSO组与Sep组各项指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论姜黄素能够有效减轻脓毒症所致ALI,这一作用与抑制ICAM-1和TNF-α的过度表达有关。

    2011年01期 v.24 75-78页 [查看摘要][在线阅读][下载 290K]
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  • 阿奇霉素对人单核白血病细胞THP-1髓系细胞触发受体-1的调节作用

    童瑾;王导新;

    目的 探讨阿奇霉素在脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激下对人单核白血病细胞THP-1髓系细胞触发受体-1(Triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1)的调节作用及TREM-1调控对炎症反应的意义。方法将THP-1细胞分为LPS组(加入1μg/ml LPS)、LPS+TREM-1/FC融合蛋白组(加入1μg/ml LPS和1μg/ml TREM-1/FC融合蛋白)和LPS+阿奇霉素组(加入1μg/ml LPS和10μg/ml阿奇霉素)。分别于培养4、8、12、24、48 h后,采用RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中TREM-1基因mRNA及蛋白的表达,ELISA法检测各组细胞上清液中可溶性TREM-1(Soluble TREM-1,sTREM-1)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)的水平。结果 TREM-1/FC融合蛋白和阿奇霉素可抑制在LPS刺激下THP-1细胞TREM-1蛋白的表达,但对其基因表达无抑制作用;二者还可明显抑制炎性细胞因子的分泌,与LPS组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),且TREM-1/FC融合蛋白的抑制作用强于阿奇霉素。结论 TREM-1是调控炎症反应及感染性疾病的重要靶点;阿奇霉素对TREM-1具有调节作用,为其进一步的临床研究提供了实验依据。

    2011年01期 v.24 79-82+90页 [查看摘要][在线阅读][下载 337K]
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诊断制品

  • 幽门螺杆菌HpaA蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用

    叶翠莲;姜和;蔡家利;邱容蓉;邹姝姝;王颖;

    目的 制备幽门螺杆菌(H.pylori)HpaA蛋白单克隆抗体,并检测其对H.pylori黏附胃腺癌细胞AGS的抑制作用。方法应用PCR法扩增HpaA基因,构建重组表达质粒pQE30-HpaA,表达并纯化重组HpaA蛋白;以其为抗原免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,筛选阳性杂交瘤细胞株,采用间接ELISA和Western blot法检测单抗的特异性,间接ELISA检测细胞株培养上清和腹水抗体效价,并对其进行亚型鉴定和杂交瘤细胞株稳定性分析;扫描电镜观察重组HpaA蛋白单抗对H.pylori黏附AGS细胞的抑制作用。结果重组表达质粒pQE30-HpaA经双酶切、PCR及测序证明构建正确;表达的重组HpaA蛋白相对分子质量约为30 000,可溶性蛋白含量约占65%,纯化后纯度达85%以上;经细胞融合及筛选克隆获得了2株能稳定分泌抗HpaA单抗的杂交瘤细胞株,2株单抗与其他肠道细菌均无交叉反应,能与H.pylori全菌体发生特异性反应;乳胶凝集试验证明,该单抗属IgG3、κ型;2株单抗细胞培养液的抗体效价分别为1∶128~1∶256和1∶64~1∶128,腹水抗体效价分别可达1∶6 400~1∶12 800和1∶1 600~1∶3 200;杂交瘤细胞经反复冻存、复苏及多次传代,仍能稳定分泌高效价抗体;单抗可抑制H.pylori对AGS细胞的黏附作用。结论已成功制备了H.pylori HpaA蛋白单克隆抗体,为建立新的H.pylori现症感染诊疗方法奠定了基础。

    2011年01期 v.24 83-87页 [查看摘要][在线阅读][下载 428K]
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临床观察

  • 抗-Ce引起的输血反应及其配血分析

    刘芳兰;刘娜;李翠微;

    目的 分析Rh血型系统中不规则抗体的临床意义。方法对1例带有抗-Ce联合抗体的患者,采用盐水法鉴定血型,并进行直接抗球蛋白试验,抗球蛋白法进行抗体鉴定和效价测定,吸收放散试验鉴定联合抗体,盐水法、抗球蛋白法和聚凝胺法进行配血。结果根据该例有抗-Ce联合抗体患者血清学抗体检测结果,为其找到了配合的血液,输注后无不良反应,治疗效果良好。结论对于经常需要输血的患者或还未生育的女性,在输血前除了做必要的抗体筛查和鉴定其相配合的血液外,建议作RhD以外的各因子的检测,做到Rh系统的配合性输注,避免此系统不规则抗体的产生,保证临床输血的安全。

    2011年01期 v.24 88-90页 [查看摘要][在线阅读][下载 128K]
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实验技术

  • 血清抗b型流感嗜血杆菌磷酸多聚核糖基核糖醇抗体杀菌活性体外检测方法的建立

    乔瑞洁;李亚南;赵志强;刘佳;王浩;史晓玲;谭小梅;杜送田;谢贵林;

    目的 建立免疫血清中抗b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)磷酸多聚核糖基核糖醇(Polyri-bosylribitol phosphate,PRP)抗体体外血清杀菌试验(Serum bacterialcid assay,SBA)方法。方法通过对补体和指示菌株的筛选,建立体外测定血清中抗Hib-PRP抗体杀菌试验方法,并对实验体系的耐变性、特异性及精密性进行验证。结果指示菌Hib-EAGAN株与Hib阳性血清显示出良好的杀菌特异性,其平均非特异性杀菌率为0;Pel-Freez公司提供的4批补体中,批号为17830的补体具有良好的杀菌稳定性和特异性;经验证,建立的Hib-SBA体系具有良好的耐变性和特异性,其精密性CV值在16%~28%之间。结论成功建立了血清抗Hib-PRP抗体杀菌活性体外检测方法,该方法具有检测样本量大、省时、易标准化等优点。

    2011年01期 v.24 91-93+98页 [查看摘要][在线阅读][下载 205K]
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  • 体外拼装苦瓜降糖多肽P基因

    张文姬;王碧莲;郭茸恺;赵健;王富军;

    目的 以苦瓜降糖多肽P基因为例,探讨用寡核苷酸片段体外拼装基因的方法。方法根据已知苦瓜降糖多肽P的蛋白序列和大肠杆菌的密码子偏爱性,反向翻译出可在大肠杆菌内表达的苦瓜降糖多肽P基因,设计24条40 bp的降糖多肽P基因寡核苷酸片段引物,通过PCR进行寡核苷酸片段的扩增和拼装。将拼装好的多肽P基因的cDNA与pET-32a载体连接后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+-NTA纯化后检测其对四氧嘧啶引起的糖尿病小鼠的降糖活性。结果苦瓜降糖多肽P基因经2轮PCR扩增后,即可见目的 条带;经第3轮PCR扩增,即可见清晰的目的 条带。经测序鉴定,与设计的降糖多肽P基因序列完全一致。重组蛋白在E.coli BL21(DE3)中获得可溶性表达,且可与鼠抗His单抗发生特异性反应。纯化的融合蛋白纯度达90%以上,产量为10 mg/L,其对四氧嘧啶引起的糖尿病小鼠具有降糖活性。结论体外基因拼装法是一种有效获取目的 基因的方法,可进行密码子偏爱性设计,在宿主系统中有效表达目的 基因。

    2011年01期 v.24 94-98页 [查看摘要][在线阅读][下载 326K]
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  • MTS染色法测定重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的生物学活性

    陈红霞;于玉根;张慧娟;黄立勤;

    目的 建立稳定可靠的重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Recombinant human TNF-related apoptosis-induc-ing ligand,rhTRAIL)生物学活性检测方法——MTS染色法。方法采用人非小细胞肺癌细胞(NCI-H460)凋亡-MTS染色法对3批rhTRAIL供试品进行检测,采用四参数回归法计算供试品效价;并对该方法的专属性、精密性和准确性进行验证。结果 3批供试品(20071101、20071102、20071103)的效价分别为7.3×104、8.1×104和9.3×104 U/ml,相关系数(R2)分别为0.998、0.996和0.998。rhTRAIL抗体能完全阻断rhTRAIL与NCI-H460细胞间的应答反应。该方法专属性较好,不同检测板间、不同加样位置、不同工作日间和不同试验人员间检测结果的平均变异系数分别为12%、26%、24%和7%,平均加样回收率为114%。结论 MTS染色法测定rhTRAIL的生物学活性具有较高的准确性和可信度,适用于rhTRAIL生物学活性的常规检测。

    2011年01期 v.24 99-101页 [查看摘要][在线阅读][下载 203K]
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  • 响应面法优化低组胺发酵香肠的工艺条件

    王长远;姚笛;于长青;王颖;李艳青;张丽娜;

    目的 以组胺基因缺失植物乳杆菌配合啤酒酵母作为发酵剂,采用响应面法优化低组胺发酵香肠的工艺参数。方法对组胺基因缺失植物乳杆菌和啤酒酵母的菌种间比例、接种量、发酵温度和发酵时间4个因素分别进行单因素试验,根据单因素试验结果设计Box-Benhnken中心组合试验,以组胺含量为指标,采用响应面分析法确定最优发酵工艺参数。以优化的工艺制作发酵香肠,并测定各项质量指标。结果发酵香肠最优工艺参数为:组胺基因缺少植物乳杆菌与啤酒酵母菌种间比为7∶4,接种量0.71%,发酵温度30.84℃,发酵时间22.89 h,发酵香肠中组胺含量为3.94 mg/kg。以优化的工艺制作的发酵香肠各项质量指标均符合国家标准,组胺含量降低了54.5%。结论以优化的工艺制作的发酵香肠组胺含量降低,安全性得到提高。

    2011年01期 v.24 102-107页 [查看摘要][在线阅读][下载 432K]
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消息

  • 《免疫学前沿进展》征订启事

    <正>由中国免疫学会理事长曹雪涛院士牵头、全国免疫学各领域知名专家联合编著的《免疫学前沿进展》,于2009年12月由人民卫生出版社正式出版。免疫学是一门重要的基础学科,与临床医学紧密相关,是生物医学乃至整个生命科学中

    2011年01期 v.24 107页 [查看摘要][在线阅读][下载 40K]
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实验技术

  • 产壳聚糖酶微生物的筛选及产酶条件的优化

    李群良;李启虔;

    目的 从土壤中筛选能降解壳聚糖的微生物,并优化其产酶条件。方法利用平板筛选法对采集的土壤中的微生物进行富集培养、初筛和复筛,得到能降解壳聚糖的菌株,并对降解壳聚糖能力最强的菌株进行发酵培养,优化产酶条件。结果筛选出3株产壳聚糖酶菌株,编号为C-01、C-02和C-03,其中,C-01、C-02为细菌,C-03为霉菌。C-01菌株产酶能力最强,其最适产酶条件为:以1%粉末壳聚糖+0.1%葡萄糖为碳源,0.5%(NH4)2SO4+0.5%蛋白胨为氮源,培养基初始pH值8.0,培养温度30℃,菌株接种量2.0%,培养时间48 h。在最适条件下,壳聚糖酶活力可达7.78 U/ml。结论已筛选出1株高产壳聚糖酶的菌株,并优化了其产酶条件,为壳寡糖的生产及应用奠定了基础。

    2011年01期 v.24 108-111页 [查看摘要][在线阅读][下载 202K]
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临床观察

综述

  • Merck Ad5艾滋病疫苗的研究进展

    刘强;王佑春;

    安全有效的疫苗是艾滋病防治的有效手段。上世纪90年代,Merck公司开始研发腺病毒5型(Ad5)载体T细胞概念艾滋病疫苗。2007年9月,在Ⅱb期临床观察中宣告失败,给疫苗学界带来沉重打击。本文就Merck Ad5艾滋病疫苗的构建、临床前期和Ⅰ、Ⅱ期临床观察以及学术界对其失败原因的分析作一综述。

    2011年01期 v.24 112-116页 [查看摘要][在线阅读][下载 211K]
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消息

综述

  • 重组人干扰素β表达体系及其适应证的研究进展

    黄志斌;党建章;王妍;

    干扰素β(Interferon β,IFNβ)具有抗病毒、抗增殖及免疫调节活性等生物学功能。重组人干扰素β(rhIFNβ)产品在临床上的应用极为广泛,但国内目前尚无自主研制的rhIFNβ药物上市。有两项临床研究为以大肠杆菌为表达体系,国内目前正在进行用CHO细胞表达rhIFNβ1a的研究。本文对rhIFNβ的生物活性、结构、表达体系、临床治疗多发性硬化症(Multiple selerosis,MS)及新增适应证作一综述。

    2011年01期 v.24 117-120页 [查看摘要][在线阅读][下载 195K]
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  • Kringle5基因工程制备方法的研究进展

    陈显久;牛勃;赵荣瑞;

    Kringle5是血浆纤维蛋白溶酶原的第5个饼环区结构,在体外具有抑制内皮细胞增殖、迁移的生物学活性,在体内可抑制多种血管新生模型的新生血管形成及肿瘤的生长和转移,在实体瘤、糖尿病视网膜病变、风湿性关节炎等疾病的治疗中具有广阔的应用前景。本文对国内外采用基因工程方法制备Kringle5的研究进展作一综述,为Kringle5蛋白基因工程药物的开发提供参考。

    2011年01期 v.24 121-123页 [查看摘要][在线阅读][下载 137K]
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消息

  • 《中国生物制品学杂志》稿约

    <正>《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊,由国家卫生部主管,中华预防医学会和中国生物技术集团公司长春生物制品研究所主办,月刊。

    2011年01期 v.24 124页 [查看摘要][在线阅读][下载 33K]
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