中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

基础研究

  • 肠道病毒71型Lanzhou01株的分离及其生物学特性

    李薇;赵祖波;李建强;程瑞霞;王军;王智永;张晓宇;王玉琳;

    目的对肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)Lanzhou01株进行分离、鉴定,并分析其生物学特性,为EV71疫苗候选毒株的筛选奠定基础。方法从兰州市手足口病患者的粪便样本中分离EV71,经蚀斑克隆传代后,RT-PCR法检测其特异性;Vero细胞甲基纤维素蚀斑法分析病毒的毒力;克隆病毒的VP1基因,进行序列测定及分析;扫描电镜观察病毒的形态;以不同的MOI接种Vero细胞,观察细胞病变,并绘制病毒的增殖曲线;连续传代,分析VP1基因和氨基酸序列,并测定毒力,检测其遗传稳定性。结果经细胞传代和蚀斑克隆,获得增殖性能稳定的分离株,RT-PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳分析可见约250bp的特异性条带;经VP1基因测序与进化树鉴定为EV71,其与浙江、深圳等地的EV71分离株的核苷酸序列同源性均大于99%,属于C4基因亚型;电镜下观察病毒颗粒为球形,直径20~30nm;该病毒在Vero细胞上培养后产生典型的细胞病变,毒力为6.8LgPFU/ml;经Vero细胞连续传30代,不同代次的病毒VP1基因序列的核苷酸序列同源性大于或等于99.6%,氨基酸序列几乎没有明显变异,毒力也无明显改变。结论已成功分离1株EV71,其生物学特性良好,为灭活疫苗的研制及疫苗候选株的筛选奠定了基础。

    2010年12期 v.23 1277-1281页 [查看摘要][在线阅读][下载 501K]
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消息

  • 欢迎登录《中国生物制品学杂志》网站

    <正>尊敬的专家、读者、作者及各位同仁:您们好!自2007年8月起,《中国生物制品学杂志》网站(www.zgswj.com.cn,中文域名:中国生物制品学杂志.com)正式运行。本站网页有杂志简介、在线投稿、稿件查询、过期目录、广告合作等您所需要的信息,欢迎登录。

    2010年12期 v.23 1281页 [查看摘要][在线阅读][下载 40K]
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基础研究

  • PTEN再表达对细胞内抗氧化蛋白表达和DNA氧化损伤的影响

    周乔丹;米粲;胡迎春;李刚;吴德昌;霍艳英;

    目的研究10号染色体缺失磷酸酶及张力蛋白同源体(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)再表达对细胞内抗氧化蛋白Prdx1,2,5,6和Cu/Zn SOD的表达、活性氧(ROS)和DNA氧化损伤水平及细胞抗氧化能力的影响。方法采用Western blot法比较Pten-/-MEFs细胞(对照细胞)与PTEN再表达的Pten-/-MEFs细胞内抗氧化蛋白Prdx1,2,5,6和Cu/Zn SOD的表达差异;采用化学/荧光发光法分析对照细胞与PTEN再表达细胞内基础ROS水平差异;采用中性单细胞凝胶电泳比较不同浓度(0、0.01、0.05、0.10mmol/L)H2O2处理后,对照细胞与PTEN再表达细胞内DNA双链断裂(DSBs)的变化。结果与对照细胞相比,PTEN再表达细胞中Prdx1,2,5,6和Cu/Zn SOD蛋白的表达水平增高,细胞内基础ROS水平降低,DSBs减少,细胞抵抗外源性H2O2的能力增强。结论 PTEN可能通过对Prdx1,2,5,6和Cu/Zn SOD等抗氧化蛋白的表达调控,增强细胞抗氧化能力,清除细胞内过量的ROS,从而保护细胞免受氧化压力导致的DNA氧化损伤,维持基因组稳定性。

    2010年12期 v.23 1282-1285+1290页 [查看摘要][在线阅读][下载 449K]
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  • 免疫抗体文库的构建及亚nM高亲和力人源抗体的筛选

    聂艳桃;何太平;雷韬;葛永红;柏玉碧;张聪明;宋春雷;谭晓晶;唐菁燕;杨波;

    目的构建免疫抗体文库,并筛选亚nM高亲和力人源抗体。方法采用破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)免疫的高效价人B淋巴细胞,经PCR扩增可变区基因,构建免疫抗体文库,并筛选高亲和力人源抗体。将获得的抗体基因片段转换成全分子,进行真核表达和纯化,并与人抗TT多克隆抗体进行比较分析。结果构建的人破伤风免疫噬菌体抗体库库容为4.5×106,多样性符合引物设计要求,经筛选获得相对亲和力为10-10M的高亲和力人源抗体,其体内中和活性高于人多克隆抗体。结论根据抗体基因使用频率设计引物构建小容量免疫抗体文库,可获得亚nM的高亲和力人源抗体,该策略可用于抗感染性疾病人源抗体的开发。

    2010年12期 v.23 1286-1290页 [查看摘要][在线阅读][下载 303K]
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  • 结核分枝杆菌PPE68蛋白的原核表达及纯化

    佘茜;徐蕾;何永林;靳志栋;张丹;杨春;

    目的构建结核分枝杆菌PPE68基因的原核表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达和纯化。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR法扩增PPE68基因,将其克隆至pET-32a(+)载体中,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)-PPE68,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,进行纯化。结果重组表达质粒pET-32a(+)-PPE68经PCR及双酶切鉴定构建正确,测序结果与GenBank中登录的PPE68基因序列一致。表达的Trx-PPE68融合蛋白相对分子质量约为57000,表达量约占菌体总蛋白的41%,可与结核分枝杆菌免疫小鼠血清发生特异性反应。纯化的重组蛋白纯度约为93%。结论已成功构建了结核分枝杆菌PPE68基因重组原核表达质粒pET-32a(+)-PPE68,原核表达并纯化了重组蛋白,为PPE68作为结核病特异性诊断抗原的开发及重组BCG疫苗的研制奠定了基础。

    2010年12期 v.23 1295-1298页 [查看摘要][在线阅读][下载 298K]
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  • 体外诱导微环境对骨髓间充质干细胞成神经分化的影响及分化后的自发逆转现象

    龚敏;毕杨;江伟;张小娟;张赟;魏小平;陈洁;刘友学;李廷玉;

    目的体外定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)成神经分化,并探讨诱导微环境对其分化的影响及分化后的自发逆转现象。方法体外分离培养大鼠MSCs,流式细胞仪检测细胞表面标志。采用改良神经元诱导液[Modified neuronal induction media(MNM)]定向诱导MSCs,免疫荧光检测神经细胞表面标志。观察胎牛血清(FBS)浓度、细胞密度、MNM剂量、新鲜与使用过的MNM等不同诱导微环境对MSCs成神经分化的影响。结果 MSCs经MNM诱导后,6h即可见尼氏体,表达神经元特异性表面标志神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)和微管相关蛋白-2(MAP-2)。随着诱导微环境的改变,MSCs成神经分化率及神经元表面标志表达亦发生改变,且分化后的神经元样细胞可自发逆转。结论 MSCs能够在MNM微环境中定向成神经分化,但诱导微环境的改变可以从量和质两个层面影响MSCs定向分化。

    2010年12期 v.23 1299-1303+1307页 [查看摘要][在线阅读][下载 433K]
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  • Intimin及其受体Tir在致病性大肠杆菌致细胞线粒体功能障碍中的作用

    杨健;王朝莉;冯丽;

    目的探讨致病性大肠杆菌(Enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)外膜蛋白Intimin及其受体Tir在EPEC致HeLa细胞线粒体功能障碍中的作用。方法将EPEC外膜蛋白Intimin及其受体Tir删除株、相应质粒互补株或染色体互补株感染HeLa细胞,用线粒体膜电位(Mitochondria membrane potential,MMP)检测试剂JC-1染色细胞线粒体,通过多功能酶标仪检测MMP水平,Western blot检测Intimin的表达及Tir的转位。结果与野生型菌株相比,Eae删除株和Tir删除株感染细胞的MMP功能显著减弱(P<0.05),Eae删除株功能能被质粒表达相应蛋白所互补,Tir删除株不能被质粒表达Tir互补,但可被染色质表达野生型Tir或TirY474S互补,而染色质TirS434A突变株不能引起明显的MMP下降。结论 Intimin和Tir是参与线粒体功能障碍的重要分子;TirS434在线粒体功能障碍中起重要作用。

    2010年12期 v.23 1304-1307页 [查看摘要][在线阅读][下载 241K]
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  • 黄芪多糖对胃癌细胞上清液中培养的树突状细胞分化成熟及功能的影响

    张苜;余应喜;

    目的探讨黄芪多糖对胃癌细胞SCG-7901上清液中培养的树突状细胞(Dendritic cells,DC)分化成熟及功能的影响,分析黄芪多糖抗癌的作用机制。方法将人外周血分离的单核细胞加入含重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGMCSF)和重组人白细胞介素的培养液中,随机分为空白组(以RPMI1640培养液培养)、干预组(以黄芪多糖干预后的胃癌细胞上清液培养)、对照组(以胃癌细胞上清液培养)。混合培养48h后,显微镜下观察DC成熟过程中的形态学变化,流式细胞术检测DC的表型(CD40、CD80),混合同种淋巴细胞增殖反应(Mixed lymphocyte reaction,MLR)检测DC的增殖效应。结果与对照组比较,空白组和干预组DC的CD40和CD80的表达均明显增加(P<0.05),刺激同种淋巴细胞增殖效应明显增强(P<0.05);干预组DC CD40和CD80的表达阳性率及刺激同种淋巴细胞增殖效应均明显低于空白组(P<0.05)。结论在体外,黄芪多糖可有效对抗胃癌细胞上清液引起的对DC分化成熟和功能的抑制。

    2010年12期 v.23 1308-1311页 [查看摘要][在线阅读][下载 385K]
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  • 人初乳中溶菌酶的理化特性及其抗菌活性

    李淑丽;汪静;解如山;陈红菊;李国才;

    目的分析人初乳中溶菌酶(Lysozyme,LYZ)的理化特性及其抗菌活性。方法取产后3d内的产妇乳汁,根据人LYZ标准曲线,求得其中的LYZ活性。将人初乳分别置于60、72、85和100℃水浴中孵育0、1、3、5、10、15、20和30min后取样,检测其中LYZ的活性,分析其热稳定性;将经稀释的人初乳分别调pH值至2.0、4.0、5.0、7.4、9.0和10.0,37℃孵育30min,检测其中LYZ的活性,分析其对pH值的敏感性;将不同的金属离子加入人初乳中,使其终浓度为10mmol/L,测定不同金属离子对人初乳中LYZ活性的影响;采用平板扩散法检测人初乳中LYZ的抑菌谱,并挑选敏感菌株进行定量抑菌试验。结果人初乳中LYZ的活性为(9650±236)U/ml,在60℃~85℃和pH2.0~10.0的条件下均可保持较强的活性,对多种金属离子具有一定的耐受性。人初乳中LYZ对多种革兰阳性及阴性细菌具有不同程度的抑菌作用,但对白色念珠菌无抑制作用。结论人初乳中的LYZ稳定性强,抗菌谱广,具有广泛的应用价值。

    2010年12期 v.23 1312-1314+1319页 [查看摘要][在线阅读][下载 413K]
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  • p38 MAPK抑制剂SB203580对缺氧致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

    罗欣;姚珍薇;漆洪波;刘丹丹;陈国庆;

    目的观察p38MAPK特异性抑制剂SB203580对缺氧致人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用。方法将HUVECs分为正常对照组、缺氧培养组、SB203580+正常对照组和SB203580+缺氧培养组,培养24h后,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率;Western blot分析各组细胞p38MAPK蛋白及其磷酸化水平;Transwell小室模型检测各组细胞的迁移率;ELISA法检测各组细胞培养上清中可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)及可溶性Endoglin(sEng)的含量。结果与正常对照组相比,缺氧培养组细胞的凋亡率、p38MAPK的磷酸化水平、sFlt-1及sEng含量显著增加(P<0.01),细胞体外迁移能力下降;SB203580+缺氧培养组细胞的凋亡率、p38MAPK的磷酸化水平、sFlt-1和sEng的释放较缺氧培养组均下降,体外迁移能力增强(P<0.05);磷酸化p38MAPK的释放水平与sFlt-1及sEng含量呈正相关(r1=0.69,P<0.05;r2=0.71,P<0.05)。结论 SB203580通过特异性阻断p38MAPK信号转导通路,对缺氧培养的HUVECs产生保护作用。

    2010年12期 v.23 1315-1319页 [查看摘要][在线阅读][下载 521K]
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  • 籽鹅卵巢产蛋性能相关基因全长cDNA序列的克隆与分析

    王丹;郭景茹;刘胜军;杨焕民;孙东波;薛琳琳;宿甲子;邓效禹;

    目的克隆并分析籽鹅卵巢产蛋性能相关基因EST1的全长cDNA序列。方法利用实时荧光定量PCR技术对EST1基因在籽鹅产蛋前期与产蛋期卵巢中mRNA表达水平进行检测,并采用RACE(Rapid amplification of cDNAends,RACE)技术对该基因全长cDNA序列进行克隆,应用生物信息学预测方法对其编码的蛋白质进行分析。结果籽鹅产蛋期卵巢组织中EST1基因mRNA的表达水平显著高于产蛋前期(P<0.05)。经RACE技术获得EST1基因全长cDNA序列长1715bp,具有单一的完整开放阅读框(ORF,14~1318bp),推测编码蛋白含434个氨基酸残基,相对分子质量为107100,等电点为5.00。该蛋白为细胞质内蛋白,含3个跨膜螺旋,蛋白序列中含1个信号肽切割位点。结论经分子生物学软件进行蛋白质功能预测,初步确定EST1基因为籽鹅α-烯醇化酶蛋白基因,推测该基因可能参与籽鹅产蛋性能的分子调控。

    2010年12期 v.23 1320-1324+1332页 [查看摘要][在线阅读][下载 978K]
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  • 糖基化终末产物对大鼠肾小球系膜细胞尾加压素Ⅱ及G蛋白偶联受体mRNA表达的影响

    赵岩;林风武;李才;

    目的观察不同浓度糖基化终末产物(Advanced glycation end products,AGEs)及AGEs作用不同时间对大鼠肾小球系膜细胞尾加压素Ⅱ(UrotensinⅡ,UⅡ)及G蛋白偶联受体(G-protein-couple receptor,GPR14)mRNA表达的影响。方法制备AGE-BSA,体外培养大鼠肾小球系膜细胞(Mesangial Cells,MC),加入不同浓度的AGE-BSA(终浓度分别为0、25、50、100和200mg/L),37℃孵育24h;加入100mg/L AGE-BSA,分别培养0、2、8、16和24h,以不含葡萄糖的BSA作为对照。收集细胞,采用RT-PCR检测各组MC UⅡ及GPR14mRNA的表达。结果 AGE-BSA各组MC UⅡ及GPR14mRNA的表达量均随AGEs浓度的增加而增加,50、100和200mg/L与0mg/L组比较,差异有统计学意义(P<0.05);100mg/L AGE-BSA各组MC UⅡ及GPR14mRNA的表达量随着作用时间的延长而增加,作用8、16、24h组与0h组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。BSA组MC UⅡ及GPR14mRNA的表达量无明显增加(P>0.05)。结论 AGEs能上调大鼠MC UⅡ及GPR14mRNA的表达。

    2010年12期 v.23 1325-1328页 [查看摘要][在线阅读][下载 309K]
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  • 重组肺癌抑癌基因1蛋白的表达、纯化及其多克隆抗体的制备

    冉永刚;游颜杰;

    目的表达、纯化重组人肺癌抑癌基因1(Tumorsuppressor in lung cancer1,TSLC1)蛋白,并制备其多克隆抗体。方法采用RT-PCR法扩增TSLC1基因全长编码区序列,克隆入原核表达质粒pQE30,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,免疫家兔,ProteinA亲和层析纯化抗血清,并经Westernblot分析其反应原性。结果重组表达质粒pQE30-TSLC1经双酶切及测序鉴定证明构建正确。重组TSLC1蛋白的表达量约占菌体总蛋白的14%,主要以包涵体形式存在。纯化的重组蛋白纯度为93.4%,可与小鼠抗His-Tag单克隆抗体发生特异性反应。以其制备的多克隆抗体具有良好的抗原识别特异性。结论已成功制备TSLC1多克隆抗体,为深入研究TSLC1分子的生物学活性奠定了基础。

    2010年12期 v.23 1329-1332页 [查看摘要][在线阅读][下载 252K]
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预防制品

  • 水痘减毒活疫苗Oka株的传代稳定性

    陈哲文;金于兰;瞿爱东;马相虎;王亮;杨忠东;

    目的观察水痘减毒活疫苗Oka株(V-Oka)的传代稳定性。方法将V-Oka病毒在人二倍体细胞MRC-5上连续传代至50代,观察病毒的培养特性。选择32、34、38、42、46、50代病毒进行病毒滴度测定和鉴别试验,提取病毒DNA,对V-Oka的主要基因(ORF31、ORF62、ORF68、R区)进行PCR扩增和测序,并对序列进行分析。结果 V-Oka连续传代至50代,其培养特性、细胞病变一致,病毒滴度为5.0~5.6LgPFU/ml。与GenBank中登录的V-Oka序列比较,32~50代的V-OkaORF31、ORF62、ORF68、R区序列稳定,并趋于减毒型。结论 V-Oka传代至50代,生物学和分子遗传学特性稳定。

    2010年12期 v.23 1333-1337页 [查看摘要][在线阅读][下载 271K]
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消息

  • 征稿

    <正>《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管,中华预防医学会和中国生物技术集团公司长春生物制品研究所主办,是中华预防医学会系列杂志之一,月刊。

    2010年12期 v.23 1337页 [查看摘要][在线阅读][下载 38K]
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预防制品

  • A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合物的制备及其工艺稳定性

    刘方蕾;吴兵;王晶;袁菲;赵志强;杨明;谢贵林;

    目的按初步确定的工艺,制备A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖(Group A Neisseria meningococcus capsular polysac charide,GAMP)与破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)的结合物,通过监测关键工艺参数,分析该工艺的稳定性。方法制备8批GAMP-TT结合物,经Sepharose4FF柱层析纯化后,进行各项生化鉴定,采用双向免疫扩散试验检测其抗原性,以结合物皮下免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清中抗GAMP及抗TT IgG抗体水平。结果制备的8批结合物工艺关键参数较稳定,均保持GAMP抗原特异性;免疫小鼠后,均可诱生较高水平的血清抗GAMP IgG抗体,并可诱生免疫加强应答。结论该制备工艺稳定,为GAMP-TT结合疫苗的研制提供了参考。

    2010年12期 v.23 1338-1342页 [查看摘要][在线阅读][下载 358K]
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实验技术

  • 超滤工艺的改进

    兰敏超;姚元存;

    <正>超滤膜通常按相对分子质量和膜面积来分类,常用的超滤膜相对分子质量有1000、5000、10000、100000、500000、1000000等;常用膜面积有0.1、0.5、2.5m2不等。超滤膜是依据透过比膜孔相对分子质量小的物质,截留比其相对分子

    2010年12期 v.23 1342页 [查看摘要][在线阅读][下载 49K]
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预防制品

  • 麻疹减毒活疫苗冻干工艺的优化

    徐斌;王弢;周园;李睿;刘毅;

    目的优化麻疹减毒活疫苗的冻干工艺。方法以预冻过程(温度、时间)、升华干燥过程(温度、时间、真空控制值)、解析干燥过程(温度、时间、真空控制值)冻干参数为影响因素,应用L(827)正交试验设计冻干曲线,对8批麻疹减毒活疫苗半成品进行冻干,采用直观分析法的综合平均值R()iⅠ和极差R(i)j分析不同批次冻干制品的干损率、病毒滴度、热稳定性和残余水分,筛选最优因素水平组合,并对其进行适用性验证。结果优化的麻疹减毒活疫苗冻干工艺参数为:预冻:温度5~-25℃、时间0.5h,温度-25~-40℃采用大于1℃/min的冻结速率,温度-40℃、保持时间3h;升华干燥:温度-40~-20℃、时间1.5h、真空控制值0.16mbar,温度-20℃、保持时间8h、真空控制值0.16mbar,温度-20~30℃、时间5h、真空控制值0.16mbar;解析干燥:温度保持30℃、时间6h、真空控制值0.005mbar,以优化的麻疹减毒活疫苗冻干工艺冻干的制品成型良好,干损率平均为1.36%,稳定性好,残余水分在1.62%~1.67%之间。结论优化的麻疹减毒活疫苗冻干工艺适合麻疹疫苗大规模生产。

    2010年12期 v.23 1343-1346页 [查看摘要][在线阅读][下载 191K]
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消息

  • 来自ATCC的基因靶向工具

    <正>ATCC发布三个新的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)滋养细胞系,用于支持未分化胚胎干细胞系和iPS细胞系的生长。DR4MEF(ATCC誖SCRC-1045TM)带有抗生素耐药基因,可以耐受新霉素(G418)、嘌呤霉素、潮霉素和6-硫基鸟嘌呤。SNL

    2010年12期 v.23 1346页 [查看摘要][在线阅读][下载 71K]
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预防制品

  • 冻干A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性及氢氧化铝佐剂复溶疫苗的免疫效果

    朱为;毕慧;王月红;王晓;

    目的观察冻干A群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗的稳定性,并比较A(lOH)3佐剂和磷酸盐缓冲液(PBS)复溶疫苗的免疫效果。方法将冻干疫苗于2~8℃放置36个月,每隔6个月取样,测定游离多糖含量、分子大小等,观察疫苗的稳定性。分别用A(lOH)3和PBS两种稀释液复溶疫苗后,计算吸附率并免疫小鼠,采用ELISA法测定小鼠血清中抗多糖IgG抗体滴度。结果疫苗于2~8℃放置30个月,各项质量指标均合格。A(lOH)3稀释液复溶疫苗的吸附率为100%。以两种稀释液复溶的疫苗均可诱导小鼠产生高滴度的抗多糖IgG抗体及免疫记忆反应,且A(lOH)3稀释液明显优于PBS稀释液。结论冻干A群脑膜炎球菌结合疫苗具有良好的稳定性,A(lOH)3佐剂可作为其稀释液。

    2010年12期 v.23 1347-1349+1356页 [查看摘要][在线阅读][下载 227K]
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治疗制品

  • 醋酸甲羟孕酮诱导结肠癌SW480细胞凋亡及其差异表达蛋白的分析

    张瑜;邱宗荫;

    目的对醋酸甲羟孕酮(Medroxyprogesterone acetate,MPA)诱导结肠癌SW480细胞凋亡时的差异表达蛋白进行分析。方法以不同浓度(25、50、75μmol/L)的MPA作用SW480细胞24、48和72h,MTT法检测细胞增殖水平。以上述浓度的MPA作用SW480细胞48h,流式细胞术分析细胞的凋亡率及细胞周期各时相比例的变化。以50μmol/L MPA作用SW480细胞48h,透射电镜观察细胞结构的变化;应用双向电泳技术分离细胞总蛋白,PDQUEST8.0软件分析凝胶图谱,选择差异表达蛋白,以Agilent1100HPLC-Chip/MS系统进行MS/MS分析,搜索UniProtKB/SWISS-PORT,Homo Sapiens(Human)数据库筛选目标蛋白质。结果透射电镜下观察经MPA作用的SW480细胞可见明显的凋亡形态学变化;不同浓度的MPA对SW480细胞均有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用,且呈剂量依赖性,细胞凋亡率最高可达56.15%;细胞周期分析表明,MPA诱导结肠癌细胞凋亡的作用可能与细胞周期的阻滞相关,此阻滞作用具有剂量依赖性;共鉴定出泛素、只含LIM结构域蛋白质3、热休克蛋白10、有机阴离子转运蛋白4、泛素羧基末端水解酶2、核苷二磷酸激酶-A、层黏连蛋白受体1共7种SW480细胞凋亡相关蛋白。结论 MPA具有诱导SW480细胞凋亡的作用,SW480细胞凋亡相关蛋白可能作为MPA抗结肠癌的潜在生物标志物。

    2010年12期 v.23 1350-1356页 [查看摘要][在线阅读][下载 856K]
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  • 重组人骨形态发生蛋白-7活性检测方法的建立

    安新玲;韩金祥;王世立;

    目的建立一种新的重组人骨形态发生蛋白-7(Recombinant human bone morphogenetic protein-7,rhBMP-7)活性检测方法。方法将吸收性明胶海绵与rhBMP-7混匀,冻干,环氧乙烷灭菌后,植入小鼠大腿股部肌间隙,共设5组:明胶海绵对照组及50、100、150、250μg rhBMP-7/块明胶海绵实验组,分别于术后第2、3周取材,进行HE染色及蛋白含量测定。结果 HE染色结果显示,与明胶海绵对照组相比,rhBMP-7/明胶海绵组细胞数量明显增多,且随着rhBMP-7剂量的增加及作用时间的延长而逐渐增多。蛋白含量测定结果显示,与明胶海绵对照组相比,rhBMP-7/明胶海绵组蛋白含量随着rhBMP-7剂量的增加及作用时间的延长而逐渐增加,且rhBMP-7剂量与每组蛋白含量平均值呈良好的相关性。结论将rhBMP-7复合明胶海绵植入小鼠大腿肌间隙并于第2周取材进行蛋白含量测定的方法,可用于rhBMP-7活性检测。

    2010年12期 v.23 1357-1360页 [查看摘要][在线阅读][下载 658K]
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消息

  • 《医学免疫学实验技术》征订启事

    <正>我国首批国家级医学研究生规划教材之一的《医学免疫学实验技术》(主编柳忠辉),于2008年3月由人民卫生出版社出版。该书由国内16所大学从事相关领域研究的教授参编。全书共分为16章,相关实验技术部分不仅介绍了实验原理和

    2010年12期 v.23 1360页 [查看摘要][在线阅读][下载 45K]
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诊断制品

  • 梅毒螺旋体特异性抗原TP17、TP0453的表达及以其作为诊断抗原的间接ELISA方法的建立

    肖洁;郭刚;张卫军;

    目的表达、纯化梅毒螺旋体特异性外膜蛋白TP17和TP0453,并以其作为包被抗原,建立新型梅毒酶联免疫诊断方法。方法 PCR扩增TP17和TP0453基因,分别克隆入pET-22b(+)和pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET-22b(+)-TP17和pET-28a(+)-TP0453,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物纯化后进行Western blot鉴定。以纯化的重组TP17和TP0453蛋白作为诊断抗原,建立间接ELISA方法,并对该方法进行验证。结果 PCR分别扩增出500和800bp的TP17和TP0453基因片段,测序结果与GenBank中登录的CDS序列完全一致。重组表达质粒pET-22b(+)-TP17和pET-28a(+)-TP0453经双酶切鉴定正确;重组TP17和TP0453蛋白的相对分子质量分别约为18000和29000。表达量分别约占菌体总蛋白的18%和24%,纯化的重组TP17和TP0453蛋白的纯度分别>95%和>90%。两种重组蛋白均能与梅毒标准血清发生特异性反应。检测70份梅毒参考血清和定值质控血清的批内变异系数(CV)≤4.35%,批间CV≤6.69%,表明精密性良好;对国家标准血清盘的检测灵敏度为94.4%,特异性为97.1%,符合率为95.7%,最低检出限为0.25NCU/ml。结论表达和纯化的重组TP17和TP0453蛋白具有良好的抗原性和特异性,可用于梅毒血清学诊断。

    2010年12期 v.23 1365-1369页 [查看摘要][在线阅读][下载 408K]
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临床观察

  • 组织蛋白酶B在甲状腺肿瘤组织中的表达及其意义

    王娜;于世鹏;伊鹏飞;

    目的探讨组织蛋白酶B(CathepsinB,CTSB)在甲状腺肿瘤组织中的表达及其与甲状腺肿瘤发生发展的相关性。方法采用荧光原底物法检测甲状腺癌、甲状腺腺瘤及正常甲状腺各30份组织标本中CTSB的活性,采用Western blot法检测各组织中CTSB蛋白的表达。结果甲状腺癌和甲状腺腺瘤组织中CTSB的活性及蛋白表达水平均显著高于正常甲状腺组织(P<0.05),而甲状腺癌组织中二者均显著高于甲状腺腺瘤组织(P<0.05)。结论 CTSB的表达与甲状腺肿瘤的发生发展密切相关。

    2010年12期 v.23 1370-1372页 [查看摘要][在线阅读][下载 194K]
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消息

  • 《中国预防医学杂志》征订征稿通知

    <正>《中国预防医学杂志》为中华人民共和国卫生部主管,中华预防医学会主办的预防医学与公共卫生领域权威性学术期刊,国内外公开发行(中国标准刊号:ISSN1009-6639,CN11-4529/R;邮发代号:2-764)。庄辉院士任主编,王陇德会长任

    2010年12期 v.23 1372页 [查看摘要][在线阅读][下载 46K]
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实验技术

  • 结核分枝杆菌分泌蛋白抗原免疫电化学检测方法的建立

    肖大平;史惠强;邵洁;戚前明;

    目的建立一种新型、快速的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)分泌蛋白抗原85B(Ag85B)免疫电化学检测方法。方法先在玻碳电极(Glassy carbon electrode,GCE)表面电沉积一层纳米金,通过静电吸附固定普鲁士蓝壳聚糖(Chitosan-prussian blue,CS-PB)纳米复合物,利用壳聚糖的氨基功能团固定微米金磁微粒(Au-Fe3O4),再吸附兔抗Ag85B多克隆抗体,制得电流型免疫传感器。测定电极制备过程的电化学特征,通过原子力显微镜对免疫传感器进行表征,确定免疫传感器的最佳pH值、反应时间、检测线性响应范围及检测下限,验证该方法的特异性和重复性,并与ELISA检测结果进行比较。结果原子力显微镜结果表明,Au-Fe3O4与兔抗Ag85B多克隆抗体可连接到电极表面。在最佳pH值(pH7.5)和反应时间(12min)的条件下,该传感器响应的峰电流值与Ag85B浓度在10~500ng/ml的范围内呈良好的线性关系,检测下限可达10ng/ml,且具有良好的特异性和重复性。免疫传感器与ELISA检测结果的吻合性较好。结论已成功制备了检测Ag85B的免疫传感器,该传感器制备简单,操作便捷,灵敏度高。

    2010年12期 v.23 1373-1376+1383页 [查看摘要][在线阅读][下载 334K]
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  • 精制马抗H5N1禽流感病毒免疫球蛋白疏水层析方法的优化

    刘冰;王承宇;杨松涛;高玉伟;王铁成;夏咸柱;

    目的对精制马抗H5N1禽流感病毒免疫球蛋白疏水层析方法进行优化。方法将胃蛋白酶直接加入制备好的高效价马抗H5N1禽流感病毒血清进行消化裂解,再加入饱和度为26%的硫酸铵溶液,盐析沉淀离心一次后,直接进行疏水层析进一步纯化F(ab′)2抗体。结果连续洗脱依次出现6个蛋白峰,50min左右,洗脱峰3开始出现,其中含大部分F(ab′)2抗体,此时硫酸铵摩尔浓度约为1.0~1.1mol/L。阶段梯度洗脱,当硫酸铵摩尔浓度降至1.0mol/L时,大量F(ab′)2片段被洗脱下来,纯度达90%以上。结论优化了精制马抗H5N1禽流感病毒免疫球蛋白的疏水层析方法,降低了硫酸铵用量,减少了离心次数,生产周期也大大缩短。

    2010年12期 v.23 1377-1379页 [查看摘要][在线阅读][下载 254K]
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消息

  • 《中国药学大辞典》(2008年版)征订启事

    <正>《中国药学大辞典》收集词汇近26000条,涉及药用动物、植物、矿物、中药和方剂、药用化学物质、化学药物、药剂学、药物化学、中药学和生药学、微生物药学、生物药学、药物分析、药理学和毒理学、医院药学、临床药学、药学史、药事管

    2010年12期 v.23 1379页 [查看摘要][在线阅读][下载 47K]
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实验技术

  • 肝癌患者血浆端粒酶逆转录酶基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

    杨英俊;陈辉;

    目的建立实时荧光定量PCR法检测肝癌患者血浆端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因水平。方法提取人全血基因组DNA,常规PCR扩增hTERT基因,与pMD18-T载体连接,转化入大肠杆菌DH5α,提取重组质粒pMD18-T-hTERT作为定量检测的标准品,绘制实时荧光定量PCR标准曲线,并进行方法的验证。采用建立的实时荧光定量PCR法检测肝癌患者和健康人血浆中hTERT DNA的水平。结果重组质粒pMD18-T-hTERT经PCR及测序鉴定证明构建正确。以该重组质粒为标准品绘制的标准曲线在103~108copies/μl浓度范围内线性关系良好,相关系数R2为0.997;批内及试验间变异系数分别为0.86%和1.44%;特异性良好。肝癌患者血浆hTERT DNA水平显著高于健康人(P<0.05)。结论已成功建立了肝癌患者血浆hTERT DNA的实时荧光定量PCR检测方法,为临床通过检测血浆hTERT DNA辅助诊断肝癌提供了良好的工具。

    2010年12期 v.23 1380-1383页 [查看摘要][在线阅读][下载 245K]
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综述

  • 重组人干扰素的研究进展

    赵广荣;

    重组人干扰素(Recombinant human interferon,rhuIFN)是一类抗病毒、抗肿瘤和多发性硬化调节免疫的重要生物制品。自1957年发现干扰素以来,人们不断采用新技术对干扰素分子结构进行改造,先后研发了原型干扰素、保守干扰素、聚乙二醇修饰干扰素等几十个品种,目前已批准十余个一类新药干扰素上市。本文在回顾干扰素药物历史的基础上,对化学修饰改型干扰素、融合干扰素、杂合干扰素等的研究进展作一综述。

    2010年12期 v.23 1384-1388页 [查看摘要][在线阅读][下载 202K]
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综述

  • 辛德毕斯病毒载体的研究进展

    连海;

    辛德毕斯病毒(Sindbis virus,SINV)是一种具有广泛宿主嗜性的正链RNA病毒,能够在许多脊椎动物和无脊椎动物细胞中有效复制。其单股基因组RNA被分成两个开放阅读框(ORF),第1个ORF编码非结构蛋白,负责病毒RNA的转录和复制;第2个ORF在亚基因组启动子控制下编码病毒结构蛋白,负责病毒RNA的包裹和病毒粒子的组装。近年来,许多基于SINV的复制子载体已被开发,这些载体能够自我复制,但只有在与表达结构蛋白的辅助RNA共转染时,才能包装成病毒样粒子。目前,SINV复制子载体已广泛应用于疫苗开发和癌症基因治疗,能够激发有效的体液免疫和细胞免疫反应。本文就SINV载体的研究进展作一综述。

    2010年12期 v.23 1389-1391页 [查看摘要][在线阅读][下载 135K]
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  • 早孕因子的研究进展

    吴晓亮;练玉银;王家骥;

    早孕因子(Early pregnancy factor,EPF)是一种具有免疫抑制和生长因子特性的分泌性蛋白质,在受精后的孕血清及某些恶性肿瘤患者血清中均能检测到。EPF与伴侣素10(Chaperonin 10,Cpn10)是同源的。EPF首先通过玫瑰花结抑制试验在哺乳动物的孕血清中被发现。EPF单克隆抗体在妊娠诊断、肿瘤诊断和治疗等方面均有广阔的应用潜力。本文就EPF的来源、化学结构和生化特性、分离纯化及检测、作用及应用等研究进展作一综述。

    2010年12期 v.23 1392-1396页 [查看摘要][在线阅读][下载 190K]
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