中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

基础研究

  • 重组结核杆菌Ag85a-ESAT6融合蛋白的原核表达、纯化及其生物活性

    张群;朱琳;楼觉人;

    目的原核表达、纯化重组结核杆菌Ag85a-ESAT6融合蛋白,并检测其生物活性。方法将Ag85a-ESAT6融合基因片段插入pET-28a(+)载体中,构建重组质粒pET-28a-Ag85a-ESAT6,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物在变性条件下经Ni-琼脂糖凝胶层析柱纯化复性后,在体外对经5种不同类型的表达结核杆菌Ag85a和ESAT6的重组痘苗病毒免疫的小鼠脾淋巴细胞进行刺激,以MTT法检测脾淋巴细胞的增殖反应。结果重组质粒pET-28a-Ag85a-ESAT6经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约41000,主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的55.65%;纯化复性的重组融合蛋白纯度达95%以上,表达量约为1.2g/L发酵液,且具有良好的反应原性;与空痘苗病毒或生理盐水免疫的小鼠相比,5种重组痘苗病毒免疫的小鼠脾淋巴细胞与Ag85a-ESAT6融合蛋白共培养后,增殖活性明显升高(P<0.01)。结论成功利用原核系统表达了结核杆菌Ag85a-ESAT6融合蛋白,纯化复性的Ag85a-ESAT6融合蛋白具有生物学活性。

    2010年11期 v.23 1153-1157页 [查看摘要][在线阅读][下载 317K]
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临床观察

  • 15例RhD阴性基因的多态性检测

    孙喜东;鲁淋;

    <正>Rh血型系统是人类红细胞血型系统中最复杂和最富有多态性的一个系统,其临床意义仅次于ABO血型系统。在Rh血型系统中,抗原抗体不匹配能引起溶血性输血反应、新生儿溶血病和自身免疫性溶血性贫血。Rh血型系统具有高度的

    2010年11期 v.23 1157页 [查看摘要][在线阅读][下载 52K]
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基础研究

  • 中国百日咳鲍特菌ptxS1和prn基因多态性分析

    张柳;徐颖华;赵建宏;徐运强;张庶民;

    目的分析我国近50年来分离的百日咳鲍特菌抗原百日咳毒素(Pertussistoxin,PT)S1亚基(ptxS1)和百日咳黏附素(Pertactin,prn)基因多态性。方法收集85株百日咳杆菌,分别进行ptxS1和prn基因的PCR扩增和测序,并对序列进行比较分析。结果共发现4个ptxS1基因型和6个prn基因型的百日咳杆菌。自20世纪60年代,非疫苗型ptxS1A菌株逐渐取代疫苗型菌株;含有prn2和prn3新基因型的菌株出现在2000年以后。基因的系统进化树显示,菌株ptxS1和prn基因型的核苷酸和氨基酸序列的同源性分别在97%以上。结论我国近50年流行的百日咳临床分离菌株ptxS1和prn基因存在抗原漂移现象,本研究为加强我国百日咳的流行病学监控与新型无细胞百日咳疫苗的研发奠定了基础。

    2010年11期 v.23 1158-1162页 [查看摘要][在线阅读][下载 491K]
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  • 免疫蛋白质组学技术筛选布鲁菌高免疫原性膜蛋白

    杨艳玲;付晓霞;盛雪玲;王兴龙;

    目的建立布鲁菌免疫蛋白质组学方法,从羊布鲁菌膜蛋白中筛选免疫候选抗原。方法提取羊布鲁菌16M膜蛋白,进行双向电泳(2-DE)分离,分别用牛、羊布鲁菌感染的阳性血清进行Westernblot分析,筛选出的免疫显性蛋白点进行LC-MS/MS质谱鉴定,并进行生物信息学分析。结果筛选出56个免疫显性蛋白点,鉴定成功35个,其中有12个蛋白是能够被牛、羊2种血清共同识别的抗原。数据检索显示,这些蛋白主要涉及布鲁菌的能量代谢,蛋白质、氨基酸合成,脂肪酸代谢及糖和辅酶的合成等生物过程。结论利用免疫蛋白质组学技术成功筛选出羊布鲁菌高免疫原性膜蛋白,为布鲁菌亚单位疫苗的研制提供了大量的候选抗原。

    2010年11期 v.23 1163-1167+1177页 [查看摘要][在线阅读][下载 419K]
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  • 靶向人Gadd45α基因的shRNA慢病毒载体对缺氧致人脐静脉内皮细胞生物学功能损伤的影响

    罗欣;刘丹丹;漆洪波;姚珍薇;陈国庆;

    目的研究靶向人生长阻滞和DNA损伤45α(Growth arrest and DNA damage 45 alpha,Gadd45α)基因和表达绿色荧光蛋白(Green fluorescert protein,GFP)的shRNA慢病毒载体对缺氧致人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelialcells,HUVECs)表达上调的Gadd45α的沉默作用,初步阐明Gadd45α在缺氧应激致HUVECs生物学功能损伤过程中的作用。方法慢病毒包装后感染HUVECs,筛选最适MOI及感染时间。感染72h后,采用Real-time PCR和Western blot检测细胞中Gadd45αmRNA和蛋白的表达;流式细胞术检测细胞的凋亡率;Transwell小室实验检测细胞的迁移率;ELISA检测细胞sFlt-1和sEng的分泌水平。结果包装后慢病毒载体的滴度为1×108TU/ml,最适MOI为20,最适感染时间为72h,对HUVECs的感染效率约为80%。Gadd45α shRNA慢病毒载体对Gadd45α基因的沉默效率可达80%,阴性对照慢病毒载体对Gadd45α的表达无抑制作用。缺氧可致HUVECs中Gadd45α的表达上调,靶向Gadd45α基因的shRNA慢病毒颗粒可有效抑制缺氧致HUVECs的凋亡,减少sFlt-1及sEng的释放,同时增强其体外迁移能力,与缺氧组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。Gadd45α蛋白的表达水平与sFlt-1及sEng的分泌水平呈正相关(r1=0.89,r2=0.77,P均<0.05)。结论沉默Gadd45α基因对缺氧应激条件下的HUVECs生物学功能具有保护作用;Gadd45α可能是一个关键上游位点,参与子痫前期时sFlt-1及sEng的释放。

    2010年11期 v.23 1168-1172页 [查看摘要][在线阅读][下载 454K]
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  • 抗体阻断表面黏附分子DNAM-1和LFA-1对人自然杀伤细胞肿瘤杀伤活性的抑制作用

    商迎辉;张丽;劳凤学;

    目的探讨抗体阻断表面黏附分子DNAM-1和LFA-1对体外扩增的人自然杀伤(Natural killer,NK)细胞的肿瘤杀伤活性的影响。方法体外活化人外周血单个核细胞来源的NK细胞,并检测其表面黏附分子DNAM-1和LFA-1的表达水平;通过Trans-well阻隔试验,阻断NK细胞与靶细胞接触,考察细胞-细胞直接接触对NK细胞杀伤活性的影响;通过NK细胞毒性试验,引入抗DNAM-1单克隆抗体和抗LFA-1单克隆抗体,阻断相应信号途径,考察相关黏附分子在NK细胞肿瘤杀伤过程中的作用。结果体外活化的NK细胞高表达表面黏附分子DNAM-1和LFA-1。阻断NK细胞与靶细胞接触,NK细胞的肿瘤杀伤效应大大降低。应用单克隆抗体阻断DNAM-1或LFA-1信号途径,可显著降低NK细胞肿瘤的杀伤效应;联合阻断DNAM-1和LFA-1信号途径,可进一步降低NK的细胞杀伤效应。结论细胞-细胞间直接接触是NK细胞发挥肿瘤杀伤效应的重要机制,表面黏附分子DNAM-1和LFA-1介导的信号途径对维持NK细胞肿瘤杀伤活性具有重要意义。

    2010年11期 v.23 1173-1177页 [查看摘要][在线阅读][下载 338K]
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  • 多效生长因子对Schlafen3和Schlafen4基因表达的负调控作用

    周乔丹;米粲;胡迎春;李刚;吴德昌;霍艳英;

    目的研究多效生长因子(Pleiotrophin,PTN)对Schlafen3(Slfn3)和Schlafen4(Slfn4)基因表达的负调控作用。方法采用RT-PCR和Northern blot法检测对照细胞(表达Ptn的Pten-/-小鼠胚胎成纤维细胞)与Ptn-/-细胞(Ptn表达沉默的Pten-/-小鼠胚胎成纤维细胞)中Slfn3/Slfn4基因的表达;分析人脑胶质瘤U87MG细胞和人乳腺癌MDA-MB-231细胞中Ptn与Slfn3/Slfn4基因表达水平的关系;在Ptn-/-细胞培养液中加入50ng/mlPTN,检测Slfn3/Slfn4基因的表达;用Ptn-/-细胞培养液作用对照细胞后,检测Slf3/Slf4基因的表达。结果 Ptn-/-细胞中Slfn3/Slfn4基因高表达;在U87MG和MDA-MB-231细胞中,Ptn与Slfn3/Slfn4基因的表达呈负相关;在Ptn-/-细胞培养液中加入PTN后,Slfn3/Slfn4基因的表达受到抑制;Ptn-/-细胞培养液对Slfn3/Slfn4基因的表达具有诱导作用。结论 PTN对Slfn3/Slfn4基因的表达具有负调控作用。

    2010年11期 v.23 1178-1181页 [查看摘要][在线阅读][下载 287K]
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消息

  • 欢迎登录《中国生物制品学杂志》网站

    <正>尊敬的专家、读者、作者及各位同仁:您们好!自2007年8月起,《中国生物制品学杂志》网站(www.zgswj.com.cn,中文域名:中国生物制品学杂志.com)正式运行。本站网页有杂志简介、在线投稿、稿件查询、过期目录、广告合作等您所需要的信息,欢迎登录。

    2010年11期 v.23 1181页 [查看摘要][在线阅读][下载 45K]
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基础研究

  • Tgo DNA聚合酶的表达、纯化及其扩增性能

    盛彦敏;于未来;吴庠玉;赵华;

    目的表达、纯化Tgo DNA聚合酶,并检测其扩增性能。方法采用PCR技术从嗜热古细菌Thermococcus gorgonarius中扩增Tgo DNA聚合酶基因,并克隆至含His-Tag靶序列的pET101载体中,转化E.coliBL21Sta(rDE3),IPTG诱导表达。目的蛋白纯化后经SDS-PAGE分析,并利用标准pfu酶,采用对比法初略测定酶活性;以质粒pUC19为模板,用Tgo酶和pfu酶进行PCR扩增,比较二者的扩增效率,采用改进的蓝白试验法检测Tgo酶的扩增忠实性。结果 PCR扩增的Tgo DNA聚合酶基因大小约2300bp,根据测序获得的基因序列推导出的氨基酸序列与GenBank中公布的序列一致。表达的目的蛋白为可溶性蛋白,相对分子质量约为89000,表达量为350μg/gE.coli,50%甘油保存的酶活性约为5U/μl。Tgo酶和pfu酶的扩增产出率和忠实性均相当。结论成功表达并纯化了Tgo DNA聚合酶,其扩增性能与pfu酶相当。

    2010年11期 v.23 1182-1184+1189页 [查看摘要][在线阅读][下载 686K]
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  • 圆弧青霉碱性脂肪酶在毕赤酵母中的高效表达

    谭中标;邬敏辰;张慧敏;李剑芳;

    目的在毕赤酵母(Pichia pastoris)中高效表达圆弧青霉碱性脂肪酶(Alkaline lipase,LipⅠ)。方法采用RT-PCR法从圆弧青霉PG37中扩增lipⅠ基因的cDNA片段,克隆入表达质粒pPIC9K中,构建重组表达质粒pPIC9K-lipⅠ,转化入毕赤酵母GS115,筛选高拷贝重组子GS115/lipⅠ,甲醇诱导表达,并对诱导表达条件进行初步优化。结果 GS115/lipⅠ在培养基初始pH6.0,甲醇添加量1.0%的BMMY培养基中,于30℃诱导96h,发酵液上清中LipⅠ的活性为10.5U/ml。在培养基初始pH9.0,甲醇添加量1.0%的BMMY培养基中,24℃诱导120h,GS115/lipⅠ发酵液上清中LipⅠ的活性最高,达407U/ml。结论在毕赤酵母GS115中高效表达了具有活性的圆弧青霉LipⅠ。

    2010年11期 v.23 1185-1189页 [查看摘要][在线阅读][下载 351K]
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  • 神经纤毛蛋白1基因RNA干扰质粒对胃腺癌细胞SGC7901增殖和凋亡的影响

    连海峰;吴小翎;

    目的探讨神经纤毛蛋白1(Neuropilin1,NRP1)基因RNA干扰质粒对胃腺癌细胞SGC7901增殖和凋亡的影响。方法构建NRP1基因特异性shRNA表达质粒,经脂质体介导转染入人胃腺癌SGC7901细胞。采用Western blot法检测细胞中NRP1蛋白的表达水平,应用流式细胞术和Annexin-V-FITC/PI法检测细胞的增殖水平和凋亡率。结果经酶切及测序鉴定证明,shRNA-NRP1质粒构建正确,转染SGC7901细胞48h后,能有效抑制NRP1蛋白的表达,G0/G1期细胞百分比显著升高,S期细胞显著减少,细胞凋亡率增加。结论 shRNA-NRP1质粒能有效抑制胃腺癌SGC7901细胞株NRP1蛋白的表达,细胞周期阻滞在G0/G1期,从而降低细胞的增殖水平,诱导细胞进入凋亡期。

    2010年11期 v.23 1190-1192+1197页 [查看摘要][在线阅读][下载 317K]
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  • 铁载体受体蛋白IroN的原核表达及其对肠道外致病性大肠杆菌感染小鼠的免疫保护作用

    佟春玉;于永忠;曹宏伟;张旭;陈龙欣;

    目的原核表达重组铁载体受体蛋白IroN,并探讨其对小鼠肠道外致病性大肠杆菌群(Extraintestinal pathogenic E.coli,ExPEC)感染的免疫保护作用。方法从E.coliJ96基因组DNA中扩增IroN基因,克隆入原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达质粒pET-32a-IroN,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组IroN蛋白纯化后,经皮下免疫BALB/c小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清和尿液中的抗体水平;以E.coliJ96菌株分别经腹腔和尿道途径攻击免疫小鼠,计算保护率并计数细菌数。结果重组IroN蛋白的表达量为32%,纯化后纯度超过85%,且具有良好的反应原性。重组IroN蛋白经皮下免疫小鼠,可诱导小鼠血清产生高水平的特异性IgG抗体,在尿液中未检测到特异性IgA抗体。重组IroN蛋白对腹腔攻击ExPEC感染小鼠的保护率为81.8%(P<0.05);重组IroN蛋白免疫的小鼠经尿道攻击ExPEC后,肾脏分离的菌落数比对照组(PBS免疫)降低了100倍以上(P<0.05),但膀胱和尿液中的菌落数两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论已原核表达并纯化了IroN蛋白,其对ExPEC感染小鼠的腹腔和肾脏具有显著的保护作用,但对膀胱感染无保护作用。

    2010年11期 v.23 1193-1197页 [查看摘要][在线阅读][下载 325K]
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  • 不同品种马属动物的免疫效果分析

    刘根顺;姚晓东;王登海;王海燕;

    目的分析不同品种马属动物的免疫效果。方法对不同地区、不同品种的马属动物进行分群,采用相同的破伤风类毒素及免疫方法免疫,分析不同群之间的抗毒素效价、免疫成功率、形成免疫耐受的程次、马匹淘汰率的差异及平均免疫寿命。结果不同群之间免疫效果存在差异,身体素质和健康状况不同的马匹,免疫效果不同。结论要生产高效价的免疫血清,应选择高质量的马匹,可采用育种方法培育出适合免疫血清生产用的优良马匹。

    2010年11期 v.23 1198-1200页 [查看摘要][在线阅读][下载 126K]
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  • 旋毛虫成虫与肌幼虫排泄分泌抗原蛋白组分的比较分析

    马鸣旺;张志兰;申丽洁;董明治;

    目的比较大理猪源旋毛虫(Trichinela spiralis)成虫与肌幼虫排泄分泌抗原(Excretory-secretory antigens,ES)的蛋白组分差异,并进一步分析其反应原性,为分离筛选出免疫原性和反应原性强的旋毛虫抗原成分奠定基础。方法分别收集和纯化旋毛虫成虫、肌幼虫虫体,制备ES,采用SDS-PAGE分析成虫和肌幼虫ES蛋白成分,Western blot分析其反应原性。结果经SDS-PAGE分析,旋毛虫成虫ES显示17条蛋白条带,相对分子质量范围在120000~14000之间,其中主带6条,相对分子质量分别为120000、64000、43000、40000、35000、33000;旋毛虫肌幼虫ES显示20条蛋白条带,相对分子质量范围在112000~10000之间,其中主带11条,相对分子质量分别为112000、66000、56000、55000、53000、49000、45000、43000、25000、21000、10000。Westernblot分析表明,旋毛虫成虫ES抗原显示7条反应带,相对分子质量分别为43000、40000、35000、27000、19000、18000、14000,其中相对分子质量43000、40000、27000、18000的条带着色明显;旋毛虫肌幼虫ES抗原显示14条反应带,相对分子质量范围在74000~12000之间,其中相对分子质量53000、49000、45000、43000、35000、27000、18000、12000的条带显色明显。结论旋毛虫成虫和肌幼虫ES抗原蛋白组分均复杂,有共同组分,也有不同组分,旋毛虫ES抗原具有较强的反应原性,是旋毛虫病研究的重要候选抗原。

    2010年11期 v.23 1201-1203页 [查看摘要][在线阅读][下载 174K]
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  • 植物乳杆菌组氨酸脱羧酶基因的克隆及序列分析

    于长青;王长远;满永刚;王颖;

    目的克隆植物乳杆菌组氨酸脱羧酶(Histidine decarboxylase,HDC)基因,并进行序列分析。方法根据GenBank中登录的乳酸菌HDC基因序列设计引物,提取植物乳杆菌Uvs44基因组DNA进行PCR扩增及克隆,并与其他乳杆菌HDC基因的核苷酸序列进行同源性分析。结果克隆的植物乳杆菌HDC基因大小约为900bp,其核苷酸序列与Lactobacillus sakei同源性最高,为99.9%;与Lactobacillus buchneri的同源性最低,为89.1%。32~489bp为高变区序列,T和C发生的替换较多。结论为产组胺乳酸菌的检测提供了理论依据,也为构建HDC基因缺失工程菌奠定了基础。

    2010年11期 v.23 1204-1206页 [查看摘要][在线阅读][下载 406K]
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  • RNA干扰BC047440基因表达对HCT-8细胞增殖能力的影响

    唐亮;赵权;宫鹏涛;李建华;杨举;张西臣;

    目的探讨RNA干扰结肠癌相关基因BC047440的表达对结肠癌细胞HCT-8增殖能力的影响。方法将BC047440基因shRNA干扰质粒pGPU6/GFP/Neo-BC047440-331(a1)、pGPU6/GFP/Neo-BC047440-451(a2)、pGPU6/GFP/Neo-BC047440-615(a3)、pGPU6/GFP/Neo-BC047440-756(a4)采用脂质体法转染结肠癌细胞HCT-8,荧光显微镜观察转染效率,荧光定量PCR法检测细胞BC047440基因mRNA的表达水平,MTT法分析细胞的增殖活性。结果细胞的转染效率为53%;干扰质粒a1、a2、a3、a4转染的HCT-8细胞BC047440基因mRNA的表达水平分别下降了36.1%、47.0%、53.8%和63.3%,a4质粒的干扰效率最高;细胞的增殖能力也明显下降。结论 BC047440基因RNA干扰质粒可明显抑制HCT-8细胞BC047440基因mRNA的表达及细胞的增殖,可能成为抑制结肠癌细胞生长的新基因。

    2010年11期 v.23 1207-1209+1216页 [查看摘要][在线阅读][下载 357K]
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  • 干扰素α2b基因真核表达质粒的构建及表达

    陈奋则;王妍;朱一松;高仁均;

    目的构建干扰素α2b(IFNα2b)基因真核表达质粒,并在CHO-dhfr-细胞中表达。方法从DH5α-pbv220-IFNα2b工程菌中扩增IFNα2b基因片段,克隆入psv-dhfr质粒中,构建重组真核表达质粒psv2-dhfr-IFNα2b,转染至CHO-dhfr-细胞中,经MTX加压筛选,获得稳定生长的单克隆细胞株。采用Wish细胞病变抑制法检测转染细胞中IFNα2b的抗病毒活性;提取细胞基因组DNA,进行PCR鉴定。结果重组真核表达质粒psv2-dhfr--IFNα2b经PCR及双酶切鉴定证明构建正确;转染后的重组细胞表达的IFNα2b具有抗病毒活性,且活性较强;以转染细胞基因组DNA为模板,可扩增出IFNα2b基因条带。结论已成功构建IFNα2b基因真核表达质粒,并在CHO-dhfr-细胞中表达了具有生物学活性的IFNα2b蛋白,为进一步对IFNα2b进行真核表达的研究奠定了基础。

    2010年11期 v.23 1210-1213页 [查看摘要][在线阅读][下载 411K]
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消息

  • 《免疫学前沿进展》征订启事

    <正>由中国免疫学会理事长曹雪涛院士牵头、全国免疫学各领域知名专家联合编著的《免疫学前沿进展》,于2009年12月由人民卫生出版社正式出版。免疫学是一门重要的基础学科,与临床医学紧密相关,是生物医学乃至整个生命科学中发展最快的学科之一。《免疫学前沿进展》是国内第一本及时

    2010年11期 v.23 1213页 [查看摘要][在线阅读][下载 44K]
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基础研究

  • 破伤风毒素重组质粒的构建及应用

    姜昌丽;谭德勇;滕毅;马洁;瞿良;程罕松;王惠萱;

    目的构建含破伤风毒素(Tetanus toxin,TT)特异性基因片段的重组质粒,并对其进行应用。方法采用PCR方法,以破伤风灭活菌株基因组DNA为模板,扩增TT的3个特异性基因片段,连接至pMD19-TSimple载体,构建重组质粒pMD19-TTx,以其为阳性参照对模拟破伤风危险品进行PCR检测。结果 PCR及测序证明重组质粒构建正确,以其为阳性参照可快速检出破伤风模拟危险品。结论成功构建了TT重组质粒pMD19-TTx,为破伤风梭菌的检测提供了阳性参照。

    2010年11期 v.23 1214-1216页 [查看摘要][在线阅读][下载 196K]
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预防制品

  • Asia 1型FMDV复合多表位亚单位疫苗在毕赤酵母中的表达及其免疫原性

    胡博;鲁会军;李霄;叶明;朱战波;杜寿文;袭莹;王婧;韩佳丽;李洋;金扩世;田明尧;李昌;金宁一;

    目的构建以霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)为分子佐剂的Asia1型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)复合多表位亚单位疫苗,在毕赤酵母中进行表达,并评价其免疫原性。方法构建毕赤酵母表达质粒pPIC9K-P1/2A-CTB-TEpi,转化至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达,表达产物经硫酸铵沉淀法纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。将纯化的P1/2A-CTB-TEpi蛋白和FMD灭活疫苗分别免疫BALB/c小鼠,以注射PBS作为对照,分别于0、21d各免疫1次。每周尾静脉采血,分离血清,ELISA法检测血清抗体水平;第2次免疫后10d,处死小鼠,分离脾脏淋巴细胞,进行淋巴细胞增殖试验和IFNγELISPOT检测。结果目的蛋白在毕赤酵母中经诱导表达后可分泌到培养上清中,在相对分子质量约为82600(P1/2A)和40500(CTB-TEpi)处可见2条特异性蛋白表达条带,占上清液中可溶蛋白的21%。纯化后的目的蛋白P1/2A和CTB-TEpi的比例约为1∶2,且具有良好的反应原性。P1/2A-CTB-TEpi蛋白免疫小鼠产生了较强的体液免疫和细胞免疫反应,其特异性血清抗体水平与灭活疫苗组差异无统计学意义(P>0.05),而淋巴细胞增殖水平和IFNγ分泌水平显著高于灭活疫苗组(P<0.01)。结论构建了以CTB为分子佐剂的Asia1型FMDV复合多表位亚单位疫苗,其免疫原性良好,为FMD多表位疫苗和亚单位疫苗的研究奠定了基础。

    2010年11期 v.23 1217-1221+1225页 [查看摘要][在线阅读][下载 447K]
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  • 鳜致病性嗜水气单胞菌灭活疫苗原液生产工艺的建立

    陶家发;赖迎迢;任燕;巩华;康光辉;张悠;石存斌;吴淑勤;

    目的建立鳜致病性嗜水气单胞菌灭活疫苗原液的生产工艺。方法分别采用摇瓶和5L发酵罐于28℃培养嗜水气单胞菌GYK1株,测定不同时间菌液的A650值;培养菌液添加不同浓度的甲醛液,检测不同时间的灭活效果;依次采用摇瓶、种子罐、发酵罐培养,甲醛灭活,制备灭活疫苗原液,并进行安全性和效力试验。结果摇瓶培养时,培养菌液18h进入生长稳定期,24h左右达高峰;用5L发酵罐培养时,培养菌液8h即进入生长稳定期,10h左右达高峰;0.30%的甲醛,37℃,24h可完全灭活菌液,且甲醛残留量较低;制备的灭活疫苗原液安全性良好,效力合格。结论初步建立了鳜致病性嗜水气单胞菌灭活疫苗原液的生产工艺。

    2010年11期 v.23 1222-1225页 [查看摘要][在线阅读][下载 208K]
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治疗制品

  • 小檗碱对高脂血症兔脂代谢及肝脏LDLR和SR-B1基因表达的影响

    金磊;何琦;周岐新;杨俊霞;

    目的研究小檗碱(Berberine,Ber)对高脂血症兔脂代谢及肝脏低密度脂蛋白受体(Low density lipoprotein re-ceptor,LDLR)和B类1型清道夫受体(Scavenger receptor B1,SR-B1)基因表达的影响。方法取新西兰大耳白兔40只,以基础饲料喂养1周后,随机选取8只为普通饲料组(ND),继续以基础饲料喂养;其余32只以高脂饲料喂养;复制高脂血症兔模型。建模8周后,将模型动物随机分为4组:高脂饲料组(HFD)、高脂饲料+非诺贝特组(FD)、高脂饲料+低剂量Ber干预组(BLD)组和高脂饲料+高剂量Ber干预组(BHD),继续喂养8周,采用全自动生化分析仪测定兔血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量;观察肝脏组织病理学变化;实时荧光定量PCR法检测肝脏组织LDLR和SR-B1基因表达的变化。结果 HFD组TC、TG和LDL-C的表达水平较ND组明显升高(P<0.01),肝脏发生中度脂肪变性和水样变性的病理学改变,而经Ber干预后,血清中TC、TG和LDL-C的表达的水平较HFD组显著降低(P<0.01),且肝细胞脂肪变性和水样变性程度较HFD组有所减轻;HFD组LDLR和SR-B1基因mRNA的表达水平明显低于ND组(P<0.01),经Ber干预后,LDLR和SR-B1基因mRNA的表达水平则较HFD组明显上调(P<0.01)。结论 Ber具有明显的调血脂作用,其作用机制可能是通过上调肝脏LDLR和SR-B1基因的表达,进而抑制肝脏中胆固醇的合成。

    2010年11期 v.23 1226-1229+1234页 [查看摘要][在线阅读][下载 371K]
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  • 恩度对横纹肌肉瘤PLA-802细胞生长的抑制作用及其机制

    杨清平;周知;殷清华;罗小红;李胜难;向美环;张雄;

    目的探讨人血管内皮抑制素恩度(Endostar)对横纹肌肉瘤PLA-802细胞生长的抑制作用及其机制。方法将常规培养的横纹肌肉瘤细胞PLA-802分为对照组和恩度处理组(不同浓度处理不同时间),采用MTT法检测恩度对细胞生长的影响;流式细胞术检测细胞周期的变化;RT-PCR和Western blot法检测恩度对细胞内血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA和蛋白表达的影响;ELISA检测细胞培养液上清中VEGF的生成水平。结果恩度可抑制PLA-802细胞增殖及VEGF的表达和生成,且上述作用具有显著的浓度-时间依赖性。结论恩度能够抑制PLA-802细胞的生长,其机制可能与阻断VEGF的表达相关。

    2010年11期 v.23 1230-1234页 [查看摘要][在线阅读][下载 342K]
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  • 氨氯地平对小鼠肝癌H_(22)细胞细胞周期及相关蛋白表达的影响

    李卫平;黄文静;孙文娟;

    目的探讨氨氯地平对小鼠肝癌H22细胞细胞周期及相关蛋白表达的影响。方法用不同浓度的氨氯地平作用小鼠肝癌H22细胞,采用MTT法检测细胞的增殖水平,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,免疫组化及RT-PCR法检测细胞周期蛋白CyclinB1和肿瘤抑制基因p53在蛋白水平和基因水平的表达。结果氨氯地平(1.75×10-3、3.5×10-3、7×10-3、14×10-3、28×10-3mg/ml)作用24、36、48h,均可抑制细胞增殖,作用48h的半数抑制浓度(IC50)为13.4μmol/L;氨氯地平对小鼠肝癌H22细胞细胞周期G2期具有阻滞作用且可使细胞发生凋亡;氨氯地平作用后的小鼠肝癌H22细胞周期蛋白CyclinB1的表达明显降低,p53表达明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论氨氯地平能显著抑制小鼠肝癌H22细胞增殖,并通过下调G2期周期蛋白CyclinB1水平和上调肿瘤抑制基因p53的表达而达到抗肿瘤效果。

    2010年11期 v.23 1235-1238+1243页 [查看摘要][在线阅读][下载 429K]
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诊断制品

  • 多聚赖氨酸为载体的聚合物标记物在丙型肝炎病毒核心抗原检测中的应用

    买制刚;雷明军;易俊波;陈少娟;

    目的探讨以多聚赖氨酸为载体的聚合物标记物在丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)核心抗原检测中的应用。方法以多聚赖氨酸作为载体,将HCV核心抗原单克隆抗体与辣根过氧化物酶(HRP)偶联形成聚合物标记物,同时制备过碘酸钠标记物,比较两种标记物中的抗体相对含量及抗体反应性;将两种标记物分别应用于ELISA和Western blot法检测HCV核心抗原中,比较二者的检测结果,并与市售试剂盒进行比较。结果通过竞争抑制和直接结合试验结果显示,当达到50%抑制率时,聚合物标记物和过碘酸钠标记物的游离抗体浓度分别为0.0019和0.0011mg/ml;当A403值为1.0时,聚合物标记物的稀释度为1:200000左右,而传统标记物为1:20000左右。聚合物标记物和过碘酸钠标记物应用于ELISA法,检测HCV核心抗原的最低检测限分别为2.0和10pg/ml,试验内、试验间变异系数均<10%,特异性良好,临床血清标本检测结果与市售试剂盒的符合率分别为97.0%和98.6%;在Western blot检测中,与过碘酸钠标记物相比,聚合物标记物至少可以提高检测灵敏度10倍。结论以多聚赖氨酸为载体的聚合物标记物可应用于HCV核心抗原的ELISA和Western blot检测,且能提高酶、抗体的比例,进而提高检测的灵敏度,防止漏检。

    2010年11期 v.23 1239-1243页 [查看摘要][在线阅读][下载 324K]
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临床观察

  • 慢性心力衰竭患者血浆脂联素与脑钠肽及左室重量指数的相关性

    刘洪岩;张金国;谭洪勇;

    目的探讨慢性心力衰竭(Chronic heart failure,CHF)患者血浆脂联素(Adiponectin,APN)水平的变化及其与脑钠肽(Brain natriuretic peptide,BNP)及左室重量指数(Left ventricular mass index,LVMI)的相关性,评价APN水平在预测心衰进程及预后中的价值。方法分别选取90例男性CHF患者及90名男性健康查体者(对照组),应用ELISA法测定血浆APN和BNP水平,通过超声心动图测定左室舒张末期室间隔厚度、左室后壁厚度、左室舒张末期内径、左室舒张末期容积和收缩末期容积,计算LVMI,比较CHF患者和对照组的APN、BNP和LVMI水平;不同病因所致CHF患者血浆APN和LVMI的水平;不同心功能患者血浆APN和BNP的水平;并进行APN与BNP及LVMI的相关性分析。结果 CHF患者血浆APN和BNP水平及LV-MI均明显高于对照组(P均<0.05);不同病因所致CHF患者的APN水平差异无统计学意义(P>0.05);NYHAⅣ患者血浆APN和BNP水平明显高于NYHAⅢ及NYHAⅡ患者(P均<0.05);APN与BNP和LVMI均呈正相关(r=0.528,P<0.001;r=0.269,P<0.05)。结论 CHF患者血浆APN水平随心功能的恶化而增高,并可能参与心肌重塑的病理生理过程,测定CHF患者血浆APN水平有可能作为预测CHF进程及评价预后的重要指标。

    2010年11期 v.23 1244-1247页 [查看摘要][在线阅读][下载 241K]
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消息

实验技术

  • 评价肺炎链球菌多糖结合疫苗效力的调理吞噬试验条件的优化

    刘倩;陈晓航;任克明;张轶;王玺;沈荣;

    目的优化评价肺炎链球菌多糖结合疫苗效力的调理吞噬试验(Opsonophagocytic assay,OPA)的条件。方法参考美国阿拉巴马大学的WHO指定实验室于2007年1月发布的A.02版实验规程,优化OPA的试验条件。分别以抗性和非抗性肺炎链球菌菌株作为靶细菌检测其对应型结合物受试血清的调理吞噬效价后,再与相应的ELISA效价比较,分析二者的相关性。结果 0.8%二甲基甲酰胺(DMF)诱导HL-60细胞分化4d后,细胞表面标志表达量分别为:CD11b和CD35≥55%、CD71≤15%,活细胞比例≥65%;各型肺炎链球菌工作种子批的复活率≥80%;补体的非特异性杀伤率为18%;各血清型均表现出良好的杀菌活性,且OPA法与ELISA法测定的血清抗体效价比较,相关系数和斜率非常接近。结论优化的OPA条件符合该试验要求,可用于肺炎链球菌荚膜多糖结合疫苗的效力评价。

    2010年11期 v.23 1248-1253页 [查看摘要][在线阅读][下载 482K]
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消息

  • 《医学免疫学实验技术》征订启事

    <正>我国首批国家级医学研究生规划教材之一的《医学免疫学实验技术》(主编柳忠辉),于2008年3月由人民卫生出版社出版。该书由国内16所大学从事相关领域研究的教授参编。全

    2010年11期 v.23 1253页 [查看摘要][在线阅读][下载 41K]
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实验技术

  • 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2缺失变异株与经典美洲型毒株基因芯片鉴别方法的建立

    郭焕成;席进;李江南;涂长春;

    目的建立高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)Nsp2缺失变异株与经典美洲型毒株基因芯片鉴别方法。方法根据高致病性PRRSV Nsp2缺失变异株与经典美洲型毒株(非缺失株)的核苷酸序列,设计扩增美洲型PRRSV保守序列和包含基因缺失区域的Nsp2基因片段的二重PCR引物,并设计长度为31~35nt的美洲型毒株通用寡核苷酸探针和非缺失株相对于变异株Nsp2基因缺失区域的探针,建立寡核苷酸芯片方法。检测该方法的特异性和灵敏度,并进行初步应用。结果通过杂交模式可清楚地区分经典毒株与缺失毒株;芯片探针与猪瘟病毒(Clas-sical swine fever virus,CSFV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV2)、猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)样品无非特异性杂交;芯片法与常规PCR法的灵敏度相近;对12份疑似高致病性PRRS猪病料的检测结果与常规PCR法一致。结论建立的芯片方法能够准确鉴别高致病性PRRSV Nsp2缺失变异株,可用于高致病性PRRSV的临床诊断和流行病学调查。

    2010年11期 v.23 1254-1259页 [查看摘要][在线阅读][下载 475K]
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  • TaqMan实时定量RT-PCR检测轮状病毒G4型

    陈继军;韩跃武;胡广宏;白慕群;周旭;

    目的应用基于TaqMan探针的实时定量RT-PCR检测轮状病毒(Rotavirus,RV)G4型VP7基因。方法从G1、G2、G3和G4型轮状病毒Vero细胞培养物中提取病毒总RNA,分别进行RT-PCR和实时定量RT-PCR,检测引物及探针的特异性;构建含轮状病毒G4型VP7基因的质粒,制备RNA参考品,绘制实时定量RT-PCR标准曲线;验证实时定量RT-PCR的灵敏度和精密性;对5个轮状病毒G4型培养物及G1、G2和G3型各3个病毒培养物进行检测,分析其实际应用性。结果以轮状病毒G4型VP7基因引物和探针只能从G4型轮状病毒总RNA中扩增出目的基因或检测到荧光信号的扩增,未在G1、G2、G3型轮状病毒总RNA中扩增出目的基因或检测到荧光信号的扩增;在2.34×107~2.34×103拷贝/μl范围内,反应扩增效率大于90%,R2大于0.98;该方法可检出100数量级的RNA样品,且试验内及试验间变异系数分别小于2.5%和4%;用建立的实时定量RT-PCR只检出5个轮状病毒G4型样品,而G1、G2、G3型样品均未检出。结论 TaqMan实时定量RT-PCR是一种灵敏度较高、特异性和精密性良好的定量检测轮状病毒G4型的方法。

    2010年11期 v.23 1260-1263页 [查看摘要][在线阅读][下载 233K]
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消息

  • 征稿

    <正>《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管,中华预防医学会和中国生物技术集团公司长春生物制品研究所主办,是中华预防医学会系列

    2010年11期 v.23 1263页 [查看摘要][在线阅读][下载 58K]
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实验技术

  • CHO宿主细胞DNA残留量检测方法的建立

    朱蓉;杜洪桥;谭洪兴;徐葛林;严家新;

    目的建立检测生物制品中CHO宿主细胞DNA残留量的方法,制备检测CHO细胞DNA残留量的内部参考品,为国家相关标准的制定和修订提供依据。方法分别采用酚:氯仿:异戊醇抽提、DNA提取试剂盒和高盐抽提3种方法提取CHO细胞DNA,比较3种方法的提取效果;用地高辛标记最佳方法提取的CHO细胞DNA探针,并优化标记体系,直接法检测探针的标记效率;采用3种方法处理CHO细胞DNA内部参考品(1组不作处理;2组加入牛血清白蛋白和蛋白酶K;3组按2组方法处理后,增加DNA抽提步骤),通过点杂交法,用标记的探针检测上述样品的灵敏度。结果高盐抽提法提取的CHO细胞DNA效果较好;体系4(DNA10μg,Vial416μl,总体积64μl)标记效率最高;经不同方法处理的1、2、3组CHO细胞DNA内部参考品的检测灵敏度分别为1pg、10pg和1ng。结论建立的地高辛标记CHO细胞DNA探针-点杂交检测CHO细胞DNA残留量的方法稳定可靠,可用于生物制品中CHO宿主细胞DNA残留量的检测。

    2010年11期 v.23 1264-1266页 [查看摘要][在线阅读][下载 206K]
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综述

  • 流感疫苗与格林-巴利综合征

    刘东辉;吴星;王军志;汪兴太;

    格林-巴利综合征(Guillan-Barré syndrome,GBS)是微生物(细菌和病毒等)感染或其他因素诱导所致的针对外周神经系统脱髓鞘炎的自身免疫反应。大范围接种H1N1流感疫苗所致严重GBS已引起人们对流感疫苗罕见不良反应的关注。本文就GBS的历史、临床特征、研究现状、与流感疫苗的相关性、流感疫苗接种的意义及其不良反应监控等作一综述。

    2010年11期 v.23 1267-1270页 [查看摘要][在线阅读][下载 162K]
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  • 金葡菌疫苗的研究进展

    陈益国;阳大庆;富宁;

    金葡菌(Staphylococcus aureus,SA)是人体感染的常见病原菌,随着抗菌素的广泛使用,其耐药性也日趋严重,临床用药面临着严峻的挑战。20世纪60年代以来,人们不断尝试各种防治SA感染的免疫手段,到目前为止,虽尚未发现一种行之有效的免疫手段应用于临床,但在探索过程中,人们发现,免疫预防与治疗具有广阔的应用前景。本文对近年来SA疫苗的研究进展作一综述。

    2010年11期 v.23 1271-1274页 [查看摘要][在线阅读][下载 220K]
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消息

  • 来自ATCC的基因靶向工具

    <正>ATCC发布三个新的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)滋养细胞系,用于支持未分化胚胎干细胞系和iPS细胞系的生长。DR4MEF(ATCCSCRC-1045TM)带有抗生素耐药基因,可以

    2010年11期 v.23 1274页 [查看摘要][在线阅读][下载 74K]
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专题报道

  • 疫苗热标签

    舒俭德;

    <正>疫苗瓶温度监测(Vaccine vial monitor,VVM或热标签)是PATH、WHO和UNICEF长期合作的研发成果,于1996年首次应用于口服脊髓灰质炎疫苗,并于2002年起逐渐用于其他疫苗。2007年5月,WHO

    2010年11期 v.23 1275-1276页 [查看摘要][在线阅读][下载 259K]
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