中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

基础研究

  • 抗人CD25人鼠嵌合抗体在CHO细胞中的稳定表达及初步鉴定

    潘勇兵;张爱华;胡迪超;杨晓明;

    目的在CHO细胞中稳定表达抗人CD25人鼠嵌合抗体,并对抗体活性进行初步鉴定。方法采用脂质体法将嵌合抗体真核表达质粒pOptiVEC-H和pcDNA3.3-L共转染CHO-DHFR-细胞,通过去除HT和在培养基中加入500μg/ml的Geneticine进行阳性克隆的筛选,有限稀释法对阳性克隆进行亚克隆,通过在培养基中加入浓度逐步增加的MTX提高克隆的抗体表达量。采用流式细胞术(FCM)检测嵌合抗体的抗原结合活性及人抗体重链Fc段、轻链κ链;提取细胞基因组进行PCR鉴定;抗体经超滤浓缩后,采用蛋白G亲和纯化法进行纯化,并进行Westernblot分析;体外连续培养细胞株2个月及冻存、复苏后,采用ELISA法检测抗体分泌的稳定性。结果获得稳定分泌嵌合抗体的细胞株1C1,ELISA检测抗体表达量为103ng/ml;PCR结果表明,表达的质粒已整合入细胞基因组中;FCM及Westernblot结果显示,嵌合抗体含有人抗体重链Fc段及轻链κ链,且保留了鼠抗体V区的抗原结合特异性;经蛋白G亲和纯化后,获得抗体220μg,纯度>97%;体外连续培养细胞株2个月及冻存、复苏后,抗体分泌保持稳定。结论获得了稳定表达人CD25人鼠嵌合抗体的CHO细胞株,其具有鼠源抗体的抗原结合特异性及人抗体的恒定区。

    2010年10期 v.23 1033-1037页 [查看摘要][在线阅读][下载 508K]
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  • 猪瘟病毒感染猪细胞因子和趋化因子的动态变化

    李素;王惟;张淑琴;董鹏;朱妍;郭焕成;涂长春;

    目的分析猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)感染猪细胞因子和趋化因子的动态变化。方法将健康猪随机分成2组:感染组和对照组,感染组经颈部肌肉注射CSFV石门株1×103TCID50/头,对照组注射等体积的生理盐水。感染后每日观察实验猪的临床症状。分别于感染前和感染后4、6、8d采血,分离外周血白细胞和血清,应用实时荧光定量RT-PCR检测外周血白细胞IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IFNγ、TNF-α和干扰素诱导蛋白10(Interferon inducible protein10,IP-10)mRNA的转录水平及全血中的病毒载量;应用ELISA法检测血清中各细胞因子的含量。结果 CSFV感染后,猪的临床症状分值逐渐升高,体温在第3天达最高,然后下降;白细胞总体呈明显下降趋势;细胞因子IL-1、IL-4、IL-6、TNF-α和IP-10的mRNA转录水平上调,IL-10的mRNA转录水平下调,IFNγ的mRNA转录水平基本未发生变化;CSFV感染猪在感染初期和症状明显期(4d和6d)的外周血的病毒载量呈明显上升趋势,而在濒死期(8d)病毒载量有所下降;CSFV感染后猪血清中的TNF-α含量上升,IL-4、IL-6、IL-8、IL-10和IFNγ的含量下降。结论猪瘟病毒感染猪TNF-α和IL-10 mRNA的转录水平与血清中的细胞因子含量变化趋势一致,而其他细胞因子mRNA的转录水平与血清中含量变化并不一致。

    2010年10期 v.23 1038-1042+1049页 [查看摘要][在线阅读][下载 354K]
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  • 采用卡介苗结核蜡酸合酶启动子构建分枝杆菌穿梭表达质粒

    曾瀚庆;吕琳;梅浙川;王丕龙;娄世锋;

    目的采用卡介苗(BCG)结核蜡酸合酶(Mycocerosic acid synthase,Mas)启动子,将分枝杆菌穿梭质粒pJEM11改建为分枝杆菌穿梭表达质粒。方法 PCR扩增BCG基因组中Mas启动子,定向克隆至质粒pJEM11的ApaⅠ与SnaBⅠ位点之间,构建分枝杆菌穿梭表达质粒pJMas。将幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)UreB基因克隆至pJMas质粒,转化耻垢分枝杆菌(Mycobacteria smegmatis,M.smegmatis)mc2155,SDS-PAGE检测重组UreB蛋白在M.smegmatis mc2155中的表达,Western blot分析其反应原性。结果克隆的Mas启动子序列与结核杆菌H37Rv株的Mas启动子序列(gi31619628)同源性达99%;重组穿梭表达质粒pJMas经PCR及双酶切鉴定证明构建正确;UreB基因在M.smegmatis mc2155中成功表达,表达的蛋白可与Hp阳性病人血清发生特异性反应。结论成功构建分枝杆菌穿梭表达质粒pJMas,为构建以耻垢分枝杆菌为载体的多价疫苗奠定了基础。

    2010年10期 v.23 1043-1045+1054页 [查看摘要][在线阅读][下载 244K]
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  • 肠道病毒71型甘肃分离株VP1基因特征分析

    李薇;李建强;赵祖波;王智永;赵英杰;王玉琳;

    目的分析肠道病毒71型(Enterovirus,EV71)甘肃分离株VP1基因的特征。方法应用RT-PCR法扩增4株EV71甘肃分离株(46F、47F、51F和55F)的VP1基因,克隆入pTA2载体,进行核苷酸序列测定,并进行序列的同源性比较及进化树分析。结果 4株病毒VP1核苷酸序列长度均为891bp,推导的氨基酸序列含297个氨基酸。51F与55F毒株核苷酸和氨基酸同源性均为100%,46F与47F的同源性分别为99.6%和99.0%,4株病毒与EV71的C4亚型毒株核苷酸同源性在96%以上,氨基酸同源性在99%以上。同源性和进化树分析显示,4株分离株分属2个群,其中51F和55F毒株同属一个群,其与昆明分离株kunming41-08亲缘关系最为相近;46F和47F同属一个群,其与内蒙分离株0723F/NM/CHN/07关系最为相近。结论 4株EV71甘肃分离株属于C4亚型,为中国EV71的基因分型、分子流行病学研究提供了参考。

    2010年10期 v.23 1046-1049页 [查看摘要][在线阅读][下载 241K]
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  • 新疆伊犁地区马脑组织尼帕病毒的感染情况

    冯裕星;何丰;谢亮;胡子成;孙后超;徐红波;展群岭;徐鸣明;张亮;胡永波;李雷雷;谢鹏;

    目的采用一步法荧光定量RT-PCR检测新疆伊犁地区天然牧场放养马群脑组织尼帕病毒(NipahVirus,NiV)核蛋白N基因的表达,调查该地区马群中枢神经系统NiV感染的流行状况。方法针对NiV高度保守区N基因设计特异性引物和探针,建立检测马脑组织样本中低浓度NiV RNA的一步法荧光定量RT-PCR方法,对该方法的敏感性及特异性进行验证,并对新疆伊犁地区天然牧场放养且未接种NiV疫苗的183匹马脑组织进行检测。结果一步法荧光定量RT-PCR的最低检出限为1.1×102 copies/μl;与NiV同为亨尼帕病毒属,且高度同源的亨德拉病毒(Hendra Virus,HeV)及同为单股负链的博尔纳病病毒(Borna Disease Virus,BDV)均无交叉反应;183份马脑组织样本未检出阳性样本。结论新疆伊犁地区天然牧场放养马匹中未发现NiV感染,该地区短时间内爆发NiV的可能性较小。

    2010年10期 v.23 1050-1054页 [查看摘要][在线阅读][下载 334K]
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  • 酸性条件下糖对抗HpaAIgY的保护作用

    夏丽君;杨致邦;黄伟;张任飞;栗俊杰;田一玲;

    目的探讨酸性条件下5种糖对抗HpaA蛋黄抗体(IgY)的保护作用,为寻找提高IgY耐酸性的保护剂,制备口服防治幽门螺杆菌(H.pylori)感染的IgY制剂提供理论依据。方法建立检测抗HpaAIgY的间接ELISA法,用不同pH值的模拟胃液分别配制IgY液(IgY终浓度为1.0mg/ml),以pH1.0、2.0和3.0的模拟胃液分别配制含20%菊糖、山梨醇、葡萄糖、蔗糖、葡聚糖的IgY液(IgY终浓度为1.0mg/ml),用pH2.0的模拟胃液分别配制含不同浓度的菊糖、山梨醇的IgY液(IgY终浓度为1.0mg/ml)。上述IgY液均于37℃孵育2h,采用间接ELISA法测定IgY的抗体效价。结果 IgY的活性随着模拟胃液pH值的降低而明显下降;在酸性环境下,5种糖对IgY均有一定的保护作用,以山梨醇和菊糖的保护作用较强;在pH2.0时,40%山梨醇和30%菊糖对IgY的保护作用最强,分别能保存80.3%和73.4%的IgY活性。结论在酸性条件下,糖对IgY均有一定的保护作用,菊糖和山梨醇可作为特异性IgY的保护剂。

    2010年10期 v.23 1055-1057页 [查看摘要][在线阅读][下载 145K]
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  • 鸡痘病毒在鸽体内的分布及毒性

    金明兰;鲁会军;马鸣潇;郑敏;刘慧娟;金宁一;

    目的检测鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)在鸽体内的分布及毒性。方法将鸡痘病毒经翅膀内侧无血管处刺种鸽子,50μl/只,对照组经相同部位刺种等量生理盐水。刺种后逐日进行临床观察,分别于刺种后6h、12h、1d、3d、7d、10d、15d和21d,剖杀鸽子,进行内脏器官的病理组织学检测,采用PCR法检测FPV在鸽体内的分布。结果在试验期间,幼鸽精神状态良好,采食、饮水正常,刺种后15d,临床症状基本消失;各组织未见明显的病理变化;刺种后6h,在刺种肌肉内检测到病毒DNA;刺种后3d和7d,在所有组织内均检测到病毒DNA;刺种后10d,在肌肉和脾脏内可检测到病毒DNA;刺种后15d,所有组织内均未检测到病毒DNA;对照组未检测到病毒DNA。结论鸡痘病毒在鸽体内存留时间短,无毒性,生物安全性良好。

    2010年10期 v.23 1058-1060+1064页 [查看摘要][在线阅读][下载 230K]
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  • 神经纤毛蛋白2干扰质粒对胃腺癌SGC7901细胞株生长、侵袭及转移的影响

    连海峰;吴小翎;刘倩;

    目的探讨神经纤毛蛋白2(Neuropilin2,NRP2)干扰质粒对胃腺癌SGC7901细胞株生长、侵袭及转移的影响。方法构建NRP2特异的小RNA干扰质粒shRNA-NRP2,采用脂质体介导的方法将质粒转染入人胃腺癌SGC7901细胞株,Western blot法检测NRP2蛋白的表达;Transwell试验检测胃癌细胞体外迁移和侵袭能力的变化;MTT试验检测胃癌细胞的增殖水平。结果 shRNA-NRP2转染SGC7901细胞后,NRP2蛋白表达明显下降,细胞的侵袭、迁移能力明显受抑制,而细胞的增殖水平无显著变化。结论 shRNA-NRP2干扰质粒可下调胃腺癌SGC7901细胞株NRP2蛋白的表达,进而抑制细胞的侵袭、转移能力,提示NRP2可能成为胃癌分子治疗的靶标。

    2010年10期 v.23 1061-1064页 [查看摘要][在线阅读][下载 349K]
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  • 基因组重排技术选育乳链菌肽高产菌株

    张旭;张惠文;徐明恺;

    目的采用基因组重排(Genome shuffling)技术选育乳链菌肽高产菌株。方法以乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)G7分别经超声波、硫酸二乙酯(Diethyl suilate,DES)及超声波和DES复合诱变后获得的3株突变株S-1、D-1、F-1为出发菌株,制备原生质体,并进行再生及灭活,采用基因组重排技术选育乳链菌肽高产菌株。结果原生质体的制备率和再生率分别为98.5%±1.2%和13.6%±0.9%;原生质体的灭活条件为紫外线灭活120s及60℃热处理20min,原生质体的致死率可达100%;通过2轮基因组重排,成功选育出1株高产乳链菌肽菌株R2-6,其比原始菌株G7的乳链菌肽的产量提高了69.8%。结论已成功选育出了1株产量大幅提高、遗传稳定的乳链菌肽菌株。

    2010年10期 v.23 1065-1067+1073页 [查看摘要][在线阅读][下载 357K]
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  • 激活素A对小鼠腹腔巨噬细胞分泌细胞因子的影响

    李楠;柳忠辉;崔雪玲;杨煜;孙洋;王轶楠;

    目的探讨激活素A对小鼠腹腔巨噬细胞分泌细胞因子的影响。方法分离小鼠腹腔巨噬细胞,将其分为激活素A处理组和对照组,瑞氏-吉姆萨染色观察小鼠腹腔巨噬细胞形态学变化;流式细胞术分析小鼠腹腔巨噬细胞表面分子CD68的表达;ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-10及TNFα的水平;Griess法检测小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO的水平。结果经激活素A刺激后,显微镜下可见呈不规则、多边型的活化巨噬细胞增多,细胞表达巨噬细胞成熟标志CD68增加,Ⅱ型巨噬细胞(M2)产生的细胞因子IL-10及NO分泌水平升高,而Ⅰ型巨噬细胞(M1)产生的细胞因子TNFα水平无变化。结论激活素A可能主要促进小鼠Ⅱ型巨噬细胞分泌细胞因子。

    2010年10期 v.23 1068-1070页 [查看摘要][在线阅读][下载 251K]
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  • 噬菌体随机肽库技术筛选抗CCR5单克隆抗体的识别表位

    郭海萍;周至威;叶惠荣;黄秋月;

    目的利用噬菌体随机肽库技术筛选趋化因子受体5(CCchemokine receptor 5,CCR5)单克隆抗体的识别表位。方法用抗CCR5单克隆抗体筛选噬菌体随机12肽库,采用双抗体夹心ELISA法鉴定噬菌体阳性克隆,挑取阳性克隆测定DNA序列,推导其氨基酸序列并进行同源性分析。结果从噬菌体随机12肽库中筛选出30株可与抗CCR5单抗特异结合的噬菌体克隆,其中多数克隆呈现核心序列HY-TC-SS-XX-P/FYS-X,该序列与CCR5的一级序列ECL2具有一定的同源性。结论 HY-TC-SS-XX-P/FYS-X序列是抗CCR5单抗的识别表位。

    2010年10期 v.23 1071-1073页 [查看摘要][在线阅读][下载 134K]
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  • TIMP-1基因在人乳腺癌、结肠癌和宫颈癌细胞中转录水平的差异

    李鹏;马艳娇;宫鹏涛;李建华;欧阳红生;张西臣;

    <正>基质金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)是抑制基质金属蛋白酶MMPs)活性的多功能因子家族,主要分为TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3和TIMP-4四种,其中TIMP-1是一种相对分子质量为28500的糖蛋白。最近很多学者发现,TIMP-1基因在乳腺癌患者组织中高表达,并被认为是乳腺癌患者一种新的预后因

    2010年10期 v.23 1074页 [查看摘要][在线阅读][下载 81K]
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预防制品

  • 以乙型肝炎病毒核心蛋白颗粒为载体的流感通用疫苗的构建

    花艳红;洪渊东;吕进;陈中伟;张伟;张良艳;周宇;王希良;

    目的构建以乙型肝炎病毒核心蛋白(Hepatitis B virus coreprotein,HBc)颗粒为载体的含流感病毒M2基质蛋白胞外功能区(M2 ectodomain,M2e)和核蛋白(Nucleoprotein,NP)保守表位的流感通用疫苗,评价其抗不同亚型流感病毒感染的保护作用。方法采用基因工程方法将流感病毒M2e的3拷贝重复片段与NP的CTL表位串联,插入HBc刺突顶端的免疫优势决定区,构建重组表达质粒pET-21a-HBc-3M2e-NP,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG16℃低温诱导表达。表达的融合蛋白HBc-3M2e-NP经纯化后,电镜观察病毒样颗粒形成情况。纯化的融合蛋白分别经鼻腔和腹腔免疫小鼠,对照组注射等体积的PBS,间接ELISA法检测小鼠血清IgG抗体水平;流式细胞术检测小鼠脾组织中CD4+、CD8+T淋巴细胞水平;以流感病毒攻毒,检测融合蛋白的保护效果。结果重组表达质粒pET-21a-HBc-3M2e-NP经PCR及双酶切鉴定证明构建正确。表达的融合蛋白相对分子质量约为29000,以包涵体和可溶性两种形式表达,且可与鼠抗M2e单抗发生特异性反应。纯化的融合蛋白纯度大于90%,且能够自动装配成病毒样颗粒。用该病毒样颗粒免疫小鼠,可诱导小鼠产生针对不同流感病毒毒株的特异性抗体;2种途径免疫的小鼠脾组织中CD4+T淋巴细胞含量和CD4+/CD8+T淋巴细胞比例均较对照组明显升高;攻毒试验结果显示,具有交叉保护作用。结论构建的流感通用疫苗能够诱导机体产生高水平的体液免疫和细胞免疫应答及有效的交叉保护作用,为流感通用疫苗的深入研究奠定了基础。

    2010年10期 v.23 1075-1079页 [查看摘要][在线阅读][下载 447K]
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  • 表达乙型肝炎表面抗原的重组CHO细胞无血清培养基的优化及生物反应器培养

    滕小锘;易小萍;孙祥明;张元兴;

    目的优化表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的重组CHO细胞的无血清培养基,并进行生物反应器高密度培养。方法通过对现有重组CHO细胞无血清培养基SFMB的氨基酸、蛋白类激素、蛋白水解物等的优化,建立针对表达HBsAg的重组CHO细胞无血清低蛋白(<10mg/L)培养基SFMC。并利用此培养基在生物反应器中分批、流加、灌注悬浮培养重组CHO细胞,通过最大细胞密度和HBsAg产率评价不同的培养模式。结果 SFMC与原培养基SFMB相比,使重组CHO细胞的最大细胞密度提高了20%,HBsAg表达量提高了25%。在生物反应器培养过程中,灌注培养的重组CHO细胞表达的HBsAg产率为0.70mg/(L·d),较分批和流加培养的0.30mg/(L·d)提高了约133%。结论通过无血清培养基优化及生物反应器高密度培养,可显著提高重组CHO细胞表达HBsAg的效率。

    2010年10期 v.23 1080-1083+1086页 [查看摘要][在线阅读][下载 358K]
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  • 风疹减毒活疫苗病毒滴定国家参考品的制备及标定

    李娟;李薇;方捍华;李长贵;

    目的制备风疹减毒活疫苗病毒滴定国家参考品,并进行标定。方法选择国内风疹减毒活疫苗生产毒株BRDⅡ制备风疹减毒活疫苗参考品,并对其进行鉴别试验、水分含量、病毒滴度及无菌检查等检定;检定合格后,组织4个实验室对候选参考品和国际参考品的病毒滴度协作标定,计算实验室内和实验室间变异系数;对候选国家参考品进行稳定性分析。结果制备的候选参考品鉴别试验、无菌检查结果均符合规定,水分含量为1.7%,病毒滴度为4.6lgCCID50/ml。经协作标定,风疹减毒活疫苗病毒滴定候选国家参考品的病毒滴度为(4.56±0.52)lgCCID50/ml,实验室内变异系数在1.25%~2.94%之间,实验室间变异系数为5.72%;国际参考品的病毒滴度为(3.96±0.08)lgCCID50/ml,实验室内变异系数在1.19%~3.21%之间,实验室间变异系数为2.04%。经考察,该参考品具有较好的稳定性。结论制备的参考品符合作为风疹减毒活疫苗病毒滴定国家参考品的要求。

    2010年10期 v.23 1084-1086页 [查看摘要][在线阅读][下载 152K]
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  • 文献报道的124例乙型肝炎疫苗接种相关(疑似)异常反应分析

    杨旭琴;苏锦锋;李津;王曦;沈心亮;赵铠;

    目的分析文献报道的乙型肝炎疫苗接种相关异常反应(Adverse events following immunization,AEFI)的一般规律及特点。方法用中文数据库检索15年来国内文献报道的乙型肝炎疫苗接种相关(疑似)AEFI病例,并进行分类统计、分析。结果乙型肝炎疫苗接种相关(疑似)AEFI的临床表现主要为过敏反应(41.13%),重组酿酒酵母乙型肝炎疫苗接种相关(疑似)AEFI病例所占比例最高(48.39%);多发生于接种后0.5~24h(35.48%)、接种后第2针(37.90%)及1岁以内的接种对象(49.19%)。结论乙型肝炎疫苗接种相关(疑似)AEFI总病例数较以往文献报道增加,但尚不能得出乙型肝炎疫苗相关(疑似)AEFI比例增多的结论,还需进一步更准确地研究分析。

    2010年10期 v.23 1087-1089页 [查看摘要][在线阅读][下载 115K]
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治疗制品

  • 重组人角质化细胞生长因子-2发酵条件的优化及其活性

    唐禄;田海山;王晓杰;周鑫;王一;李校堃;

    目的优化重组人角质化细胞生长因子-2(Recombinant human keratinocyte growth factor-2,rhKGF-2)基因工程菌的发酵条件,并对rhKGF-2进行纯化及活性检测。方法优化rhKGF-2基因工程菌接种量、装液量、培养基初始pH值、IPTG浓度、诱导时机和诱导时间等发酵条件;rhKGF-2经离子交换层析和肝素亲和层析后,采用MTT法检测其对NIH-3T3细胞增殖的影响。结果 rhKGF-2基因工程菌的最佳发酵条件为:接种量2.0%,装液量50ml/250ml三角瓶,培养基初始pH值6.5~7.0,IPTG浓度0.10mmol/L,菌体处于对数生长初期时(A600=0.8~1.0)开始诱导,诱导时间4h;纯化的rhKGF-2经HPLC检测纯度达95.0%以上;在1~100μg/ml浓度范围内,rhKGF-2对NIH-3T3细胞的增殖具有促进作用。结论优化了rhKGF-2基因工程菌的发酵条件,获得了纯度较高、具有活性的rhKGF-2蛋白,为其工业化生产奠定了基础。

    2010年10期 v.23 1090-1094页 [查看摘要][在线阅读][下载 500K]
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  • 重组人uPA_(17)-KPI大规模发酵及纯化工艺的建立

    赵磊;孔宁;颜炜群;周庆伟;

    目的建立重组人uPA17-KPI(rhuPA17-KPI)毕赤酵母工程菌在80L发酵罐中的大规模发酵及纯化工艺。方法对工程菌表达rhuPA17-KPI的pH值进行优化。在摇瓶中制备rhuPA17-KPI工程菌种子2L,接种至80L发酵罐中,采用优化的pH值,补料分批培养方式对工程菌进行高密度发酵,控制和优化各种发酵条件,经甲醇诱导48h后结束发酵。将发酵液离心,经SP Sepharose XL阳离子交换层析和SourceTM 30 RPC反相疏水柱层析纯化。结果建立的发酵工艺为:控制发酵温度为28℃,pH值为5.5,溶氧值为25%~30%之间,在酵母细胞湿重达到190g/L时开始甲醇诱导表达,诱导30h,rhuPA17-KPI的分泌达高峰,为300mg/L发酵液。发酵上清经阳离子交换层析和反相疏水层析纯化后,获得纯度为95%以上的rhuPA17-KPI,产量为180mg/L,回收率为60%。结论已建立了rhuPA17-KPI毕赤酵母工程菌在80L发酵罐中的大规模发酵及纯化工艺,为其产业化及临床应用奠定了基础。

    2010年10期 v.23 1095-1098页 [查看摘要][在线阅读][下载 242K]
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  • 重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子壳聚糖-海藻酸钠微囊的制备

    戴宗祥;姬秋彦;杨增福;杨旭;李健峰;李智华;徐维明;

    目的以壳聚糖和海藻酸钠为原料,制备重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)微囊,探讨开发口服蛋白多肽类药物的可行性。方法以rhGM-CSF为药物模型,通过壳聚糖与海藻酸钠聚电解质的络合反应制备rhGM-CSF壳聚糖-海藻酸钠微囊,观察微囊的形态大小,测定其包封率,不同pH值下的膨胀度和体外释放率。结果制备的rhGM-CSF壳聚糖-海藻酸钠微囊呈均匀、完整的圆球形,平均直径1mm左右;包封率达80%以上;在模拟肠液(磷酸盐缓冲液,pH7.4)中浸泡3h,膨胀度可达600%,药物释放率达85%以上。结论壳聚糖-海藻酸钠微囊具有肠溶控释作用,有望成为rhGM-CSF等蛋白类口服药物的控释载体。

    2010年10期 v.23 1099-1101页 [查看摘要][在线阅读][下载 189K]
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  • 鸡卵煮沸对菌痢和轮状病毒特异性IgY活性的影响

    陈维金;姜崴;姚为民;郭立君;张梅;郭凤云;赫宝双;李春晖;

    目的探讨鸡卵煮沸对特异性IgY活性的影响,为食用特异性IgY防治消化道传染病奠定基础。方法用福氏志贺痢疾菌及轮状病毒Wa株免疫母鸡,制备特异性IgY。将含特异性IgY的鸡卵煮沸不同时间,观察卵清及卵黄性状;提取煮沸4min、6min和4℃对照的鸡卵特异性IgY,采用凝集试验、乳鼠抑菌试验及ELISA,检测鸡卵特异性IgY的活性。结果含特异性IgY的鸡卵煮沸4min,卵清与卵黄容易分离,与4℃保存的鸡卵特异性IgY活性差异无统计学意义;但煮沸6min时,卵清完全凝固,特异性IgY活性明显下降。结论鸡卵煮沸4min,对特异性IgY活性无明显影响,可直接食用煮沸4min的鸡卵,用于消化道疾病的防治。

    2010年10期 v.23 1102-1104页 [查看摘要][在线阅读][下载 155K]
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  • 姜黄素对人喉癌Hep-2细胞的生长抑制及诱导凋亡作用

    张淑芳;孙吉凤;张立;宋英明;

    目的探讨姜黄素(Curcumin)对人喉癌Hep-2细胞的生长抑制及诱导凋亡作用。方法将Hep-2细胞用含不同浓度姜黄素(3、6、12.5、25μmol/L)的培养基分别培养24和48h,采用MTT法检测其对细胞增殖的影响;台盼蓝染色法检测其对细胞活力的影响;流式细胞术检测其对细胞周期分布及细胞凋亡的影响;DNA琼脂糖凝胶电泳检测其对细胞DNA的影响。结果姜黄素可明显抑制Hep-2细胞增殖,且呈时间-剂量依赖性;可明显降低细胞活力,且呈剂量依赖性;可使细胞阻滞在G2/M期,并诱导细胞出现典型的凋亡峰,凋亡率呈时间-剂量依赖性;能使细胞DNA形成典型的DNA-Ladder。结论姜黄素对人喉癌Hep-2细胞增殖及细胞活力具有显著的抑制作用,并能诱导Hep-2细胞发生凋亡。

    2010年10期 v.23 1105-1108页 [查看摘要][在线阅读][下载 309K]
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诊断制品

  • 两种进口HBV/HCV/HIV核酸筛查试剂的质量评价

    许四宏;宋爱京;聂建辉;李秀华;王佑春;

    目的对Gen-Probe公司的Procleix Ultrio(Ultrio)和Roche公司的Cobas TaqScreen MPX(MPX)HBV/HCV/HIV核酸筛查试剂的质量进行初步评价。方法从我国不同地区收集60份HIV-1感染者样品(包括59份HIV抗体阳性样品和1份HIV抗体阴性的HIV-1感染窗口期样品)及540份HIV抗体阴性样品,将60份HIV-1感染者样品随机分布于540份HIV阴性样品中,按照合并检测模式对600份样品进行检测,并对每种试剂的检测结果为阳性的样品汇集池(pool)分别按其说明书进一步进行拆分和/或鉴别试验。结果 MPX试剂和Ultrio试剂的单一人份样品检测(Individual donor test,IDT)结果一致的样品共586份,二者的符合率为97.67%,MPX试剂共有12份样品检测结果为假阳性,Ultrio试剂共有6份样品检测结果为假阳性,4份样品MPX试剂检测为阳性,而Ultrio试剂检测为阴性,其核酸含量较低(1份样品HIV-1RNA<40cp/ml,3份样品HBV DNA<12cp/ml),由于无法完成跟踪随访,因此不能确定其最终感染状态。结论 MPX试剂和Ultrio试剂检测结果具有较高的一致性,但对于HBV DNA、HCVRNA和HIV-1RNA含量较低的样品,二者检测结果可能存在一定的差异。

    2010年10期 v.23 1109-1112页 [查看摘要][在线阅读][下载 140K]
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临床观察

  • 乳酸杆菌活菌制剂治疗细菌性阴道病的临床疗效及成本-效果分析

    季建珺;滕小玲;王晔;陈杨芳;熊建华;吕杰强;

    目的观察乳酸杆菌活菌制剂治疗细菌性阴道病(Bacterial vaginosis,BV)的临床疗效,并对其成本-效果进行分析。方法将180例BV患者随机分为3组,分别用乳酸杆菌活菌胶囊(A组)、纳米银抗菌凝胶(B组)和奥硝唑胶囊(C组)治疗,比较各组的总有效率和复发率,并进行成本-效果分析。结果 3组患者总有效率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。复发率比较,C组明显高于A组和B组(P<0.05);A与B组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组成本-效果比分别为0.94、1.00和0.39;以成本最低的C组为参照,A组和B组增量成本-效果比分别为23.3和110.6。结论乳酸杆菌活菌制剂安全有效,具有相对的经济学优势,是治疗BV较理想的药物。

    2010年10期 v.23 1113-1115页 [查看摘要][在线阅读][下载 147K]
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  • 冠心病患者血清可溶性OX40配体和CRP水平的临床意义

    汪克纯;王曦;王玉璟;张冬颖;覃数;常广磊;

    目的探讨不同类型冠心病患者血清可溶性OX40配体(sOX40L)和C反应蛋白(Creactive protein,CRP)水平的临床意义。方法分别采用ELISA法和免疫透射比浊法检测458例疑似或诊断为冠心病患者血清sOX40L和CRP的浓度,采用冠脉造影术和ACC/AHA评分法判定冠状动脉病变程度。结果急性冠脉综合征(ACS)组患者血清sOX40L和CRP水平及冠脉评分均明显高于稳定型心绞痛(SAP)组和正常对照(CT)组(P<0.01);sOX40L与CRP及冠脉评分均呈正相关(P<0.01),CRP与冠脉评分亦呈正相关(P<0.01)。结论血清sOX40L和CRP水平与冠心病患者的病情严重程度及冠状动脉病变程度密切相关,sOX40L有望与CRP一样,作为炎症指标预测冠心病的发生和预后。

    2010年10期 v.23 1116-1119页 [查看摘要][在线阅读][下载 157K]
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实验技术

  • 三磷酸腺苷生物发光快速微生物检测法在疫苗中间品无菌试验中的应用

    魏树源;杨京生;陈晓琦;桂金柱;刘瑛球;王珍;黄宙;

    目的探讨三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)生物发光快速微生物检测法应用于疫苗中间品无菌试验的可行性。方法测定各种培养基与疫苗培养上清液(不含细胞碎片)的本底值,并确定阳性限值;确定测试仪的检测限及线性范围;考察非细菌来源的ATP对测定值的影响;筛选适宜培养基;比较ATP生物发光法与无菌试验检测结果的一致性。结果除199培养基外,其他培养基的RLU本底值均低于205,阳性限值为500;测试仪的最低检测限为10-15mol/L,在10-15~10-6mol/L范围内,线性关系良好;采用增菌法进行试验,可不考虑非细菌来源的ATP的影响;筛选出的适宜培养基为硫乙醇酸盐流体培养基(不含琼脂);ATP生物发光法和无菌试验检测结果的阳性符合率为80%,2种方法各有1个样品另一种方法未检出。结论 ATP生物发光法操作简便,应用范围广泛,可应用于疫苗中间品的无菌试验。

    2010年10期 v.23 1120-1124页 [查看摘要][在线阅读][下载 186K]
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  • 快速检测淋球菌porA和16S rRNA基因的环介导等温扩增技术的建立

    崔亚利;何於娟;刘鑫;胥文春;刘明芳;龚艺;贺潇;

    目的建立快速检测淋球菌porA和16S rRNA基因的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,探讨其用于淋球菌感染早期诊断的可行性。方法利用Primer-ExplorerV3软件分别针对淋球菌porA及16S rRNA基因设计6条引物(2条内引物FIP、BIP,2条外引物F3、B3,2条环引物LF、LB),以淋球菌标准菌株基因组DNA为模板,进行LAMP扩增,同时,以外引物F3、B3为PCR引物,进行PCR扩增,并比较2种扩增方法的灵敏度和特异性。结果LAMP法与PCR法灵敏度相同,可检测到10个拷贝的目的基因;其针对淋球菌porA和16S rRNA基因的引物对脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和大肠埃希菌的DNA均不能扩增。结论已成功建立了检测淋球菌porA和16S rRNA基因的LAMP技术,为淋球菌的快速检测提供了新的手段,有望成为淋球菌常规检测的简便方法。

    2010年10期 v.23 1125-1128页 [查看摘要][在线阅读][下载 266K]
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  • 人表皮蛋白质组双向电泳的建立及技术的改进

    龙亭;黄欣;高永良;陈爱军;李文静;

    目的建立人表皮蛋白质组双向电泳(Two-dimensional electrophoresis,2-DE)图谱,并改进技术条件,为人表皮蛋白质组学的研究提供技术参考。方法以2种不同的方法提取人表皮总蛋白,使用固相pH梯度胶条进行2-DE,并对样品上样量、等电聚焦(Isoelectric focusing,IEF)参数及硝酸银染色等关键步骤进行改进,采用PDQuest8.0软件分析比较2-DE图谱。结果采用液氮研磨后再裂解的方法制备的人表皮总蛋白,以250μg上样,以改进的IEF参数和硝酸银染色步骤获得的2-DE图谱清晰、分辨率高、重复性好,匹配率为85.5%。分离出蛋白质点551±31个,均匀分布在相对分子质量14000~100000、pH5~8之间,比常规方法所获得的2-DE图谱蛋白点明显增多(P<0.05)。结论已建立了人表皮蛋白质组2-DE图谱,改进的方法比常规方法更适用于人表皮蛋白质组学的研究。

    2010年10期 v.23 1129-1131+1137页 [查看摘要][在线阅读][下载 250K]
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  • 麻疹病毒属病毒种特异性探针的设计

    朱晓光;刘冰;李斌;孙远;付玉;杨松涛;高玉伟;王铁成;夏咸柱;王承宇;

    目的设计能检测麻疹病毒、犬瘟热病毒、牛瘟病毒、海豹瘟热病毒、海豚瘟热病毒和小反刍兽疫病毒的基因芯片探针,制备芯片用于以上病毒的种特异性检测。方法在ncbi网站下载上述病毒全部基因组序列信息,利用生物学软件CLUSTAL W对从GenBank中获得的6种病毒所有序列进行比对,获得每种病毒有意义的特异序列,以此作为设计oligo探针的备选序列,利用生物软件Primer Premier 5.0设计探针。选择最优化探针,制备基因芯片,并进行特异性验证。结果获得6条长度均一,退火温度相近,特异性良好的种特异性寡核苷酸探针。结论利用GenBank数据库和生物学软件Primer Premier 5.0设计病毒检测基因芯片探针,是一种快速、有效的方法。

    2010年10期 v.23 1132-1134页 [查看摘要][在线阅读][下载 138K]
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  • 氢氧化铝佐剂配制工艺的优化

    李德娟;何巍;张睿;付琳娜;赵丽剑;王宇;金立杰;

    目的优化氢氧化铝[A(lOH)3]佐剂配制工艺。方法对A(lOH)3配制工艺中的反应温度、氢氧化钠(NaOH)溶液的滴入速度、气体流量和反应终点pH值进行优化,观察配制的A(lOH)3溶液的状态。分别以原工艺和优化工艺配制的A(lOH)3溶液为佐剂制备重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞),比较二者的外观和效力。结果优化的A(lOH)3配制工艺为:反应温度70~72℃;NaOH溶液滴入速度185ml/min,10个点滴入;气体流量0.2bar;反应终点pH值5.80±0.05,以该工艺配制的A(lOH)3胶体颗粒大小均匀,呈淡淡的蓝白色,不发生沉淀。以优化工艺配制的A(lOH)3溶液为佐剂制备的重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)无沉淀,为均匀的胶体,成品放置3年外观无显著变化;疫苗效力略有提高,但不显著。结论优化了A(lOH)3溶液佐剂的配制工艺。

    2010年10期 v.23 1135-1137页 [查看摘要][在线阅读][下载 210K]
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  • 不同交联方法制备的人表皮生长因子凝胶微球的性能比较

    王咏梅;金莉;

    目的比较不同交联方法制备的人表皮生长因子(Humanepid ermal growth factor,hEGF)凝胶微球的体外性能。方法采用化学交联、光交联和热交联方法,制备复合hEGF凝胶微球,观察其形态,测定其粒径、质量残留率、载药率和包裹率,并采用ELISA法检测hEGF的体外释放效果。结果 3种方法制备的凝胶微球的形态、粒径、载药率和包裹率均无显著差异;但化学交联法制备的微球释药时间明显较光交联和热交联法制备的微球长,降解速度较光交联和热交联法制备的微球慢。结论化学交联法制备的hEGF凝胶微球性能好,具有作为缓释生长因子载体的应用前景。

    2010年10期 v.23 1138-1140页 [查看摘要][在线阅读][下载 194K]
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综述

  • 干扰素诱导的MxA蛋白及其抗丙型肝炎病毒感染作用的研究进展

    吉瑾;赵兰娟;戚中田;

    干扰素α(Interferon α,IFNα)是目前公认的可有效抗丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)的药物,其主要通过诱导细胞产生抗病毒蛋白而发挥作用。抗黏病毒蛋白A(Mixovirus resistance protein A,MxA)是由I型IFN诱导产生的相对分子质量为78000的抗病毒蛋白,主要分布于细胞质中,具有识别HCV核糖核蛋白复合物(Virus ribonucleoprotein complexes,vRNPs)的功能,通过MxA的GTP酶活性水解HCV核衣壳,使病毒核酸释放并被胞浆中的核酸内切酶降解。本文主要对IFN的分类、MxA的结构和作用机制及近年来MxA抗HCV感染作用的研究进展作一综述。

    2010年10期 v.23 1141-1143+1152页 [查看摘要][在线阅读][下载 184K]
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  • 流式细胞术产品质量标准的建立及应用

    李丽莉;高尚先;张春涛;

    流式细胞术(Flow cytometry,FCM)是一种对液流中排成单列的细胞或其他生物微粒逐个进行快速定量分析及分选的技术,为人类疾病的检测提供了快速有效的手段。目前已有很多商品化的FCM试剂盒面世,应用于免疫缺陷症、遗传病、细胞周期分析及肿瘤诊断、分型、愈后监测等领域。本文依据标记免疫类产品常规分析方法及产品说明书提供的评价方法,从FCM试剂的外观、准确性、稀释线性、精密性和染色稳定性等要点出发,对FCM产品质量标准的建立及应用作一综述。

    2010年10期 v.23 1144-1146页 [查看摘要][在线阅读][下载 101K]
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  • 干扰素γ生物学功能及其应用的研究进展

    田园;丁壮;岳玉环;

    干扰素γ(Interferon gamma,IFNγ)是体内重要的细胞因子,能够通过调控免疫相关基因的转录协调机体的免疫反应。本文对IFNγ的生物学功能(主要包括诱导机体的抗病毒状态、抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、免疫调节)及其应用的研究进展作一综述。

    2010年10期 v.23 1147-1150页 [查看摘要][在线阅读][下载 175K]
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专题报道

  • 南京市食品中单核细胞增生李斯特菌的污染情况分析

    金萍;叶艳华;王炜;

    <正>单核细胞增生李斯特菌(Listeria monoc ytogenes,LM)简称单增李斯特菌,是一种人畜共患病的病原菌,其广泛存在于自然界中,人和动物感染可引起脑膜炎、脑炎、败血症及怀孕妇女流产、死胎等疾病,病死率很高,是一种严重影响食品安全的食源性致病菌[1]。该菌在4℃冰箱保存的食物中也可

    2010年10期 v.23 1151-1152页 [查看摘要][在线阅读][下载 80K]
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