中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

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    <正>《中国生物制品学杂志》于1988年创刊,由中华人民共和国卫生部主管,系中华预防医学会系列杂志之一,为报道我国生物制品研究开发重大成果和最新进展的国内唯一生物制品专业学术期刊。主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床学等方面的研究、生产、使用和质控等学术文章。主要设有基础研究、预防制品、治疗制品、诊断制品、实验技术、临床观察、研究简报、综述、述评、会议快讯、消息等栏目。

    2010年06期 v.23 560页 [查看摘要][在线阅读][下载 43K]
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基础研究

  • 嵌合泛素连接酶TrCP-CC及其突变体△F-CC重组腺病毒的构建及鉴定

    罗红伟;袁颖;季茂胜;刘钉宾;王晓飞;曹唯希;冯文莉;

    目的构建嵌合泛素连接酶TrCP-CC及其突变体△F-CC的重组腺病毒,并检测其表达。方法采用PCR和重叠PCR法构建真核表达质粒Migr1-TrCP-CC-HA和Migr1-△F-CC-HA,以此为模板,通过PCR将其克隆至穿梭质粒pAd-Track-CMV,构建重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-TrCP-CC和pAdTrack-△F-CC,再与骨架载体pAdeasy-1经同源重组得到重组腺病毒质粒pAd-TrCP-CC和pAd-△F-CC,转染HEK293细胞进行包装扩增,得到重组腺病毒Ad-TrCP-CC和Ad-△F-CC,测定其滴度,并经RT-PCR检测目的基因的转录水平。结果经酶切和测序证实重组腺病毒质粒pAd-TrCP-CC和pAd-△F-CC构建正确,经HEK293细胞包装后显微镜下可观察到绿色荧光,病毒滴度分别为2.5×109和1.0×109pfu/L,经RT-PCR检测目的基因可有效表达。结论已成功构建重组腺病毒Ad-TrCP-CC和Ad-△F-CC,并在HEK293细胞中成功表达,为进一步研究其靶向融合蛋白Bcr-Abl泛素化和降解的机制奠定了基础。

    2010年06期 v.23 561-565页 [查看摘要][在线阅读][下载 295K]
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  • 稳定表达绿色荧光蛋白标记的人单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体ORF2融合蛋白的Vero细胞株的建立

    杨慧兰;白利利;樊建勇;王颖;

    目的建立稳定表达绿色荧光蛋白(EGFP)标记的人单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框2(ORF2)融合蛋白的Vero细胞株。方法构建重组真核表达质粒pEGFP-ORF2,经酶切及测序鉴定正确后,体外转染Vero细胞,经G418筛选稳定表达融合蛋白的克隆,扩大培养后,荧光显微镜观察EGFP的表达,RT-PCR检测目的基因的转录。结果重组真核表达质粒pEGFP-ORF2经酶切及测序鉴定构建正确,经G418培养20d筛选出的Vero细胞株荧光显微镜下可见融合蛋白表达,RT-PCR检测显示,转染了重组表达质粒的Vero细胞内有目的基因的表达。结论已成功建立了稳定表达EGFP-ORF2的Vero细胞株,为进一步研究HSV-2LATORF2的功能奠定了基础。

    2010年06期 v.23 566-568页 [查看摘要][在线阅读][下载 282K]
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  • 糖基化终末产物对大鼠肾小管上皮细胞组织型转谷氨酰胺酶mRNA表达的影响

    刘辉;于晓艳;孙波;李相军;任立群;李才;邹颖刚;李佳;

    目的探讨晚期糖基化终末产物(Advanced glycosylation end products,AGEs)对大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E组织型转谷氨酰胺酶(Tissue transglutanunase,tTG)mRNA表达及其对细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)降解的影响。方法体外培养NRK-52E细胞,分别用体外合成的不同浓度的糖化牛血清白蛋白(AGE-BSA)及未经糖化的牛血清白蛋白(BSA)处理48h,ELISA法检测细胞培养上清中纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)和Ⅳ型胶原蛋白(TypeⅣcollagen,ColⅣ)含量,RT-PCR检测细胞tTG mRNA的表达。结果与BSA组比较,50~200mg/LAGE-BSA组细胞上清中FN含量明显增加(P<0.01),25~100mg/L AGE-BSA组细胞上清中ColⅣ含量明显增加(P<0.05);AGE-BSA(50~400mg/L)可不同程度地刺激细胞tTG mRNA表达的增加(P<0.05);tTG mRNA表达增加与FN、ColⅣ分泌增多呈正相关(r值分别为0.911和0.872)。结论 AGEs能诱导大鼠近端肾小管上皮细胞tTG mRNA的表达,引起ECM主要成分FN和ColⅣ含量增加,提示tTG可能在AGEs引起的ECM积聚过程中,起到抑制ECM蛋白降解的作用,进而参与糖尿病肾病的病理过程。

    2010年06期 v.23 569-572页 [查看摘要][在线阅读][下载 301K]
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消息

  • 来自ATCC的基因靶向工具

    <正>ATCC发布三个新的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)滋养细胞系,用于支持未分化胚胎干细胞系和iPS细胞系的生长。DR4MEF(ATCC誖SCRC-1045TM)带有抗生素耐药基因,可以耐受新霉素(G418)、嘌呤霉素、潮霉素和6-硫基鸟嘌呤。SNL76/7(SCRC-1049TM)是一个克隆,来自于具有G418抗性和鼠类LIF高表达的STO细胞系。

    2010年06期 v.23 572页 [查看摘要][在线阅读][下载 55K]
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基础研究

  • 靶向肠道病毒71型VP1基因的siRNA表达质粒的构建

    吕玉春;陈全;严莎;候艳;

    目的构建靶向肠道病毒71型(EV71)VP1基因的siRNA表达质粒,并进行鉴定。方法构建靶向EV71VP1基因的siRNA表达质粒pSVSi1、pSVSi2和pSVSi3;脂质体法转染A549细胞株,筛选阳性克隆,通过荧光定量PCR和Western blot,分别在mRNA水平和蛋白水平鉴定EV71VP1基因的表达。结果质粒pSVSi1、pSVSi2和pSVSi3经测序证明构建正确。pSVSi1对A549细胞VP1基因的抑制效果最好,在mRNA和蛋白水平上的抑制率分别为87%和89%,pSVSi2和pSVSi3在mR-NA水平上的抑制率分别为60%和70%。结论已成功构建了靶向EV71VP1基因的siRNA表达质粒,并筛选出一种对VP1基因有显著抑制作用的siRNA,为手足口病的siRNA基因治疗奠定了基础。

    2010年06期 v.23 573-576页 [查看摘要][在线阅读][下载 313K]
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消息

  • 《医学免疫学实验技术》征订启事

    <正>我国首批国家级医学研究生规划教材之一的《医学免疫学实验技术》(主编柳忠辉),于2008年3月由人民卫生出版社出版。该书由国内16所大学从事相关领域研究的教授参编。全书共分为16章,相关实验技术部分不仅介绍了实验原理和实验流程,还列举了典型实验案例,并重点阐述了实验过程可能出现的问题及解决方法 ,在书后附录中还列举了免疫学常用试剂的配制。本书集实验教学的实用性和科学研究的前瞻性于一体,既适合免疫学研究生、本科生教学,也是从事免疫学相关研究不可或缺的参考书籍。

    2010年06期 v.23 576页 [查看摘要][在线阅读][下载 75K]
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基础研究

  • 人碱性成纤维细胞生长因子在植物毛状根和毕赤酵母中的表达

    范伟全;牟旭鹏;韦安慧;刘永刚;张宏桂;

    目的在植物毛状根和毕赤酵母中表达人碱性成纤维细胞生长因子(Human basic fibroblast growth factor,hbFGF),并对发酵条件进行优化。方法将hbFGF基因分别克隆至表达载体pCAMBIA1301和pPICZα上,构建重组表达质粒pCAMBIA1301-hbFGF和pPICZα-hbFGF。通过发根农杆菌介导,将pCAMBIA1301-hbFGF质粒转入大豆毛状根;采用电转化法将质粒pPICZα-hbFGF转入毕赤酵母X-33菌株,PCR法筛选阳性转化子,诱导表达。筛选高效稳定表达株,发酵培养并优化发酵条件,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物,并进行纯化。结果经酶切及测序证明两个重组表达质粒构建正确;经PCR鉴定证明hbFGF基因已整合入大豆毛状根及毕赤酵母基因组中;筛选出了在两种体系中发酵培养的最佳条件;hbFGF在大豆毛状根和毕赤酵母中的表达量分别占总蛋白的31%和42%,且均具有良好的反应原性;经纯化后,均可见相对分子质量约18000的单一条带。结论 hbFGF能够在大豆毛状根和毕赤酵母中高效表达,为其大规模工业化生产奠定了实验基础。

    2010年06期 v.23 577-580+585页 [查看摘要][在线阅读][下载 346K]
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  • 重组蛋白转导结构域-SARA融合蛋白生物学功能的初步研究

    加慧卫;黄晨;李晶;张英起;孙世仁;杜锐;

    目的初步研究重组蛋白转导结构域(Protein transduction domain,PTD)-SARA融合蛋白(PTD-SARA)抗肾脏纤维化的生物学功能。方法采用免疫细胞化学法检测重组PTD-SARA融合蛋白的穿膜作用;通过显微镜观察人肾小管上皮细胞HK2形态学变化,Western blot法测定上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和磷酸化Smad3蛋白水平,以比较PTD-SARA融合蛋白和SARA蛋白抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱发的肾小管上皮细胞向间质细胞转分化作用。结果重组PTD-SARA融合蛋白可高效地转入细胞胞质与胞核;PTD-SARA融合蛋白与SARA蛋白相比,能更显著地上调E-cadherin蛋白的表达,下调α-SMA和磷酸化Smad3蛋白的表达,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论与SARA蛋白相比,PTD-SARA融合蛋白可以高效地进入细胞胞质及胞核,并能明显地抑制TGF-β1诱发的肾小管上皮细胞向间质细胞转分化作用,为进一步研究重组PTD-SARA融合蛋白防治肾脏纤维化奠定了基础。

    2010年06期 v.23 581-585页 [查看摘要][在线阅读][下载 466K]
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  • DNA甲基化对调控胰岛分化基因表达的影响

    方爱平;张悦;林宝行;郭辉;余小舫;李富荣;胡泓;

    目的探讨DNA甲基化对调控胰岛分化基因表达的影响,为调控干细胞分化为胰岛细胞提供理论依据。方法采用甲基化DNA免疫共沉淀-实时定量PCR法(MeDIP-qPCR)检测129/J小鼠胚胎干细胞、NIT1细胞及NIH3T3细胞中Pdx-1、MafA、Nkx6.1和Oct4四种调控胰岛分化基因的DNA甲基化程度;同时采用实时定量RT-PCR检测上述3种细胞中4种基因mRNA表达水平,分析这些基因DNA甲基化水平差异与基因表达之间的关系。结果 Pdx-1、MafA和Nkx6.1基因在129/J小鼠胚胎干细胞和NIT1细胞中呈低甲基化,在NIH3T3细胞中则呈高甲基化,前两种细胞的甲基化程度明显低于后者(P<0.05);Oct4基因在129/J小鼠胚胎干细胞中未甲基化,在NIT1和NIH3T3细胞中呈低甲基化,NIT1细胞的甲基化程度明显低于NIH3T3细胞(P<0.05)。低甲基化的Pdx-1、MafA和Nkx6.1基因在NIT1细胞中可高效表达,而在NIH3T3和129/J小鼠胚胎干细胞中则未见表达(P<0.05);Oct4基因在129/J小鼠胚胎干细胞中可高效表达,在NIT1和NIH3T3细胞中则未见表达。结论转录起始区DNA甲基化程度可影响Pdx-1、MafA、Nkx6.1和Oct4基因的表达,参与β细胞的分化过程。

    2010年06期 v.23 586-589+593页 [查看摘要][在线阅读][下载 269K]
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  • 弗氏志贺菌侵袭性基因ipaC诱饵质粒的构建及其自激活作用

    陈志宝;宋博翠;

    目的构建弗氏志贺菌侵袭性基因ipaC诱饵质粒,并检测其自激活作用。方法 PCR法扩增弗氏志贺菌侵袭素ipaC基因,克隆入诱饵载体pSos,构建诱饵质粒pSos-IpaC,转化酵母菌cdc25H,进行Western blot分析,并检测诱饵质粒的自激活特性。结果酵母双杂交诱饵质粒pSos-IpaC经酶切及测序证明构建正确;Western blot分析显示,诱饵质粒表达了相对分子质量约214000的融合蛋白;诱饵质粒对酵母菌cdc25H无自激活作用,且该质粒表达的融合蛋白在宿主细胞质中定位正确。结论已成功构建了诱饵质粒pSos-IpaC,该质粒对酵母菌cdc25H无自激活作用。

    2010年06期 v.23 590-593页 [查看摘要][在线阅读][下载 207K]
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  • 重组人B7-H1IgV发酵纯化工艺的建立及其抑瘤活性

    陈霖;李晶;侯建伟;舒震;张伟;张英起;

    目的建立大规模生产重组人B7-H1IgV(rhB7-H1IgV)的发酵和纯化工艺,并检测纯化蛋白的抑瘤活性。方法对rhB7-H1IgV工程菌进行发酵培养,IPTG诱导表达,采用超声裂菌分离包涵体,梯度复性,2次Ni亲和层析等步骤纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE、Westernblot分析及抑瘤活性检测。结果在建立的发酵工艺下,rhB7-H1IgV的表达量可达菌体总蛋白的(10~11)%;纯化的rhB7-H1IgV蛋白经HPLC检测,纯度可达95%以上,Westernblot检测具有良好的反应原性;动物实验表明纯化的重组蛋白能诱导BALB/c小鼠产生高滴度的抗B7-H1抗体,且对肿瘤的生长具有明显的抑制作用。结论所建立的rhB7-H1IgV发酵纯化工艺简单迅速,为其开发和应用奠定了基础。

    2010年06期 v.23 594-597页 [查看摘要][在线阅读][下载 301K]
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消息

基础研究

  • 治疗用A型肉毒梭菌神经毒素全基因克隆及序列分析

    赵雅静;魏然;刘晨鸣;张雪平;冯德杰;高雪军;朱莉萍;

    目的对我国治疗用A型肉毒毒素生产用菌株Hall株神经毒素(BoNT)全基因进行克隆及序列分析,了解其遗传特性,为该制剂的质量控制提供依据。方法取生产用主代种子、工作种子,通过PCR扩增BoNT全基因片段,将其克隆至载体pGEM-T中,构建重组克隆质粒pGEM-T-BoNT,对克隆的BoNT基因进行序列测定与分析。结果测得的Hall株BoNT全基因序列3891bp,共编码1297个氨基酸。4种核苷酸的比例分别为:A:40.58%,G:16.17%,T:33.13%,C:10.13%;GC含量为26.29%,AT含量为73.71%。主代种子、工作种子核苷酸序列3591位的G变成A,为无义突变,未导致其推导的氨基酸的改变。序列测定结果与GenBank中登录的Hall标准株进行比较,主代种子、工作种子核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为99.99%和100%。结论 A型肉毒梭菌Hall株在实验室长期的保存和生产传代过程中,BoNT基因遗传特性非常稳定。

    2010年06期 v.23 598-601页 [查看摘要][在线阅读][下载 1992K]
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消息

  • 《中国预防医学杂志》征订征稿通知

    <正>《中国预防医学杂志》为中华人民共和国卫生部主管,中华预防医学会主办的预防医学与公共卫生领域权威性学术期刊,国内外公开发行(中国标准刊号:ISSN1009-6639,CN11-4529/R;邮发代号:2-764)。庄辉院士任主编,王陇德会长任名誉主编,并有曾毅、侯云德等共九位院士作为本刊的顾问。

    2010年06期 v.23 601页 [查看摘要][在线阅读][下载 38K]
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基础研究

  • 弓形虫速殖子特异表达蛋白SAG1启动子的克隆及鉴定

    安娜;张瑞岩;赵志远;商立民;刘全;魏峰;

    目的克隆弓形虫速殖子特异表达蛋白SAG1的启动子序列,为弓形虫基因操作提供工具。方法应用PCR方法扩增弓形虫速殖子特异表达蛋白SAG1的5′非编码区、致密颗粒蛋白GRA2的3′编码区和红色荧光蛋白(RFP)基因,并构建重组质粒pMD/SAG-RFP-GRA,经电穿孔法将其转染弓形虫速殖子,倒置荧光显微镜观察RFP的表达。结果重组质粒pMD/SAG-RFP-GRA经双酶切和测序证明构建正确,质粒转染弓形虫速殖子24h,荧光显微镜下可观察到红色荧光,表明克隆的SAG1启动子具有转录活性。结论已成功克隆了弓形虫速殖子特异表达蛋白SAG1的启动子序列,并能介导外源基因在弓形虫体内的表达。

    2010年06期 v.23 602-604页 [查看摘要][在线阅读][下载 216K]
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  • 溶血磷脂酸对人卵巢癌细胞P120catenin表达的影响

    姜歆;彭真年;熊学华;孙迪;

    目的观察溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid,LPA)对人卵巢癌细胞SKOV3 P120catenin(P120ctn)表达的影响,探讨LPA和P120ctn在卵巢癌发生发展中的作用机制。方法将不同浓度的LPA作用于SKOV3细胞,MTT法检测细胞的增殖率;以最佳浓度的LPA及不同浓度的酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein作用于SKOV3细胞,MTT法检测细胞的增殖抑制率;将SKOV3细胞分为3组:对照组、LPA组和LPA+Genistein组,分别于培养6、12、24h,采用免疫荧光细胞化学法和Western blot分析P120ctn表达的变化,RT-PCR法检测P120ctn基因mRNA的转录水平。结果 20μmol/LLPA作用24h促进SKOV3细胞增殖的作用最强,而200μmol/LGenistein对LPA促进SKOV3细胞增殖有明显的抑制作用。LPA可诱导SKOV3细胞膜中P120ctn的表达减少,胞质中的表达增多;而Genistein与LPA共同作用后,P120ctn在细胞膜中的表达增多,而在胞质中的表达减少。结论 LPA可诱导SKOV3细胞中P120ctn表达的改变,其机制可能与相关的酪氨酸蛋白激酶磷酸化有关。

    2010年06期 v.23 605-608+612页 [查看摘要][在线阅读][下载 398K]
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预防制品

  • 质粒剂量和免疫次数对基因枪免疫DNA疫苗免疫反应的影响

    徐智勇;张舟;陈佩;周芳;邵一鸣;刘勇;王立良;

    目的研究质粒剂量和免疫次数对基因枪免疫DNA疫苗免疫反应的影响。方法构建携带HIV-1 Env gp145基因的DNA疫苗质粒p1.0-Env,分别采用肌肉注射和基因枪方法免疫BALB/c小鼠。其中,基因枪免疫采用不同剂量或不同次数。ELISA法检测小鼠体内Env特异性抗体水平。结果基因枪免疫小鼠诱导的抗体水平显著高于肌肉注射免疫。在0.1~2.25μg剂量范围内,基因枪免疫小鼠体内的Env特异性抗体水平随疫苗剂量的增加不断提高。加大免疫剂量至5μg和10μg,不能提高体液免疫反应水平。基因枪免疫1次和2次所诱导的特异性抗体水平很弱,免疫3次可诱导高水平的抗体应答。结论基因枪免疫能有效提高DNA疫苗所诱导的抗体应答,小鼠的最适免疫剂量约为2.25μg,2.25μg免疫3次可诱导较强的体液免疫反应。

    2010年06期 v.23 609-612页 [查看摘要][在线阅读][下载 229K]
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  • 细胞工厂培养沙鼠肾原代细胞制备肾综合征出血热灭活疫苗

    姚伟;钟建琴;苏波;方杰;沈学峰;谭建新;霍海琴;李清朗;

    目的用细胞工厂代替转瓶培养沙鼠肾原代细胞,制备肾综合征出血热(HFRS)疫苗,减少原代沙鼠用量,提高产量。方法在细胞工厂内培养沙鼠肾原代细胞,以15L转瓶培养作对照,比较两种容器内细胞生长及收获的病毒滴度和抗原含量;病毒液经超滤浓缩后,采用Sepharose-4FF介质色谱纯化,并进行各项检定。结果细胞工厂只需接种转瓶培养所需1/3量的沙鼠肾细胞,就能在同期与转瓶细胞数量相当。接种病毒后,转瓶中的细胞在收获第5次后已脱落(10~20)%,而细胞工厂中的细胞几乎没有脱落;收获至第9次时,细胞工厂中的细胞脱落率才达20%;每次收获的病毒液病毒滴度和抗原含量均较高,且稳定在一定范围。浓缩纯化后,各项检定指标均合格。结论使用细胞工厂培养沙鼠肾原代细胞制备HFRS疫苗不仅提高了收率,而且减少了培养空间,降低了污染,可替代转瓶大规模生产HFRS疫苗。

    2010年06期 v.23 613-614+618页 [查看摘要][在线阅读][下载 191K]
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治疗制品

  • 聚乙二醇修饰重组人干扰素α1b的制备及其性质

    杨宇峰;路煜;石玮;马相虎;秦洁;朱威;楼觉人;

    目的制备聚乙二醇(PEG)修饰的重组人干扰素α1b(rhIFNα1b),并分析其部分性质。方法采用PEG修饰rhIFNα1b,通过离子交换层析分离纯化修饰混合物,单点修饰产物经超滤浓缩后,经Lowry法检测蛋白的浓度,SDS-PAGE和RP-HPLC检测蛋白的纯度,等电聚焦电泳检测蛋白的等电点,质谱法检测蛋白的相对分子质量,细胞病变抑制法检测蛋白的体外活性,ELISA法检测蛋白的抗原性。结果单点修饰产物的蛋白得率为33%;SDS-PAGE分析纯度为96.1%,RP-HPLC分析纯度为98.1%;等电点为6.22;相对分子质量为39946;比活为1.28×106IU/mg,活性保留率为14.4%;抗原性至少降至原来的1/625。结论制备的单点修饰rhIFNα1b药学性质获得改善,有望开发为安全、长效的新型干扰素。

    2010年06期 v.23 615-618页 [查看摘要][在线阅读][下载 377K]
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  • 重楼提取液对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及其作用机制

    李晞;王继红;肖亚雄;

    目的观察重楼提取液对人结肠癌SW480细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法采用不同浓度(10、20、40、80μg/ml)的重楼提取液,分别作用于体外培养的SW480细胞12、24、36和48h,采用MTT法检测其对SW480细胞的抑制率;并以半数抑制浓度的重楼提取液与体外培养的SW480细胞作用24h后,显微镜下观察细胞形态,并通过流式细胞术分析其对SW480细胞细胞周期的影响,RT-PCR和Western blot法分别测定SW480细胞干细胞因子(SCF)mRNA和蛋白表达的变化。结果各浓度重楼提取液对SW480细胞均有不同程度的抑制作用,且存在剂量-效应和时间-效应关系,重楼提取液作用后的SW480细胞出现变性、坏死的形态改变;经重楼提取液处理24h后,SW480细胞在S期的分布比例下降,G0-G1期和G2/M期细胞分布增多(P<0.05);同时SCF表达增高(P<0.05)。结论重楼提取液可能通过抑制肿瘤细胞的蛋白质与DNA合成,抑制肿瘤细胞的有丝分裂,进而抑制SW480细胞增殖,且其作用机制可能与SCF无关。

    2010年06期 v.23 619-622+632页 [查看摘要][在线阅读][下载 432K]
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  • 肿瘤基因疫苗纯化工艺的建立

    杨晓玲;吕婧;朱智强;谢秋;王建华;张悦红;牛勃;

    目的建立肿瘤基因疫苗的纯化工艺,为肿瘤基因疫苗的工业化生产奠定基础。方法采用碱裂解法粗提质粒DNA,利用凝胶过滤层析、亲和层析及离子交换层析分离纯化质粒DNA,并对所纯化的质粒DNA进行全面检定。结果经3种层析柱纯化所获得的超螺旋质粒DNA,其A260与A280的比值在1.85~1.92之间;超螺旋质粒DNA比例不低于94%;内毒素含量远低于10EU/mg;5批纯化的质粒DNA经全面检定,均符合国家质量标准。结论该纯化工艺制备的肿瘤基因疫苗纯度高,且有效去除了内毒素。

    2010年06期 v.23 623-626页 [查看摘要][在线阅读][下载 218K]
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  • 当归多糖预防给药对放射损伤小鼠骨髓单个核细胞黏附分子表达及细胞周期的影响

    张雁;吴宏;关雪晶;周玥;

    目的探讨当归多糖(Angelica polysaccharide,APS)预防给药对放射损伤小鼠骨髓单个核细胞(Bone marrow mononuclear cells,BMNCs)黏附分子表达及细胞周期的影响。方法将BALB/c小鼠分为4组:正常对照组(不作任何处理)、NS组(经腹腔注射生理盐水)、2mg/kgAPS组(经腹腔注射2mg/kgAPS)和8mg/kgAPS组(经腹腔注射8mg/kgAPS),连续注射7d后,进行照射,并继续给药13d。分别于照射后第7、14天采集各组小鼠外周血,并取骨髓,进行WBC、RBC、PLT及BMNC计数;流式细胞术检测小鼠Sca-1+BMNC表面黏附分子CD44和CD49d的表达及BMNC细胞周期的变化;半定量RT-PCR和Western blot法分别检测小鼠BMNC细胞周期蛋白D(2CyclinD2)mRNA转录水平和蛋白表达水平的变化。结果与正常对照组比较,NS组外周血WBC、RBC、PLT及BMNC数量均明显减少,Sca-1+BMNC表面黏附分子CD44和CD49d的表达明显下降(P<0.05),G0/G1期细胞比例显著增加(P<0.05),CyclinD2 mRNA转录水平和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);2mg/kgAPS组和8mg/kgAPS组能增加外周血各指标及BMNC数量(P<0.05),明显降低第7和14天Sca-1+BMNC表面黏附分子CD44和CD49d的表达水平(P<0.05),降低G0/G1期细胞比例(P<0.05),提高CyclinD2 mRNA的转录水平和蛋白表达水平(P<0.05)。结论 APS预防给药能通过降低放射损伤小鼠Sca-1+BMNC表面黏附分子的表达水平,上调BMNC的CyclinD2 mRNA和蛋白表达来加速BMNCG1期向S期的转换,促进造血恢复。

    2010年06期 v.23 627-632页 [查看摘要][在线阅读][下载 538K]
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诊断制品

  • 抗Ⅰ型脊髓灰质炎病毒单克隆抗体的制备

    李树香;沈心亮;石男;刘敬;

    目的制备抗脊髓灰质炎病毒单克隆抗体,为ELISA检测方法的建立奠定基础。方法将Ⅰ型脊髓灰质炎减毒疫苗原液和灭活疫苗原液经超滤、超离纯化,以纯化的减毒脊髓灰质炎病毒D抗原免疫BALB/c小鼠,得到的脾细胞与SP2/0-A14小鼠骨髓瘤细胞融合,以纯化的灭活脊髓灰质炎病毒D抗原建立间接ELISA法,筛选分泌特异性单抗的阳性细胞株,诱生小鼠腹水,通过正辛酸-硫酸铵法纯化抗体,并进行各项鉴定。结果获得两株稳定分泌抗脊髓灰质炎病毒单抗的细胞株7G5及5E4。纯化的7G5和5E4株单抗分别可与脊髓灰质炎病毒D抗原的VP2、VP3衣壳蛋白结合;在不同温度下放置均比较稳定;pH4不利于7G5株单抗的保存;5E4株单抗的相对亲和力大于7G5株;7G5株单抗的亚类为IgM,5E4株单抗的亚类为IgG2a;两株单抗可识别相似表位;7G5株和5E4株单抗的中和效价分别为1:64和1:128。结论已成功制备了两株分泌抗脊髓灰质炎病毒的单抗。

    2010年06期 v.23 633-635+642页 [查看摘要][在线阅读][下载 219K]
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临床观察

  • 自身免疫性溶血性贫血患者成分输血的疗效观察

    李岚;薛俭成;

    目的探讨自身免疫性溶血性贫血(AHIA)患者成分输血的临床疗效。方法对15例输注洗涤红细胞的AHIA患者(A组)和15例输注红细胞悬液的AHIA患者(B组)的临床资料进行回顾性对比分析。结果 A、B两组患者输血24h后,血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)数量和血细胞比容(Hct)均升高;同组内输血前后比较,差异均有统计学意义;两组间输血前后差异均无统计学意义。A组中5例患者输注洗涤红细胞联合血浆置换治疗AHIA,临床症状明显改善。结论输注洗涤红细胞与红细胞悬液治疗AHIA,其临床效果差异无统计学意义;输注洗涤红细胞联合血浆置换治疗AHIA效果显著。

    2010年06期 v.23 636-638页 [查看摘要][在线阅读][下载 127K]
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实验技术

  • 无血清微载体培养Vero细胞和H1N1流感病毒条件的优化

    田石华;孙明波;张新文;马磊;高菁霞;宋绍辉;姜述德;李卫东;廖国阳;

    目的优化无血清微载体培养Vero细胞和H1N1流感病毒的条件,为Vero细胞流感疫苗的开发奠定基础。方法在搅拌瓶中采用不同的细胞接种量和不同的微载体浓度培养Vero细胞,制备流感病毒,并检测不同的pH值、TPCK-胰酶含量、病毒接种量及病毒收获时间对流感病毒血凝滴度的影响。结果以(1.0~5.0)×105个/ml的Vero细胞接种至浓度为3mg/ml的无血清微载体中,病毒培养液pH值为7.2~7.4,TPCK-胰酶含量为1.0μg/ml,病毒接种量为1.0MOI,并在感染48h后补加TPCK-胰酶,培养72h后收获上清与细胞内病毒,血凝滴度可达1:512。结论已获得了无血清微载体培养Vero细胞和H1N1流感病毒的适宜条件,为应用生物反应器大规模制备流感病毒奠定了基础。

    2010年06期 v.23 639-642页 [查看摘要][在线阅读][下载 364K]
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  • 狂犬病疫苗细胞培养灭活验证实验方法的建立

    汪霞;徐葛林;孙文;唐建蓉;毕军;吴杰;张丽娜;卢颖;林娜;胡巧玲;张永振;

    目的建立狂犬病疫苗细胞培养灭活验证实验方法。方法将9批狂犬病疫苗样品及含有不同病毒量的CTN病毒悬液在Vero细胞上培养21d,丙酮固定细胞后,采用免疫荧光法检测,同时与小鼠法进行比较;并验证细胞培养法的重复性和灵敏度。结果细胞培养免疫荧光法检测的9批狂犬病疫苗样品结果均为阴性,CTN病毒液均为阳性,与小鼠法检测结果一致。细胞培养法的检测灵敏度可达3.3FFU/ml,重复性良好。结论已建立了狂犬病疫苗细胞培养灭活验证实验方法 ,该法具有良好的灵敏度和重复性,可用于狂犬病疫苗的灭活验证。

    2010年06期 v.23 643-645页 [查看摘要][在线阅读][下载 301K]
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  • 重组人睫状神经营养因子生物学活性检测方法的建立

    李萍;蒋琳;马亚茹;应莲芳;卜晓萍;

    目的建立重组人睫状神经营养因子(Recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF)的生物学活性检测方法 ,在其研制和生产中进行有效的质量控制。方法应用鸡胚睫状神经节细胞培养法和鸡胚背根神经节法,对rhCNTF进行定性和半定量检测;应用TF-1.CN5a.1细胞增殖法检测rhCNTF的活性;应用正常小鼠减重法,对rhCNTF的减肥生物学活性进行检测。并探索4种方法的实验条件及优缺点。结果上述4种方法均能用于rhCNTF的生物学活性测定,以TF-1.CN5a.1细胞增殖法及正常小鼠减重法结合使用最为有效。结论可联合使用TF-1.CN5a.1细胞增殖法和正常小鼠减重法,对重组rhCNTF进行质量控制。

    2010年06期 v.23 646-648+653页 [查看摘要][在线阅读][下载 394K]
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  • 二乙烯亚胺对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株的灭活效果

    王白燕;张新文;蔡玮;马磊;高菁霞;孙明波;姜述德;李卫东;杨静思;廖国阳;

    目的观察二乙烯亚胺(Binary ethylenimine,BEI)对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株的灭活效果。方法在不同温度(37、33、28和25℃)下采用4种浓度(0.002、0.001、0.0005和0.00025mol/L)的BEI及0.0925mg/ml的甲醛对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株进行灭活,采用微量滴定法测定病毒感染性滴度,ELISA法检测灭活病毒液D抗原含量,并进行病毒灭活验证试验。结果在37℃条件下,0.002mol/L的BEI能在48h内完全灭活病毒,灭活后的病毒液D抗原含量回收率为90.6%,显著高于甲醛灭活的回收率(60.6%)。经验证,灭活彻底,无活病毒存在。结论 BEI对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株的D抗原破坏小,能较好地保持疫苗的有效成分。

    2010年06期 v.23 649-653页 [查看摘要][在线阅读][下载 285K]
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  • 抗肝癌基因疫苗内毒素去除方法的建立

    吕婧;杨晓玲;朱智强;王建华;张悦红;牛勃;

    目的建立去除抗肝癌基因疫苗pVAX1-aLCGV内毒素的方法。方法采用Triton X-114液相分离法去除抗肝癌基因疫苗中的内毒素,鲎试剂法检测疫苗中的内毒素含量,家兔法复试,ELISA法检测内毒素入血前后血浆中细胞因子TNF-α和IL-8的含量及疫苗的免疫原性,并比较处理前后的基因疫苗转染SMMC-7721和HepG2细胞的转染效率。结果经Triton X-114处理后,基因疫苗的内毒素含量及热原检测均合格;内毒素入血后,血浆中TNF-α和IL-8的含量均明显升高;疫苗的免疫原性与处理前比较,差异无统计学意义;处理后疫苗质粒的细胞转染效率增高。结论 Triton X-114能有效去除基因疫苗pVAX1-aLCGV中的内毒素,为其临床应用奠定了基础。

    2010年06期 v.23 654-656页 [查看摘要][在线阅读][下载 136K]
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  • ELISA法间接检测血管内皮生长因子抑制剂的相对结合力

    毕华;丁有学;王兰;刘兰;韩春梅;李永红;饶春明;

    目的采用ELISA法间接检测血管内皮生长因子抑制剂(VEGF Trap)的相对结合力。方法以固定量的VEGF165与VEGF Trap结合,通过双抗体夹心ELISA法检测未结合的、游离的VEGF165,进而求得VEGFTrap的半数抑制浓度(IC50),计算其与反应体系中参比品的IC50之比,即为VEGFTrap的相对结合力。结果同一批次的3支VEGF Trap样品分别经3次测定,相对结合力分别为(100.86±9.43)%、(88.46±13.94)%和(82.66±9.60)%,均值为(90.66±12.60)%,符合该制品质量标准的要求。3次试验的变异系数分别为9.35%、15.76%和11.61%。结论 ELISA法精密性良好,结果客观,影响因素少,可用于VEGF Trap相对亲和力的常规检测。

    2010年06期 v.23 657-659页 [查看摘要][在线阅读][下载 272K]
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消息

  • 征稿

    <正>《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管,中华预防医学会和中国生物技术集团公司长春生物制品研究所主办,是中华预防医学会系列杂志之一,月刊。

    2010年06期 v.23 659页 [查看摘要][在线阅读][下载 37K]
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综述

  • Ⅱ型单纯疱疹病毒疫苗的研究进展

    张华捷;张庶民;

    Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)是一种主要引起人类生殖器疱疹的病原体,在世界范围内广泛流行,不发达国家和地区尤为严重。HSV-2感染不仅严重威胁人类健康,同时也造成大量的经济损失。对HSV-2疫苗的研究已开展多年,历经了灭活疫苗、减毒活疫苗、重组亚单位疫苗、肽疫苗、DNA疫苗等多个阶段,并取得了一定进展,然而到目前为止,全球仍无一种HSV-2疫苗被批准上市。本文对近年来HSV-2疫苗的研究进展作一综述。

    2010年06期 v.23 660-664页 [查看摘要][在线阅读][下载 160K]
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  • 肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-8与慢性阻塞性肺疾病发病机制的关系

    王东;张东岳;

    慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是呼吸系统常见疾病,近期研究表明,一些细胞因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)与COPD的发生密切相关。TNF-α和IL-8作为主要的炎性递质参与了介导气道炎症反应,二者相互作用、相互促进、加速局部炎症的发生发展,可导致气道结构的重塑和气流阻塞的形成,最终对COPD的发生、发展产生影响。本文就TNF-α和IL-8与COPD发病机制的关系作一综述。

    2010年06期 v.23 665-668页 [查看摘要][在线阅读][下载 145K]
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  • 酶联免疫法检测抗狂犬病病毒抗体的研究进展

    王伟伟;张国强;许丽锋;

    狂犬病的有效预防是避免狂犬病大规模流行的关键措施之一。针对人群免疫接种后抗体水平的监测,酶联免疫法(ELISA)以其特异、快捷的特点具有独特的优势。本文就近年来国内外应用ELISA法检测抗狂犬病病毒抗体的研究进展作一综述。

    2010年06期 v.23 669-672页 [查看摘要][在线阅读][下载 132K]
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消息