中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

基础研究

  • 浙江新分离狂犬病病毒街毒株与国内外疫苗株G基因的比较分析

    孟胜利;钱宝峰;章国平;周剑军;吴杰;严家新;徐葛林;

    目的对浙江新近分离的2株狂犬病病毒街毒株的G基因进行遗传学分析,并比较其与国内外使用的狂犬病疫苗株间的差异。方法以直接免疫荧光法和双抗体夹心ELISA法检测伤人犬脑组织,乳鼠接种分离病毒,RT-PCR扩增G基因片段,直接测序后进行遗传学分析。结果在2份伤人犬脑组织(编号LH和ZJCA1)中均检出狂犬病病毒,与其他浙江街毒株相比,G基因核苷酸和氨基酸序列同源性均为98.7%~99.2%。与当前国内外使用的多种疫苗株相比,与CTN疫苗株同源性最高,G基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为79.5%~86.1%和86.8%~94.1%。结论浙江新分离的2株狂犬病病毒街毒株属于基因1型,与当前使用的多种疫苗株相比,与CTN疫苗株属于同一分支,二者的亲缘关系最近。

    2009年09期 v.22 841-844页 [查看摘要][在线阅读][下载 192K]
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消息

  • 征稿

    <正>《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管,中华预防医学会和中国生物技术

    2009年09期 v.22 844页 [查看摘要][在线阅读][下载 40K]
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基础研究

  • 脑红蛋白在内毒素脑损伤过程中的表达上调

    刘超;孙善全;余剑波;徐瑲;杨美;张跃;李京;

    目的探讨内毒素脑损伤模型大鼠的额叶皮质、海马组织、脑脊液(CSF)和血浆中脑红蛋白(NGB)的表达变化及其意义。方法将SD大鼠随机分为内毒素干预组和对照组,内毒素干预组向大鼠第四脑室内注射内毒素0.1mg/kg,对照组注入等剂量的生理盐水。于注射后3、6、12、24、48和72h采血,分离血清,收集CSF,并处死大鼠,留取额叶皮质和海马组织,应用ELISA、Western blot检测NGB含量,免疫组织化学法检测NGB的表达,干燥法检测鼠脑含水量。结果注射6h后,内毒素干扰组鼠脑含水量明显高于对照组,48h达峰值;额叶皮质、海马组织、CSF和血浆中NGB含量显著高于对照组,48h达峰值。结论在内毒素所致脑损伤中,NGB表达上调,且与内毒素的注入时间相关,NGB表达上调是机体内源性神经保护机制之一。

    2009年09期 v.22 845-849页 [查看摘要][在线阅读][下载 343K]
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  • 结核病高危人群预防用无细胞耻垢分枝杆菌疫苗的研制

    陈保文;沈小兵;徐苗;苏城;王国治;

    目的研制结核病高危人群预防用无细胞耻垢分枝杆菌疫苗(MS疫苗)。方法耻垢分枝杆菌培养物经多次洗涤后,制备所需浓度的菌悬液,高压匀浆后,经高压灭菌、稀释、分装、冻干,制成MS疫苗。将结核杆菌感染的豚鼠随机分为A组(接种疫苗8.7μg/次)、B组(接种疫苗17.5μg/次)和C组(接种生理盐水),观察疫苗对结核杆菌感染豚鼠的保护作用。结果MS疫苗浓度确定为每支蛋白含量为17.5μg(0.25mg湿菌)。疫苗具有良好的安全性,且可有效抑制或杀死豚鼠体内的结核杆菌,减轻豚鼠各脏器的病变程度。结论已成功制备MS疫苗,其对结核杆菌感染动物有较好的预防效果,有望成为结核病高危人群预防用疫苗。

    2009年09期 v.22 850-852页 [查看摘要][在线阅读][下载 164K]
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消息

基础研究

  • siRNA介导NF-κB p65沉默联合5-Fu诱导胃癌细胞SGC7901凋亡

    李怡君;王立;

    目的运用siRNA抑制胃癌细胞株SGC7901中NF-κB p65基因的表达,探讨其对细胞增殖和凋亡的影响,并分析该基因对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药性的作用。方法将SGC7901细胞分为空白对照组、脂质体组、5-Fu组、siRNA组和联合组,除空白对照组外,各组分别给予相应的药物。Western blot法检测各组细胞NF-κBp65蛋白的表达;Annexin V-PI法检测细胞凋亡;MTT法检测各组细胞的增殖水平。结果NF-κBp65蛋白在空白对照组和脂质体组中高表达,在5-Fu组、siRNA组和联合组中低表达,其中以联合组表达量最低;各组细胞早期凋亡率分别为1.40%±0.20%、2.36%±0.58%、6.68%±0.34%、6.60%±0.64%和21.62%±1.12%,其中以联合组最高;细胞的增殖活性随着siRNA浓度的增加和作用时间的延长而下降。结论siRNA能有效抑制NF-κBp65基因的表达,从而抑制SGC7901细胞增殖,促进其凋亡,并增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。

    2009年09期 v.22 853-856页 [查看摘要][在线阅读][下载 251K]
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  • 猪卵透明带3α重组腺病毒的构建及纯化

    陈敬;潘善培;熊亚明;黄丹;关艺青;

    目的构建猪卵透明带3α(pZP3α)重组腺病毒,并包装与纯化病毒,为研究猪ZP3α重组腺病毒避孕疫苗奠定基础。方法将pZP3α基因克隆至穿梭质粒pShuttle,重组穿梭质粒pSshuttle-pZP3α再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-5共转化大肠杆菌BJ5183,筛选重组腺病毒质粒pAd-pZP3α,脂质体法转染HEK293A细胞,包装并扩增病毒至第4代。收集重组病毒颗粒,经两轮氯化铯密度梯度离心纯化,紫外吸收法测定总病毒颗粒数(VP),并计算病毒的颗粒性滴度,空斑形成试验测定病毒的感染性滴度。以MOI为10的病毒剂量感染HeLa细胞,PCR鉴定插入病毒的目的基因,斑点免疫印迹法鉴定目的蛋白的表达。结果pZP3α基因成功插入病毒基因组,pZP3α蛋白能在病毒感染的HeLa细胞中正常表达。病毒的颗粒性滴度约为1.3×1011VP/ml,感染性滴度约为3×109PFU/ml。结论已成功构建猪ZP3α重组腺病毒质粒pAd-pZP3α,包装并纯化了重组pZP3α腺病毒颗粒。

    2009年09期 v.22 857-860页 [查看摘要][在线阅读][下载 201K]
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  • 抑癌基因WWOX对Lewis肺癌细胞c-jun蛋白表达及其转录活性的影响

    杨巍;王晓明;

    目的研究抑癌基因WWOX对Lewis肺癌细胞c-jun蛋白表达及其转录活性的影响,探讨WWOX基因的抑癌机制。方法采用脂质体转染法将WWOX基因重组真核表达质粒转染Lewis肺癌细胞,RT-PCR和Western blot法检测WWOX基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平;免疫组化法检测WWOX基因转染后Lewis细胞中c-jun蛋白的表达水平;半定量RT-PCR法检测c-jun调控的4种肿瘤相关基因p21、cyclinD1、FasL及VEGF mRNA的转录水平。结果重组真核表达质粒pcDNA4.0/Myc-His-WWOX转染Lewis细胞后,WWOX基因在mRNA和蛋白水平上均得到表达;与未转染细胞和空载体转染细胞相比,WWOX基因转染细胞胞浆中c-jun蛋白的表达量升高,而细胞核中c-jun蛋白的表达量未见明显差异;p21基因mRNA的转录水平升高,cyclinD1、FasL和VEGF基因mRNA的转录水平降低。结论WWOX基因可在Lewis细胞中表达,其转染Lewis肺癌细胞后,不直接调控c-jun蛋白的表达量,但可影响其转录活性。

    2009年09期 v.22 861-864页 [查看摘要][在线阅读][下载 200K]
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  • 欢迎订阅《中国生物制品学杂志》

    <正>《中国生物制品学杂志》于1988年创刊,由中华人民共和国卫生部主管,系中华预防医学会系列杂志之一,为报道我国生物制品研究开发重大成果和最新进展的国内唯一生物

    2009年09期 v.22 864页 [查看摘要][在线阅读][下载 36K]
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基础研究

  • 乌斯他丁和环磷酰胺对乳腺癌细胞增殖和侵袭及MMP-9表达的影响

    陈建生;孙治君;于涛;

    目的观察乌斯他丁(UTI)和环磷酰胺(CTX)对体外培养的乳腺癌细胞MCF-7(雌激素受体阳性)和乳腺癌细胞MDA-MB-231(雌激素受体阴性)增殖、侵袭及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法将体外培养的乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231分别分为8组:对照组、UTI高、中、低剂量组、CTX组、CTX+UTI高、中、低剂量组,分别用相应药物处理。采用MTT法检测细胞的增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR检测细胞MMP-9基因的表达;Boyden小室侵袭试验检测两种细胞的浸袭能力。结果UTI可明显抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖,使细胞周期阻滞在G2/M期,并能使2株细胞中MMP-9基因的转录水平下降,细胞的增殖侵袭能力降低。CTX与UTI联合应用,其作用效果优于CTX单独使用。结论UTI能增强CTX诱导的乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖抑制作用,二者具有协同效应。其机制可能与UTI降低细胞MMP-9基因的表达等有关。

    2009年09期 v.22 865-868+875页 [查看摘要][在线阅读][下载 249K]
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  • 表达猪Ⅱ型圆环病毒ORF2基因重组鸡痘病毒的构建与鉴定

    韩松;金宁一;鲁会军;赵翠青;

    目的构建表达猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)ORF2基因的重组鸡痘病毒。方法将PCV2ORF2基因插入到转移载体pUTAL复合启动子下游,构建重组鸡痘病毒转移质粒pUTA-ORF2,将该质粒与鸡痘病毒野生株282-E4共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行同源重组。经BrdU加压筛选重组鸡痘病毒,采用RT-PCR和间接免疫荧光法进行鉴定。结果重组鸡痘病毒感染的CEF经RT-PCR可扩增出260bp的目的基因,间接免疫荧光检测可见特异性黄绿色荧光,表明目的基因在重组鸡痘病毒中得到表达。结论已成功构建了1株表达PCV2ORF2基因的重组鸡痘病毒。

    2009年09期 v.22 869-871页 [查看摘要][在线阅读][下载 161K]
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  • 大鼠颅脑损伤后神经细胞的凋亡

    张剑涛;王宏磊;徐宁;付双林;王海峰;

    目的观察大鼠颅脑损伤后不同时间损伤周边区额皮质及海马CA1区神经细胞的凋亡现象,为颅脑外伤的临床治疗提供理论依据。方法将SD大鼠分为正常对照组(30只)、假手术对照组(30只)和损伤组(80只),采用侧位液压冲击法制成颅脑损伤动物模型,损伤组按冲击时脑组织所承受力量大小,进一步分为轻、中、重度3组,采用免疫组织化学技术和原位末端标记法(TUNEL)检测各组大鼠损伤后4、8、24、72、96h和7d大鼠伤灶周边额皮质及海马CA1区的凋亡细胞。结果轻、中、重度损伤组大鼠损伤区周边额皮质和海马CA1区各时间点凋亡阳性细胞数均高于正常对照组和假手术对照组,重度损伤组高于轻度和中度损伤组,且差异均有统计学意义。损伤4h后,各损伤组伤灶边缘额皮质和海马CA1区开始出现凋亡细胞,随后逐渐增加,分别于72和24h达高峰,之后开始下降。结论颅脑损伤可导致损伤周边区大脑额皮质及海马CA1区神经细胞凋亡,凋亡高峰时间分别为损伤后72和24h。

    2009年09期 v.22 872-875页 [查看摘要][在线阅读][下载 293K]
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  • 植物乳杆菌中胆盐水解酶基因的原核表达及纯化

    战媛媛;王长远;于长青;

    目的克隆植物乳杆菌中胆盐水解酶(BSH)基因,原核表达并纯化重组蛋白。方法利用PCR技术扩增植物乳杆菌BSH基因,克隆至表达载体pET-30a,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行纯化及Western blot鉴定。结果重组表达质粒pET-30a-BSH经双酶切鉴定,可见961bp的目的基因条带。表达的重组蛋白相对分子质量约为40000(含6个His标签),主要以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的43%,纯化后,纯度达90%以上,且可与植物乳杆菌多克隆抗血清发生特异性反应。结论已成功克隆了植物乳杆菌中BSH基因,并在大肠杆菌中获得高效表达。纯化的重组蛋白纯度较高,为高效降解胆固醇的基因工程菌株的研究奠定了基础。

    2009年09期 v.22 876-879页 [查看摘要][在线阅读][下载 196K]
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消息

  • 《中国药学术语词库与主题词表》征订启事

    <正>《中国药学术语词库与主题词表》是科技部的重点科技基础性项目。书本产品《中国药学主题词表》是我国第一部涵盖药学及其相关学科主题词的主题词表。对图书文献的编辑、出版、标引、编目、建库、

    2009年09期 v.22 879页 [查看摘要][在线阅读][下载 51K]
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基础研究

  • 人BimS蛋白的原核表达及纯化

    何侃;佟立全;战卓;金英花;

    目的克隆人BimS基因,原核表达并纯化目的蛋白。方法用PCR方法从HeLa细胞cDNA文库中扩增人BimS基因,克隆至pGEX-6P-1表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经GST亲和层析纯化。结果PCR扩增得到327bp的DNA片段,重组表达质粒pGEX-6P-1-BimS经双酶切鉴定和测序分析,表明构建正确。表达的目的蛋白相对分子质量约37000,表达量约占菌体总蛋白的30%,纯化后纯度可达93%。结论已成功克隆并原核表达了人BimS基因,得到纯度较高的BimS蛋白,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。

    2009年09期 v.22 880-881+886页 [查看摘要][在线阅读][下载 139K]
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预防制品

  • 兽用灭活纯化狂犬病疫苗生产工艺的优化

    吕宏亮;王栋;杨培豫;张万林;何海蓉;付秀花;崔松奇;程婷;高彤民;杨晓明;胡启毅;

    目的优化兽用灭活纯化狂犬病疫苗的生产工艺。方法建立BHK21C13细胞主细胞库、工作细胞库,狂犬病病毒疫苗株LEP-Flury主种子批、工作种子批,并进行鉴定。优化悬浮培养工艺参数,并分析病毒原液浓缩、纯化和灭活过程中抗原及成品的稳定性。结果主细胞库、工作细胞库无外源因子污染,细胞形态、生长良好;狂犬病病毒主种子批和工作种子批无外源因子污染,病毒滴度最高可达107.8logLD50/ml。采用15L生物反应器,在优化的培养工艺条件下,细胞密度可达4.5×106个/ml,病毒按0.3MOI接种,灌流培养5次,病毒滴度平均可达106.8logLD50/ml。病毒原液合并后,经750KD中空纤维柱30倍浓缩,Sepharose Fast Flow6层析柱纯化,1/4000β-丙内酯灭活,期间加入稳定剂,纯化疫苗效价平均达(5.03±1.84)IU/头份,纯化的抗原量达(11.75±0.70)μg/头份,在4℃可保存24个月,在37℃可保存30d,在45℃可保存12h。结论优化的兽用灭活狂犬病疫苗的生产工艺可提高疫苗的安全性、有效性及稳定性。

    2009年09期 v.22 882-886页 [查看摘要][在线阅读][下载 193K]
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  • STAg联合蜂胶佐剂鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染的保护作用

    刘成芳;殷国荣;岳毅;赵云鹤;孔丽;刘红丽;

    目的探讨可溶性速殖子抗原(STAg)联合蜂胶佐剂鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染的保护作用及蜂胶的适宜剂量。方法将60只BALB/c小鼠随机分为5组,每组12只,分别用20μgSTAg、20μgSTAg+5μg蜂胶、20μgSTAg+10μg蜂胶、20μgSTAg+20μg蜂胶及20μgSTAg+40μg蜂胶鼻内免疫小鼠2次,间隔14d。末次免疫后第10天,用RH株弓形虫速殖子灌胃攻击,4×104个/只,观察小鼠存活情况。攻击后第30天处死全部小鼠,分离计数小鼠脑、肝组织内速殖子和肠系膜淋巴结淋巴细胞(MLNL)、脾T淋巴细胞;ELISA法检测小鼠肺冲洗液、粪便弓形虫特异性sIgA和血清IgG抗体水平。结果随着蜂胶剂量的增加,小鼠脑、肝速殖子数呈下降趋势,20μgSTAg+40μg蜂胶组显著低于20μgSTAg组,脑、肝组织减虫率分别为46.10%和60.11%;MLNL和脾T淋巴细胞增殖活性提高,其中20μgSTAg+40μg蜂胶组小鼠MLNL和脾T淋巴细胞数分别为(2.09±0.24)×107和(1.89±0.21)×107,均显著高于20μgSTAg组;肺冲洗液、粪便弓形虫特异性sIgA和血清IgG抗体水平呈增高趋势,但各组间差异无统计学意义。结论STAg联合蜂胶佐剂鼻内免疫小鼠可有效诱导抗弓形虫感染的保护作用,适宜的蜂胶剂量为40μg。

    2009年09期 v.22 887-890页 [查看摘要][在线阅读][下载 172K]
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消息

  • 《英汉-汉英生物制品学词汇》出版发行

    <正>由国家药典委员会组织中国生物制品领域众多知名专家主编、中国生物制品集团公司协编的《英汉-汉英生物制品学词汇》,已由科学出版社于2008年第四季度出版。本书是我

    2009年09期 v.22 890页 [查看摘要][在线阅读][下载 42K]
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治疗制品

  • pH值对重组人源抗狂犬病病毒单克隆抗体稳定性的影响

    李耿;程立均;赵伟;刘进怀;张世雄;魏敬双;

    目的研究pH值对重组人源抗狂犬病病毒单克隆抗体NM57稳定性的影响。方法将NM57原液的pH值分别调节为4.0、5.0、6.0、7.0和8.0,分别置于4和40℃保存,于0、2、4、6周取样,观察其外观的变化,并检测其SDS-PAGE及SEC-HPLC纯度。中试规模制备NM57制剂(200IU/ml,pH6.0),4℃放置3、6、9、12、18和24个月,取样观察其外观的变化,SEC-HPLC检测样品纯度,快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测样品中和活性。结果在观察期内,所有样品的外观均保持澄清透明。不同pH值的NM57原液4℃放置6周,纯度无明显变化;40℃放置的不同pH值的NM57原液样品纯度变化有明显差异,NM57(5.0)和NM57(6.0)样品相对稳定。中试规模制备的6批NM57制剂4℃放置24个月,其纯度及中和活性均保持稳定。结论NM57原液在甘氨酸-组氨酸缓冲系统中,pH6.0条件下比较稳定,NM57(pH6.0)制剂长期稳定性良好。

    2009年09期 v.22 891-894页 [查看摘要][在线阅读][下载 203K]
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消息

  • 《中国药学大辞典》(2008年版)征订启事

    <正>《中国药学大辞典》收集词汇近26000条,涉及药用动物、植物、矿物、中药和方剂、药用化学物质、化学药物、药剂学、药物化学、中药学和生药学、微生物药学、生物药学、药物

    2009年09期 v.22 894页 [查看摘要][在线阅读][下载 49K]
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治疗制品

  • 血管内皮生长因子抑制剂生物学活性检测方法的建立

    王兰;饶春明;李永红;高凯;王军志;

    目的建立血管内皮生长因子抑制剂(VEGF Trap)生物学活性检测方法。方法利用HEK293/D9/Flt-18R(al-pha)/Flt-IL18R(beta),clone V3H9细胞系,通过荧光素酶检测系统(Steady-Glo~ Luciferase Assaysystem)进行VEGF Trap的生物学活性检测,用VEGF Trap参考品计算供试品的相对百分效价,并对该方法进行精密性和准确性验证。结果VEGF Trap供试品及参考品在该方法中均存在量效关系,且符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(X/C)B]+D。3批VEGF Trap原液和6批成品经3次测定,相对百分效价的平均值在(90.00±2.40)%~(116.77±16.50)%之间,变异系数均小于15%。1批VEGF Trap原液及成品经3次测定,回收率分别为(90.40±2.67)%和(117.20±18.12)%。结论已成功建立VEGF Trap生物学活性检测方法,该方法重复性好,准确性高,可作为VEGFTrap生物学活性的常规检测方法。

    2009年09期 v.22 895-897+906页 [查看摘要][在线阅读][下载 189K]
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  • 重组人aFGF工程菌发酵条件的优化

    王树民;解佳森;刘丹;杜金霞;王晓杰;田海山;李校堃;

    目的优化重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)工程菌的发酵条件。方法采用分批补料方式,在菌体快速生长阶段,通过变速流加碳源和氮源,控制流加比例,调节pH值和溶解氧(DO)含量,实现工程菌的高密度发酵及目的蛋白的高效表达。结果当碳源与氮源流加比例为3:1时,菌体湿重可达145g/L,干重达36g/L,目的蛋白表达量达28.9%;DO控制在20%时,全菌体和裂解液中目的蛋白的表达量均最高,分别可达29.11%和44.28%。结论已初步优化了rhaFGF工程菌的发酵条件。

    2009年09期 v.22 898-900页 [查看摘要][在线阅读][下载 165K]
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  • WuTac与CD25抗原结合的饱和度及其对健康人外周血淋巴细胞亚群的影响

    孙可芳;杜雯;张囡;郭长福;黎维勇;赵亚杰;胡豫;张爱华;

    目的动态监测鼠抗人T淋巴细胞CD25抗原单克隆抗体(WuTac)在健康人中与CD25抗原结合的饱和度及其对外周血淋巴细胞亚群的影响,评价WuTac临床应用的安全性,并预测其有效性。方法静脉恒速滴注WuTac0.05、0.1、0.2mg/kg,在用药前和停药后的1、24和72h经肘静脉采血,通过流式细胞术动态监测T淋巴细胞亚群及与CD25抗原结合的饱和度。结果不同剂量组的T淋巴细胞亚群用药前后差异均无统计学意义;停药后1h开始,CD25+淋巴细胞的比例明显降低,且一直持续至停药后72h,CD25+淋巴细胞的比例均明显低于用药前。不同剂量组的CD25抗原的饱和度均达96%以上。结论WuTac单抗用药后,对健康人T淋巴细胞亚群均无影响,能迅速与CD25高效结合,持续时间72h以上,为其Ⅱ、Ⅲ期临床研究奠定了基础。

    2009年09期 v.22 901-903页 [查看摘要][在线阅读][下载 145K]
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诊断制品

  • 2007~2008年度HIV血液筛查试剂的质量分析

    宋爱京;李秀华;许四宏;聂建辉;王佑春;

    目的对我国2007~2008年度用于血液筛查的HIV试剂进行质量分析。方法采用HIV抗体和HIVP24抗原国家参考品,对我国2007~2008年度用于血液筛查的第三代(218批)和第四代(27批)试剂进行敏感性、特异性及精密性分析。结果2007~2008年度检测的245批试剂全部符合质量要求。在敏感度指标中,约36%(88/245)试剂的抗体检测水平和74%(20/27)的抗原检测水平优于最低检出限的标准;在特异性指标中,95%以上的试剂优于合格标准;试剂的批内变异系数均在11%以内,但大部分试剂的批间变异系数在30%以上。结论我国2007~2008年度用于血液筛查的HIV试剂质量均达到国家现行标准,但试剂的批间差异有待进一步缩小。

    2009年09期 v.22 904-906页 [查看摘要][在线阅读][下载 110K]
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  • 猪血凝性脑脊髓炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定

    陈克研;赵传博;贺文琦;陆慧君;高巍;常志广;王丽;高丰;

    目的制备猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)单克隆抗体,并进行鉴定。方法通过差速离心和蔗糖密度梯度离心法对猪HEV进行纯化,免疫BALB/c小鼠后,取其脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合,经间接ELISA和血凝抑制试验(HI)筛选能稳定分泌抗HEV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单抗进行生物学鉴定。结果筛选出4株能稳定分泌抗HEV单抗的杂交瘤细胞株2H2、2A1、1E2、4D4。经鉴定,4株杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水抗HEV的ELISA效价可达1∶12800~1∶51200,其中3株HI效价可达1∶24~1∶28,另1株为0。4株杂交瘤细胞分泌的单抗与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)均不发生交叉反应;杂交瘤细胞染色体数为83~103;除2A1单抗为IgG2b外,其他3株均为IgG1;Westernblot分析表明,2H2、2A1和4D4能识别HEV的血凝素-酯酶蛋白(HE),1E2可识别纤突蛋白(S)。结论已成功制备出抗HEV的单克隆抗体,为HEV快速检测试剂的研制奠定了基础。

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消息

  • 《实用药品正异名词典》(2007年版)征订启事

    <正>为方便临床医生合理选用药物,以及便于医药科研、经营工作者学习与掌握有关药物知识,同时顺应国家食品药品监督管理局逐步加强对药品说明书的规范和管理形势,我们在工作实践中收集、

    2009年09期 v.22 910页 [查看摘要][在线阅读][下载 51K]
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临床观察

  • 开封农村地区婴幼儿中肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型中和抗体水平及流行趋势

    毛群颖;杨再伟;于翔;荆庆;何鹏;黄维金;吴晓音;万宗举;梁争论;李凤祥;王军志;

    目的了解开封农村地区婴幼儿中肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16)中和抗体水平及流行趋势。方法应用微量细胞病变法,对2004年开封农村地区采集的349名7~30月龄婴幼儿血清进行EV71和CA16中和抗体检测。结果7~30月龄婴幼儿EV71和CA16中和抗体阳性率分别为36.7%(128/349)和36.5%(123/337),但二者流行趋势不同。EV71抗体阳性率由10~12月龄组的18.2%上升至25~30月龄组的81.3%,上升约4.5倍,抗体几何平均滴度(GMTs)也缓慢上升;CA16抗体阳性率由13~15月龄组的23.0%上升至22~24月龄组的47.6%,上升约2.1倍,GMTs在125~338之间波动;不同月龄婴幼儿中存在EV71和CA16混合感染的情况,19~24和25~30月龄组的EV71和CA16混合感染率显著高于7~12和13~18月龄组。结论开封农村地区婴幼儿中EV71和CA16中和抗体阳性率高,但二者上升的趋势不同,18月龄后的婴幼儿中EV71和CA16混合感染的比例显著升高。

    2009年09期 v.22 911-913+922页 [查看摘要][在线阅读][下载 187K]
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  • 冻干甲型肝炎减毒活疫苗的接种反应及免疫原性观察

    陈胤忠;崔颖杰;汤权;周志芹;刘令九;吴巨飞;刘秀兰;董梅;刘照惠;刘景晔;

    目的观察冻干甲型肝炎减毒活疫苗的接种反应和免疫原性。方法采用随机、开放式试验设计,选择出生后未接种过甲肝疫苗的18月龄以上的儿童和18~35周岁的成人,接种冻干甲肝减毒活疫苗1针。接种后30min观察即时反应,24、48和72h进行局部和全身反应观察,免后30d采血,分离血清,进行免疫原性检测。结果562名观察对象接种疫苗后均未发生局部反应,全身反应仅表现为轻度发热,有35人次(6.23%)发生发热反应。471名完成免疫原性检测的观察对象免后抗-HAV阳性率为99.8%,保护性抗体阳性率为96.4%,抗-HAVGMC水平为527.4mIU/ml,较免前增长30.3倍。儿童组和成人组免后保护性抗体阳性率分别为97.0%和95.9%,抗-HAVGMC水平分别为84.1和2119.1mIU/ml。2组免前免后抗体阳性率和GMC水平差异均有统计学意义。277名易感者免后抗体阳性率为99.6%,保护性抗体阳性率为93.9%,GMC水平为92.6mIU/ml,儿童组免后抗体阳性率明显高于成人组,免后抗-HAVGMC水平则明显低于成人组,2组之间免后抗体阳性率和GMC水平差异均有统计学意义。结论国产冻干甲型肝炎减毒活疫苗接种后副反应轻微,免疫原性良好,适于推广应用。

    2009年09期 v.22 914-916页 [查看摘要][在线阅读][下载 131K]
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实验技术

  • PERT-ELISA法用于细胞逆转录病毒检测的再研究

    孟淑芳;李秀华;林林;冯建平;李修兰;王佑春;李德富;

    目的进一步分析PERT-ELISA法在细胞逆转录病毒检测应用中的意义。方法分析不同细胞培养液及其添加成分对PERT-ELISA法检测结果的影响及检测方法的精密性和检测用试剂的稳定性,将该方法用于不同来源细胞的逆转录酶活性的检测,并通过共培养法对我国金黄地鼠肾细胞中逆转录酶活性是否具有感染性进行初步分析。结果不同细胞培养液及其添加成分逆转录酶活性检测均为阴性,不会影响样本的检测结果。PERT-ELISA法具有良好的试验间精密性及重现性,检测用试剂在保存条件下,至少在1年内可保持稳定。近250株细胞的检测结果显示,含有逆转录病毒颗粒的细胞,无论是否具有感染性,均为逆转录酶活性阳性;除部分人淋巴瘤来源的细胞外,大部分人源细胞为逆转录酶活性阴性;8种91株猴肾来源的细胞包括74株Vero细胞均为逆转录酶活性阴性;而鼠源细胞则大部分为阳性,其中20株CHO来源的细胞均为阳性;3株猪源细胞及1株猫源细胞为阳性,而2株水貂细胞、2株牛源细胞及1株犬源细胞均为阴性。被检测的15株组织工程产品用人源细胞逆转录酶活性均为阴性,而我国不同地区来源的金黄地鼠肾细胞上清中,逆转录酶活性均为阳性。金黄地鼠肾细胞与人2BS细胞共培养后连续传代7次,细胞上清中逆转录酶活性仍为阳性,但随着传代次数的增加呈下降趋势。结论PERT-ELISA法可用于细胞逆转录病毒的检测,但对于阳性细胞,还需要进一步分析其与逆转录病毒或逆转录病毒样颗粒的相关性及是否具有感染性。

    2009年09期 v.22 917-922页 [查看摘要][在线阅读][下载 221K]
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  • 罗式电化学发光法在乙型肝炎疫苗质量控制中的应用

    朱亭玉;王明莹;何亚丽;苏桂民;齐璇;柳蔷;李津;庄辉;赵铠;

    目的用罗式电化学发光法检测乙型肝炎疫苗(酵母)生产过程中纯化工序关键样品的HBsAg含量和疫苗的体外相对效力(RP),以取代雅培珠式EIA法。方法分别用科华板式EIA法、雅培MUREX板式EIA法、罗式电化学发光法与雅培珠式EIA法对比检测重组乙型肝炎疫苗(酵母)生产过程中纯化工序关键样品的HBsAg含量和疫苗的RP值,并分析3种方法的精密性。结果科华板式EIA法和雅培MUREX板式EIA法检测纯化工序关键样品的HBsAg含量结果与雅培珠式EIA法比较,差异均有统计学意义,且精密性均不佳;罗式电化学发光法检测纯化工序关键样品的HBsAg含量及疫苗的RP值结果与雅培珠式EIA法比较,差异均无统计学意义,且精密性均良好。结论罗式电化学发光法可以替代雅培珠式EIA法,检测乙肝疫苗(酵母)生产过程中HBsAg含量和疫苗的RP值。

    2009年09期 v.22 923-926页 [查看摘要][在线阅读][下载 151K]
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  • DNA水平电泳检测重庆地区汉族人MDR1C3435T基因多态性

    马丽芳;周琦;徐建业;李少林;

    目的应用DNA水平聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测重庆地区汉族人MDR1C3435T基因的多态性。方法PCR扩增重庆地区正常汉族人外周血MDR1C3435T基因,以MboⅠ进行限制性酶切,用DNA水平PAGE作图谱分析。结果200名重庆地区汉族人MDR1C3435T基因中,表型T/T的频率为0.15,T/C为0.49,C/C为0.36。MDR1C3435T基因T频率为0.395,基因C为0.605。结论重庆地区汉族人MDR1C3435T基因的分布与我国其他地区人群基本接近,地区差异不明显。DNA水平PAGE为一种简单可靠的基因多态性分析方法,值得在基层单位推广。

    2009年09期 v.22 927-929页 [查看摘要][在线阅读][下载 141K]
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  • 肺炎链球菌18C型多糖结合物中游离多糖含量检测方法的建立

    吴凯;陈磊;周红军;樊会兰;周燕美;包南艳;徐娅妮;袁琳;张益丽;黄镇;

    目的建立肺炎链球菌18C型多糖结合物中游离多糖含量的测定方法。方法采用不同条件预处理样品,将结合多糖与游离多糖分离,用改良蒽酮法测定结合物中总糖与游离多糖的浓度,计算出结合物中游离多糖的含量,并对检测方法进行验证。结果采用5mol/L氯化钠溶液、85%乙醇溶液及-20℃冻存72h预处理样品,结合多糖与游离多糖的分离率及实验的有效性均最高。采用本方法测定肺炎链球菌18C型多糖结合物中游离多糖含量,结合多糖与游离多糖分离率的变异系数CV值为1.7%,实验有效性变异系数CV值为5.6%;检测3个浓度供试品的平均回收率分别为98.6%、98.5%和97.0%;检测1批多糖结合疫苗中游离多糖含量的CV值为4.2%。结论已建立肺炎链球菌18C型多糖结合物中游离多糖含量的检测方法,该方法可靠性强,准确性高,精密性良好。

    2009年09期 v.22 930-932页 [查看摘要][在线阅读][下载 117K]
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综述

  • 人鼠嵌合抗体的基因构建

    胡迪超;张爱华;杨晓明;

    为了克服鼠单克隆抗体在人体治疗中出现的问题,经典的基因工程抗体技术将人源抗体恒定区替代鼠抗体的恒定区,即构建人鼠嵌合抗体。嵌合抗体不仅保留了亲本抗体的特异性和亲和力,大大降低了人抗鼠抗体(HAMA)反应,而且可表现出不同的生物学功能和半衰期。本文就嵌合抗体鼠抗体可变区基因的克隆、人抗体恒定区基因的钓取、鼠抗体可变区基因与人抗体恒定区基因的拼接及表达载体和宿主细胞的构建作一综述。

    2009年09期 v.22 933-936+940页 [查看摘要][在线阅读][下载 176K]
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  • 转录因子MafA在胰岛β细胞中的作用

    黄栋;任伟;

    胰岛素是一种可降低血糖水平的多肽类激素,只在胰岛β细胞中分泌。胰岛素基因的转录由多种转录因子引发。转录因子MafA具有β细胞特异性,其在激活胰岛素基因启动子和产生胰岛素的过程中起重要作用。MafA还可以调节多种在胰岛β细胞中起作用的蛋白的表达。MafA的丰度由多种因素在转录和翻译等水平进行调节。利用基因工程的方法使非β细胞过度表达MafA等转录因子,建立分泌胰岛素的细胞系,有可能成为糖尿病基因治疗的一个靶点。本文就转录因子MafA的特点、其在胰岛β细胞中的作用、MafA的表达与调节及其与糖尿病的关系作一综述。

    2009年09期 v.22 937-940页 [查看摘要][在线阅读][下载 153K]
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  • 病毒类疫苗的相互干扰现象

    杨进;

    随着疫苗种类的增多及多价疫苗、联合疫苗的大量使用,疫苗间的相互干扰现象日益突出。本文对疫苗干扰现象的原因、机理、影响因素以及一些常用病毒类疫苗的干扰现象作一综述。

    2009年09期 v.22 941-944页 [查看摘要][在线阅读][下载 132K]
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