中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

基础研究

  • 间充质干细胞及基因转移方法促进新骨生成和大节段骨缺损的修复

    楼觉人;弘之土田;桥本淳一;

    目的构建含人骨形态蛋白-2(BMP-2)基因的重组腺病毒,并转染入间充质干细胞,诱导其向骨细胞分化,从而生成新骨并修复骨缺损。方法用重组腺病毒作为载体,将人BMP-2基因转染入小鼠胚胎间充质干细胞,Western blot检测BMP-2蛋白的分泌表达。观察重组腺病毒Adv-BMP-2转染后小鼠间充质干细胞的增殖变化,并进行碱性磷酸酶活性、钙化结节形成和细胞中成骨相关蛋白mRNA转录水平等细胞分化的指征检定。将Adv-BMP-2转染后的小鼠间充质干细胞注入裸鼠右侧大腿四头肌内,观察新骨生成情况。将重组腺病毒Adv-BMP-2转染的大鼠骨髓间充质干细胞用于大鼠大节段骨缺损的修复,并对植入的骨髓间充质干细胞进行跟踪观察。结果Western blot分析表明,重组腺病毒Adv-BMP-2转染的细胞可分泌表达BMP-2蛋白。转染后的小鼠间充质干细胞的增殖速度与重组腺病毒Adv-BMP-2的转染量呈剂量相关。Adv-BMP-2转染的干细胞碱性磷酸酶上升,并在体外形成钙结节,同时,成骨相关蛋白Osteopontin、Osteocalcin、Bone sialoprotein及Collagenα1(I)的mRNA水平也上升。用Adv-BMP-2转染的间充质干细胞能在裸鼠的大腿肌肉内形成发育成熟的新骨,转染的自体性骨髓间充质干细胞能有效修复大鼠大节段股骨缺损。在免疫抑制剂FK506的支持下,Adv-BMP-2转染的同种异体骨髓间充质干细胞也能修复大鼠的大节段骨缺损。没有FK506支持下的Adv-BMP-2转染的同种异体骨髓间充质干细胞及重组腺病毒Adv-β-gal转染的骨髓间充质干细胞则不能在体内形成新骨。植入骨缺损部位的骨髓间充质干细胞能直接参与骨缺损的修复,且有向全身其他组织器官迁移的趋势,但生存期较短。结论用腺病毒介导的BMP-2基因转染入间充质干细胞能有效诱导干细胞向骨细胞分化,生成新骨并修复骨缺损。

    2009年04期 v.22 313-319页 [查看摘要][在线阅读][下载 495K]
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消息

  • 欢迎订阅《中国生物制品学杂志》

    <正>《中国生物制品学杂志》于1988年创刊,由中华人民共和国卫生部主管,系中华预防医学会系列杂志之一,为报道我国生物制品研究开发重大成果和最新进展的国内唯一生物制品专业学术期刊。主要刊载生物制品和生物技术产品相关

    2009年04期 v.22 319页 [查看摘要][在线阅读][下载 39K]
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基础研究

  • 百日咳毒素S1亚基片段在大肠杆菌中的表达

    时成波;曹玉锋;张秀霞;吴晓娟;李雨桐;徐光磊;尹晓东;

    目的构建百日咳毒素(PT)S1亚基片段原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达重组蛋白。方法根据GenBank中登录的百日咳毒素S1亚基基因序列,人工合成密码子优化的S1基因,利用重叠PCR技术将S1基因上的两段DNA序列拼接在一起,形成一个新的基因序列S1′。将该序列与7ZTS表达载体连接,构建重组原核表达质粒7ZTS-S1′,转化大肠杆菌JM109(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果S1′基因经PCR鉴定及测序证明与预期相符;重组表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确;表达蛋白的相对分子质量约17400,表达量约占菌体总蛋白的8%,且具有良好的反应原性。结论已成功构建百日咳毒素S1亚基片段重组原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了重组蛋白,为PT单抗及其检测试剂盒的研制奠定了基础。

    2009年04期 v.22 320-322页 [查看摘要][在线阅读][下载 180K]
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  • X盒结合蛋白1-u的原核表达及纯化

    李婧;林建炜;张静;郭风劲;

    目的构建X盒结合蛋白1-u(XBP1-u)基因原核表达质粒,表达并纯化XBP1-u蛋白。方法利用RT-PCR技术从肝癌细胞HepG2中扩增XBP1-u基因,先插入中间载体pGEM-Teasy,再将其克隆至原核表达载体pET32a,构建重组原核表达质粒pET32a-XBP1-u,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经Ni-NTA树脂柱亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定。结果测序分析证实,克隆入pET32a的XBP1-u序列与GenBank中登录的XBP1-ucDNA序列一致。IPTG的最佳诱导浓度为0.5mmol/L,最佳诱导时间为6h。目的蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约为33000。纯化的蛋白经SDS-PAGE分析显示单一条带,且具有良好的反应原性。结论已成功构建了XBP1-u基因原核表达质粒,表达并纯化了XBP1-u蛋白,为XBP1-u在肿瘤发病中的作用机制及在应激性疾病临床治疗中的研究奠定了基础。

    2009年04期 v.22 323-326+330页 [查看摘要][在线阅读][下载 234K]
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  • 小鼠可溶性IL-5受体α胞外区基因的克隆及原核表达

    宋爱玲;蔡累;杨怡;王伟华;王增禄;张英起;李志奎;

    目的克隆并原核表达小鼠可溶性IL-5受体α(sIL-5Rα)胞外区基因。方法采用RT-PCR从BALB/c小鼠脾脏组织中分别扩增sIL-5Rα胞外区前后段基因片段,酶切后将两段基因连接,插入原核表达载体pPROEX中,构建重组表达质粒pPROEX/sIL-5Rα,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。采用SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白的表达。结果重组表达质粒经双酶切和DNA测序,证实构建正确。表达的sIL-5Rα胞外区蛋白相对分子质量约36100,表达量约占菌体总蛋白的30%,且可与兔抗小鼠sIL-5Rα单抗发生特异性免疫反应。结论已成功克隆并原核表达了小鼠sIL-5Rα胞外区基因,为进一步探讨sIL-5Rα对哮喘的治疗作用及开发新的哮喘治疗药物奠定了基础。

    2009年04期 v.22 327-330页 [查看摘要][在线阅读][下载 182K]
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  • 重组腺病毒Ad-CMV-TK的构建及其对Lewis细胞的抑制作用

    张煜;于湘辉;查晓;孔维;

    目的构建重组腺病毒Ad-CMV-TK,并检测Ad-CMV-TK/GCV系统对小鼠Lewis肺癌细胞的抑制作用。方法PCR扩增HSV-TK基因,以复制缺陷型腺病毒为载体构建重组腺病毒Ad-CMV-TK,在HEK293细胞中包装,CsCl2梯度离心法纯化后,感染Lewis肺癌细胞,Western blot检测HSV-TK蛋白的表达;MTT法检测Ad-CMV-TK/GCV系统对Lewis细胞的体外抑制作用;同时检测Ad-CMV-TK/GCV系统对C57荷瘤小鼠的抑瘤作用。结果重组腺病毒Ad-CMV-TK感染的Lewis细胞可特异地表达HSV-TK蛋白,Ad-CMV-TK/GCV系统在体外能明显抑制Lewis细胞的生长,当GCV浓度为100μmol/L时,Lewis细胞的存活率仅为16%;在体内能明显抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,与Ad-Blank/GCV对照组和PBS对照组相比,差异具有统计学意义。结论已成功构建了重组腺病毒Ad-CMV-TK,Ad-CMV-TK/GCV系统在体内及体外对小鼠Lewis肺癌细胞均有明显的抑制作用,为进一步研究其抗肿瘤机制及应用奠定了基础。

    2009年04期 v.22 331-333+337页 [查看摘要][在线阅读][下载 217K]
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  • 高脂、胰岛素抵抗合并高脂高糖对大鼠肝脏Angptl3和LPL基因mR-NA转录的影响

    黄家利;王继红;程梅;王欣;曾建涛;

    目的探讨高脂、胰岛素抵抗合并高脂高糖对大鼠肝脏血管生成素样蛋白3(Angptl3)和脂蛋白脂肪酶(LPL)基因mRNA转录的影响。方法建立高脂(HL)、胰岛素抵抗合并高脂高糖(IR-HLG)大鼠模型,采用自动分析仪检测模型大鼠空腹血糖(BG)、总三酰甘油(TG)和胆固醇(TC)含量,采用Realtime PCR定量检测各组大鼠肝组织Angptl3和LPL基因的mRNA转录水平。结果模型组大鼠血清TG、TC含量及肝脏Angptl3和LPL基因mRNA转录水平均较对照组明显升高;IR-HLG组大鼠的BG水平和Angptl3水平较对照组和HL组均明显升高,LPL水平较HL组明显下降。结论随血脂的增高,Angptl3和LPL的表达均增强;在高糖、胰岛素抵抗状态下,Angptl3的表达增高,而LPL的表达则部分受到抑制。

    2009年04期 v.22 334-337页 [查看摘要][在线阅读][下载 222K]
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  • 蜂毒肽/变构hIL-2融合蛋白的原核表达及其对宿主菌生长的影响

    郑旭;鲁晓晴;宋卫青;赵巍;闫志勇;钱冬萌;丁守怡;宋旭霞;徐莉莉;李鹏;王斌;

    目的构建蜂毒肽(Melittin)与变构hIL-2融合基因原核表达质粒,并检测表达的融合蛋白对宿主菌E.coli生长的影响。方法以质粒pGEX-4T-2/Melittin-IL-2(88Arg)为模板,通过PCR定点诱变为Melittin-IL-2(88Arg,125Ala),将PCR产物和pET-15b载体分别经双酶切后连接,构建重组表达质粒pET-15b/M-IL-2(88Arg,125Ala),转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。SDS-PAGE及ELISA分析表达产物;检测诱导不同时间重组菌的A600值,绘制生长曲线,并进行活菌计数。结果PCR扩增的目的片段长542bp,重组表达质粒测序分析证明目的基因如预期突变;ELISA可检测到目的蛋白表达,但表达量较低;SDS-PAGE分析未见目的条带;诱导表达4h,重组菌A600值由0.8下降至0.6;诱导2h,活菌计数由108个/ml降至104个/ml。结论已成功构建了原核表达质粒pET-15b/M-IL-2(88Arg,125Ala),表达的融合蛋白可能对宿主菌具有毒性,从而杀伤宿主菌。

    2009年04期 v.22 338-340+347页 [查看摘要][在线阅读][下载 200K]
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  • miRNA-21对肺癌A549细胞抑癌基因PTEN表达的调控

    徐晓明;张政;彭惠民;晏宁;

    目的探讨miRNA-21对肺癌A549细胞抑癌基因PTEN表达的调控作用。方法人工合成miRNA-21序列,插入到质粒pGenesil-1中,构建重组真核表达质粒,并转染至肺癌A549细胞,采用RT-PCR和Western blot分别检测细胞PTEN基因mRNA转录水平和蛋白的表达水平。结果经酶切和测序鉴定,表明重组真核表达质粒构建正确。转染重组真核表达质粒的A549细胞PTEN基因mRNA转录水平与未转染组相比,差异无统计学意义,蛋白表达水平较未转染组明显降低。结论miRNA-21可能主要在翻译水平调控PTEN基因的表达。

    2009年04期 v.22 341-343页 [查看摘要][在线阅读][下载 166K]
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  • 骨髓间充质干细胞对大鼠胰腺损伤组织的修复作用

    滕春燕;于庭;王春娥;陈玉丙;金春香;

    目的观察骨髓间充质干细胞(MSCs)对大鼠胰腺损伤组织的修复作用。方法应用贴壁法分离、纯化、扩增大鼠MSCs,经流式细胞仪检测其细胞周期及表面标志后,用DAPI标记,经尾静脉注入胰腺损伤模型大鼠体内,15d后,在激光共聚焦显微镜下观察MSCs在大鼠胰腺组织的定位,组织病理切片观察胰腺损伤组织的病理改变,PCR检测胰腺损伤区组织的Sry基因。结果体外纯化、扩增、富集的MSCs经流式细胞仪检测,86.67%的细胞处于G0/G1期,细胞表面CD34呈阴性表达,CD44呈阳性表达。DAPI标记的MSCs移植治疗15d后,激光共聚焦显微镜下可见,MSCs在损伤的胰腺组织中多见,在正常胰腺组织中偶见;组织病理切片可见损伤的胰腺组织结构开始恢复,胰岛再建;PCR结果显示,治疗组胰腺组织可扩增出Sry基因。结论MSCs对大鼠胰腺损伤组织可能具有修复作用。

    2009年04期 v.22 344-347页 [查看摘要][在线阅读][下载 322K]
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  • Survivin启动子调控的EGFP基因真核表达质粒的构建及其在肺癌细胞中的特异性表达

    朱大冕;陈全;李奕璇;朱道银;

    目的构建由Survivin启动子调控的EGFP基因真核表达质粒,并检测其在人肺腺癌A549细胞中的特异性表达。方法以A549细胞基因组DNA为模板,PCR扩增Survivin启动子,替换pEGFP-C1载体中的CMV启动子,构建携带Survivin启动子的pEGFP-C1真核表达质粒pEGFP-C1/Surp,转染A549细胞及人胚肺成纤维细胞MRC-5,在荧光显微镜下观察EGFP的表达。结果重组表达质粒pEGFP-C1/Surp经双酶切和测序鉴定,证明构建正确。转染A549细胞和MRC-5细胞后,在荧光显微镜下可见A549细胞有较强的绿色荧光,而MRC-5细胞则未见绿色荧光。结论已成功构建以Survivin启动子为调控序列、EGFP为标示蛋白的真核表达质粒,且具有较强的肿瘤特异性启动活性,为进一步开发肿瘤靶向性基因治疗载体奠定了基础。

    2009年04期 v.22 348-350页 [查看摘要][在线阅读][下载 184K]
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  • 传染性喉气管炎病毒gD基因重组禽痘病毒的制备、纯化及初步鉴定

    杨明凡;崔保安;陈红英;王学斌;魏战勇;

    目的制备传染性喉气管炎病毒(ILTV)gD基因重组禽痘病毒,并进行纯化及初步鉴定。方法将含有ILTV河南长葛株gD基因的禽痘病毒转移载体转染禽痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞,采用蓝色蚀斑筛选纯化重组禽痘病毒,并经PCR及间接免疫荧光试验(IFA)进行鉴定。结果经过5轮蚀斑筛选纯化,获得1株重组禽痘病毒rFPV-ILTV-gD,其PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,可见约1400bp的ILTVgD特异性条带。IFA检测显示重组禽痘病毒中的ILTVgD基因得到了表达。结论已成功制备并纯化了ILTVgD基因重组禽痘病毒,为预防ILT提供了新的途径。

    2009年04期 v.22 351-353页 [查看摘要][在线阅读][下载 157K]
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消息

基础研究

  • 曲古抑菌素A与罗格列酮联合应用对胃癌细胞增殖的抑制作用

    马国栋;张才全;侯俊;彭洪;

    目的研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)与过氧化物酶体增殖物激活受体γ配体罗格列酮(ROZ)联合应用对胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法首先用不同浓度的TSA和ROZ分别作用于SGC-7901细胞,MTT法检测二者对细胞增殖的抑制作用,以筛选出合适的联合作用浓度。将SGC-7901细胞随机分为对照组、TSA组、ROZ组和TSA+ROZ组,加入相应的药物处理48h后,MTT法检测各组细胞增殖抑制率,并应用流式细胞仪检测细胞周期情况,RT-PCR检测PPARγ和CyclinD1基因mRNA的转录水平。结果对SGC-7901细胞增殖抑制作用不显著的低剂量TSA(40nmol/L)与ROZ联用时,能显著增强ROZ对细胞增殖的抑制作用,TSA+ROZ组G0/G1期细胞比例较单用TSA或ROZ组明显增加,且CyclinD1基因mRNA转录水平明显下降;TSA作用于细胞后,PPARγ基因mRNA转录水平较对照组明显升高,而ROZ单独作用后,细胞PPARγ基因mRNA转录水平无改变。结论TSA可明显增强ROZ对SGC-7901细胞增殖的抑制效应,提示HDAC在SGC-7901细胞内可能具有抑制PPARγ的作用。

    2009年04期 v.22 354-358页 [查看摘要][在线阅读][下载 260K]
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  • 小鼠Chk1基因RNAi表达质粒的构建与筛选

    王铁君;郭喜平;董丽华;韩成敏;

    目的构建并筛选小鼠细胞周期检测点激酶1(Chk1)基因的RNAi表达质粒,为肿瘤的基因治疗探索新途径。方法根据GenBank中登录的Chk1基因序列及shRNA设计原则,设计、合成用于构建Chk1基因RNAi质粒的寡核苷酸,并构建4种重组Chk1RNAi质粒,酶切及测序鉴定正确后,以脂质体LipofectamineTM2000介导转染小鼠Lewis肺癌细胞株。转染后48h,采用RT-PCR技术检测转染细胞中Chk1基因mRNA的转录水平,筛选有效的Chk1RNAi质粒。结果4种重组Chk1RNAi质粒经酶切鉴定及测序证明构建正确。转染后48h,转染质粒pGPU6/GFP/Neo-Chk1-536的Lewis细胞Chk1基因mRNA的转录水平下降,以其作为后续实验的有效质粒。结论已成功构建并筛选出Chk1基因的iRNA表达质粒,为Chk1基因iRNA治疗肿瘤的研究奠定了基础。

    2009年04期 v.22 359-362页 [查看摘要][在线阅读][下载 296K]
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  • 人呼吸道合胞病毒的稳定性

    蒋蕊鞠;李华;龙润乡;陈思瑾;陈洪波;宋霞;崔萍芳;谢忠平;

    目的观察人呼吸道合胞病毒(HRSV)在不同温度保存、冻融和超声波处理的稳定性。方法将HRSVA2株接种于KMB17细胞上适应培养后,收获病毒液,分别置于37、22、4和-20℃条件下保存不同时间,或经冻融和超声波处理后,用微量细胞病变法检测HRSV的感染性滴度,观察其稳定性。结果HRSV在37℃保存,病毒感染性滴度下降很快,第4天时,降至约1.50lgCCID50/ml,5d后降至1.00lgCCID50/ml以下,几乎检测不到;在22℃保存,病毒感染性滴度下降相对缓慢,第14天时比原始滴度降低约3.20lgCCID50/ml;在4℃和-20℃下保存较稳定,分别保存5周和3个月后,病毒感染性滴度下降<0.60lgCCID50/ml。冻融1、2、3次,病毒感染性滴度分别下降1.37、2.55和3.61lgCCID50/ml,冻融4次后,病毒几乎无感染性。超声波处理后,病毒感染性滴度下降很快,处理1次病毒滴度即下降至原始滴度的50%左右,处理2次后,病毒几乎无感染性。结论HRSV不宜在37℃和22℃存放,可短暂保存于4℃,在-20℃可保存较长时间;冻融和超声波处理均对病毒感染性滴度有明显影响。

    2009年04期 v.22 363-365页 [查看摘要][在线阅读][下载 141K]
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消息

  • 征稿

    <正>《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管,中华预防医学会和中国生物技术

    2009年04期 v.22 365页 [查看摘要][在线阅读][下载 36K]
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预防制品

  • 喷雾干燥法制备脊髓灰质炎微球减毒活疫苗

    曾丽文;王道军;胡凝珠;胡云章;

    目的采用喷雾干燥法制备脊髓灰质炎微球减毒活疫苗。方法以正交试验法筛选最佳保护剂配方及最佳工艺条件,通过样品的得率、含水量、病毒滴度、微球形态、粒径大小分布和热力学性质等特性评价疫苗的稳定性。结果最佳喷雾干燥工艺为:入口风温180℃,入口风压3.9m/s,进样速度2.5ml/min,保护剂配方1.5%海藻糖+0.2%人血白蛋白(HSA)+0.2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)(w/v)。微球形态完整,分散性好,平均粒径为10.9μm,得率为54.25%,干粉疫苗37℃放置1周和25℃保存6个月,病毒的滴度下降不超过0.5lgCCID50/ml。结论喷雾干燥法制备的脊髓灰质炎微球减毒活疫苗稳定性好,工艺简便,易于工业化生产。

    2009年04期 v.22 366-370页 [查看摘要][在线阅读][下载 242K]
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消息

预防制品

  • 人用重组禽流感血凝素疫苗接种大鼠的安全性及免疫原性

    徐潘生;陈云祥;沈敏;辛艳飞;陈国灿;张升;张立将;由振强;宣尧仙;

    目的评价家蚕生物反应器生产的重组禽流感血凝素疫苗的安全性和免疫原性。方法将SD大鼠随机分为5组,分别经皮下注射9.4、1.88和0.375mg/kg剂量的重组禽流感血凝素疫苗(含氢氧化铝佐剂)、A(lOH)3和生理盐水,每10d注射1次,连续注射3次,分别于第1次给药后第2、22和42天进行血液学、血液生化学、病理学和免疫原性检测。结果3个剂量组疫苗第1次给药后第42天,检测抗体滴度(P/N)在8~11之间,CD4+、CD8+T淋巴细胞含量及IFNγ和IL-2的含量与两对照组相比,未见明显升高;连续3次给药后,大鼠的血液学和生化学指标均无明显改变;给药期间注射部位皮下出现肉芽肿样结节,经20d恢复后有所改善;9.4和1.88mg/kg剂量组动物出现可逆性的脾肿大症状;整个实验期间,动物未出现任何其他明显不良反应。结论重组禽流感血凝素疫苗对大鼠具有良好的安全性,但免疫原性较低。

    2009年04期 v.22 371-374页 [查看摘要][在线阅读][下载 279K]
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  • 纯化甲型肝炎灭活疫苗接种普通狨猴的安全性及免疫原性

    张玉慧;曹雨露;陈丽玲;郑红;蒋建江;周佳丽;王益民;胡艳灵;黄明;孙玲华;陈明曦;练幼辉;陈统球;

    目的观察纯化甲型肝炎灭活疫苗(Vero细胞)接种普通狨猴的安全性和免疫原性。方法将800EU/0.5ml和1600EU/ml两个剂量的纯化甲肝灭活疫苗(JS-4株)与进口疫苗(50U/ml)分别接种普通狨猴各2只,进行安全性和免疫原性检测,并进行强毒(JS-12株)攻击保护试验及毒力试验。结果接种疫苗后72h,各组狨猴均未发生局部及全身反应;有特异性抗-HAV产生;肝脏血清酶活性均有一过性升高,未见肝脏病理改变;并均能抵抗甲肝病毒强毒株(JS-12)的攻击;JS-4毒株采用106.67CCID50/ml剂量接种狨猴后未见毒力反应,但产生了73000mIU/ml的高水平抗体;而JS-12毒株接种狨猴后,狨猴出现肝脏血清酶活性升高和肝组织病理学改变。结论纯化甲型肝炎灭活疫苗具有良好的安全性和免疫原性。

    2009年04期 v.22 375-377页 [查看摘要][在线阅读][下载 147K]
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治疗制品

  • 氟伐他汀对糖尿病大鼠肾脏CTGF表达的影响

    罗曼宇;吴曼;罗萍;

    目的观察氟伐他汀对糖尿病大鼠肾脏结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法用链脲佐菌素复制糖尿病大鼠模型,成模后给予氟伐他汀治疗。采用ELISA法检测尿微量白蛋白浓度;Western blot和RT-PCR法检测大鼠肾皮质CT-GF蛋白及mRNA的表达水平;免疫组化法检测肾小球内CTGF和FN的表达。结果氟伐他汀治疗组大鼠尿白蛋白排泄率、肾脏肥大指数(KHI)、肾皮质中CTGF的mRNA及蛋白表达、肾小球内CTGF和FN的表达较糖尿病组大鼠均明显降低。结论氟伐他汀能降低肾小球内CTGF及FN的表达,减轻肾小球肥大,起到抑制和延缓糖尿病肾病进展的作用。

    2009年04期 v.22 378-381页 [查看摘要][在线阅读][下载 246K]
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诊断制品

  • 人催乳素化学发光免疫分析试剂盒的制备及验证

    温涛;赵建增;罗胜军;高荣;高英杰;

    目的制备人催乳素(hPRL)化学发光免疫分析(CLIA)试剂盒,并进行验证。方法采用2株不同结合位点的抗hPRL单克隆抗体,1株用于包被微孔板,另1株用于标记HRP,建立双抗体夹心检测系统,配合化学发光底物组装成试剂盒,并进行各项技术指标的验证。结果试剂盒最佳定量范围在5~100ng/ml,标准曲线的相关系数r=0.9999,灵敏度为0.49ng/ml,平均回收率为100.9%,试验内和试验间变异系数分别小于6.3%和10.9%。试剂盒有效期可达1年,特异性良好,出现Hook效应的样品浓度为1500ng/ml。与进口化学发光试剂盒和放射免疫分析试剂盒对比检测84份临床标本的结果呈高度相关,相关系数分别为0.9537和0.9486。结论已成功制备灵敏、特异的hPRLCLIA试剂盒,可用于人催乳素的临床检测。

    2009年04期 v.22 382-384页 [查看摘要][在线阅读][下载 154K]
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临床观察

  • 人用Vero细胞狂犬病疫苗的接种反应观察

    徐志荣;

    目的观察人用Vero细胞狂犬病疫苗的接种反应。方法对810名观察对象采用0、3、7、14、28d共接种5针的程序进行暴露后免疫,观察接种疫苗30min内的即时反应,及24h、72h、15d和3个月内的反应。结果810名观察对象接种人用Vero细胞狂犬病疫苗后,均未发生即时反应,局部及全身一般反应发生率分别为1.85%和1.60%。结论接种人用Vero细胞狂犬病疫苗具有良好的安全性。

    2009年04期 v.22 385-386页 [查看摘要][在线阅读][下载 85K]
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消息

临床观察

  • 子痫前期和子痫患者血小板膜糖蛋白Ⅰbα和Ⅱb的水平及其临床意义

    郑明阳;马晓艳;廖琪;

    目的检测妊娠期高血压子痫前期、子痫患者血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰbα及Ⅱb的水平,并探讨其临床意义。方法采用流式细胞术检测16例轻度子痫前期患者、32例重度子癫前期/子癫患者和22名正常孕晚期孕妇剖宫产术前及术后72h内及20名正常非孕妇女血小板GPⅠbα、GPⅡb水平的变化。结果剖宫产术前,重度子痫前期/子痫组血小板GPⅠbα水平与正常非孕组、正常孕晚期组和轻度子痫前期组比较均明显降低,且差异有统计学意义;其他3组比较,差异无统计学意义;重度子痫前期/子痫组剖宫产术后,血小板GPⅠbα水平与术前比较明显升高,差异有统计学意义;各组血小板GPⅡb水平变化差异无统计学意义。结论GPⅠbα的水平是反映血管内皮损伤、血小板活化、黏附聚集、微血管血栓前状态的重要指标,对于监测病情发展和指导临床治疗具有重要意义。

    2009年04期 v.22 387-389+398页 [查看摘要][在线阅读][下载 208K]
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实验技术

  • BrdU标记家兔成纤维细胞的体外及体内实验观察

    甄勇;许侃;罗祺;陈学思;赵长稳;王柏;张德智;

    目的用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记家兔皮肤成纤维细胞,确定最佳标记方法,探讨其作为成纤维细胞示踪方法的可行性。方法取12~16周龄健康中国大耳白兔颈部皮肤,胶原酶消化,分离并培养成纤维细胞。取第3代细胞,加入终浓度分别为2.5、5、10和15μg/ml的BrdU共培养,MTT法检测细胞的生长情况。分别用2.5、5、10和15μg/ml的BrdU标记第3代细胞,标记6、12、24和48h后,采用免疫荧光法检测各组细胞的标记阳性率。以最佳剂量及时间标记家兔成纤维细胞,与壳聚糖-甘油磷酸钠水凝胶混合后,注入兔颈内动脉,1周后,免疫荧光法观察植入细胞。结果加入BrdU48h内,各浓度的BrdU对家兔成纤维细胞生长的影响均不明显。标记剂量及标记时间均可影响标记率,但标记时间的影响更大。5μg/ml剂量标记24h,标记率可达(94.50±2.08)%,再加大标记剂量或延长标记时间,标记率提高不明显。以该方法标记的家兔成纤维细胞注入家兔颈内动脉1周后,可在兔颈内动脉观察到大量标记细胞。结论BrdU对家兔成纤维细胞的最佳标记方法为5μg/ml标记24h,该方法对细胞影响小,标记率高,适用于成纤维细胞体内示踪。

    2009年04期 v.22 390-394页 [查看摘要][在线阅读][下载 346K]
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临床观察

实验技术

  • 重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体纯化条件的优化

    孙静;傅晶晶;霍烛;陈佩;胡云章;刘勇;郝彦玲;

    目的优化重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件。方法将表达Gp41的大肠杆菌菌体高压匀浆破碎、洗涤分离提取包涵体,以不同pH值的低浓度变性剂溶解包涵体,稀释复性并用离子交换层析纯化目的蛋白,纯化产物经West-ernblot进行鉴定。结果以50mmol/LTris buffer、2mol/L,pH11.5尿素溶解的包涵体蛋白得到很好的溶解,目的蛋白复性得率大于40%。经纯化后,目的蛋白的纯度大于90%,且具有良好的反应原性。结论优化了重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件,为HIV-1Gp41抗原纯化工艺的放大提供了依据。

    2009年04期 v.22 395-398页 [查看摘要][在线阅读][下载 207K]
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  • 合成多肽抗原检测原发性肝癌血清标志物ELISA方法的建立及应用

    王文;王锦红;缪晓辉;Mark A Feitelson;戚中田;

    目的建立用合成多肽抗原检测原发性肝癌血清标志物的ELISA方法,并进行初步应用。方法利用筛选的5种与乙型肝炎病毒X抗原(HBx)诱导肝癌相关的细胞蛋白URG4、URG7、URG11、S15a和Sui1,作为原发性肝癌的筛查和早期诊断的血清标志物,根据上述蛋白的序列合成多肽(L4A/L4B、L7B、L11-1/L11-3/L11-4、L12A/L12B和Sui1A/Sui1B),作为检测抗原,建立检测相应抗体的间接ELISA法,并进行敏感性、特异性、精密性评价及临床应用。结果所建立的间接ELISA法敏感性为93.8%,特异性为97.9%,试验内和试验间变异系数分别为3.8%~5.6%和7.4%~10.3%;检测161份肝癌、肝硬化及乙型肝炎患者血清样本中,1种指标以上阳性检出率分别为90.4%、92.6%和61.7%,2种指标以上阳性检出率分别为78.6%、70.6%和48.3%;39份正常献血员血清中,1种指标以上阳性检出率为12.2%,2种指标以上阳性检出率为6.3%。结论所建立的ELISA法可作为目前的AFP和核磁共振诊断方法的有益补充,用于原发性肝癌高危人群的筛选和小肝癌的早期诊断。

    2009年04期 v.22 399-401页 [查看摘要][在线阅读][下载 140K]
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  • 人血小板衍生生长因子-BB在酿酒酵母中的表达及纯化工艺的建立

    薛亮;朱艳飞;彭端;王永华;杨博;杨汝德;

    目的建立重组人血小板衍生生长因子-BB(hPDGF-BB)在酿酒酵母中的表达及纯化工艺。方法在5L发酵罐中,探讨接种量、溶氧、诱导温度和诱导pH值对菌体密度及目的蛋白表达量的影响,并通过离子交换层析和凝胶过滤层析对目的蛋白进行纯化。结果重组hPDGF-BB工程菌在5L发酵罐分批补料培养中,经84h发酵,细胞A600值可达65.1,目的蛋白表达量占26%。纯化后的蛋白纯度可达95%,产量为15.4mg/L,收率为21.9%。结论已建立了周期短、产率高的hPDGF-BB发酵及纯化工艺,为其大规模生产奠定了基础。

    2009年04期 v.22 402-405页 [查看摘要][在线阅读][下载 243K]
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综述

  • HIV-1 Tat蛋白的生物学特性及其致病效应

    滕竞飞;潘卫;

    Tat蛋白是HIV-1编码的重要调控蛋白,在病毒复制和感染致病中起重要作用。在感染细胞内,Tat蛋白与多种细胞分子相互作用,启动病毒基因组的转录,促进转录延伸,从而激活和促进病毒复制;分泌和释放至细胞外的Tat蛋白,具有独特的穿膜功能,可到达宿主多个部位,作用于多种细胞,产生多样的Tat蛋白胞外活性,如参与免疫抑制、神经系统损伤及卡波济肉瘤形成等致病过程,被称为"病毒毒素"。本文对Tat蛋白的生物学特性及其致病效应作一综述。

    2009年04期 v.22 406-410页 [查看摘要][在线阅读][下载 198K]
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  • 成体干细胞可塑性研究进展

    丁宁;王世立;

    成体干细胞是存在于发育成熟机体组织中的具有自我更新和分化潜能的细胞。已证实,骨髓、神经、肌肉、脂肪等多种组织中的干细胞具有多向分化的潜能。这些干细胞可以打破胚层界限,横向分化为其他组织的成熟细胞,这种性质称为干细胞的可塑性,是成体干细胞应用于临床的理论基础,具有广阔的临床应用前景。然而对干细胞可塑性的机制仍存在较大的争议。本文对近几年此方面的研究进展作一综述。

    2009年04期 v.22 411-414页 [查看摘要][在线阅读][下载 130K]
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  • 血清中抗水痘病毒IgG抗体的检测方法

    宋颖丽;姜典财;李长贵;

    水痘是由水痘-带状疱疹病毒引起的一种疾病,主要见于儿童,在人群中具有极高的感染率。IgG是机体感染水痘后产生的两种主要中和抗体之一,检测血清中水痘IgG抗体在水痘血清流行病学研究、水痘疫苗的免疫效果评价、临床诊断等方面具有重要意义。本文主要对检测血清中水痘IgG抗体敏感性和特异性较高的膜抗原荧光抗体法、酶联免疫吸附法、间接免疫荧光抗体法、免疫吸附血凝试验法、补体扩大中和试验法和放射免疫法作简要介绍。

    2009年04期 v.22 415-416+424页 [查看摘要][在线阅读][下载 115K]
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  • 细胞外超氧化物歧化酶基因转移及活性调控的研究进展

    杨丰科;徐克;李思东;

    超氧化物(O2.-)与许多病理过程有关,通过细胞外超氧化物歧化酶(ecSOD)基因转移除去细胞外的超氧化物,对于治疗因氧化应激反应过强而引发的血管疾病具有广阔的前景。最近的研究已揭示了ecSOD的表达调控以及肝素取代等方面的相关机制,为探讨ecSOD如何与其他因素协同作用,从而调节血管功能的机理提供了新的思路。本文对ecSOD基因转移及活性调控的最新研究进展作一综述。

    2009年04期 v.22 417-420页 [查看摘要][在线阅读][下载 137K]
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述评

  • 病毒性疫苗生产用牛血清质控问题的探讨

    洪小栩;佘清;

    <正>目前,绝大部分病毒性疫苗是通过细胞培养制备的。牛血清中含有的多种生物活性物质,如生长因子、激素、脂类、无机盐等成分,是细胞繁殖所需促生长因子和营养物质的来源。牛血清已广泛用于细胞

    2009年04期 v.22 421-424页 [查看摘要][在线阅读][下载 113K]
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  • 《中国生物制品学杂志》稿约

    <正>《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊,由国家卫生部主管,中华预防医学会和中国生物技术集团公司长春生物制品研究所主办,月刊。1刊载内容和设置栏目本

    2009年04期 v.22 425页 [查看摘要][在线阅读][下载 298K]
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