中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

消息

  • 第四届中国医药生物技术论坛征文通知

    <正>由中国医药生物技术协会、中国医学科学院、军事医学科学院共同举办的"第四届中国医药生物技术论坛"将于2009年8月在大连召开,大会除主论坛外,还设疫苗产业新

    2009年03期 v.22 208页 [查看摘要][在线阅读][下载 40K]
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基础研究

  • 东亚钳蝎氯离子通道毒素BmK CTa在大肠杆菌中的异源表达及其对宿主菌增殖的影响

    殷丽天;付月君;梁爱华;殷国荣;

    目的在大肠杆菌中异源表达东亚钳蝎氯离子通道毒素BmK CTa,并观察其对宿主菌增殖的影响。方法构建BmK CT基因原核表达质粒pExSecI-rBmK CTa,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。光密度法检测含不同质粒的大肠杆菌BL21(DE3)及空菌在37℃,LB液体培养基中的生长速率。结果重组原核表达质粒pExSecI-rBmK CTa经PCR、双酶切和测序证明构建正确。目的蛋白的表达量占全菌总蛋白的19.94%,为可溶性表达,且具有良好的反应原性。rBmK CTa的异源表达显著抑制了大肠杆菌在对数生长期的增殖。结论rBmK CTa在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了可溶性表达,且对大肠杆菌的生长具有显著的抑制作用。提示BmK CT可能特异性地作用于宿主菌的氯离子通道,对原核生物的氯离子通道有抑制作用。

    2009年03期 v.22 209-212页 [查看摘要][在线阅读][下载 337K]
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  • 靶向Pin1基因的shRNA干扰质粒的构建及其对大肠癌SW620细胞Pin1基因的抑制作用

    郝华;李美宁;赵志兰;杜叶平;秦立元;程牛亮;

    目的构建靶向Pin1基因的短发夹RNA(shRNA)干扰真核表达质粒,并检测其对大肠癌SW620细胞Pin1基因的抑制作用。方法设计合成特异性针对人Pin1基因的寡核苷酸序列,退火后与pGenesil-1载体连接,构建靶向Pin1基因的shRNA真核表达质粒pGenesil-1-Pin1(+),利用脂质体转染大肠癌SW620细胞,以质粒pGenesil-1-Pin(-)转染细胞和未转染细胞为对照。利用荧光显微镜观察转染后细胞表达的绿色荧光蛋白,估算转染效率;应用实时荧光定量PCR和Western blot检测其对SW620细胞Pin1基因mRNA转录及蛋白表达的影响。结果所构建的特异Pin1shRNA真核表达质粒经酶切及测序证明构建正确,转染SW620细胞的转染效率为64%。shRNA对SW620细胞Pin1基因mRNA的抑制率在转染后72h最高,为70.2%,蛋白抑制率为60%。结论已成功构建了靶向Pin1基因的shRNA干扰真核表达质粒,可抑制SW620细胞Pin1基因mRNA的转录及蛋白的表达。

    2009年03期 v.22 213-216页 [查看摘要][在线阅读][下载 465K]
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  • 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5、M蛋白基因核酸疫苗表达质粒的构建及其免疫原性

    周井祥;薛江东;张嘉保;刘殿峰;袁宝;扈荣良;

    目的构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株GP5、M蛋白基因核酸疫苗表达质粒,并检测其免疫原性。方法用RT-PCR法扩增PRRSV的GP5和M蛋白基因片段,克隆至真核表达载体pIRES-neo中,构建真核表达质粒pIRES-G和pIRES-M,制备核酸疫苗,以其单独或联合免疫小鼠,检测其免疫原性。结果真核表达质粒pIRES-G和pIRES-M经酶切鉴定证明构建正确。第1次免疫后4周,各重组质粒免疫组小鼠血清ELISA抗体水平均显著升高,其中pIRES-G + pIRES-M组抗体水平最高;第1次免疫后9周,pIRES-G + pIRES-M组小鼠血清中和抗体效价(1∶16)高于pIRES-G组(1∶8)和pIRES-M组(1∶4),但均低于灭活疫苗组(1∶64);第1次免疫后9周,与pIRES-neo组相比,各组免疫小鼠脾细胞经特异性(PRRSV)和非特异性(ConA)抗原刺激后,均有明显的增殖,对非特异性刺激反应比特异性刺激反应略强。结论已成功构建PRRSV GP5、M蛋白基因核酸疫苗表达质粒,二者联合免疫效果更好。

    2009年03期 v.22 217-220+225页 [查看摘要][在线阅读][下载 258K]
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  • 人甲型流感病毒H1N1亚型NS1蛋白的原核表达及纯化

    麻粉莲;李引乾;郑丽舒;张骞;张万菊;张钫;刘斌;侯云德;

    目的表达并纯化人甲型流感病毒H1N1亚型NS1蛋白。方法用RT-PCR法从人甲型流感病毒株A/PR/8/34(H1N1)中扩增NS1基因,克隆入原核表达载体pTXB1,构建重组原核表达质粒pTXB1/NS1,经酶切鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达形式和表达量。经几丁质柱亲和层析纯化表达蛋白,串联飞行时间质谱仪检测其相对分子质量。结果所构建的重组表达质粒pTXB1/NS1序列完整,插入的基因片段全长690bp。以1.0mmol/LIPTG37℃诱导4h,重组蛋白表达量最高,占菌体总蛋白的50%以上。破菌上清及沉淀中均有目的蛋白表达。纯化的NS1蛋白纯度达95%以上,相对分子质量约为26000。结论已成功表达并纯化了人甲型流感病毒H1N1亚型NS1蛋白,为其进一步的研究奠定了基础。

    2009年03期 v.22 221-225页 [查看摘要][在线阅读][下载 391K]
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  • 人脑钠肽与人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及其活性

    丁月娣;雷楗勇;陈蕴;张莲芬;金坚;

    目的在毕赤酵母中表达重组人脑钠肽(BNP)与人血清白蛋白(HSA)融合蛋白,并检测其活性。方法重叠PCR法拼接BNP二联体与HSA基因,插入表达载体pPIC9K,电穿孔法转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE分析、Western blot鉴定及活性检测。结果融合基因(BNP)2-HSA经测序正确,重组表达质粒经双酶切鉴定构建正确。诱导72h,融合蛋白表达量最高,可达200mg/ml,且具有良好的反应原性,其活性为rhBNP标准品的1%。结论已在毕赤酵母中成功表达了具有一定生物活性的(BNP)2-HSA融合蛋白,为开发BNP长效药物奠定了基础。

    2009年03期 v.22 226-229页 [查看摘要][在线阅读][下载 276K]
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  • 骨桥蛋白反义基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞黏附能力的影响

    姜伟栋;于杰;贾明库;宫路路;

    目的探讨骨桥蛋白反义基因(ANOPN)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞黏附能力的影响。方法构建人骨桥蛋白反义基因真核表达质粒pcDNA3.1-ANOPN,将质粒pcDNA3.1-ANOPN、空载体pcDNA3.1(+)和脂质体分别转染MDA-MB-231细胞,将转染细胞分别命名为MDA-ANOPN、MDA-vect和MDA。RT-PCR法检测转染细胞OPN基因mRNA的转录水平,MTT法检测转染细胞的黏附能力。结果重组质粒pcDNA3.1-ANOPN经双酶切、PCR及测序鉴定,证明构建正确。MDA-ANOPN细胞中OPN基因mRNA的转录水平较MDA-vect和MDA细胞明显下降,细胞的黏附能力也明显降低。结论ANOPN可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的黏附。

    2009年03期 v.22 230-232页 [查看摘要][在线阅读][下载 243K]
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  • 胃癌相关miRNAs的筛选及其作用靶点的验证

    罗红春;张祯祯;张霞;宁波;郭进军;聂娜;刘波;吴小翎;

    目的筛选胃癌中相关miRNAs,并验证其作用靶点。方法应用基因芯片技术检测3份正常胃组织标本、24份胃癌组织标本、胃癌细胞SGC7901和正常胃黏膜细胞GES-1中328个miRNAs的表达情况。采用实时荧光定量PCR对结果进行验证,并用基因克隆和Western blot方法分析miR-9的作用靶点。结果共有26个miRNAs在胃癌标本(包括24份胃癌组织和SGC7901细胞)中异常表达。其中19个下调,7个上调。实时荧光定量PCR检测出miR-9在胃癌标本中的表达水平显著下调,该结果与基因芯片检测结果一致。miR-9与RAS癌基因家族成员RAB34的表达呈负相关。结论已初步筛选了胃癌相关miRNAs。miR-9可能是胃癌中的标记性miRNAs之一,RAB34是其作用靶点。

    2009年03期 v.22 233-237页 [查看摘要][在线阅读][下载 254K]
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消息

基础研究

  • 人β-NGF蛋白的原核表达、纯化及其生物活性

    朱武飞;刘亚珍;赵之恭;刘永茂;

    目的在大肠杆菌中表达人神经生长因子β(β-NGF)蛋白,并进行纯化及生物活性检测。方法以人外周血基因组DNA为模板,PCR扩增人β-NGF基因片段,克隆并测序后,与表达载体pET-28a(+)连接,构建重组表达质粒pET-28a-β-NGF,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。采用分子筛层析法对表达产物进行纯化,复性后用鸡胚背根神经节培养试验检测其生物活性。结果酶切和测序证实,PCR扩增的人β-NGF基因片段为β-NGF成熟肽编码序列;重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的23.5%,主要以包涵体形式表达,纯化后蛋白纯度达90%以上,表达量为4.8mg/L菌液,且可明显促进鸡胚背根神经节神经突起生长。结论已在大肠杆菌中成功表达了人β-NGF蛋白,纯化后的重组蛋白具有良好的生物活性。

    2009年03期 v.22 238-241页 [查看摘要][在线阅读][下载 321K]
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消息

基础研究

  • PTD-SARA融合蛋白的表达、纯化及鉴定

    宋扬;张珍;张英起;黄晨;

    目的在大肠杆菌中表达PTD-SARA融合蛋白,并对其进行纯化和鉴定。方法使用大肠杆菌偏爱密码子合成PTD-SARA全长基因,将其克隆入载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-PTD-SARA,转化感受态大肠杆菌M15,IPTG诱导表达。表达产物经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定及N-端测序。结果重组表达质粒pQE-30-PTD-SARA经双酶切及测序鉴定证明构建正确。1.0mmol/LIPTG诱导4h,目的蛋白的表达量最高,约占菌体总蛋白的25%,主要以包涵体形式存在。纯化的融合蛋白纯度为94%,浓度为0.2mg/ml,且具有良好的反应原性,N-端有14个氨基酸。结论已成功表达并纯化了PTD-SARA融合蛋白,为其功能的研究奠定了基础,也为临床防治肾脏纤维化提供了一个新的策略。

    2009年03期 v.22 242-245页 [查看摘要][在线阅读][下载 453K]
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  • 柯萨奇B4病毒非结构蛋白P_2C基因的克隆与表达

    张宸豪;任旷;马爱新;方芳;

    目的克隆并表达柯萨奇B4病毒(CVB4)非结构蛋白P2C基因。方法提取CVB4总RNA,RT-PCR扩增P2C基因,克隆入pUCm-T载体中,进行酶切和测序鉴定。双酶切重组质粒pUCm-T-P2C,将P2C基因片段定向亚克隆至原核表达载体pMAL-C2中,转化大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。结果RT-PCR扩增得到987bp的基因片段,测序结果与GenBank公布的P2C基因序列一致。pMAL-C2-P2C经双酶切鉴定,证明构建正确。表达的融合蛋白相对分子质量约78000,表达量约占菌体总蛋白的25%,且具有良好的反应原性。结论已成功克隆并表达了CVB4P2C基因,为进一步研究其生物学活性奠定了基础。

    2009年03期 v.22 246-248+255页 [查看摘要][在线阅读][下载 272K]
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  • 人表皮生长因子受体HER2胞外近膜区基因的克隆及原核表达

    田晨;石琳;陆敏;朱卫彬;

    目的克隆人表皮生长因子受体HER2胞外近膜区基因,原核表达并纯化重组蛋白。方法从人乳腺癌细胞系SK-Br3中扩增HER2胞外近膜区编码基因,克隆并测序后,插入原核表达质粒pET41d中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并进行纯化。结果从SK-Br3细胞系中扩增出387bp的人HER2胞外近膜区基因;重组表达质粒pET41d/HER2构建正确;IPTG浓度为0.5mmol/L时,目的蛋白的表达量最高;纯化后重组蛋白浓度为1.5mg/ml。结论已成功表达了HER2胞外近膜区蛋白,为抗HER2单克隆抗体的制备提供了抗原。

    2009年03期 v.22 249-251页 [查看摘要][在线阅读][下载 290K]
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  • 骨髓间充质干细胞对胰腺损伤模型大鼠血清生化指标的影响

    滕春燕;于庭;于艳辉;曲雅勤;陈玉丙;金春香;

    目的观察大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)对胰腺损伤模型大鼠血清生化指标的影响。方法胰腺结扎建立大鼠胰腺损伤模型;体外分离纯化及培养大鼠的MSCs,流式细胞术检测细胞周期及细胞表面标志,经尾静脉回输治疗胰腺损伤,逐日观察,并于回输后24h、48h、7d和15d,分别采血,分离血清,检测血淀粉酶与脂肪酶含量。结果分离纯化的MSCs细胞周期中,86.67%处于G0/G1期,表达MSCs表面标志CD44,不表达造血干细胞表面标志CD34。治疗组在回输MSCs15d后,肉眼可见坏死的胰腺组织外观基本恢复正常,24h、48h和7d,血清淀粉酶含量均低于模型组,且差异有统计学意义,在15d时接近于模型组,差异无统计学意义;在24h、48h、7d和15d时,治疗组血清中脂肪酶含量均低于模型组,且差异有统计学意义;24h、48h、7d和15d,治疗组血清中血淀粉酶和脂肪酶含量仍高于正常对照组,且差异有统计学意义。结论骨髓间充质干细胞对胰腺组织损伤的模型大鼠具有治疗作用。

    2009年03期 v.22 252-255页 [查看摘要][在线阅读][下载 332K]
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  • 大鼠动情周期子宫及卵巢内SLC26A3的表达

    徐海艳;黄民;黄彦;

    目的探讨溶质相关载体26A3(SLC26A3)在大鼠动情周期子宫及卵巢内的表达。方法根据阴道涂片检测结果,将12只雌性Wister大鼠分别在动情前期(P)、动情期(E)、动情后期(M)和动情间期(D)断头处死,取出卵巢及子宫,提取总RNA及总蛋白,用RT-PCR及Western blot方法检测卵巢及子宫内SLC26A3在动情周期中各时期的表达。结果子宫内SLC26A3在动情期mRNA的转录水平和蛋白的表达水平相对较高,卵巢内SLC26A3在动情前期和动情期mRNA的转录水平和蛋白的表达水平相对较高。结论动情周期中,SLC26A3在大鼠卵巢及子宫内呈规律性表达,其变化为受孕做好了充分准备。

    2009年03期 v.22 256-258+268页 [查看摘要][在线阅读][下载 286K]
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预防制品

  • 无细胞百日咳疫苗生产用菌株CS的5种保护性抗原基因序列分析

    王雅英;王丽婵;徐颖华;张庶民;

    目的对我国无细胞百日咳疫苗生产用菌株CS的5种保护性抗原的基因序列进行分析。方法分别用PCR扩增CS菌株的PT、FHA、PRN、FIM2和FIM3基因,克隆至pGEM-TEasy vector中,进行序列测定及分析,并确定其基因型。结果获得了CS菌株PT、FHA、PRN、FIM2和FIM35段基因克隆,其核苷酸和氨基酸序列与GenBank中收录的相应百日咳杆菌的同源性均在90%以上,种系进化树分析结果与鲍特菌属进化结果一致。CS的基因型为:PTS1属于ptxS1B型,PTS3属于ptxS3A型,FHA属于FHA1型,PRN属于PRN1型,FIM2属于FIM2-1型,FIM3属于FIM3A型。结论本研究为更好地对我国无细胞百日咳疫苗进行质量控制和百日咳杆菌的基因漂移研究奠定了基础。

    2009年03期 v.22 259-262页 [查看摘要][在线阅读][下载 210K]
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  • 伤寒、副伤寒甲沙门菌毒性和抗原性的稳定性

    刘钰;刘梅影;吕世泽;张学峰;王平;张达伦;林云;王建华;

    目的观察伤寒Vi多糖结合疫苗生产用菌株伤寒沙门菌CMCC50098株和副伤寒甲沙门菌CMCC50073株毒性和抗原性的稳定性。方法将CMCC50098和CMCC50073菌株分别连续传代至30代,取3、5、10、15、20、25、30代次菌,进行小鼠毒性试验,免疫家兔制备血清,进行抗原性试验。结果CMCC50098和CMCC50073菌株连续传30代,毒性均未改变,抗原性均未下降,血清凝集效价均达到1∶12800。结论CMCC50098和CMCC50073菌株连续传代至30代,毒性及抗原性均稳定。

    2009年03期 v.22 263-264页 [查看摘要][在线阅读][下载 85K]
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  • STAg联合CpG ODN滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答

    武云香;石蓉;殷国荣;孟晓丽;张杰;

    目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)联合CpG寡核苷酸(CpG ODN)滴鼻免疫BALB/c小鼠诱导的免疫应答,探讨CpG ODN的佐剂效应。方法将72只雌性BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,每组36只。实验组以20μgSTAg联合10μg CpG ODN滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻,共免疫2次,间隔2周。于末次免疫后第1、2、3、4、5、6周每组分别随机处死6只小鼠,ELISA法检测血清IgG和小肠冲洗液sIgA,分离脾和肠上皮内淋巴细胞(iIEL)并计数。结果实验组小鼠血清IgG水平在末次免疫后第1周即显著高于对照组,在5周内呈持续上升趋势,至第6周出现下降。实验组小鼠小肠冲洗液sIgA水平在各个时间点均高于对照组,第2~6周差异有统计学意义。实验组小鼠脾淋巴细胞和iIEL数量均明显增生,脾淋巴细胞数量在第3周时达高峰,第2~6周显著高于对照组;iIEL数量分别在第2、4周出现2个峰值,第2、3、4周显著高于对照组。结论STAg与CpG ODN联合滴鼻免疫BALB/c小鼠,可有效诱导黏膜部位和系统的体液免疫和细胞免疫应答,且可持续较长时间。

    2009年03期 v.22 265-268页 [查看摘要][在线阅读][下载 175K]
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治疗制品

  • 柳氮磺吡啶与维生素K3联合应用对神经胶质瘤C6细胞增殖的影响

    张承巍;康劲松;张一帆;孙连坤;

    目的观察柳氮磺吡啶(SAS)与维生素K3(VK3)联合应用对神经胶质瘤C6细胞增殖的影响,并探讨二者的作用机制。方法取对数生长期的大鼠神经胶质瘤C6细胞,分别加入不同浓度的SAS、VK3,MTT法检测各组细胞增殖水平,RT-PCR及Western blot法分别检测细胞IKBα基因mRNA的转录水平及P65蛋白的表达水平;TUNEL法检测细胞凋亡。结果SAS单独作用于C6细胞,呈剂量依赖性地抑制细胞增殖;SAS与VK3联合作用,抑制细胞增殖效果更明显。SAS与VK3联合作用4、8、12h,C6细胞IKBα基因mRNA的转录水平逐渐下降,4h时,C6细胞P65蛋白的表达水平增加,而8、12h时降低。SAS与VK3联合作用,TUNEL阳性细胞率明显高于空白对照组及SAS、VK3单独作用组。结论SAS与VK3联合应用,可通过影响NF-κB/IKBα基因的表达,抑制C6细胞增殖,二者联合应用可减少单独药物用量,减轻对正常细胞的毒性作用。

    2009年03期 v.22 269-271+280页 [查看摘要][在线阅读][下载 220K]
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诊断制品

  • 利福霉素单克隆抗体的制备及竞争ELISA检测方法的建立

    曹馨匀;张云涛;谢雍;张甲菊;杨福军;席仲兴;

    目的制备利福霉素单克隆抗体,并建立利福霉素竞争ELISA检测方法。方法通过利福霉素与载体蛋白(BSA、OVA)偶联,制备免疫原和检测抗原,用杂交瘤技术制备单克隆抗体,建立利福霉素竞争ELISA检测方法。结果筛选出5株能稳定分泌抗利福霉素单抗的杂交瘤细胞株,均分泌IgG抗体,其中2H1、5H5、3F12和2C8株的轻链是κ链,3A2株的轻链是λ链;5株单抗为同一位阻群;在碱性条件下较稳定。建立的利福霉素竞争ELISA检测法灵敏度为6ng/ml,与利福平无交叉反应,稳定性良好。结论已成功制备了利福霉素单克隆抗体,并建立了利福霉素竞争ELISA检测法。

    2009年03期 v.22 272-275页 [查看摘要][在线阅读][下载 175K]
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临床观察

  • Survivin在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

    郭芳芳;张学文;邢洪存;

    目的探讨凋亡抑制因子Survivin在结直肠癌组织中的表达及其与各临床病理因素之间的相关性。方法应用RT-PCR技术检测58份结直肠癌组织及其癌旁正常组织标本中Survivin基因的表达,回顾性分析其与诸多临床病理因素间的相关性。结果在58份结直肠癌组织中,Survivin基因的阳性表达率为84.5%,而在癌旁正常组织中均不表达,二者差异有统计学意义。在癌组织中,Survivin的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、部位及组织分化程度无明显相关性,但与Dukes分期及有无淋巴结转移密切相关。结论Survivin基因在结直肠癌组织中高表达,并与病理分期、有无淋巴结转移等恶性临床病理特征有密切相关性,提示Survivin在结直肠癌的发生、发展及预后中发挥重要作用。

    2009年03期 v.22 276-277+283页 [查看摘要][在线阅读][下载 141K]
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  • 24例输血患者血型不规则抗体分析

    杭海;

    目的对输血患者中血型不规则抗体检出情况进行分析,探讨不规则抗体筛检及抗体鉴定在临床输血中的意义。方法收集2006年11月~2007年9月,在山西省临汾市人民医院院输血治疗的患者标本3115份,应用盐水法、RhD初筛试验凝聚胺法检测不规则抗体,抗体筛检阳性标本进一步以微柱凝胶抗人球蛋白法鉴定,分析抗体的特异性。结果凝聚胺法检出不规则抗体22份,微柱凝胶抗人球蛋白法检出24份,其中抗-E抗体占20.8%,抗-c抗体占25.0%,抗-D抗体占12.5%,抗-P1抗体占12.5%,抗-Jkb抗体占29.2%。阳性标本中,Rh系统占62.5%,其他系统占37.5%。结论输血前对受血者进行常规的抗体筛检试验,对预防溶血性输血反应,提高临床用血的安全性和有效性具有重要意义。

    2009年03期 v.22 278-280页 [查看摘要][在线阅读][下载 105K]
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实验技术

  • 以纤维素酯膜作为基底材料进行生物芯片杂交条件的优化

    张伟;李贵玲;胡北侠;张秀美;高淑霞;

    目的优化以纤维素酯膜作为基底材料进行生物芯片杂交的条件。方法分别用不同厂家、不同孔径的基底膜进行杂交,筛选最佳基底膜;以不同长度探针片段、不同核酸标记方式进行杂交,筛选最佳探针长度和靶基因标记方法;分别在30、40和50℃杂交0.5、1.0和1.5h,比较芯片杂交效果。结果美国Millipore公司的0.45μm混合纤维素酯膜为最佳基底膜;Biotin-16-dUTP探针标记方法和在40℃杂交1.0h为最佳杂交条件。结论优化了以纤维素酯膜作为基底材料进行生物芯片杂交的条件。

    2009年03期 v.22 281-283页 [查看摘要][在线阅读][下载 314K]
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  • 矮化蓖麻RAPD-PCR反应体系及扩增程序的优化

    姚远;陈永胜;李凤山;黄凤兰;宋永辉;陈献辉;

    目的优化矮化蓖麻RAPD-PCR反应体系及扩增程序。方法采用正交试验设计,优化RAPD-PCR反应体系(引物、dNTP、Taq酶和Mg2+浓度)及扩增程序(退火温度、退火时间、变性时间、延伸时间和循环次数)。结果25μl反应体系中最佳浓度配比为:引物0.36μmol/L,dNTP0.24mmol/L,Taq酶0.05U/μl,Mg2+1.20mmol/L;最佳扩增程序为:94℃预变性2min;94℃变性45s,36℃退火45s,72℃延伸80s,共35个循环;最后72℃再延伸5min。结论已优化了矮化蓖麻RAPD-PCR的反应体系及扩增程序,为应用RAPD-PCR技术对蓖麻株高性状进行研究奠定了基础。

    2009年03期 v.22 284-287页 [查看摘要][在线阅读][下载 648K]
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基础研究

实验技术

  • 大剂量盐酸异丙肾上腺素诱发大鼠心肌缺血性坏死模型的建立

    高海成;孙波;苗春生;高海梅;任立群;

    目的建立大剂量盐酸异丙肾上腺素(Iso)诱发大鼠心肌缺血性坏死模型。方法多点皮下注射Iso15mg/kg,建立大鼠心肌缺血坏死模型,并检测其心电图(ECG)、血清酶学指标、心肌血清羟脯氨酸含量、三磷酸腺苷(ATP)含量及HE染色结果。结果与正常对照组比较,模型组大鼠心电图各点ST段和T波均有明显的变化;注射Iso后4h,乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平达高峰;注射后6h,天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平达高峰;随着注射后时间的延长和病变程度的加重,心肌血清羟脯氨酸含量明显增加;ATP含量明显降低;注射Iso2h后,模型组即出现小的坏死灶,且随时间的延长,病变程度明显加重,坏死面积在3周达到最大,并出现明显的纤维化。结论一次性皮下多点注射15mg/kg的Iso,可成功地诱发大鼠心肌缺血性坏死,且可出现明显的纤维化。

    2009年03期 v.22 288-290+296页 [查看摘要][在线阅读][下载 348K]
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  • 黑曲霉实时荧光PCR检测方法的建立

    刘金华;贺丹;史艳宇;黄宇;王丽;任常菲;

    目的建立黑曲霉实时荧光PCR检测方法。方法对6种主要病原曲霉(黑曲霉、烟曲霉、杂色曲霉、构巢曲霉、土曲霉及黄曲霉)的GAPDH基因序列进行比对分析,选择黑曲霉特异位点设计引物和探针,对黑曲霉进行实时荧光PCR扩增,并检测该方法的灵敏度及特异性。结果该方法可检出2.78×10-10μg/ml的黑曲霉基因组DNA;对亲源关系较近的11株不同种曲霉及4株其他属临床常见的病原真菌进行实时荧光PCR检测,未发现有交叉反应。结论已建立了灵敏度高、特异性好的快速检测黑曲霉的实时荧光PCR方法。

    2009年03期 v.22 291-293页 [查看摘要][在线阅读][下载 152K]
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消息

  • 征稿

    <正>《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管,中华预防医学会和中国生物技术

    2009年03期 v.22 293页 [查看摘要][在线阅读][下载 34K]
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实验技术

  • 三种常用交叉配血方法检出IgG型抗体能力的比较

    何子毅;刘赴平;刘仁强;刘景春;

    目的比较微柱凝胶法、抗人球蛋白法和凝聚胺法检出IgG型抗体的能力。方法选用IgG抗-D血清致敏O型RhD阳性红细胞悬液,以未致敏的O型RhD阳性红细胞悬液倍比稀释,用微柱凝胶法、抗人球蛋白法和凝聚胺法分别进行检测;用生理盐水分别将IgG抗-D血清和IgG抗-AB血清倍比稀释后分别加入O型RhD阳性红细胞和AB型红细胞,用上述3种方法分别进行检测。结果3种方法对致敏红细胞的最低检出效价为微柱凝胶法1∶8,抗人球蛋白法1∶32,凝聚胺法1∶32;对IgG抗-AB血清的最低检出效价为微柱凝胶法1∶16,凝聚胺法1∶32,抗人球蛋白法1∶64;对IgG抗-D血清的最低检出效价为微柱凝胶法1∶128,凝聚胺法1∶64,抗人球蛋白法1∶16。结论微柱凝胶法对致敏红细胞和IgG抗-AB血清的检出能力均低于抗人球蛋白法和凝聚胺法,对IgG抗-D血清的检出能力高于抗人球蛋白法和凝聚胺法。3种方法用于交叉配血均存在阳性漏检现象,选择合适的检测方法是保证输血安全的基础。

    2009年03期 v.22 294-296页 [查看摘要][在线阅读][下载 102K]
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综述

  • 细菌菌蜕的研究进展

    蔡昆;王慧;

    细菌菌蜕是革兰阴性细菌被噬菌体PhiX174的裂解基因E裂解后形成的完整细菌空壳。细菌菌蜕兼顾了组合抗原免疫原性、佐剂效应、靶向性载体的作用,特别适合于黏膜免疫及口服免疫;由于缺乏内含物而更加安全;生产过程简单,适宜大规模生产。这些特性决定了细菌菌蜕是一种具有良好应用前景的候选疫苗及递送系统。本文就细菌菌蜕的研究进展作一综述。

    2009年03期 v.22 297-300页 [查看摘要][在线阅读][下载 150K]
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  • 口蹄疫疫苗的研究进展

    陈里新;靳玉珠;扈荣良;

    口蹄疫是被列为A类疫病的家畜传染病之一,接种疫苗是防止该病流行的有效措施。本文就口蹄疫灭活疫苗、基因工程亚单位疫苗、转基因植物可饲疫苗、合成肽疫苗、蛋白质载体疫苗、基因工程弱毒疫苗、活载体疫苗、核酸疫苗及空病毒衣壳蛋白疫苗的最新研究进展作一综述。

    2009年03期 v.22 301-304页 [查看摘要][在线阅读][下载 129K]
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消息

综述

  • 猪2型圆环病毒疫苗的研究进展

    邢海云;赵建增;赵亚荣;

    猪2型圆环病毒是引起猪圆环病毒病,如断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪呼吸疾病综合征、猪皮肤和肾病综合征等的重要病原体。该病毒可诱发多种病毒和/或细菌的混合感染和继发感染,给养猪业造成巨大的经济损失。近年来,国内外研究者都在致力于猪2型圆环病毒疫苗的研究开发。到目前为止,部分疫苗已在临床试验中取得成功,有的已投入应用,其他候选疫苗也正在积极研究过程中。本文就近年来国内外各类猪2型圆环病毒疫苗的研究进展及存在的问题和可能的解决办法作一综述。

    2009年03期 v.22 305-308页 [查看摘要][在线阅读][下载 131K]
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  • 动物乳腺生物反应器的应用及研究进展

    张颖琦;

    动物乳腺生物反应器是利用转基因技术获得药物蛋白的动物个体表达系统,其利用乳腺特异性调控元件指导外源基因在乳腺中特异地表达,以转基因动物的乳腺组织生产药用重组蛋白。本文就动物乳腺生物反应器的操作流程、应用、优点、存在的问题及其国内外研究进展和产业化现状作一综述。

    2009年03期 v.22 309-312页 [查看摘要][在线阅读][下载 135K]
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