中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

基础研究

  • 高表达抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体细胞株的建立及其表达产物的分析

    聂艳桃;何太平;谢荣麟;葛永红;容新宗;陶昆蓉;刘宇虹;王琰;Sendi Montanie;Vladka Curin-Serbec;

    目的建立高表达抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体的工程细胞株。方法将构建的抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体基因真核表达载体转染CHO细胞,并采用DHFR/MTX基因扩增策略,经反复加压和克隆筛选,提高抗体的表达量。用ELISA、Westernblot和体外中和试验分析比较抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体与鼠亲本单抗的特性。结果获得的表达抗人TNF-α嵌合抗体的转染细胞系2F5,在静止培养4d后工程抗体的表达量约80mg/L。所表达的工程抗体优于鼠亲本单抗F7/2,并具有良好的特异性和中和活性,其相对亲和力约为2.1×10-10mol/L。结论已成功建立了高表达的嵌合抗体工程细胞株,其抗体具有潜在的临床应用前景。

    2006年06期 553-556页 [查看摘要][在线阅读][下载 160K]
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  • 天花粉蛋白突变体TCS_(KR173-174CG)的构建、表达与纯化

    安群星;穆士杰;张献清;陈蕤;夏爱军;张清平;陈晨;雷迎峰;黎志东;徐志凯;

    目的构建天花粉蛋白(TCS)突变体基因,并进行表达及纯化。方法应用计算机预测TCS分子上可能的抗原决定簇,并进行定点突变。以栝楼基因组DNA为模板,经PCR扩增突变基因,与pRSET-A表达载体连接,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并对表达产物进行Ni-NTA层析纯化。结果目的蛋白在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,表达产物经纯化后,得到均一的TCS突变体蛋白。结论已成功构建了TCS突变体基因,并获得高效表达。

    2006年06期 557-559+563页 [查看摘要][在线阅读][下载 258K]
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  • SARS病毒S2蛋白在毕赤酵母中的表达及鉴定

    王瑞琳;金宁一;赵博;贾雷立;金洪涛;金明兰;屈勇刚;

    目的研究用毕赤酵母菌表达SARS病毒S2蛋白亚单位。方法依据GenBank中SARS基因组序列,采用人工合成的方法合成SARS病毒刺突蛋白S2亚单位的基因(1590bp),再与CTL表位基因(195bp)重组后,将其克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建重组表达质粒pPIC9K-S2,转化毕赤酵母GS115,并经MD和MM平板筛选及PCR鉴定,得到阳性重组酵母工程菌GS115/pPIC9K-S2。经诱导、表达,并对表达产物进行分析、鉴定。结果所构建的重组质粒pPIC9K-S2正确,在毕赤酵母中可高效表达,其表达产物与阳性SARS血清产生特异性反应。结论SARS病毒刺突蛋白S2亚单位可在毕赤酵母中高效表达,产物具有良好的抗原特异性。

    2006年06期 560-563页 [查看摘要][在线阅读][下载 196K]
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  • 狂犬病毒aG株核蛋白和糖蛋白双表达质粒的构建及其在真核细胞中的表达

    杨卉娟;陈俊英;孙明波;张新文;钱源;段骞;王东宝;姜述德;廖国阳;李卫东;

    目的构建狂犬病毒aG株核蛋白(NP)和糖蛋白(GP)双表达重组质粒,在中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)中表达核蛋白和糖蛋白。方法提取狂犬病毒RNA,应用RT-PCR方法扩增NP和GP基因,分别将其克隆到pIRES载体上,获得同时含有NP和GP基因的双顺反子重组质粒pING,并以脂质体介导法转染CHO-K1细胞,G418筛选,用ELISA和IFA检测NP和GP的表达。结果限制性内切酶分析表明重组质粒pING含有NP和GP基因片段,长度分别为1353bp和1575bp。应用ELISA和IFA方法,在转染细胞中均检测到NP和GP的表达。结论重组双表达质粒可在CHO细胞中同时表达NP和GP,为进一步开发重组狂犬病疫苗奠定了基础。

    2006年06期 564-567页 [查看摘要][在线阅读][下载 226K]
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  • 可溶性Fas与VEGF及TIMP-1表达在乳腺癌淋巴结转移中的相互关系

    王心明;陈云波;贾明库;许洪志;刘梦虹;

    目的通过对乳腺癌可溶性Fas浓度与血管内皮生长因子(VEGF)及金属蛋白酶抑制物(TIMP-1)表达之间关系的分析,探讨患者血清中sFas浓度改变对乳腺癌细胞生长、浸润和转移的影响。方法通过S-P免疫组化法和ELISA法,分别检测乳腺癌细胞VEGF和TIMP-1表达及血清sFas浓度,结合VEGF、TIMP-1与乳腺癌临床病理参数,分析浸润、淋巴结转移乳腺癌中VEGF、TIMP-1表达失衡与血清sFas浓度之间的关系。结果①VEGF阳性表达与乳腺癌淋巴结转移呈显著相关,VEGF阳性的肿瘤有淋巴结转移率为56%,明显高于VEGF阳性的肿瘤无淋巴结转移率(7%)。随着乳腺癌TNM分期和组织学分级的进展,VEGF阳性表达率逐渐增加,呈正相关。TIMP-1阳性表达与肿瘤淋巴结转移明显相关。随着TNM分期和组织学分级的进展,TIMP-1阳性表达率逐渐降低,呈负相关。②VEGF阳性表达而TIMP-1阴性表达组发生乳腺癌浸润和淋巴结转移率及血清sFas浓度最高,VEGF阴性表达而TIMP-1阳性表达组发生淋巴结转移率及血清sFas浓度最低,两组比较差异有极显著意义。结论sFas与VEGF及TIMP-1表达之间存在着反馈机理以及相互激活的密切关系。sFas浓度可以间接地反映基质金属蛋白酶(MMPs)和VEGF的表达情况,sFas在乳腺癌中的浓度变化可以反映乳腺癌的生长、局部浸润和转移。

    2006年06期 568-570页 [查看摘要][在线阅读][下载 110K]
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  • 人巨细胞病毒包膜糖蛋白gB/AD-1片段的基因克隆和原核表达

    刘兰军;何太平;杨春;雍雪飞;何敏;葛永红;

    目的克隆人巨细胞病毒包膜糖蛋白gB/AD-1片段并构建其原核表达系统。方法用PCR法从人巨细胞病毒AD169株基因组DNA中扩增gB/AD-1片段并克隆至pGEM-T载体,酶切后,亚克隆至表达载体pET-15b,构建重组表达质粒pET-15b/gB/AD-1,并转化大肠杆菌,IPTG诱导表达。表达产物经金属螯合层析一步纯化,并用Westernblot鉴定。结果gB/AD-1蛋白表达量达到35%。表达产物经纯化后,纯度大于95%。经Westernblot检测,表达产物与CMV阳性人血清发生特异性反应。结论已成功构建重组表达载体pET-15b/gB/AD-1,并在大肠杆菌中高水平表达gB/AD-1。

    2006年06期 571-573页 [查看摘要][在线阅读][下载 181K]
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  • BCG-CpG-DNA免疫活性作用的初步研究

    赵爱华;寇丽杰;乔来艳;贾淑珍;王国治;

    目的研究BCG-CpG-DNA的免疫学活性。方法通过淋巴细胞增殖、T细胞亚群分析、细胞因子产生、对NK细胞杀伤功能影响等试验,检测BCG-CpG-DNA的免疫活性。结果BCG-CpG-DNA能促进小鼠T、B淋巴细胞增殖,活化巨噬细胞分泌IL-12,并能增强ConA诱导IFN-γ产生,提高小鼠脾细胞中CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群的含量,同时增强小鼠NK细胞的杀伤活性。实验组与对照组所有结果差异均有显著意义(P<0.05)。结论BCG-CpG-DNA能活化抗原呈递细胞(APC),并具有较好的免疫活性。

    2006年06期 574-577页 [查看摘要][在线阅读][下载 121K]
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  • 重组Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A在毕赤酵母中的表达及纯化

    母敬郁;王曦;王峤;陈阳;王恩思;

    目的在毕赤酵母中表达Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A。方法提取Thermomonospora fusca基因组DNA作模板,PCR扩增纤维素酶Cel6A基因,克隆到毕赤酵母表达载体pGAPZαA上,用电击法将线性Cel6A-pGAPZαA核酸片段转化毕赤酵母X-33株,克隆PCR鉴定法筛选阳性转化株,培养传代。选择稳定株,培养3d后取培养液上清,用His-BindQuick Cartridge300提取表达的重组Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A。结果一步His-Bind Quick Cartridge300层析可提取电泳纯的重组Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A,SDS-PAGE分析显示相对分子质量约为60000,收率为200mg/L,用羧甲基纤维素法测活性为500U/mg,用滤纸法测活性为1U/mg。结论已在毕赤酵母中成功表达了Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A。

    2006年06期 578-579+582页 [查看摘要][在线阅读][下载 127K]
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  • 维生素A对小鼠免疫调节功能的影响

    邢杰;李玉芬;罗海英;延正红;葛立本;

    目的探讨维生素A对小鼠免疫调节功能的影响。方法人工制备低维生素A、正常维生素A、高维生素A3种饲料,分别按常规饲养3组小鼠5周,应用微量荧光法测定血清维生素A浓度,三色流式细胞术测定CD4+T细胞内细胞因子IL-4和IFN-γ水平。结果3组小鼠血清维生素A浓度差异有显著意义,低维生素A组IFN-γ水平(28.60%±10.82%)明显高于正常对照组(20.13%±6.39%);高维生素A组IL-4水平(5.31%±2.04%)明显高于正常对照组(2.80%±1.37%),差异有非常显著意义(均P<0.01)。随着维生素A水平的提高,IFN-γ表达率降低,Th1免疫应答减弱,IL-4表达率增高,Th2免疫应答增强。结论维生素A对小鼠Th1/Th2免疫应答影响显著。

    2006年06期 580-582页 [查看摘要][在线阅读][下载 104K]
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  • 表达PRRSV GP5、GP3和猪IL-18的重组鸡痘病毒的构建及鉴定

    沈国顺;金宁一;秦晓光;庄天中;尹荣兰;马鸣潇;

    目的研制安全有效的预防猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组鸡痘病毒活载体疫苗。方法将PRRSV长春株的GP5和GP3基因插入到含有猪IL-18基因的鸡痘病毒转移载体pUTAL复合启动子下游,构建重组鸡痘病毒转移载体pUTAL-IL-18-GP5-GP3。将该重组质粒与鸡痘病毒(FPV)282-E4株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行同源重组。通过3次BrdU加压筛选,经PCR、RT-PCR和IFA方法鉴定重组病毒。结果从重组鸡痘病毒基因组和总RNA中扩增出340bp的目的基因片段,感染重组病毒的CEF细胞与特异性荧光抗体发生阳性反应,表明目的基因在重组鸡痘病毒中得到表达。结论已成功构建1株重组鸡痘病毒,并可正确表达PRRSVORF5/ORF3基因。

    2006年06期 583-585页 [查看摘要][在线阅读][下载 148K]
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  • 表达MAGE-1/HSP70/MAGE-3工程菌的稳定性

    胡沛臻;隋延仿;李侠;张建芳;司少艳;张秀敏;

    目的检测重组工程菌pET28a-MAGE-1/HSP70/MAGE-3/BL21(DE3)生物学性状的稳定性。方法将工程菌菌株连续传50代,每隔10代挑取单克隆菌落进行诱导表达,并计算质粒丢失率。提取不同代次的质粒,扫描电镜观察,检测融合蛋白表达水平,并进行工程菌的染色镜检及生化鉴定。结果pET28a-MAGE-1/HSP70/MAGE-3/BL21(DE3)融合蛋白工程菌呈典型的大肠杆菌形态,各代次菌的各项检测结果与原始菌种差异无显著意义。结论重组工程菌pET28a-MAGE-1/HSP70/MAGE-3/BL21(DE3)生物学性状稳定,可作为生产用菌种。

    2006年06期 586-588页 [查看摘要][在线阅读][下载 167K]
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预防制品

  • 人用狂犬病毒脂质体疫苗的制备及性质

    郭秀侠;福泉;陈妍;徐军;夏滨;姜媛丽;胡晓明;于洪涛;盛军;

    目的制备人用狂犬病毒脂质体疫苗,并考察其制剂学及毒理学性质。方法以氢化大豆磷脂、胆固醇、十八胺为原料,采用反相蒸发法(REV)制备脂质体,加入纯化狂犬病毒抗原,以冻干重建法(DRV)制备狂犬病毒脂质体疫苗。在电镜下观察其形态,测定其包封率和体外释放率,用激光衍射粒度分析仪测定其粒径分布及平均粒径,并进行局部刺激性、过敏反应及异常毒性试验。结果所制备的狂犬病毒脂质体疫苗形态呈圆形或椭圆形,粒径分布均匀,平均粒径为12.25μm左右,包封率在60%以上。无刺激性,无异常毒性,过敏反应检测合格。结论所制备的狂犬病毒脂质体疫苗性质稳定,可作进一步研究。

    2006年06期 589-591页 [查看摘要][在线阅读][下载 181K]
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  • 乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)中间品的稳定性

    李芙;王辉;张月兰;钟书声;张颖;韩霞;

    目的对乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)生产各阶段的中间品进行稳定性观察。方法将各阶段中间品置4℃保存,于不同时间取样,进行病毒滴度、抗原含量和小鼠免疫原性检测。结果4℃下病毒收获液14d内滴度下降8.0%,灭活收获液的抗原含量8周内下降7.3%。浓缩原液、鱼精蛋白处理原液、蔗糖区带离心原液抗原含量在12周内分别下降了9.7%、8.3%和8.3%,加保护剂脱糖原液12周内抗原含量下降了8.4%,稀配半成品24周内抗原含量下降了2.98%,但在12周内均保持了良好的小鼠保护效力。结论上述样品在4℃下,保存期限内均保持了良好的稳定性。

    2006年06期 592-593页 [查看摘要][在线阅读][下载 71K]
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  • 甲型副伤寒多糖-破伤风类毒素结合疫苗的制备及安全性和免疫原性

    秦敏;杨国友;涂小萍;杨蒲;林丽;黄锴;

    目的制备甲型副伤寒多糖-破伤风类毒素结合疫苗,并检测其安全性与免疫原性。方法副甲O-SP溶液加入CDAP活化,己二酰肼(ADH)衍化,在碳二亚胺(EDAC)作用下与破伤风类毒素(TT)偶联,反应物经柱层析纯化,制得多糖蛋白结合物,经质量检测后,进行安全性及免疫原性试验。结果所制备的结合物多糖蛋白比稳定在0.6~0.8之间,CL-4B检测Kd≤0.2时的回收率大于75%,高相对分子质量结合物含量不低于90%。免疫双扩散试验显示结合物与副甲家兔超免血清和TT抗血清均产生可见沉淀线。动物安全试验均合格。结合物免疫小鼠后,其血清副甲LPS抗体滴度显著增长,阳转率达到100%。结论用CDAP活化多糖制备的甲型副伤寒-破伤风类毒素结合疫苗质量稳定,安全可靠,且具有良好的免疫原性。

    2006年06期 594-596页 [查看摘要][在线阅读][下载 97K]
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  • 3种乙型脑炎纯化疫苗免疫原性和热稳定性

    过琴媛;王辉;张月兰;钟书声;张颖;

    目的比较地鼠肾细胞、Vero细胞和2BS细胞乙型脑炎纯化疫苗的免疫原性和热稳定性。方法对3种细胞制备的病毒原液和冻干疫苗分别进行小鼠免疫原性试验和热稳定性试验。结果2BS细胞制备的病毒原液和疫苗小鼠效力均高于地鼠肾细胞和Vero细胞;Vero细胞和地鼠肾细胞制备的病毒原液和疫苗小鼠蚀斑减少中和试验抗体效价均高于2BS细胞。3种细胞制备的疫苗在37℃保存4周,中和抗体效价损失均小于5%。结论3种细胞制备的病毒原液及冻干疫苗均具有良好的免疫原性及热稳定性。

    2006年06期 597-598页 [查看摘要][在线阅读][下载 51K]
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  • 含IL-2基因的乙型肝炎病毒DNA疫苗的构建及其免疫效果

    吴晓娟;赵大鹏;冷梅;崔颖杰;张岩;汪春义;戚凤春;郭新;陈云波;何伟;徐建国;付学奇;

    目的构建含白细胞介素-2(IL-2)基因的乙型肝炎病毒DNA疫苗,并考察免疫效果。方法将微小病毒内部核糖体进入位点(Internal ribosomal entry site,IRES)基因克隆到质粒pVAX1载体多克隆位点处,再将乙肝病毒表面抗原(HB-sAg)基因和IL-2基因分别连接在IRES基因的两侧,构建出乙肝病毒DNA疫苗pHII。将pHII转染COS-7细胞,进行瞬时表达。大量提取质粒后,按0、2、4周程序免疫BALB/c小鼠,以pVAX1质粒为阴性对照,pVAX/HBsAg质粒为阳性对照。第1针免疫1周后开始眼眶采血,检测血清中HBsAg和HBsAb含量。第1针免疫13周后处死小鼠,用流式细胞仪检测其脾脏T细胞表面CD4+、CD8+分子数量。结果在转染pHII质粒的COS-7细胞上清液中检测到HBsAg和IL-2的表达。实验组和阳性对照组小鼠分别于第1针免疫2、4周后,在血清中检测出HBsAb,但阴性对照组未测出。以上3组均未检测出HBsAg。实验组与阳性对照组相比,产生抗体的时间提前2周,抗体阳转率提高2.5倍,产生抗体的量也提高了近3倍。实验组CD4+分子数量和CD4+/CD8+值均高于阳性对照组。结论乙肝病毒DNA疫苗pHII成功诱导出小鼠的免疫应答,其免疫效果明显优于不含分子佐剂的乙肝DNA疫苗。

    2006年06期 599-602页 [查看摘要][在线阅读][下载 192K]
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实验技术

治疗制品

  • 干扰素脂质体的质量控制研究

    李云富;张水华;李久立;杨虹;易艳蓉;王妍;

    目的建立稳定的干扰素脂质体质控体系。方法采用电子显微镜、粒度分析仪、气相色谱仪以及酶标仪等仪器和检测手段,对干扰素脂质体的形态、粒径、包封率、有机物的残留量以及稳定性等进行分析。结果干扰素脂质体透射电镜下观察为圆形,直径50~350nm,粒径呈正态分布,平均粒径为200~210nm,跨距为0.80~1.10,包封率达到90%以上。有机物残留量低于《中国药典》二部(2005版)规定的标准。在2~8℃下保存6个月,渗漏率不高于20%,而总活性基本不变。结论该干扰素脂质体的质控体系的检测项目比较全面,检测结果稳定,可用于产品的质量控制。

    2006年06期 603-606页 [查看摘要][在线阅读][下载 163K]
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  • 重组人干扰素α2a凝胶对单纯疱疹病毒感染的疗效

    张淑子;李凡;易世红;

    目的研究重组人干扰素α2a(rhIFNα2a)凝胶对动物体内单纯疱疹病毒(HSV)感染的疗效。方法建立HSV-1型豚鼠皮肤感染模型和HSV-2型小鼠阴道炎模型,考察rhIFNα2a凝胶抗HSV作用。将模型豚鼠与小鼠各自分为3个试验组,分别用3×105、2×105和1×105IU/g的rhIFNα2a凝胶治疗,并设平行对照(阿昔洛韦)与空白对照(未治疗)组。评价各组的疗效。结果与空白对照组比较,rhIFNα2a凝胶2×105和3×105IU/g剂量组可明显减少豚鼠皮肤组织中病毒含量,降低小鼠的死亡率,延长生存期。rhIFNα2a凝胶与阿昔洛韦的疗效差异无显著意义。结论rhIFNα2a凝胶具有抑制HSV-1致皮肤病变作用,可缩短病程,对HSV-2所致小鼠阴道炎有较好疗效。

    2006年06期 607-609页 [查看摘要][在线阅读][下载 93K]
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诊断制品

  • VIDAS HIV Duo Assay试剂的特异性及敏感性

    许四宏;宋爱京;李秀华;李敬云;鲍作仪;貌盼勇;赵擎;胡燕;王佑春;

    目的评价HIV抗原/抗体联合检测快速法(VIDAS HIV Duo Quick)和超敏法(VIDAS HIV Duo Ultra)试剂的特异性及敏感性。方法用这2种试剂和HIV抗体参比试剂,分别检测287份HIV感染或疑似感染者样品、1240份非HIV感染者血清/血浆样品,对与参比试剂检测结果不一致样品,进行抗体的确认及HIV p24抗原和RNA的检测,并比较其特异性和敏感性。用这2种试剂和HIV-1p24抗原参比试剂,分别检测3株病毒培养上清的系列稀释样品,并比较其检测p24抗原敏感性的差异。结果共检测1277份HIV抗体阴性样品和250份HIV抗体阳性样品,与参比试剂相比,快速法试剂的特异性为99.45%,敏感性为100%,而超敏法试剂的特异性为99.14%,敏感性为99.20%。两种试剂检测病毒株培养上清的敏感性均不低于HIV-1p24抗原参比试剂,且能检出HIV感染窗口期样品。结论这2种试剂在增加HIV p24抗原检测的情况下,对HIV抗体检测的特异性和敏感性均没有明显降低,并且能检测出HIV感染窗口期样品。

    2006年06期 610-613页 [查看摘要][在线阅读][下载 146K]
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  • HpaA蛋白在幽门螺杆菌感染诊断中的应用

    吴利先;王国富;白丽;王晶;潘云华;郭利军;

    目的建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法,探讨以重组蛋白作为抗原在诊断H.pylori感染中的价值。方法将从临床分离菌株中获得的HpaA基因在大肠杆菌中表达,用Ni2+-NTA柱纯化表达的HpaA作为抗原,建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法,与诊断标准比较评价其应用的可行性。结果经超声破碎后,用SDS-PAGE分析显示,HpaA蛋白主要存在于上清中,纯化抗原检测临床标本中HpaA抗体的敏感性和特异性分别为100.0%和90.1%。结论以重组蛋白为抗原初步建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法敏感性、特异性高,为制备商品化的试剂盒奠定了基础。

    2006年06期 614-616页 [查看摘要][在线阅读][下载 128K]
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  • 荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物的制备

    陈保文;沈小兵;苏城;王国治;

    目的研制荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物。方法采用液体表面膜培养方法培养荚膜组织胞浆菌,培养液经盐析和弱酸沉淀法纯化,再经透析和除菌,制成荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物原液,并进行豚鼠的皮肤反应试验和安全性检测。结果荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物的蛋白纯度达80%以上,其1μg/ml的浓度诱导的豚鼠皮肤反应与国外同类制品等效,且具有良好的安全性。结论荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物可作为体内诊断制品,用于检查人体荚膜组织胞浆菌的感染以及荚膜组织胞浆菌病的临床诊断。

    2006年06期 617-618+622页 [查看摘要][在线阅读][下载 90K]
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实验技术

  • 抗狂犬病病毒抗体的制备及酶联免疫法的建立

    赵志晶;庄辉;张嘉铭;张洪;高俊芳;

    目的制备具有中和活性的抗狂犬病病毒(Rabiesvirus,RV)抗体,并建立检测RV抗原的ELISA法。方法以RV全病毒免疫2只新西兰家兔,制备抗RV多克隆抗体。以RV全病毒免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,建立稳定分泌抗RV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。以小鼠中和试验(MNT)检测抗体的中和活性。以ELISA双抗体夹心法和ELISA竞争法检测RV抗原。结果2只家兔的多克隆抗体ELISA效价分别为1∶6.0×103和1∶1.2×104,纯化的兔抗RVIgG中和活性分别为46.3和29.2IU/ml。获得了9株稳定分泌抗RV的单克隆抗体杂交瘤细胞株,属于IgG1或IgG2b亚型,腹水的抗体ELISA效价为1∶1.0×105~1∶1.0×107。单克隆抗体3E5、4C2和4F8具有中和活性,Westernblot分析提示,单克隆抗体4C2是针对RV糖蛋白线性表位的抗体。以单克隆抗体4C2作为捕捉抗体,兔多克隆抗体作为检测抗体,建立了ELISA双抗体夹心法,检测RV抗原。同时建立了另一种ELISA竞争法,加入固定工作浓度的单克隆抗体4C2,与RV病毒液孵育,以ELISA间接法检测RV病毒抗原。结论所获得的狂犬病毒多克隆和单克隆抗体具有中和活性,可在ELISA中用于检测RV抗原。

    2006年06期 619-622页 [查看摘要][在线阅读][下载 174K]
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  • 重组蜂毒素-基因变构IL-2的纯化与生物活性

    刘明军;王斌;钱冬萌;丁守怡;闫志勇;宋旭霞;

    目的制备纯化重组蜂毒素-基因变构IL-2(Melittin-88ArgIL-2)嵌合蛋白,并检测其生物活性。方法将含表达载体的大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达。表达产物经离子交换层析与亲和层析进行纯化,SDS-PAGE鉴定,MTT染色法检测嵌合蛋白对Hela细胞增殖的抑制作用。结果所表达的可溶性蛋白,纯化后纯度达95%,蛋白浓度0.5g/L。纯化后的嵌合蛋白在体外能抑制Hela细胞的增殖。结论已成功地制备并纯化了重组melittin-88ArgIL-2嵌合蛋白,该蛋白具有生物活性,为中试放大和纯化工艺研究奠定了基础。

    2006年06期 623-626页 [查看摘要][在线阅读][下载 171K]
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  • 我国生物制品生产用细胞外源因子污染情况检测

    孟淑芳;李修兰;冯建平;林林;郎淑惠;王佑春;李德富;

    目的对我国目前生物制品生产用细胞外源因子污染情况进行检测。方法按照《中国生物制品规程》2000版规定的细胞外源因子检测方法,对我国生物制品生产用细胞进行细菌、真菌、支原体及一般外源病毒污染检测。结果自2003~2006年3月间共检测了用于生物制品生产用细胞库细胞79株。结果显示,被检测的79株细胞中,支原体污染细胞10株,污染阳性率为12.7%;外源病毒污染细胞5株,污染率为6.3%;这5株外源病毒污染的细胞中,2株293细胞体外接种至人二倍体细胞后,致细胞形态明显异常;2株Vero细胞接种鸡胚后,致鸡胚全部死亡;1株Vero细胞接种乳鼠及成鼠后第7天,致接种动物全部死亡,组织病理学检查结果显示,接种待检细胞组小鼠脑组织有不同程度的病变。结论目前我国生物制品生产用细胞存在一定程度的外源因子污染。

    2006年06期 627-629+632页 [查看摘要][在线阅读][下载 292K]
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  • 自制填充介质对人血浆白蛋白的层析分离

    赵彦鼎;杨博;李凯锋;陈学忠;刘萍;郭立安;

    目的用自制的快速层析介质对人血浆白蛋白进行分离纯化。方法低温离心去掉冷沉淀后的人血浆,在不同淋洗条件下,经过两步弱阴离子交换和一步弱阳离子交换层析分离,并经凝胶过滤层析柱进一步纯化。结果经3步层析后,所得含白蛋白组分的纯度已达到98.44%,回收率为91.40%。4步层析后,白蛋白纯度可接近于100%。结论所采用的分离纯化方法和介质适用于人血浆白蛋白的纯化。

    2006年06期 630-632页 [查看摘要][在线阅读][下载 93K]
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  • 以结核分枝杆菌38kD重组蛋白为抗原的血清学诊断

    岳乔红;苏明权;杨军兰;程晓东;段艳;郝晓柯;

    目的克隆表达结核分枝杆菌38kD抗原基因,并以此蛋白为抗原,进行分枝杆菌的血清学诊断。方法采用PCR自结核分枝杆菌基因组DNA中扩增38kD抗原基因,经测序鉴定正确后,克隆于pGEX-4T-2表达载体,转化大肠杆菌BL21进行诱导表达,利用GSTrapFF蛋白柱纯化表达产物,经ELISA检测其抗原的灵敏度与特异性。结果目的蛋白表达量约占菌体总蛋白量的28%,ELISA检测灵敏度为79.8%,特异性为99.0%。结论重组38kD抗原可用于结核分枝杆菌的诊断。

    2006年06期 633-635页 [查看摘要][在线阅读][下载 157K]
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  • 3种培养方法培养脊髓灰质炎病毒过程中病毒繁殖特性比较

    兰芸;胡凝珠;胡云章;瞿素;段金梅;李蓝江;

    目的比较3种培养方法培养脊髓灰质炎病毒过程中病毒繁殖动力学特性。方法分别用悬浮吸附法、静止吸附法和非吸附法培养脊髓灰质炎病毒(SabinⅠ、Ⅱ、中Ⅲ2型),分别在间隔12h时取样,至细胞完全病变或96h,用微量细胞病变法检测感染性滴度,绘制病毒一步生长曲线。结果悬浮吸附法病毒增殖快,2∶1分种率时,60h细胞完全病变,滴度最高,分别为SabinⅠ型9.000LgCCID50/ml、SabinⅡ型8.500LgCCID50/ml、中Ⅲ2型8.750LgCCID50/ml;1∶1分种率时,SabinⅠ型在60h完全病变,滴度为8.875LgCCID50/ml,SabinⅡ型和中Ⅲ2型在70h完全病变,滴度分别为8.000LgCCID50/ml和8.125LgCCID50/ml;静止吸附法1与静止吸附法2差异不明显,96h时,仍有约10%~20%细胞未发生病变,静止吸附法1滴度为SabinⅠ型7.125LgCCID50/ml、SabinⅡ型6.500LgCCID50/ml、中Ⅲ2型6.375LgCCID50/ml,静止吸附法2滴度为SabinⅠ型7.250LgCCID50/ml、SabinⅡ型6.875LgCCID50/ml、中Ⅲ2型7.000LgCCID50/ml;非吸附培养法,在96h,有20%细胞未发生病变或病变程度较轻。滴度为SabinⅠ型7.250LgCCID50/ml、SabinⅡ型5.625LgCCID50/ml、中Ⅲ2型6.375LgCCID50/ml。在12h,悬浮吸附法(分种率2∶1)培养三型病毒滴度已分别达到6.000、6.125和6.250LgCCID50/ml,略高于悬浮吸附法(分种率1∶1)达到的值,而静止吸附法及非吸附法培养至36h,病毒滴度才达到相近的水平。结论在3种培养方法中,悬浮吸附法明显优于静止吸附法和非吸附法。

    2006年06期 636-638页 [查看摘要][在线阅读][下载 148K]
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  • 甲型肝炎病毒的RT-PCR-ELISA检测法

    吴星;毛群颖;张华远;

    目的建立一种半定量检测甲型肝炎病毒(HAV)RNA的RT-PCR-ELISA方法。方法将5′端磷酸化的特异性探针包被在氨基化的微孔板上,以生物素标记的探针为引物,提取样品中的HAVRNA,反转录并扩增HAVDNA,变性后的PCR产物与探针杂交,并被捕获在微孔板上,再与酶标亲和素结合,显色测定。结果所建立的方法结果判断客观,灵敏度比凝胶电泳法高一个数量级,分析不同时间检测结果,差异无显著意义。结论已建立了半定量检测HAVRNA的RT-PCR-ELISA方法。

    2006年06期 639-640页 [查看摘要][在线阅读][下载 54K]
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  • 纯化乙型肝炎病毒表面抗原新层析工艺的建立

    李建平;杨屹;王宇;李德娟;陈万革;

    目的建立提高乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)纯度和收率的新工艺。方法采用微滤法、疏水层析、“穿透式”阴离子交换层析、硫酸纤维素亲和层析和凝胶过滤层析进行HBsAg的纯化。结果采用新建立的工艺,HBsAg收率在50%以上,纯度大于95%,各项检定结果均符合《中国药典》三部(2005版)要求。结论新工艺提高了HBsAg的纯度和收率,适用于规模化生产。

    2006年06期 641-643页 [查看摘要][在线阅读][下载 97K]
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  • 水痘-带状疱疹病毒gE糖蛋白基因扩增法鉴别水痘减毒活疫苗

    金于兰;陈哲文;瞿爱东;杨忠东;

    目的利用水痘-带状疱疹病毒(VZV)gE糖蛋白基因鉴别水痘减毒活疫苗。方法以提取的病毒DNA为模板,PCR扩增gE糖蛋白基因。经琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果水痘减毒活疫苗Oka株VZV(病毒滴度≥2.0lgPFU/ml)通过琼脂糖电泳均可见特异性的条带。使用同样的方法检测麻疹减毒活疫苗、麻疹-腮腺炎联合疫苗、风疹减毒活疫苗以及Ⅰ、Ⅱ型单纯疱疹病毒(病毒滴度≥4.2lgCCID50/ml),结果均为阴性。结论gE糖蛋白基因可以作为VZV的特异性指标,进行病毒鉴别试验。

    2006年06期 644-646页 [查看摘要][在线阅读][下载 174K]
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  • 酶联法检测流感疫苗中卵清蛋白含量试剂盒的质量验证

    田博;施彤;王晋;冯素英;董小曼;张国强;

    目的验证酶联法检测流感疫苗中卵清蛋白含量的试剂盒的质量。方法选取卵清蛋白标准品及20批全病毒流感灭活疫苗,对北京天坛生物制品股份有限公司生产的卵清蛋白ELISA试剂盒(简称天坛试剂盒)进行验证,确定该试剂盒的最佳检测区间、精密度、准确度及稳定性,并与德国Seruzym试剂盒进行比较,确定二者之间是否有相关性。结果天坛试剂盒的最佳检测区间为2.5~20ng/ml,试验间精密度分别为0.37%~9.79%、1.25%~5.57%和0.70%~5.51%,均小于10%;试验内精密度为1.28%;配制5、10和20ng/ml3个浓度的标准品,由同一实验人员分别进行9次准确度验证,回收率分别为105.67%、108.61%和98.67%;37℃放置3d与4℃保存的试剂盒检测结果之间差异无显著意义(t=2.075,P=0.0518);与进口试剂盒检测结果之间存在正相关关系(r=0.989,t=24.56,P<0.0001)和直线回归关系(b=0.629,F=602.97,P<0.0001),直线回归方程为y=0.629x-13.77。结论天坛试剂盒具有较好的精密度、准确度及稳定性;检测结果与进口试剂盒存在正相关和直线回归关系,可以用于卵清蛋白的常规检测。

    2006年06期 647-648+652页 [查看摘要][在线阅读][下载 88K]
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综述

  • 树突状细胞肿瘤疫苗的研究现状

    谢英林;

    本文综述了树突状肿瘤疫苗的研究及应用现状,其中主要包括树突状细胞的生物学特性、体外培养、肿瘤疫苗的制备、临床应用、存在的问题及展望等。

    2006年06期 649-652页 [查看摘要][在线阅读][下载 129K]
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  • 炭疽杆菌毒素致病机制及炭疽疫苗的研究进展

    熊小培;杨晓明;

    炭疽毒素是炭疽杆菌的主要致病因子之一。本文对炭疽毒素,尤其是致死毒素的致病机制以及疫苗的研究进展作一综述,并讨论了炭疽的治疗及炭疽毒素在肿瘤治疗中的应用。

    2006年06期 653-656页 [查看摘要][在线阅读][下载 151K]
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  • 猪链球菌2型主要毒力因子研究进展

    高尚庆;雷连成;韩文瑜;

    猪链球菌2型的毒力因子主要包括荚膜多糖(CPS)、溶菌酶释放蛋白(MRP)、细胞外因子(EF)、溶血素(HLY)以及多种具有毒性作用的蛋白片段。荚膜多糖是猪链球菌2型抵抗巨噬细胞吞噬的重要物质,也是猪链球菌进行分型的标志。溶菌酶释放蛋白和细胞外因子多出现于高致病力的毒株中,MRP和EF阳性菌株一般具有较高的毒力。溶血素具有较强的细胞毒性作用,其对微血管内皮细胞的破坏作用有利于细菌在组织内的扩散。其他多种毒力因子虽也具有致病作用和免疫原性,但还有待于进一步研究。由于猪链球菌2型致病机理复杂,毒株表型多样,尚未发现可区分毒力株、弱毒力株和无毒力株的标志性因子。对猪链球菌2型的毒力因子进行深入研究,对于阐明猪链球菌2型的致病机理,寻找到快速有效的诊断治疗方法以及疫苗的构建都有重要意义。

    2006年06期 657-659页 [查看摘要][在线阅读][下载 107K]
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  • 我国狂犬病疫苗发展中存在的问题

    李光谱;俞永新;

    本文从狂犬病疫苗的质量、暴露后免疫的特殊性、疫苗中的各抗原组分的免疫作用、免疫佐剂的选择、保护剂及疫苗质量控制等方面进行分析,以期进一步提高狂犬病疫苗质量,最大限度发挥疫苗免疫作用,从而降低我国的狂犬病发病率。

    2006年06期 660-662页 [查看摘要][在线阅读][下载 77K]
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  • 避孕疫苗的研究进展

    邢冬红;白虹;

    本文对近年来倍受关注的抗激素、抗卵细胞透明带和抗精子疫苗的安全性、有效性及作用机理的研究进展作一综述。

    2006年06期 663-665页 [查看摘要][在线阅读][下载 87K]
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