中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

  • 重组DT/bFGF融合蛋白基因表达载体的构建及表达产物的纯化

    张华捷;张庶民;庄辉;

    目的构建重组DT/bFGF融合蛋白表达载体,制备高纯度的DLF融合毒素。方法PCR扩增DT389和bFGF的编码DNA序列,经酶切和连接,克隆至表达载体pET-30a,转化E.coliBL21(DE3),鉴定阳性克隆菌落,经IPTG诱导表达融合蛋白DLF,镍离子螯合层析纯化,用Westernblot分析其抗原性。结果测序表明,插入片段可编码含545个氨基酸残基的融合蛋白DLF。SDS-PAGE分析表明,该融合蛋白可在大肠杆菌中表达,其表达量约占菌体总蛋白的20%,表达形式主要为包涵体。纯化后纯度达90%以上。Westernblot证实,该融合蛋白同时具有DT和bFGF两种抗原性。结论已成功构建DT/bF-GF表达载体,并获得较纯的DLF融合毒素。

    2006年04期 329-332页 [查看摘要][在线阅读][下载 382K]
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  • 信息

    2006年04期 332+361+372+375+422+436+442页 [查看摘要][在线阅读][下载 390K]
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  • 猪流感复合多表位核酸疫苗的构建及其表达研究

    贾雷立;金宁一;金扩世;郑敏;金洪涛;连海;王瑞琳;李昌;鲁会军;马鸣潇;金明兰;

    目的构建猪流感病毒复合多表位核酸疫苗,并研究其表达产物的抗原性。方法以H3、H9亚型流感的HA抗原表位及流感病毒的其它主要抗原(NP、NA、M)表位基因为基础,再附以Kozak序列和适当的酶切位点,设计并合成一段长765bp的复合多表位基因(Epi),其中各表位基本独立,将其克隆入真核表达载体pIRES1neo,构建重组质粒pIRE-Epi。将多表位抗原基因Epi插入到融合表达基因H57中,构建重组质粒pIRE-H57-Epi。将构建的重组质粒在Hela细胞中表达,并用免疫荧光方法初步检测所表达蛋白的抗原性。结果所构建的融合表达载体pIRE-Epi和pIRE-H57-Epi,在Hela细胞中表达出流感病毒多表位抗原蛋白,并具有抗原性。结论已成功构建猪流感病毒多表位基因,有可能成为较理想的猪流感候选疫苗。

    2006年04期 333-335页 [查看摘要][在线阅读][下载 377K]
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  • 细菌内同源重组构建人p21~(WAF1)基因重组腺病毒

    邹昌勇;杨京生;全家妩;田生和;

    目的构建人p21WAF1基因重组腺病毒载体,并在293细胞中包装制备重组腺病毒。方法将人p21WAF1基因亚克隆连接到腺病毒转移质粒pshuttle-cmv,得到阳性重组转移质粒psh-p21。先将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1转化BJ5183菌,筛选得到AdBJ5183菌,再将PmeⅠ线性化的psh-p21转化AdBJ5183菌,经细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒pAdp21。经PacⅠ和BstXⅠ酶切及PCR鉴定,将正确的重组腺病毒质粒pAdp21转染293细胞包装病毒,用RT-PCR和PCR鉴定重组腺病毒及其稳定性。结果所构建的重组腺病毒质粒pAdp21,经PCR鉴定,可扩增出约500bp的片段,与预期大小相符。转染293细胞可包装成p21WAF1基因重组腺病毒,经电镜观察,具有典型的腺病毒特征。结论已成功地构建了重组腺病毒质粒pAdp21,并制备出重组腺病毒rAdp21。

    2006年04期 336-339页 [查看摘要][在线阅读][下载 610K]
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  • 耐药大肠杆菌的致病性与免疫原性

    雷连成;韩文瑜;郑丹;乔红伟;杨洋;

    目的了解大肠杆菌耐药株的致病性与免疫原性。方法临床分离耐药大肠杆菌,经适宜条件培养后接种小鼠,观察耐药菌株对小鼠的致病性;并选择已知血清型的不同耐药谱和不同耐药水平的菌,分别培养至对数生长期,经甲醛灭活后免疫小鼠,2周后分别用致死剂量的原菌株和同期分离菌株进行攻毒,考察耐药菌株免疫原性。结果24株耐药菌普通肉汤培养物分别感染小鼠,在接种后18h,存活率仅为4%。只有2株菌在1周内仍不能将小鼠全部致死,经小鼠体内传3代后,可在18h内致死小鼠。耐药谱广的菌株感染的小鼠,心肌发生颗粒变性、局灶性出血、坏死;肝脏糖元溶解,脂肪变性;脾脏轻度淤血,淋巴细胞减少;肾脏出血,肾小球肾炎,上皮细胞颗粒变性,水泡变性。而耐药种类少的菌株与对照敏感菌株感染的小鼠主要特征为脾脏出血、淤血,坏死,脾小体消失;肠上皮细胞坏死、脱落、卡他性肠炎。免疫小鼠以免疫用菌株攻毒,均可得较高的保护率,最低为75%,最高为100%。免疫小鼠用非免疫菌株攻毒,小鼠感染后症状出现较缓慢,在18h后出现死亡高峰。耐药种类少的菌株免疫小鼠,对同期分离的非免疫用的致病性大肠杆菌攻击的保护率偏低,而对受试的11种抗生素耐受7种以上的菌株免疫小鼠后,对致病大肠杆菌攻击的保护率显著提高,多数达到75%以上,经统计学分析差异显著。结论耐药大肠杆菌具有较强致病性,且耐药特性与其免疫保护效果相关,多重耐药株对当前流行菌株具有更好的免疫保护作用。

    2006年04期 340-343页 [查看摘要][在线阅读][下载 132K]
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  • 浙江省桐庐县狂犬病发病情况分析

    方胜宇;徐进;

    2006年04期 343页 [查看摘要][在线阅读][下载 33K]
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  • 植物细胞表达人胰岛素的载体构建

    汪春义;戚凤春;陈桂玲;申镇维;王宣军;盛军;

    目的构建人胰岛素的植物细胞表达载体。方法设计多对引物,通过PCR反应合成霍乱毒素B亚单位(CTB)基因和不带C肽的人胰岛素基因。将霍乱毒素B亚单位(CTB)基因与这种不带C肽的人胰岛素基因融合后,插入克隆载体,然后用BamHⅠ和SacⅠ进行酶切,并将酶切的融合基因片段连接在植物表达载体pBI121上,最后用BamHⅠ和SacⅠ进行酶切鉴定。结果测序结果表明,PCR扩增的目的基因顺序与设计完全一致,并构建了克隆载体和植物表达载体。植物表达载体经酶切后鉴定,所含基因片段大小与预期相符。结论已成功地构建了人胰岛素基因的植物细胞表达载体。

    2006年04期 344-346页 [查看摘要][在线阅读][下载 188K]
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  • HIV-1C亚型调控蛋白Nef在大肠杆菌中的表达

    戴青;孙明;周东霞;蒋国润;黄小琴;褚嘉祐;

    目的表达人免疫缺陷病毒1型C亚型调控蛋白Nef,为研制HIV疫苗寻找新的途径。方法通过PCR扩增,获得HIV-1C亚型Nef基因片段,并将其克隆到原核表达载体pGEX-5X-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后,以SDS-PAGE和Westernblot分析表达产物。结果表达产物是相对分子质量为50000的GST融合蛋白,且能与p27单克隆抗体发生特异性反应。结论重组Nef蛋白在大肠杆菌中得到了有效表达。

    2006年04期 347-348页 [查看摘要][在线阅读][下载 219K]
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  • LHRH-PE40对LOVO细胞的靶向杀伤作用

    吴广谋;张国利;岳玉环;何畅;朱平;

    目的研究LHRH-PE40对LOVO细胞的靶向杀伤作用。方法用XTT检测LHRH-PE40对LOVO细胞的体外细胞毒性。将LOVO细胞移植于裸鼠,测定静脉注射LHRH-PE40对体内肿瘤细胞生长的抑制作用。结果LHRH-PE40对LOVO细胞细胞毒作用的半数抑制浓度为2·103μg/ml,在裸鼠肿瘤模型中,LHRH-PE40剂量为150μg/kg时抑瘤率为68·49%,这种细胞毒性作用可以被LHRH(或LHRH类似物)特异性抑制。结论在体内外LHRH-PE40对LOVO细胞具有很强的细胞毒作用,其机制是LHRH-PE40通过与癌细胞膜上的LHRH受体特异结合发挥细胞杀伤作用。

    2006年04期 349-351页 [查看摘要][在线阅读][下载 96K]
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  • RhD(-)血型临床供应模式

    刘芳兰;袁连根;孙树丰;张来玉;

    2006年04期 351页 [查看摘要][在线阅读][下载 35K]
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  • 人乳头瘤病毒16型晚期蛋白L1基因重组MVA病毒的构建及鉴定

    刘大维;姜春来;于湘晖;吴永革;金英花;孔维;

    目的研制预防人乳头瘤病毒(HPV)感染的重组修饰的Ankara痘病毒(MVA)活载体疫苗。方法将HPV16L1基因插入MVA病毒转移载体psc11M2的P7·5启动子的下游,构建转移质粒psc11M2-L1,与MVA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行同源重组。通过9轮蓝斑筛选,以PCR和Westernblot鉴定重组病毒。结果获得的含目的片段的重组MVA病毒,表达产物与鼠抗人HPV16L1抗体发生阳性反应,目的蛋白相对分子质量约为55000。结论已成功地构建了可正确表达HPV16L1基因的重组MVA病毒株。

    2006年04期 352-354页 [查看摘要][在线阅读][下载 200K]
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  • 人乳头瘤病毒16型L1/E7嵌合基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

    宋衍燕;李秀玲;何薇薇;张中洋;许丽锋;

    目的克隆人乳头状瘤病毒16型(HPV16)L1/E7嵌合蛋白基因,并在毕赤酵母中表达。方法PCR扩增HPV16L1/E7基因,并克隆至毕赤酵母表达载体pPIC-3·5K和pPIC-9K中,构建含HPV16L1/E7基因的pPIC3·5K-HPV16L1/E7和pPIC9K-HPV16L1/E7重组表达载体,经测序证实插入的外源基因读码框正确后,分别转入GS115和KM71菌株中,筛选阳性转化菌株,经PCR鉴定,甲醇诱导表达HPV16L1/E7嵌合蛋白,经SDS-PAGE和Westernblot鉴定,电镜观察,并经离心法纯化VLPs。结果HPV16L1/E7基因已成功插入pPIC-3·5K和pPIC-9K载体中,共获得6株KM71HPV16L1/E7-pPIC3·5K、5株GS115HPV16L1/E7-pPIC3·5K、1株KM71HPV16L1/E7-pPIC9K和2株GS115HPV16L1/E7-pPIC9K阳性转化菌株,并可表达相对分子质量约为69000的蛋白,与预期值一致。表达量约为0·35~1·04mg/ml。Westernblot显示该蛋白可与抗-HPV16L1蛋白和抗-HPV16E7蛋白的单克隆抗体特异性结合。在透射电镜下可观察到VLPs的形成,其形态与HPV16天然病毒颗粒相似。经纯化的目的蛋白纯度接近100%。结论已成功构建了pPIC3·5K-HPV16L1/E7和pPIC9K-HPV16L1/E7重组表达载体,阳性转化菌株可表达结构与野生型HPV16一致的VLPs。

    2006年04期 355-361页 [查看摘要][在线阅读][下载 1346K]
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  • 重组Thermus thermophilus DNA聚合酶表达纯化及其在RT-PCR中的应用

    王峤;相世和;母凯萍;母敬郁;王恩思;

    目的研究重组ThermusthermophilusDNA聚合酶的表达、纯化和应用。方法提取Thermusthermophilushb8基因组DNA作为模板,PCR扩增TthDNA聚合酶基因后,克隆至pET28a表达载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,用His-BindQuickCartridge300纯化重组TthDNA聚合酶His-tag融合蛋白。提取Thermomonosporafusca总RNA,用一管法RT-PCR扩增E2cd基因,检测重组TthDNA聚合酶RT-PCR活性。结果大肠杆菌表达TthDNA聚合酶,分离出的电泳纯重组TthDNA聚合酶His-tag融合蛋白相对分子质量为94000,表达产量为200000U/L。一管法RT-PCR可扩增出850bp长度的E2cd基因。结论重组TthDNA聚合酶已成功地表达和纯化,并用于RT-PCR。

    2006年04期 362-364页 [查看摘要][在线阅读][下载 184K]
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  • 中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白真核表达载体的构建及稳定表达细胞株的筛选

    马红霞;于湘晖;姜春来;吴永革;孔维;

    目的获得高质量的中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白抗原。方法改造表达载体,以构建中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白基因带有筛选标记的真核细胞表达质粒,将所构建质粒转染真核细胞,用含有抗性的培养基筛选出能够高效、持续表达包膜蛋白的稳定表达细胞株。结果所构建的表达载体pVRPEnv转染细胞后可表达目的蛋白,并建立了稳定表达细胞系。结论获得了可以高效、持续稳定表达中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白的细胞株。

    2006年04期 365-367页 [查看摘要][在线阅读][下载 258K]
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  • 乳源抗高血压活性肽CEI_(12)在大肠杆菌中的表达

    叶巍;吕桂善;付小燕;霍贵成;

    目的在大肠杆菌中表达乳源抗高血压活性肽CEI12。方法将人工合成血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)的DNA序列CEI12连接到表达载体pQE16上,转化到JM109中,筛选出重组子,在E.coliBL21中表达,用Westernblot检测表达结果,并且比较了不同温度的表达水平。结果乳源抗血压活性肽CEI12在E.coliBL21中的表达量约为1·2mg/L培养液,在25℃诱导的表达量高于37℃的表达量。结论已成功在大肠杆菌BL21中表达了乳源抗高血压活性肽CEI12。

    2006年04期 368-370页 [查看摘要][在线阅读][下载 388K]
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  • 紫杉醇诱导细胞凋亡的研究

    陈宇;张明秋;李学军;贺晓楠;陈晨;杨海山;杨萍;

    目的探讨紫杉醇诱导细胞凋亡的效果。方法采用末端DNA片段原位标记法检测紫杉醇诱导细胞凋亡作用。结果正常SMC对照组偶见凋亡细胞,加入紫杉醇SMC,可见大量凋亡细胞。结论紫杉醇可诱导人脐动脉SMC的凋亡,其作用随药物剂量的增加而变强。

    2006年04期 371-372页 [查看摘要][在线阅读][下载 156K]
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  • 丝状支原体丝状亚种SC型LppB基因的克隆与表达纯化

    李媛;辛九庆;高玉龙;王砚范;

    目的克隆丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)LppB蛋白基因,并进行表达及纯化。方法通过PCR,扩增MmmSC标准株PG1的LppB全基因,克隆至pMD18-T载体上,并测序鉴定。同时选LppB基因中两个TGA之间903bp片段,与pET30a载体构建重组质粒,进行诱导表达,表达产物经Ni-NTA-His系统纯化。结果PCR扩增的LppB基因长度片段约1869bp,与预期大小相符。将其与NCBI上发布的Afade株、LC型代表株Y-goat和同属的Bovine7株的LppB基因序列相比较,同源性分别为99·8%、92·8%和76·7%,氨基酸同源性分别为99·2%、90·2%和67·0%。经Ni-NTA-His系统纯化,得到纯净的单一蛋白。结论已成功克隆了PG1的LppB蛋白基因,并进行了表达及纯化。

    2006年04期 373-375页 [查看摘要][在线阅读][下载 189K]
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  • 脊髓灰质炎病毒Sabin株工作种子批基因鉴别

    廖国阳;孙明波;余芬;沈伟;赵玮;蒋燕军;姜述德;

    目的研究脊髓灰质炎病毒Sabin株基因鉴别的方法。方法分别进行脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ型Sabin株和Ⅲ型Pfizer株3个型的工作种子批病毒RT-PCR,对扩增产物进行SDS-PAGE及测序。结果Ⅰ、Ⅱ型Sabin株和Ⅲ型Pfizer株3个型的工作种子批病毒分别出现了97、71和53bp的电泳带,与预期结果相符。扩增基因序列与报道的脊髓灰质炎病毒减毒株序列一致。结论RT-PCR可以用于脊髓灰质炎病毒Sabin株毒株鉴别。

    2006年04期 376-377+380页 [查看摘要][在线阅读][下载 160K]
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  • 乙型肝炎疫苗-卡介苗联合疫苗在动物中的免疫应答

    杨丽华;王志;赵小琳;杨彤;于爱东;刘艾红;金立杰;

    目的评价乙型肝炎疫苗-卡介苗联合疫苗的免疫应答。方法用联合疫苗及其单价疫苗分别免疫豚鼠和BALB/c小鼠,检测两种疫苗的免疫应答。结果联合疫苗与卡介苗豚鼠皮肤PPD反应直径数值相近(P>0·05),联合疫苗与乙肝疫苗免疫小鼠血清乙肝抗体滴度差异无显著意义(P>0·05);联合疫苗免疫小鼠淋巴细胞转化刺激指数、IL-2含量均高于单价疫苗,差异有显著意义(P<0·001)。结论乙型肝炎疫苗-卡介苗联合疫苗能有效地诱导实验动物的体液免疫和细胞免疫。

    2006年04期 378-380页 [查看摘要][在线阅读][下载 93K]
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  • HBsAg免疫刺激复合物的制备及鉴定

    吴隼;韩效林;郭立君;金立杰;

    目的提高CHO细胞表达的重组乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的免疫原性。方法采用离心法和透析法制备HBsAg的免疫刺激复合物,并探讨其影响因素。结果初步确定HBsAg的ISCOMs的最佳形成条件是:温度25℃,反应时间18h,pH6·8。电镜下观察ISCOMs呈直径为30~40nm的蜂窝状结构。SDS-PAGE分析表明,离心法和透析法制备的颗粒HBsAg蛋白均由P23、GP27和GP30组成。用Bradfords法检测离心法和透析法制备的ISCOMs的蛋白回收率分别为31·50%和41·15%,其稳定性和免疫原性均优于相应的铝佐剂疫苗。结论HBsAg免疫刺激复合物可提高乙型肝炎表面抗原的免疫原性。

    2006年04期 381-383页 [查看摘要][在线阅读][下载 390K]
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  • 脊髓灰质炎病毒冻干保护剂的筛选

    兰芸;胡凝珠;姬秋彦;胡云章;

    目的筛选脊髓灰质炎病毒冻干保护剂。方法将不同配方的冻干保护剂与脊髓灰质炎病毒(SabinⅠ型、SabinⅡ型及中Ⅲ2型)混合,进行冻干,并检测冻干前后病毒感染性滴度及冻干后的热稳定性。结果经检测发现,第Ⅷ组配方(海藻糖8%、人白蛋白1%、山梨醇5%、明胶0·5%和甘氨酸1%)在脊髓灰质炎病毒的冻干过程中保护作用较好。冻干前后感染性滴度下降在0·5LgCCID50/ml以内,且热稳定性好,37℃放置1周后SabinⅠ型、SabinⅡ型及中Ⅲ2型病毒的感染性滴度平均下降分别为0·2、0·3和0·4LgCCID50/ml,而相应对照组的感染性滴度平均下降分别为1·1、1·1和1·3LgCCID50/ml,二者差异有显著意义(P<0·05)。结论含有海藻糖、人白蛋白、山梨醇、明胶和甘氨酸的保护剂对脊髓灰质炎病毒冻干具有良好的保护效果。

    2006年04期 384-386页 [查看摘要][在线阅读][下载 80K]
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  • 肺炎链球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合疫苗两种免疫途径对小鼠抗体应答的比较

    沈荣;陈晓航;任克明;孔素娟;王剑虹;张勇;

    目的比较肺炎链球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合疫苗两种免疫途径对小鼠的抗体应答。方法选NIH小鼠,分别经皮下和腹腔途径免疫3次同等剂量的结合疫苗,每次间隔2周,用ELISA方法检测两种途径免疫小鼠的血清抗体滴度。结果结合疫苗经腹腔免疫后的抗体滴度优于皮下免疫。小鼠经腹腔免疫3次后,血清抗体的几何平均滴度分别是第1次免疫的6·6倍和3·5倍。结论结合疫苗经腹腔免疫较皮下免疫获得的抗体应答水平高。

    2006年04期 387-388+390页 [查看摘要][在线阅读][下载 201K]
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  • 抗SARS刺突蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

    张秀霞;吉海滨;王宣军;方勇;李洋;王志武;盛军;

    目的制备抗SARS病毒表面刺突蛋白单克隆抗体,用于SARS研究。方法大肠杆菌中表达的SARS-S2蛋白经纯化后免疫小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,制备单克隆抗体,并进行ELISA和Westernblot鉴定。结果所制备的抗SARS病毒表面刺突蛋白单克隆抗体,能与表达的SARS-S2蛋白发生特异性结合。结论已获得了抗SARS病毒表面刺突蛋白单克隆抗体。

    2006年04期 389-390页 [查看摘要][在线阅读][下载 76K]
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  • 人血液制品的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯度分析

    白坚石;马秋平;

    目的以聚丙烯酰胺凝胶电泳分析血液制品蛋白纯度。方法采用SDS-PAGE和2-DE对人血液制品进行电泳分离,分别以胶体考染和银染显示凝胶电泳分离结果,以Labworks45或ImageMaster2D软件分析图谱。结果SDS-PAGE和2-DE检测的人血白蛋白样品的纯度均低于现行方法的结果。重组人白蛋白样品含有明显的宿主细胞蛋白,需进一步分离纯化。结论聚丙烯酰胺凝胶电泳可以提高血液制品纯度分析的灵敏度。

    2006年04期 391-393页 [查看摘要][在线阅读][下载 328K]
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  • 人生长激素抗独特型抗体的制备及免疫学鉴定

    谢英林;刘大为;

    目的制备人生长激素抗独特型抗体,并进行鉴定。方法应用人生长激素抗原(Ag)纯品,通过杂交瘤技术制备人生长激素单克隆抗体(Ab1),经免疫亲和层析柱纯化后,免疫家兔,其血清经饱和硫酸铵纯化后,获得人生长激素抗独特型抗体(Ab2)。再应用ELISA法进行鉴定。结果Ab2与Ab1呈阳性反应,与BALB/c小鼠γ球蛋白呈阴性反应。Ab2与Ag竞争结合Ab1,Ab2抑制Ab1与Ag的结合。结论已成功制备针对人生长激素的单克隆抗体和具有人生长激素抗原内影像的抗独特型抗体。

    2006年04期 394-396页 [查看摘要][在线阅读][下载 84K]
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  • 第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品的研制

    曾明;王薇;幺山山;王斌;蒋志宾;计国欣;

    目的研制第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品。方法从国内11省市几十万名供血员中筛选出871份样品,以多种试剂对其进行复核,对备选参比品样品再进行免疫荧光吸收法检测,并对人类免疫缺陷病毒抗体、乙型肝炎病毒抗体、丙型肝炎病毒抗体、类风湿因子及非特异性抗体进行检测。根据样品复检及确证结果,选定30份样品,分装并分发至11个实验室,进行会同标定。结果已制备出第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品,并建立了相应的质量标准。结论第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品已被国家有关部门批准正式使用。

    2006年04期 397-399页 [查看摘要][在线阅读][下载 101K]
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  • 冻干血吸虫病诊断试剂IgG免疫血清国家参考品的制备及标定

    辛晓芳;朱荫昌;何伟;张谨;王国柱;梁幼生;徐明;薄淑英;曹国群;王国治;

    目的建立血吸虫病诊断试剂IgG免疫血清国家参考品。方法收集血吸虫病疫区粪检筛查阳性病人血清和非疫区正常人血清,经标定和验证合格,制成冻干参考品。结果冻干参考品血清效价符合要求,2家协作单位用3种免疫学方法标定,结果一致。结论所制备的冻干参考品可以用于血吸虫病抗体诊断试剂的检定。

    2006年04期 400-401页 [查看摘要][在线阅读][下载 48K]
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  • 结核杆菌利福平与异烟肼耐药基因快速检测用参考品的制备

    陈保文;沈小兵;苏城;王国治;景奉香;

    目的建立结核杆菌利福平与异烟肼耐药基因快速检测用国家参考品。方法收集分枝杆菌菌株,用经典的药敏试验及培养基鉴别试验进行鉴定;用分子生物学技术对耐药菌株的耐药基因进行核苷酸序列分析,并进行突变位点的筛选;选取完全耐药菌株,用膜过滤法制备单细胞菌液,进行显微计数。结果选出阳性参考品符合率检测用、含不同突变位点的结核分枝杆菌耐药菌株20株;阴性参考品符合率检测用菌株10株,其中敏感菌株5株,致病性非结核分枝杆菌菌株5株;最低检出量检测用结核分枝杆菌耐药菌株5株,制备浓度为1×106个/ml的单细胞菌液。结论该参考品可以用作结核菌利福平与异烟肼耐药基因快速检测试剂质量的标准。

    2006年04期 402-404+406页 [查看摘要][在线阅读][下载 106K]
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  • 麻疹自然感染后抗体衰减趋势指数模型的建立与抗体持久性的预测

    罗凤基;赵伟;张菁;

    目的建立麻疹自然感染后抗体水平变化趋势的指数曲线模型,预测抗体水平的持久性,为麻疹的预防控制提供依据。方法利用已追踪观察9年的历史资料,拟合麻疹自然感染后抗体水平变化趋势的指数曲线模型,与实测值进行比较,以验证模型的可靠性,再用所拟合的模型来预测麻疹自然感染后抗体水平的持久性。结果用指数曲线所拟合的模型为:Y=70·53exp(-0·02x),决定系数R2=0·99,预测误差E=0·01。预测麻疹自然感染后第15年时,GMT为2·00,到第25年时则下降到0·18以下。结论用模型所预测的麻疹自然感染后的HI抗体可维持15年左右。

    2006年04期 405-406页 [查看摘要][在线阅读][下载 50K]
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  • 重组铜绿假单胞菌外毒素A工程菌发酵及表达产物的纯化

    赵志强;杜琳;谭小梅;杜送田;王永谦;蒋奕;王燕;谢贵林;

    目的建立稳定、高效表达重组铜绿假单胞菌外毒素A(rEPA)的工程菌发酵及表达产物纯化工艺。方法规模化发酵表达rEPA的重组大肠杆菌rPE553D,离心收集菌体,渗透压调解使菌体周质间隙蛋白释放后,高速离心收集蛋白溶液。经DEAESepharoseFF、PhenylSepharose6FF疏水层析和SOURCE30Q强离子交换层析,超滤浓缩纯化rEPA。用HPLC、SDS-PAGE和Westernblot等方法检定生化和免疫学特性,并用小鼠和Vero细胞检定毒性。结果每55L培养基中rEPA产量超过4g,纯度在95%以上,细胞毒性降低了至少32000倍。其余各项指标均符合《中国生物制品规程》要求。结论已建立了收率高、纯度好、稳定、适合规模化生产rEPA的工艺。

    2006年04期 407-410页 [查看摘要][在线阅读][下载 373K]
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  • 抗-HCV多表位抗体在检测HCV抗原中的应用

    谢忠平;龙润乡;宋霞;李华;李文忠;熊秋霞;洪超;崔萍芳;李琦涵;

    目的应用丙型肝炎病毒多表位抗体,探索从血浆或血清样品中检测丙型肝炎病毒抗原(HCAg)的可能性,为献血员筛选及临床早期诊断提供检测方法。方法利用原核系统表达的丙型肝炎病毒(HCV)7个高度保守区基因的多表位复合抗原免疫动物,制备抗-HCV多克隆抗体,采用ELISA双抗体夹心法检测血浆或血清中的HCAg,并与RT-PCR法进行比较。结果制备的抗-HCV多表位复合抗原多克隆抗体,在用ELISA法检测HCAg中表现出较高的特异性及灵敏性,Cutoff值为0·239,批内CV值为5·60%~6·65%,批间CV值为7·80%。与RT-PCR比较,相关系数为0·816,灵敏度为88·89%,特异度为96·30%,一致性为95·24%,调整一致性为90·82%,阳性预测值为80·00%,阴性预测值为98·11%。HCAg检出率与美国ORTHO公司HCV-C抗原检测试剂盒差异无显著意义(P=0·06)。结论用HCV多表位复合抗原制备的多克隆抗体,采用ELISA双抗体夹心法检测HCAg,具有灵敏、特异、快速的优点,有望开发成为HCAg诊断试剂盒。

    2006年04期 411-413页 [查看摘要][在线阅读][下载 95K]
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  • 顶空固相微萃取-气相色谱法测定粉尘螨舌下滴剂中丙酮的残留量

    翟晨淏;陈东英;迟颖红;

    目的建立粉尘螨舌下滴剂中残留丙酮的检测方法。方法采用顶空固相微萃取-气相色谱联用技术(HS-SPME-GC)。结果丙酮浓度在20·2~161·8μg/ml之间呈良好线性关系,平均回收率在93·3%~105·8%之间;丙酮的最低检测限为3·0×10-4g/L(S/N=3)。结论固相微萃取和气相色谱技术的联用适合生化药物体系中微量挥发性残留溶剂的检测。

    2006年04期 414-415页 [查看摘要][在线阅读][下载 55K]
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  • 柱前衍生高效液相色谱法测定纤维蛋白原中精氨酸含量

    杨金平;尹贵宇;孙晓东;

    目的测定人纤维蛋白原中的精氨酸含量。方法应用柱前衍生高效液相色谱法检测,用外标法计算含量。结果系统适应性测试:n=6,T=1·04,RSD%(定性)=0·2,RSD%(定量)=2·0,表明系统适应性良好。应用该法检测3批人纤维蛋白原,精氨酸含量分别为0·87%、0·85%和0·90%,结果符合《中国药典》要求。结论柱前衍生高效液相色谱法简单、迅速,可作为纤维蛋白原质量控制中检测精氨酸含量的方法。

    2006年04期 416-417页 [查看摘要][在线阅读][下载 146K]
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  • 注射用核糖核酸Ⅰ制备工艺的改进

    杨琳;闫素志;张金岩;耿星海;白春杰;夏天瑶;何玉君;代淑燕;

    目的改进用动物脏器制取核糖核酸Ⅰ的制备工艺,提高产品的质量和收率。方法采取冻融与少量苯酚、三氯甲烷并用一次萃取法,替代传统工艺用大剂量苯酚多次萃取法。结果用新工艺制备的3批制剂,各项检定指标均达到国家同类制品的质量标准,单位产量较传统工艺提高了50%,原材料成本显著下降。结论建立了适合大规模生产核糖核酸Ⅰ的制备方法。

    2006年04期 418-419页 [查看摘要][在线阅读][下载 56K]
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  • 冻干水痘减毒活疫苗免疫持久性观察

    刘晔;高嵩;赵军;王鹏;徐俊峰;李莉;徐秀凤;李占春;哈秀杰;李开军;刘延威;王丽华;宣黎波;王立成;王连成;

    目的观察国产冻干水痘减毒活疫苗的免疫原性和免疫持久性。方法选免疫前抗体阴性的健康易感儿童,随机分为3组,分别接种原倍疫苗、稀释疫苗及对照疫苗,并于接种后每年采集静脉血,用FAMA法测定抗体。结果原倍疫苗组和稀释疫苗组免疫后1~5年,平均抗体阳性率分别为91·05%、89·39%、95·56%、97·27%和98·76%。免疫后1年与5年抗体阳性率及抗体GMT比较,差异均无显著意义。原倍疫苗组和稀释疫苗组抗体阳性率及抗体GMT比较,差异亦无显著意义。接种原倍和稀释疫苗的两组与对照组比较,差异无显著意义。结论国产冻干水痘减毒活疫苗具有良好的免疫原性及免疫持久性。

    2006年04期 420-422页 [查看摘要][在线阅读][下载 91K]
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  • 抗金黄色葡萄球菌及溶血性链球菌IgY的制备及临床疗效观察

    唐宁;包伟光;陈勤玲;张进;聂荣庆;胡国柱;吴东风;

    目的制备抗金黄色葡萄球菌及溶血性链球菌鸡卵黄IgG(IgY),并观察其治疗急性咽炎的临床疗效。方法将金黄色葡萄球菌及溶血性链球菌混合免疫母鸡,使用水稀释法、超滤法、西曲溴胺除脂法和硫酸铵盐析法提取、纯化IgY后,经全面检定,对110例急性咽炎进行临床疗效观察,治疗组60例,使用0·2%IgY口腔喷剂治疗7d;对照组50例,口服双黄连胶囊7d。结果IgY粗提物和纯化物纯度分别为41·6%和96·0%,效价分别达1∶1024和1∶8192;IgY粗提物在pH2·07~11·71条件下7d,效价基本不变;2·5~10·0mg/ml的纯化物抑制率为20·81%~68·11%。治疗组治愈率为26·67%,显效率为36·37%,有效率为30·00%,无效率为6·67%,总有效率为93·33%;对照组治愈率为12·00%,显效率为18·00%,有效率为44·00%,无效率为26·00%,总有效率为74·00%,差异有非常显著意义(P<0·005)。治疗组未见毒副作用。结论金黄色葡萄球菌及溶血性链球菌能够诱导母鸡产生特异性抗体,治疗急性咽炎疗效显著、安全。

    2006年04期 423-425+429页 [查看摘要][在线阅读][下载 206K]
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  • 溶栓剂的研究进展

    陈连锋;田明;郭洪文;冮洁;

    本文介绍国内外一些溶栓剂,主要涉及尿激酶、链激酶、组织型纤溶酶原激活剂及其突变体。并介绍一些新型溶栓剂,如嵌合体和导向型溶栓剂,最后介绍一些其它来源的溶栓剂与以前出现的溶栓剂的区别及临床应用效果和副作用。

    2006年04期 426-429页 [查看摘要][在线阅读][下载 139K]
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  • 甲病毒载体研究进展

    周鹏;聂奎;

    甲病毒是一类能在宿主细胞的胞质内大量复制的RNA病毒。用外源基因替换结构蛋白基因的甲病毒载体,仍具有甲病毒的宿主感染谱广泛、能够自我复制、诱导被转染细胞发生凋亡等众多生物学特性,同时能够大量表达外源基因,激发机体产生高效的免疫反应,并不易与宿主基因组整合。甲病毒载体已被用于基因治疗和分子生物学领域的研究。

    2006年04期 430-433页 [查看摘要][在线阅读][下载 138K]
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  • 我国不同人群接种乙型肝炎疫苗的成本-效益分析

    梁争论;李河民;

    2006年04期 434-436页 [查看摘要][在线阅读][下载 76K]
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  • 体外诊断试剂临床研究的基本要点

    张丽;

    2006年04期 437+440页 [查看摘要][在线阅读][下载 45K]
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  • 原子力显微镜在生物制品中的应用

    雷卓;白晓军;成晓玲;匡同春;李梦奇;向熊志;雷淑梅;

    2006年04期 438-440页 [查看摘要][在线阅读][下载 71K]
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  • 人乳头瘤病毒疫苗制检规程研讨会简介

    王佑春;

    2006年04期 441-442页 [查看摘要][在线阅读][下载 50K]
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