中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

  • 中国狂犬病毒疫苗株CTN-1-V三个代次的GP基因序列分析

    明平刚;孙文;徐葛林;吴杰;杨晓明;严家新;

    目的分析三个代次CTN-1-V病毒株糖蛋白(GP)基因部分序列,并与代表性街毒株进行比较。方法利用RTPCR反应,从感染了CTN-1-V病毒的小鼠脑内获得GPcDNA的部分片段,并进行序列测定。结果三个代次的CTN-1-V病毒株GPcDNA序列的690个核苷酸与代表性狂犬病毒GP核苷酸相应序列同源性为83.2%~96.8%,氨基酸序列同源性为90.0%~97.4%。CTN1V株三代之间的核苷酸序列几乎相同。结论CTN1V株在传代过程中GP基因结构基本稳定,与中国流行的代表性街毒株的同源性高于aG株和PV株。

    2006年03期 217-219+235页 [查看摘要][在线阅读][下载 163K]
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  • 抗肝癌hdsFv-hEDN重组免疫毒素的表达及生物学活性

    付勇;苏雪梅;刘彦仿;杨守京;赵君;邹赛英;

    目的制备对人肝癌细胞具有特异性杀伤活性的抗肝癌重组免疫毒素。方法利用大肠杆菌系统表达抗肝癌hdsFvhEDN基因重组免疫毒素。表达产物经NiNTA亲和层析纯化后,进行特异性杀伤活性检测。结果抗肝癌hdsFvhEDN重组免疫毒素以可溶性形式表达于大肠杆菌培养上清中,并获得有效纯化。ELISA法检测证实其具有与相应抗原特异性结合的活性。细胞毒试验表明对肝癌细胞具有杀伤作用,而对正常肝细胞无损伤。结论已成功地制备了具有特异性结合和杀伤活性的抗肝癌hdsFvhEDN基因重组免疫毒素,为其进一步应用奠定基础。

    2006年03期 220-222页 [查看摘要][在线阅读][下载 142K]
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  • CpG ODN2006对乙型肝炎疫苗免疫BALB/c小鼠抗体产生的影响

    郑源强;石艳春;杨贵贞;

    目的探讨合成含CpG基序的寡脱氧核苷酸(CpGODN2006)对乙型肝炎疫苗增强小鼠特异性抗体产生的效应。方法采用BALB/c小鼠,经后腿胫骨前肌注免疫2次,ELISA法检测血清中抗HBsIgG效价。结果疫苗+CpG组较疫苗组和空白对照组的抗HBsIgG效价明显增高,且维持时间长。结论CpGODN2006对小鼠抗HBsIgG的产生具有明显的增强作用。

    2006年03期 223-224页 [查看摘要][在线阅读][下载 59K]
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  • 重组李斯特菌细胞溶解素LLO蛋白表达纯化及溶血活性鉴定

    郑丽舒;李武平;王刚;段招军;侯云德;

    目的克隆单核细胞增生症李斯特菌细胞溶解素O(LLO)基因hlyA,构建其原核表达系统,鉴定融合蛋白LLO的抗原性和溶血活性。方法采用PCR技术从Lm总DNA中扩增hlyA基因,与基因库中其它9株hlyA基因序列相比较。用pET30a载体构建LLO原核表达质粒pET30ahlyA,在E.coliBL21(DE3)宿主菌中用IPTG诱导表达,Ni2+柱纯化后,Westernblot鉴定其抗原性。用人红细胞检测溶血活性。结果所克隆的hlyA基因PEST样结构与GenBank上9个菌株的相应氨基酸序列相比,最多有3个氨基酸替代。LLO融合蛋白在大肠杆菌中可高效表达,纯化后获得高纯度的重组蛋白,具有较高的抗原性。在酸性pH5.5条件下,LLO溶血活性最大为1.41×104HU/mg。结论已成功构建LLO原核表达系统,所表达的蛋白具有较高的抗原性和溶血活性。

    2006年03期 225-228页 [查看摘要][在线阅读][下载 237K]
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  • 鸡贫血病毒VP3基因与人IL-18基因的共表达对人肝癌细胞BEL-7402的作用

    连海;金宁一;李霄;陈立刚;张静敏;管国芳;孙丽丽;李雪梅;郑洪玲;

    目的利用凋亡素和IL18基因的抗肿瘤优势,设计构建共表达凋亡素和hIL-18基因的真核重组子,检测其在体外对人肝癌细胞BEL7402的作用效果,旨在探索新的肿瘤基因治疗方法。方法将凋亡素VP3基因与hIL-18基因一同克隆到真核表达载体pVAX1上,构建重组质粒pVVP3IL-18,经脂质体介导,转染人肝癌细胞BEL7402,AO/EB染色,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法和流式细胞仪分别分析凋亡细胞的形态学变化、DNA断裂情况和不同细胞周期的DNA含量变化,透射电镜分析凋亡细胞超微结构变化。结果随着转染时间的延长,重组质粒pVVP3IL18所表达的目的蛋白对BEL7402细胞的杀伤作用逐渐增强,作用48h,形态学观察表明BEL7402细胞发生明显的凋亡,凋亡率可达(56.5±11.9)%,并且大部分细胞为TUNEL阳性着色,流式细胞术分析可见明显的亚二倍体凋亡峰,透射电镜观察可见细胞核固缩、染色质聚集等典型的凋亡超微结构变化。结论联合应用凋亡素与hIL18基因,在体外对人肝癌细胞BEL7402具有明显的凋亡诱导作用。

    2006年03期 229-232页 [查看摘要][在线阅读][下载 357K]
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  • 抗肿瘤重组鸡痘病毒体外抑制骨肉瘤细胞S180的效应

    张治宇;金宁一;李霄;张新;金毅;杨英欣;李力卓;

    目的探讨Apoptin、HN和IL18融合基因的重组鸡痘病毒(vFV3)对骨肉瘤细胞S180的抑制效应。方法以vFV3感染人骨肉瘤细胞S180,应用MTT法检测细胞活性,流式细胞仪分析vFV3感染致S180细胞周期变化,并用Rhodamine123染色结合FCM检测线粒体跨膜电位,从细胞生物学角度探讨vFV3致S180肿瘤细胞凋亡的途径。结果vFV3感染可有效抑制S180肿瘤细胞,杀伤率达46.8%。感染使S180肿瘤细胞线粒体膜电位下降,导致S180肿瘤细胞凋亡。结论vFV3可诱导S180肿瘤细胞凋亡,并主要通过线粒体途径诱导凋亡。

    2006年03期 233-235页 [查看摘要][在线阅读][下载 97K]
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  • Ⅱ型B族链球菌表面免疫相关蛋白基因的克隆和原核表达

    岳丽琴;沈叙庄;张华捷;王咏红;俞桑洁;杨永弘;

    目的重组表达Ⅱ型B族链球菌表面免疫相关蛋白(Surfaceimmunogenicprotein,SIP)基因,为进一步免疫学研究提供目标蛋白。方法用PCR的方法从GBSⅡ型标准株的基因组DNA中扩增出SIP基因,用T/A克隆法将其插入pMD18T载体,构建原核表达载体pET32aSIP,用BL21(DE3)/pET系统表达TrixSIP融合蛋白,SDSPAGE和质谱分析鉴定表达产物,并对表达蛋白进行初步纯化。结果PCR扩增产物经测序,证实与GenBank中Ⅰa/c型GBS的SIP的基因序列同源性为99%。SDSPAGE显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET32aSIP总蛋白中出现一条相对分子质量为66000的新蛋白带。质谱分析和蛋白质库的比较证实其为B族链球菌表面免疫相关蛋白(SIP)的可能性分数为74。结论已成功表达并初步纯化SIP,为SIP在细菌致病中的作用研究以及相关疫苗的制备奠定了基础。

    2006年03期 236-239页 [查看摘要][在线阅读][下载 338K]
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  • PEP-1-SOD1融合蛋白的表达及纯化

    丁鹏;王家宁;杨波;黄永章;骆丽娜;

    目的构建原核表达载体pET15bPEP1SOD1,并进行PEP1SOD1融合蛋白表达和纯化。方法以pBluescriptIISKSOD1质粒为模板,PCR扩增SOD1cDNA。经酶切后,分别构建原核表达载体pET15bSOD1和pET15bPEP1SOD1,经测序证实构建成功后,分别转化E.coliBL21(DE3),表达SOD1和PEP1SOD1融合蛋白,并进行鉴定。结果SDSPAGE和Westernblot分析表明,分别在相对分子质量22000和26000处出现SOD1和PEP1SOD1目标表达条带,目的蛋白占菌体总蛋白的30%,两种表达蛋白以天然的、可溶性的形式存在。结论已成功地制备出SOD1和PEP1SOD1融合蛋白。

    2006年03期 240-243页 [查看摘要][在线阅读][下载 409K]
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  • 北京分离株Gassericin T基因的克隆、表达及活性检测

    李向红;赵建增;崔云龙;闫述翠;万阜昌;

    目的克隆格氏菌素T基因,在原核细胞中表达,并检测其抑菌活性。方法通过PCR技术,从3株L.gasseri北京分离株中特异性扩增格氏菌素T的成熟肽DNA编码片段(V11/gatA和V441/gatA),经TA克隆和序列测定后,进行同源比较分析。双酶切后的目的片段与表达载体pGEX6P1连接,得到高效融合表达质粒pGEXgatA/V11和pGEXgatA/V441,转化大肠杆菌BL21(DE3)PlysS,IPTG诱导表达,并检测表达产物的抑菌活性。结果目的蛋白以包涵体形式表达,表达量约29%。重组格氏菌素对于金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、痢疾志贺氏菌和伤寒沙门氏菌具有明显的抑制生长作用。结论所获得的重组格氏乳杆菌素具有明显的抑菌活性,有望成为新型抗菌素。

    2006年03期 244-248页 [查看摘要][在线阅读][下载 377K]
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  • 实时荧光定量PCR方法检测人、鼠正常组织及脑癌组织中CD109蛋白的表达

    张静敏;金宁一;连海;李宵;孙迎春;安汝国;高桥雅英;

    目的分析CD109基因在正常组织及脑癌组织中的分布。方法采用实时荧光定量PCR方法,分析CD109在人、鼠正常组织及脑癌中的表达,以18SrRNA作为内标。结果CD109蛋白的mRNA丰度在睾丸组织中最高,在其它组织中较低,在12份脑癌标本中,检测到9份CD109表达上调。结论CD109基因在多数正常组织中表达很少,有可能是治疗恶性肿瘤的一个潜在的分子靶点。

    2006年03期 249-251页 [查看摘要][在线阅读][下载 272K]
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  • LHRH-PE40的免疫原性及其抗体对细胞毒作用的影响

    吴广谋;张国利;岳玉环;何畅;孟锐奇;李俊植;朱平;

    目的观察连续静脉注射重组毒素LHRH-PE40所引起的家兔抗LHRH-PE40抗体产生的规律以及该抗体对细胞毒作用的影响。方法将家兔分为3组,第1组隔日连续静脉注射LHRHPE40,第2组用弗氏佐剂乳化的LHRHPE40皮下注射为阳性对照组,第3组静脉注射人血白蛋白为阴性对照组。用ELISA检测血清中的抗体水平,XTT检测LHRH-PE40与血清中和后对Hela细胞的细胞毒作用。结果抗LHRHPE40抗体水平随静脉注射时间的延长而升高,8d可以检测到抗LHRH-PE40抗体,在24d基本达到最高水平。血清中和后LHRHPE40对Hela细胞的半数抑制量较阴性血清提高1~2倍,而阳性血清较阴性血清提高14倍。结论连续静脉注射LHRH-PE40产生较低水平的抗体,这种抗体未造成LHRHPE40对Hela细胞半数抑制量产生严重影响,这为临床连续使用LHRH-PE40提供了依据。

    2006年03期 252-254页 [查看摘要][在线阅读][下载 93K]
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  • HBV PreS2-MBP融合蛋白质粒构建及在大肠杆菌中的表达

    邵丽军;刘照惠;金立杰;李利;李猛;谷丽娟;赵晓林;杨屹;

    目的在大肠杆菌pMALP2x系统中表达HBVPreS2MBP融合蛋白,并对其进行鉴定和纯化。方法利用DNA重组技术,将全长的HBVPreS2蛋白基因克隆至原核表达载体pMALP2x中,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。表达产物经SDSPAGE和Westernblot检测,并经阴离子交换层析、AmyloseResin亲和层析纯化。结果成功构建了重组载体pMALP2x/S2,诱导蛋白为MBP标记的可溶性的PreS2MBP融合蛋白,具有良好的抗原性,可经AmyloseResin亲和层析纯化。结论pMALP2x系统可成功表达PreS2MBP融合蛋白。

    2006年03期 255-258页 [查看摘要][在线阅读][下载 428K]
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  • 人乳头瘤病毒16型晚期蛋白真核表达质粒的构建

    刘大维;刘景晔;王鹏富;姜春来;于湘晖;孔维;

    目的克隆宫颈癌病理组织中人乳头瘤病毒16型(HPV16)晚期蛋白(L1)的基因,并构建真核表达质粒,为制备预防性疫苗奠定基础。方法采用PCR法从宫颈癌病理标本中扩增出HPV16-L1基因,与pMD18T载体连接,测序并构建真核表达质粒(pVAX1L1),瞬时转染Cos7细胞,利用免疫组化技术检测表达产物。通过小鼠淋巴细胞转化试验检测免疫原性。结果所得L1基因的序列与GenBank中序列比较存在若干变异,并由此引起相应的氨基酸发生变化。pVAX1-L1瞬时转染Cos7细胞,经免疫组化技术检测到棕黄色免疫复合物的形成,说明有表达产物L1蛋白产生。淋巴细胞转化试验结果显示,试验组与对照组差异有显著意义。结论宫颈癌病理组织中HPV16L1基因序列存在一定程度的变异,所得L1基因表达产物具有生物学活性。

    2006年03期 259-261页 [查看摘要][在线阅读][下载 183K]
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  • 骨骼肌源性抑瘤物对恶性肿瘤抑制作用的研究

    郑梦利;罗成华;张向华;周乃康;孙玉鹗;

    目的研究骨骼肌微环境因素对恶性肿瘤细胞增殖的影响,评价其在骨骼肌转移瘤罕见性中的意义。方法原代培养新生Wistar大鼠骨骼肌细胞,用MTT法分析、比较其条件性上清液(MMCM)对恶性肿瘤细胞(小鼠骨髓瘤细胞株SP2/0、鼻咽癌细胞株CNE、肺巨细胞癌细胞株PLA801C、人食管鳞癌细胞株Eca109、宫颈癌细胞株Hela)及正常非肿瘤细胞(金黄地鼠肾细胞株BHK-21)的体外抑瘤作用。结果MMCM分别与SP2/0、CNE、PLA801C、Eca109、Hela及BHK-21细胞共同培养后,对5株恶性肿瘤细胞的增殖均有明显抑制作用,而正常非肿瘤细胞株则未受影响。结论新生大鼠骨骼肌细胞可产生选择性抑制恶性肿瘤细胞增殖的抑瘤物质,这种抑瘤物质可能是临床上骨骼肌内罕见转移瘤现象的生物学基础。

    2006年03期 262-264页 [查看摘要][在线阅读][下载 97K]
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  • 小鼠IFN-γ真核表达质粒的构建及表达

    揣侠;张永红;金玉怀;房文亮;谢立新;王永祥;

    目的构建重组小鼠干扰素γ(mIFN-γ)真核表达系统,并检测其在cos-7细胞中的表达。方法用RTPCR方法,从ConA活化的小鼠脾细胞中扩增出mIFNγcDNA,将其克隆至pGEMT载体上,测序正确后,再定向连接到真核表达载体pcDNA3中,经DEAEDextran转染至cos7细胞,检测其在细胞内外的表达。结果RTPCR扩增的mIFNγcDNA与GenBank中mIFNγ序列一致。构建的真核重组表达质粒pcDNA3/mIFNγ转染cos7细胞后,可检测到mIFN-γ的转录和表达。结论已成功构建了mIFNγ真核表达系统,为抗病毒基因疫苗的研究奠定了基础。

    2006年03期 265-267页 [查看摘要][在线阅读][下载 248K]
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  • 八肽胆囊收缩素对大鼠滑膜细胞株RSC-364 TNF受体基因表达的影响

    金玉怀;赵占胜;丛斌;徐锦荣;姚玉霞;李淑瑾;凌亦凌;

    目的探讨CCK8对RSC364细胞株TNF受体基因表达的影响。方法采用RTPCR法检测不同浓度的八肽胆囊收缩素(CCK8)对在TNF-α诱导下的大鼠滑膜细胞RSC364TNF受体(Tumornecrosisfactorreceptor,TNFR)mRNA表达的影响。结果CCK8在10-6mol/L和10-7mol/L浓度时可抑制TNF-α诱导的TNFR2mRNA在RSC364细胞的表达,且表现了一定的剂量和时间依赖性,CCK受体拮抗剂丙谷胺则可抑制此作用。结论CCK8可抑制TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞RSC364株TNFR2基因的表达。

    2006年03期 268-271页 [查看摘要][在线阅读][下载 404K]
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  • 不同周龄BALB/c小鼠制备单抗的产量比较

    焦艳;高克谨;朱庆宣;陈洁;郭晓云;廖燕端;林朝琨;

    2006年03期 271页 [查看摘要][在线阅读][下载 36K]
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  • 人GnRH及其转运肽基因合成及鉴定

    金元昌;刘利;苏晓艳;李景鹏;李会东;向育君;周建红;

    目的人工合成人GnRH及转运肽(TRS)基因。方法根据已发表的人GnRH基因mRNA序列以及转运肽(9个左旋精氨酸)基因核苷酸序列,设计一对核苷酸,再用含7mol/L尿素的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化,然后以这对核苷酸3′末端短互补序列退火、补齐,合成长达90bp的目的序列GnRH/TRS。将其亚克隆到pMD18T载体上,构建重组质粒pYC1。酶切鉴定筛选出阳性克隆pYC1,并测序。结果GnRH/TRS序列由90个核苷酸组成,扩增产物与原设计序列同源性达100%。结论已成功合成人GnRH/TRS基因,为进一步研究和应用奠定基础。

    2006年03期 272-274页 [查看摘要][在线阅读][下载 127K]
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  • 乳腺生物反应器特异调控序列的构建

    蒋小玲;张红梅;徐六妹;王火生;乐晓华;李丽雄;周伯平;

    目的构建可以指导外源基因在动物乳腺组织特异表达的调控序列———牛α-S1酪蛋白基因调控序列。方法提取新生小牛肝组织的DNA,应用PCR分段扩增牛α-S1酪蛋白基因调控序列,经琼脂糖凝胶电泳鉴定后测序,再将各基因片段连接成完整的序列。并将外源基因ALB亚克隆入该调控序列内,转染C127细胞,经免疫组化法检测其表达情况。结果乳腺生物反应器特异调控序列———牛α-S1酪蛋白基因调控序列,包括其1.8kb上游序列、第一外显子、第一内含子、包含翻译起始位点的第二外显子和部分第二内含子,及其最后一个内含子的大部分、最后一个不翻译的外显子(含多聚A信号)及侧翼区全长5.8kb。位于该调控序列内的ALB高效表达。结论成功构建乳腺生物反应器特异调控序列———牛α-S1酪蛋白基因调控序列,此调控序列对外源基因的表达有正调控作用。

    2006年03期 275-277+281页 [查看摘要][在线阅读][下载 387K]
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  • 丝状支原体丝状亚种SC型LppQ N-端基因表达与免疫原性

    辛九庆;高玉龙;李媛;王砚范;钱爱东;

    目的构建丝状支原体丝状亚种SC型LppQN端基因表达载体,并进行表达产物的纯化及免疫原性检测。方法利用PCR方法在体外定点突变丝状支原体丝状亚种SC型HVRIX株编码色氨酸的基因(TGA突变为TGG),构建表达载体,使其能在大肠杆菌中大量表达,并对表达产物进行纯化和免疫原性检测。结果表达产物约占菌体总蛋白的53.7%,经Westernblot和ELISA检测,表达蛋白具有良好的免疫原性。结论已成功表达了具有免疫原性的LppQ重组表达蛋白,可以作为诊断抗原用于血清学检测。

    2006年03期 278-281页 [查看摘要][在线阅读][下载 325K]
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  • 弓形虫P30蛋白抗原表位的克隆表达及纯化鉴定

    李越希;陶开华;张锦海;潘明洁;

    目的构建表达P30蛋白抗原表位的重组质粒及工程菌,获得纯化的P30蛋白抗原表位,用于检测弓形虫特异性抗体。方法采用PCR技术,设计一对引物(P30P3、P30P4),从弓形虫基因组DNA中扩增出编码P30蛋白抗原表位的基因片段,与载体pET28a(+)连接,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后进行SDSPAGE分析。用离子交换纯化表达的P30抗原表位,用ELISA鉴定其抗原性。结果表达的P30蛋白抗原表位以包涵体形式存在,纯化的P30蛋白抗原表位片段有较好的抗原性,可用于检测弓形虫抗体。结论已成功构建了高表达P30蛋白的工程菌,为研制弓形虫抗体检测试剂或疫苗奠定了基础。

    2006年03期 282-284+287页 [查看摘要][在线阅读][下载 232K]
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  • LHRH-PE40与癌细胞表面LHRH受体结合特性的检测

    向梅;向钧;崔满华;殷艳玲;朱平;

    目的检测LHRH-PE40融合蛋白是否保留了LHRH与癌细胞表面其相应受体特异性结合的性质。方法在Hela细胞培养液中,分别加入LHRH和LHRHPE40,经结晶紫染色法检测A值。另取宫颈癌组织切片,分别加LHRH-PE40和LHRH后,再加兔抗PE40血清和羊抗兔IgG异硫氰酸荧光素,在荧光显微镜下观察荧光强度。结果随着LHRH与LHRHPE40的摩尔数之比由100/1、250/1增加到500/1,细胞毒性的效果逐渐减弱。当LHRH/LHRH-PE40达到500/1时,肿瘤细胞表面的LHRH受体饱和;LHRH/LHRHPE40达750/1时,其A值与500/1时的A值接近。宫颈癌组织加入LHRH竞争后,荧光强度较仅加LHRHPE40组明显减弱。结论重组毒素LHRH-PE40仍保留了与癌细胞LHRH受体结合的特性。

    2006年03期 285-287页 [查看摘要][在线阅读][下载 234K]
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  • 生物反应器细胞培养制备人用狂犬病疫苗

    查力;高军;侯剑英;白珠穆;袁德明;杨俊伟;李旭;李庆岸;陈焕玉;孙非非;赵红梅;周德水;

    目的应用生物反应器培养细胞和病毒,大规模生产人用狂犬病疫苗。方法以巴斯德PV2061为毒种,以143代以内Vero细胞为培养基质,应用生物反应器,每升投放25g微载体,灌流式细胞培养,连续收获病毒液,经浓缩、灭活、纯化,制成Vero细胞狂犬病疫苗。结果细胞培养密度达1.2×107~1.5×107个/ml,病毒感染后可连续收获18~22d,病毒最高滴度8.5LogLD50/ml,平均滴度7.6LogLD50/ml。经柱层析纯化,杂蛋白去除率达99.95%以上,总蛋白含量≤80μg/g,DNA含量≤10pg/0.5ml,GP含量3.5~4.5IU/0.5ml,效力≥4.5IU/0.5ml。结论应用生物反应器细胞培养,可以大规模生产优质Vero细胞人用狂犬病疫苗。

    2006年03期 288-290页 [查看摘要][在线阅读][下载 203K]
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  • 两种细胞培养流感病毒的滴度比较

    戚凤春;汪春义;张雪梅;王亚军;李晓波;贾媛;赵大鹏;盛军;

    目的探讨甲1(A1)型流感病毒在Vero细胞和MDCK细胞培养的可行性,确定最佳培养条件。方法将流感病毒接种于Vero细胞和MDCK细胞,在含有不同浓度胎牛血清或胰酶维持液中培养,于不同时间收获病毒液,检测血凝素滴度(HA)。结果胎牛血清对病毒的繁殖有明显抑制作用。加入适量胰酶(约5μg/ml)可提高病毒产量。最佳收获病毒时间为72~96h。在MDCK细胞上的病毒HA滴度高于Vero细胞。结论两种组织细胞培养流感病毒结果相近,Vero细胞和MDCK细胞均可用于培养流感病毒。

    2006年03期 291-292+318页 [查看摘要][在线阅读][下载 90K]
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  • 冻干Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗的稳定性

    王辉;张月兰;张颖;张晋;钟书声;罗书荣;

    目的了解冻干Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗的稳定性。方法将冻干Vero细胞乙脑纯化疫苗分别放置在4℃、25℃、37℃和40℃下,按规定时间取样。用ELISA双抗体夹心法和小鼠效力试验检测其抗原单位和效力水平。结果在4℃下72周效力损失4.2%,25℃下24周效力损失4.5%,37℃下12周效力损失9.1%,40℃下4周效力损失15.2%。疫苗溶解后室温放置24h,效力无明显改变。结论冻干Vero细胞乙脑纯化疫苗在室温下稳定性良好。

    2006年03期 293-294页 [查看摘要][在线阅读][下载 58K]
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  • b型流感嗜血杆菌结合物纯化过程不同部分的生化及免疫学特性

    杜琳;谭小梅;宣俊文;蒋奕;刘月萍;谢贵林;

    目的分析Hib结合物纯化过程不同部分的生化及免疫学特性。方法制备的Hib结合物经SepharoseCL4B层析柱纯化,从中选5个不同位点取样,检测其生化特性及免疫原性。结果1、2和3部分多糖蛋白质比例在0.4左右,高分子结合物含量均在80%以上,经高压液相分析,这3部分的相对分子质量均在1400000以上,免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答。第4部分高分子结合物含量在70%左右,相对分子质量约在670000,免疫小鼠后也能产生较好的免疫应答。第5部分高分子结合物含量为23.7%,相对分子质量在50000左右,基本是以游离状态存在的多糖和载体蛋白,免疫小鼠后仅能产生很低的免疫应答。结论1、2和3部分是Hib结合物纯化中需收集的部分,第4部分虽也以结合状态存在,但相对分子质量相对较低,第5部分主要是游离的多糖和蛋白质。

    2006年03期 295-297页 [查看摘要][在线阅读][下载 112K]
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  • 麻疹乙脑二联减毒活疫苗安全性及免疫原性研究

    姚亚夫;张卓光;周本立;曾立学;刘瑛;王洪彬;廖轶;卢德芬;

    目的研究麻疹乙脑二联减毒活疫苗的安全性及免疫原性。方法采用麻疹沪191毒株和乙型脑炎SA14142毒株分别制备的病毒原液,进行配比和干扰试验,制备成二联疫苗,冻干后免疫小白鼠和猴子,观察安全性和免疫原性,然后进行人体观察。结果麻疹病毒原液与乙脑病毒原液的最佳混合比例(体积比)为1∶2。注射小白鼠后安全性良好,且产生较好的乙脑免疫应答。注射猴子后无异常反应,神经组织病理学变化轻微,麻疹和乙脑中和抗体效价与各自的单价苗差异无显著意义。人体临床观察一般情况良好,无局部及全身反应。结论所研制的麻疹乙脑二联减毒活疫苗安全性及免疫原性良好,可推广使用。

    2006年03期 298-301页 [查看摘要][在线阅读][下载 111K]
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  • 中华稻蝗超氧化物歧化酶的提纯

    周艳利;李建科;

    2006年03期 301页 [查看摘要][在线阅读][下载 27K]
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  • HIV抗体国家参考品(胶体金类试剂)的建立及其应用

    李秀华;宋爱京;尹红章;王佑春;

    目的建立HIV抗体国家参考品(胶体金类试剂)并对其应用效果进行分析。方法通过对阳性和阴性样品的筛选,确定候选参考品的组成,经标定,确定参考品的质量标准,并以此为标准对试剂的质量进行检测和评估。结果参考品由20份阳性、20份阴性、3份最低检测限和1份精密性样品组成。质量标准为20份阳性样品,应均为阳性,20份阴性样品中应至少18份为阴性,最低检测限样品应至少1份为阳性,且稀释用血浆应为阴性,精密度样品检测10次,其颜色反应一致。共检测进口注册、国内注册以及常规检定样品189批,其中进口注册样品合格率为81.8%,国内注册样品合格率为80.8%,常规检定样品合格率为96.2%。结论该参考品可反映试剂的质量水平,对保证试剂的质量具有重要作用。

    2006年03期 302-303页 [查看摘要][在线阅读][下载 51K]
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  • 康赛宁对体外培养的人肝癌细胞的影响及与乙肝疫苗联合免疫对小鼠的免疫增强作用

    陈克金;刘建;喻刚;全家妩;

    目的研究A群溶血性链球菌制剂(康赛宁)对体外培养的人肝癌细胞系Hep3B和HepG22.2.15的影响及与乙肝疫苗联合免疫对小鼠的免疫增强作用。方法用不同浓度的康赛宁作用于人肝癌细胞Hep3B和HepG22.2.15,观察细胞形态学,MTT比色法检测细胞活性,EIA法检测培养上清HBsAg、HBeAg含量,吖啶橙直接染色检测细胞凋亡,Southernblot分析细胞DNA片段。给NIH小鼠腹腔注射康赛宁和乙肝疫苗,检测血清中HBs抗体、转氨酶水平。给普通小鼠腹腔注射康赛宁和乙肝疫苗,观察注射前后的体重变化。结果康赛宁可抑制HBsAg及HBeAg的分泌,使染色体DNA发生有规律的断裂,促使细胞发生凋亡。与乙肝疫苗联合免疫,可提高小鼠血清中HBs抗体水平。无论单用或合用康赛宁,对小鼠均无明显毒副作用。结论康赛宁对体外培养的人肝癌细胞系有影响,与乙肝疫苗联合免疫对小鼠有免疫增强作用。

    2006年03期 304-308页 [查看摘要][在线阅读][下载 507K]
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  • Pichia酵母表达重组人可溶性TRAIL的纯化与生物活性

    李茹冰;傅泳航;李继东;佟明华;杨联萍;孔祥平;

    目的分离纯化Pichia酵母表达的重组人可溶性TRAIL,并检测其生物活性。方法以Pichia酵母分泌型表达TRAIL,采用硫酸铵沉淀和柱层析纯化可溶性TRAIL蛋白。以SDSPAGE、ESIMS和Westernblot法鉴定其纯度及特异性。以细胞透射电镜、DNALadder和MTT法检测其诱导肿瘤细胞凋亡活性。结果目的蛋白以可溶形式存在,蛋白相对分子质量22000,纯化后纯度95%。Westernblot证实为TRAIL蛋白。电镜、DNALadder和MTT均证实其具有诱导肿瘤细胞凋亡活性。结论Pichia酵母表达rhsTRAIL可用柱层析法纯化,并具有诱导肿瘤细胞凋亡的生物活性。

    2006年03期 309-312页 [查看摘要][在线阅读][下载 320K]
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  • 金黄地鼠耳螨病皮肤病理组织学观察

    赵亚力;王丹;周捷;赵晓青;赵婧;薄文学;

    目的观察地鼠繁殖群发生的耳螨病皮肤病理学改变。方法应用两种死螨检查方法制备耳及会阴部皮肤寄生螨载玻片,光镜观察,并进行寄生虫形态学鉴定。同时对6只临床发病地鼠进行大体剖检,选取双耳、阴囊、肛门周围皮肤,常规病理制片,HE染色,光镜观察皮肤病理改变。结果寄生虫形态学观察证实为耳螨(背肛螨、疥痂螨)。大体剖检内脏器官未见异常,主要病变部位是皮肤。双耳(耳翼、耳甲)、阴囊、肛门周围皮肤有病变处,表皮上有炎性渗出物及痂皮,表皮增生、增厚,可见不完全角化,上皮增生可达68层甚至更多,角质层增生更明显。在角质层表面以及角质层或表皮的隧道内,均发现大量螨虫及螨卵的各种断面。在耳螨寄生部位可引起急性或慢性炎症,有的动物伴有继发性细菌感染,少数动物可见表皮坏死,形成溃疡。真皮出现充血、水肿及炎性细胞浸润。结论地鼠耳螨病皮肤病理改变具有典型特征,可结合寄生虫形态学鉴定进行病理诊断。

    2006年03期 313-315页 [查看摘要][在线阅读][下载 528K]
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  • 重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)免疫效果的观察

    孙俊业;徐冬冬;李德娟;王立成;陶航;陈胤忠;金立杰;

    目的进一步观察重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)的免疫效果。方法选择江苏省响水县某中心小学学生及教师,经筛查HBsAg、antiHBs和antiHBc均为阴性的98名作为观察对象,使用10μg重组乙肝疫苗(CHO细胞),按0、1、6个月3针免疫程序进行免疫效果观察。结果全程免疫后1个月,85名学生中,抗HBs阳性83名,阳转率为97.65%,GMT为172.50mIU/ml,最高可达498.12mIU/ml。男性、女性的抗HBs阳转率分别为97.50%和97.78%,GMT分别为170.11和148.42mIU/ml。结论10μg重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)应用于小学生,免疫效果良好。

    2006年03期 316+325页 [查看摘要][在线阅读][下载 79K]
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  • 干扰素α2a联合美能治疗慢性丙型肝炎临床及病理观察

    王明;孙海英;

    目的观察干扰素α2a联合美能治疗慢性丙型肝炎的疗效。方法52名临床确诊为慢性丙型肝炎的患者接受干扰素α2a与美能的联合治疗,以同期49名慢性丙型肝炎患者单独接受干扰素α2a治疗为对照组,治疗前后观察肝功能、肝纤维化指标、HCVRNA及肝穿活检结果。结果总胆红素、ALT、AST、HA、LN、IVC的改善程度治疗组明显优于对照组(P<0.05),病毒清除率治疗组为53.8%,对照组为38.8%(P<0.05),肝穿活检结果改善情况治疗组与对照组差异有非常显著意义(P<0.01)。结论干扰素α2a联合美能对慢性丙型肝炎的临床及病理学指标均有明显改善,优于单独使用干扰素。

    2006年03期 317-318页 [查看摘要][在线阅读][下载 60K]
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  • 免疫化疗对肾癌根治术后的远期疗效观察

    王家强;王焱民;李义;孙文涛;谢英林;

    目的探讨免疫化疗在肾癌根治术后的远期疗效。方法将50名经手术和病理证实为肾透明细胞癌的患者随机分成2组,化疗组25名,肾癌根治术后应用白细胞介素2、干扰素和5氟尿嘧啶治疗;对照组25名,行单纯肾癌根治术。比较2组术后生存率。结果观察1年,2组间生存率差异无显著意义(P>0.05),而3年及5年化疗组生存率分别为92.0%和84.0%,明显高于对照组(分别为68.0%和48.0%),差异均有显著意义(P<0.05)。化疗组患者未发生严重副反应,药物治疗耐受性良好。结论肾癌术后免疫化疗可提高生存率。

    2006年03期 319-320页 [查看摘要][在线阅读][下载 56K]
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  • 天花的威胁及其控制

    安焕宇;过琴媛;

    2006年03期 321-322页 [查看摘要][在线阅读][下载 49K]
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  • 结核分枝杆菌感染细胞的信号传导通路研究进展

    黄晓燕;严杰;李淑萍;

    结核分枝杆菌是一种典型的胞内致病菌,在其感染宿主细胞的过程中,激活或抑制了复杂的信号传导通路,发挥调控感染细胞对IFN-γ的反应性,抑制炎症相关细胞因子产生,抗感染细胞凋亡,阻断吞噬体溶酶体融合等生物学效应,有利于Mtb生存并逃避免疫系统攻击。

    2006年03期 323-325页 [查看摘要][在线阅读][下载 109K]
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  • 组织激肽释放酶的研究进展

    姜春华;曹郁生;

    组织激肽释放酶为一类性质相似的化合物,可由肝脏、胰脏、脑神经等合成。人类多种疾病与激肽释放酶基因表达相关,该基因是高血压基因治疗研究的首选靶点。本文综述了激肽释放酶基因与疾病的相关性以及该基因重组载体的构建和表达等研究进展。

    2006年03期 326-327页 [查看摘要][在线阅读][下载 64K]
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  • 世界卫生组织无细胞百日咳疫苗质量控制与规程修订研讨会纪要

    张庶民;

    2006年03期 328页 [查看摘要][在线阅读][下载 24K]
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