中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

  • 含CpG基序寡核苷酸对rHBsAg免疫小鼠脾脏组织及细胞增殖的影响

    石艳春;翁滨;郑源强;刘丹;杨贵贞;

    目的探讨合成含CpG基序的寡核苷酸(CpGODN)与重组乙型肝炎表面抗原(rHBsAg)联合免疫对小鼠脾脏淋巴组织及细胞增殖的影响。方法经后腿胫骨前肌初次免疫BALB/c小鼠,2周后加强免疫1次;常规石蜡切片,H-E染色,观察脾脏组织学改变;3H-TdR掺入法检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞增殖反应。结果抗原+CpG组脾脏可见明显的组织学改变。加CpG与不加CpG的2组比较,淋巴细胞增殖反应显著增强。结论CpGODN能够有效刺激小鼠脾脏组织T细胞区淋巴细胞增生,生发中心明显增大,而且能够显著增强淋巴细胞增殖反应。

    2006年02期 105-107页 [查看摘要][在线阅读][下载 284K]
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  • HIV-1 HXB2株蛋白酶在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定

    贾建安;周波;钱宝华;蒋少华;陈秋莉;潘欣;赵平;任浩;温宗梅;邓松华;卢洪洲;潘卫;

    目的原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(Protease,PR),用于对HIV-1GagP2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选。方法根据HIV-1HXB2株PRDNA序列设计引物,用重叠延伸PCR方法合成使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,用T/A克隆法将其插入pMD18-T载体进行测序。将HIV-1PRDNA克隆至原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中进行诱导表达,用Ni-NTA亲和柱对表达蛋白进行纯化,SDS-PAGE鉴定,并用HIV阳性血清进行免疫反应性的鉴定。结果合成的使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,经测序显示其编码氨基酸序列与原始序列完全一致。所构建的HIV-1PR原核表达质粒pQE30-pr,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为14000的HIV-1PR蛋白,纯化的目的蛋白浓度为7.74mg/ml。ELISA检测该蛋白与HIV阳性血清呈特异性反应。结论已成功合成并克隆了使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,经表达及纯化的HIV-1PR蛋白具有免疫学特性。

    2006年02期 108-112页 [查看摘要][在线阅读][下载 484K]
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  • 重组人Stathmin基因的克隆及表达

    陈越;李晶华;何侃;金英花;

    目的克隆人Stathmin基因,并利用原核细胞进行表达。方法用PCR方法从Hela细胞cDNA文库中扩增Stathmin基因,PCR产物经TA克隆并测序后,克隆至pGEX-4T-1载体,并转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Westernblot鉴定。结果PCR扩增得到460bp的cDNA片段,经测序分析,与GenBank数据库报道的人Stathmin(NM_203401)序列一致,经SDS-PAGE和Westernblot证实诱导表达的蛋白为GST融合蛋白。结论利用原核表达系统表达了人Stathmin,为进一步研究Stathmin结构和功能奠定了基础。

    2006年02期 113-115页 [查看摘要][在线阅读][下载 230K]
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  • B族链球菌C5a肽酶功能活性区域的分段表达

    岳丽琴;沈叙庄;周育森;林粱;杨永弘;

    目的表达B族链球菌C5a肽酶蛋白功能活性区域,为进一步研究及开发疫苗奠定基础。方法设计引物,从GBSⅡ型标准株的基因组DNA中扩增出含有C5a肽酶蛋白不同功能区域基因的4个目的片段,分别插入T载体,再经酶切后,插入原核表达载体PET32a,进行融合表达。对表达蛋白进行免疫原性检测,并通过镍柱大量纯化。结果成功构建4个目的片段的PET表达质粒。经SDS-PAGE检测表达的融合蛋白相对分子质量分别为80000、78000、70000和36000。蛋白质谱分析证实,表达的4个蛋白为B族链球菌C5a肽酶蛋白的可能性分数分别为82、152、113和79。免疫印迹证实均能与特异性抗C5a肽酶蛋白的抗体反应,纯化后的蛋白SDS-PAGE纯度达90%。结论已成功地表达了可溶性C5a肽酶蛋白4个功能活性区域,为蛋白免疫表位和毒力机制的研究以及亚单位蛋白疫苗的制备奠定了基础。

    2006年02期 116-119页 [查看摘要][在线阅读][下载 591K]
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  • 金黄色葡萄球菌肠毒素A基因克隆、表达、纯化与鉴定

    王丽婵;张庶民;余模松;杨晓明;

    目的构建含SEA基因的原核表达载体,并在大肠杆菌表达系统中表达。方法应用PCR扩增SEA基因片段,与克隆载体pGEMT-easy连接,插入到表达载体pET-30a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达及鉴定。结果PCR扩增约770bp的基因片段,克隆至载体后,经测序与文献报道结果一致,表达蛋白相对分子质量约31000,纯化后鉴定为SEA蛋白。结论已成功获得SEA蛋白,为其进一步研究和应用奠定基础。

    2006年02期 120-123页 [查看摘要][在线阅读][下载 450K]
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  • HIV跨膜蛋白gp36和gp41的截短及融合表达

    肖健;朱华松;尹娟;孙可芳;汪超英;端义坤;余模松;

    目的将HIV-1的跨膜蛋白gp41和HIV-2跨膜蛋白gp36进行截短,并在大肠杆菌中进行融合表达。方法用PCR将gp41和gp36的编码基因进行截短,回收的PCR产物纯化后克隆到连接载体pGEM-T上,然后用BamHⅠ、EcoRⅠ和SalⅠ切下目的基因,并构建到表达载体pGEX-4T-3,导入宿主细胞BL21,用IPTG诱导表达。结果酶切鉴定显示,截短的HIV-1gp41和HIV-2gp36跨膜蛋白基因大小与预期的一致,表达产物经SDS-PAGE分析显示在相对分子质量66000处出现融合表达条带,Westernblot分析显示,与相应抗体出现特异性反应。结论已成功对gp41和gp36跨膜蛋白进行截短,并构建表达载体进行表达,为跨膜蛋白的进一步应用研究奠定基础。

    2006年02期 124-126+138页 [查看摘要][在线阅读][下载 523K]
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  • 转基因枸杞表达重组HIV壳体蛋白的鉴定

    杜国利;宋长征;张更林;孙晓光;

    目的构建转基因枸杞表达系统,并表达HIV壳体蛋白。方法以重组质粒pET-3a-MA4-CA为模板,PCR扩增MA4-CA基因,克隆至pGEM-T质粒中,转化DH5α,经双酶切后重组于pCAMBIA1305.2载体中,构成pCAMBIA1305.2-MA4-CA载体,经农杆菌介导叶盘转化法转化枸杞,培育转基因枸杞植株,进行芽、根诱导。结果在植物培养箱中,转基因植株成功地进行了分化及生根的诱导。PCR扩增分析表明转基因植株内存在目的基因,并与启动子p35S相连。ELISA及Westernblot实验证实在转基因枸杞叶子提取物中存在壳体蛋白。结论初步建立了表达具有免疫原性的HIV壳体蛋白的转基因枸杞表达系统。

    2006年02期 127-129+133页 [查看摘要][在线阅读][下载 569K]
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  • 人sΔBAFF的高效原核表达及纯化

    黄刚;何凤田;李蓉芬;高会广;陈麟凤;龚薇;胡颖;胡大强;

    目的克隆TNF家族B细胞激活因子(BcellactivatingfactortotheTNFfamily,BAFF)胞外区134~285(sBAFF134-285)氨基酸残基段缺失突变体(sΔBAFF)的cDNA,并进行表达及纯化。方法以构建的重组质粒pUC19/sBAFF为模板,采用一步反向PCR法,扩增缺失编码sBAFF的142~160位氨基酸的核苷酸序列。经测序证实后,克隆入原核表达载体pQE-80L。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Westernblot检测表达产物,Ni2+-NTA柱层析纯化目的蛋白。结果经一步反向PCR扩增后得到401bp的DNA片段,该片段序列与GenBank报道的编码人ΔBAFF的胞外区(sΔBAFF)cDNA序列一致。含sΔBAFF的表达载体在大肠杆菌中可表达出相对分子质量为18000的蛋白质并以包涵体的形式存在,经Ni2+-NTA柱层析纯化后得到高纯度的目的蛋白。结论已成功地制备出人sΔBAFF蛋白,为其功能的研究创造了条件。

    2006年02期 130-133页 [查看摘要][在线阅读][下载 394K]
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  • 人白细胞介素-24基因的克隆、表达和纯化

    肖斌;杨珺;田文标;朱永红;毛旭虎;邹全明;

    目的对人白细胞介素-24(hIL-24)进行克隆、表达和纯化。方法分离人外周血单个核细胞,ConA刺激培养,提取细胞总RNA,应用RT-PCR技术从外周血单个核细胞中扩增hIL-24成熟肽编码区,定向克隆至融合表达载体pGEX-4T-1,重组载体pGEX-4T-1/hIL-24经DNA测序鉴定后,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,阴离子交换层析纯化融合蛋白,SDS-PAGE和Westernblot鉴定。结果所得hIL-24基因经序列分析,与GenBank公布一致。所构建融合表达载体pGEX-4T-1/hIL-24测序正确,转化BL21(DE3)后,37℃诱导表达相对分子质量约为44000的融合蛋白,主要以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的30.63%。经纯化后,纯度达85%以上。Westernblot检测能与兔抗人IL-24的多克隆抗血清发生结合反应。结论已成功构建了hIL-24的融合表达载体pGEX-4T-1/hIL-24,并在大肠杆菌中高效表达,纯化后获得了高纯度的融合蛋白,为hIL-24的功能及活性研究奠定基础。

    2006年02期 134-138页 [查看摘要][在线阅读][下载 705K]
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  • 体外培养前后脐血CD34~+细胞差异表达基因的筛选

    刘启威;李群良;蔡海波;谭文松;

    目的筛选扩增培养前后脐血CD34+细胞差异表达基因。方法将新鲜分离的CD34+细胞设为对照组,经静态和动态培养系统扩增的CD34+细胞设为试验组,应用基因差异显示技术(DDRT-PCR)比较两组之间的基因表达差异,对差异表达基因片段进行克隆、测序及生物信息学分析,并且通过半定量RT-PCR方法验证基因差异表达的真实性。结果应用差异显示技术筛选出5个差异表达基因,其中4个为已知功能基因,1个为未知功能基因,对其中2个基因RAN和DC24进行半定量RT-PCR检测表明,在静态和动态体系扩增培养后的CD34+细胞内,RANmRNA的表达水平分别是新鲜分离细胞的1.521和3.978倍,DC24mRNA的表达水平分别是新鲜分离CD34+细胞的14.275和2.374倍。结论发现了与CD34+细胞体外增殖相关的一些重要基因,为从基因水平调控CD34+细胞体外增殖提供依据。

    2006年02期 139-142页 [查看摘要][在线阅读][下载 358K]
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  • 鸡传染性法氏囊病毒VP2基因的原核表达与抗原性分析

    高玉龙;高宏雷;邓小芸;杨虹;王晓艳;祁小乐;付朝阳;王笑梅;

    目的表达鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)弱毒株VP2蛋白并检测其抗原活性。方法以IBDV强毒致弱株Gt株基因组RNA为模板,应用RT-PCR方法扩增VP2基因,并将其克隆入pUC18载体,经PCR、酶切及测序鉴定正确后,将其亚克隆到原核表达载体pET30a中,并经酶切、PCR、测序鉴定,阳性重组表达质粒转化E.coliBL21(DE3)菌,经IPTG诱导后,表达产物用SDS-PAGE及Westernblot检测。结果阳性重组表达质粒转化E.coliBL21(DE3)后,经诱导表达了目的蛋白,表达量占菌体总蛋白的15%。Westernblot检测表达蛋白可与IBDV阳性血清发生反应,而与阴性对照血清不发生反应。结论已成功表达了鸡传染性法氏囊病毒弱毒株VP2蛋白,且具有良好的抗原性。

    2006年02期 143-145页 [查看摘要][在线阅读][下载 267K]
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  • HSV-1 stocker株糖蛋白G基因膜外区毕赤酵母表达载体的构建及序列分析

    刘毅;韩金祥;邵金辉;朱波;朱有名;

    目的构建Ⅰ型单纯疱疹病毒型特异性包膜糖蛋白G基因膜外区毕赤酵母表达载体,并进行序列分析。方法PCR扩增HSV-1-gG基因的膜外区,克隆于pGEM-T载体,转化DH5α,提取质粒酶切鉴定后,与pPIC9K载体连接,转化DH5α,筛选阳性克隆,鉴定后转化GS115菌,构建酵母表达载体。对克隆的序列进行分析,预测表达产物的理化特性、抗原性及表达形式。结果获得的重组酵母表达载体pPIC9K-gG,测序结果证实为HSV-1-gG基因,序列分析其高度保守,预测蛋白相对分子质量15870,等电点pI为4.72,包含全部膜外区分值达1.7的6个强抗原决定簇,将以可溶性形式分泌表达于胞外。结论已成功构建HSV-1stocker株糖蛋白G基因膜外区毕赤酵母表达载体。

    2006年02期 146-149页 [查看摘要][在线阅读][下载 525K]
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  • 产气荚膜梭菌β_2-β_1融合基因的构建及初步表达

    曾瑾;王玉炯;许崇波;邓光存;马春燕;

    目的构建产气荚膜梭菌β2-β1毒素融合基因并在重组大肠杆菌中表达。方法采用PCR方法,从含β2毒素基因质粒CPB2-9中扩增出β2毒素基因,经NcoⅠ和BamHⅠ双酶切后,回收0.73kb片段,再将含β1毒素基因质粒pXETB1经同样双酶切回收,与β2片段连接,转化BL21(DE3)中,进行诱导表达。结果经SDS-PAGE和Westernblot分析表明,重组菌株BL21(DE3)可表达β2-β1融合蛋白,且该蛋白可以被相应的抗体所识别。结论已成功构建了β2-β1融合基因,并在重组大肠杆菌中表达。

    2006年02期 150-152页 [查看摘要][在线阅读][下载 310K]
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  • 真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Vasostatin的构建及其在293T细胞中的表达

    刘建巨;吴雅臻;李辉南;吴荒;刘茂雄;刘殊;

    目的构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Vasostatin并检测其在真核细胞内的表达水平。方法将带有信号肽的Vasostatin基因片段克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体上,经酶切鉴定及测序分析证明构建成功后,以脂质体介导法转染293T细胞,通过Westernblot法,检测其在293T细胞内的表达水平。结果所构建的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Va-sostatin转染293T细胞后,在其裂解的上清液中,检测到目的基因的表达。结论已成功构建了pcDNA3.1(+)-Vasostatin表达载体,并在真核细胞中表达了目的蛋白。

    2006年02期 153-154+158页 [查看摘要][在线阅读][下载 273K]
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  • 绿脓杆菌重组毒素分泌表达的初步研究

    彭其胜;张国利;吴广谋;朱平;

    目的分析绿脓杆菌重组毒素的分泌表达机理。方法将所构建的6种绿脓杆菌重组毒素的分泌表达质粒,即pET-20b-IL-1023-57-PE40、pET-20b-EGF-PE40、pET-20b-LHRH-PE35、pET-20b-EGF-PE38、pET-20b-MSH-PE40和pET-20b-LHRH-PE40分别转化至Rosetta(DE3)中,进行IPTG诱导表达。结果只有LHRH-PE40和LHRH-PE35能分泌表达。LHRH-PE35表达产物经Westernblot检测,可被特异抗体识别。经DNAStar和ANThewin蛋白分析软件对6种PE重组毒素性质进行比较分析发现,并不是所有PE重组毒素融合信号肽序列后,就能分泌表达,其中导向部分的性质决定了PE重组毒素是否分泌表达。结论对绿脓杆菌重组毒素的分泌机理已有初步了解。

    2006年02期 155-158页 [查看摘要][在线阅读][下载 509K]
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  • 5-Fu对人结肠癌细胞凋亡过程中DNA损伤修复基因表达的影响

    薛立娟;卜丽莎;杨绍娟;崔亚南;王维忠;

    目的探讨5-Fu对人结肠癌细胞(HCT/8)凋亡过程中DNA损伤修复相关基因表达的影响。方法通过形态学、基因组电泳、吖啶橙染色及流式细胞仪,观察大肠癌细胞凋亡情况,同时应用基因芯片分析5-Fu作用后DNA损伤修复相关基因表达的变化。结果经流式细胞仪检测发现,5-Fu作用于HCT/8细胞48h与对照组相比,凋亡细胞数明显增加,基因组电泳出现典型的梯形条带,基因芯片分析显示,12个与DNA损伤修复相关的基因中,上调基因3个,下调基因9个。结论5-Fu作用于结肠癌细胞,导致多种DNA损伤修复基因发生改变,综合作用使细胞不能及时对损伤DNA进行修复,最终导致细胞发生凋亡。

    2006年02期 159-161页 [查看摘要][在线阅读][下载 204K]
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  • 凋亡抑制因子Survivin在小鼠内耳发育中的作用

    李春晖;杜宝东;孙阳;雷爱军;李贵才;马忠恕;

    目的探讨凋亡抑制因子Survivin在小鼠内耳发育中的作用。方法应用HE染色观察小鼠内耳发育形态演变过程、免疫组织化学方法检测Survivin在小鼠12~17d胚胎、生后14d内乳鼠内耳的表达情况。结果Survivin在听泡上皮增殖期表达最广泛,在分化成熟期表达逐渐增强,而范围减小。结论Survivin参与小鼠内耳发育,在细胞增殖与分化、器官塑形过程中起一定的作用,为探索毛细胞再生和耳聋防治奠定基础。

    2006年02期 162-163页 [查看摘要][在线阅读][下载 226K]
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  • 呋喃唑酮促睾丸细胞凋亡作用

    张洪雁;贺英勤;刘素文;董春娥;曲立科;李继峰;门晓文;

    目的探讨呋喃唑酮(NFZ)诱导大鼠睾丸细胞凋亡的作用,为指导临床药物及禽畜药物的使用提供一定的理论依据。方法采用免疫组化、细胞培养、亚细胞器分离、无细胞体系及免疫沉淀技术,观察睾丸细胞在NFZ作用下形态变化;检查睾丸细胞及其无细胞系统在NFZ作用后的DNA梯状电泳图谱以及与凋亡相关的Bcl-2、caspase-3等因子表达。结果睾丸细胞在NFZ作用下,形态变化具有明显的凋亡特征。DNA电泳出现梯状电泳带,即DNA片段化。分析与凋亡相关的因子表达,均符合细胞程序死亡的规律。结论呋喃唑酮可促进精子细胞凋亡。

    2006年02期 164-168页 [查看摘要][在线阅读][下载 831K]
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  • LHRH-PE40与宫颈癌组织结合特性的研究

    向梅;向钧;马燕;马晓艳;朱平;王占东;

    目的观察LHRH-PE40对各种病理型宫颈癌组织的结合能力,为其临床应用提供理论依据。方法采用免疫荧光法检测LHRH-PE40与正常宫颈组织及宫颈癌组织的结合能力。结果宫颈结缔组织、鳞状上皮的荧光结合率为0%。宫颈癌组织荧光结合率为74%,弱阳性及阴性表达病例中,高分化鳞状细胞癌占67%,中低分化鳞状细胞癌占15%,两者差异有显著意义(P<0.05)。中强阳性表达病例中,高分化鳞状细胞癌仅占37%,中低分化鳞状细胞癌占86%,两者差异有显著意义(P<0.05)。5例强阳性表达病例均为高分化腺癌。结论高分化鳞状细胞癌与LHRH-PE40结合能力最弱,子宫颈腺癌与LHRH-PE40结合能力最强。

    2006年02期 169-170页 [查看摘要][在线阅读][下载 237K]
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  • 乙型肝炎疫苗-卡介苗联合疫苗细胞免疫的研究

    金立杰;赵小琳;方艳秋;杨丽华;王志;

    目的评价乙型肝炎疫苗-卡介苗联合疫苗对小鼠细胞免疫的影响。方法采用BALB/c小鼠,试验组分为联合疫苗组、卡介苗组、乙肝疫苗组,对照组分为空白组和保护剂组,各组小鼠分别于接种后1个月及2个月,取脾进行淋巴细胞转化试验以及细胞因子和T淋巴细胞表面标记检测。结果联合疫苗组淋巴细胞转化刺激指数、IL-2含量均明显高于卡介苗组和乙肝疫苗组;CD4+/CD8+值高于单价乙肝疫苗组,而与卡介苗组差异无显著意义。结论乙型肝炎疫苗-卡介苗联合疫苗能有效地诱导细胞免疫。

    2006年02期 171-173页 [查看摘要][在线阅读][下载 104K]
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  • 重组MVA病毒载体疫苗的冻干保护剂研究

    张一折;姜春来;王忠诚;于湘晖;吴永革;刘成山;孔维;

    目的研制重组MVA病毒载体疫苗的耐热冻干保护剂。方法在重组MVA病毒载体疫苗中加入不同配比的保护剂,在适宜的条件下制备成冻干剂型。根据冻后外观、病毒滴度和热稳定性等结果,筛选出保护剂的最适配方。结果以海藻糖、甘露醇、右旋糖苷和肌醇等按比例、配伍而成的保护剂,对MVA病毒载体疫苗显示了较好的保护性,疫苗冻干前后病毒滴度下降在0.12LgPFU/ml以内,37℃放置1周,滴度下降0.35LgPFU/ml左右;放置3周,滴度下降不超过1LgPFU/ml。而无保护剂的液体疫苗对照于37℃放置1周,滴度下降近1LgPFU/ml;放置3周,滴度下降3.5LgPFU/ml左右。结论以海藻糖、甘露醇、右旋糖苷和肌醇等配伍而成的保护剂是一种良好的疫苗保护剂。

    2006年02期 174-176页 [查看摘要][在线阅读][下载 91K]
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  • 不同方法制备Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗的质量比较

    王辉;过琴媛;张月兰;张颖;白江;赵兰英;钟书声;张晋;田博;罗书荣;

    目的比较不同纯化方法制备Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗的质量。方法用柱层析一步法、两步法、区带离心法纯化工艺制备Vero细胞乙脑纯化疫苗各3批,比较杂蛋白去除率、抗原比活性、纯度、HCP残留。结果3组杂蛋白去除率分别为97.0%、99.1%和99.6;抗原比活性分别为0.35、0.59和0.68EU/μg;抗原回收率分别为82.3%、49.6%和30.3%;HCP残留量分别为10.40、0.70和0.13μg/ml,纯化液中每微克蛋白中残余HCP(ng)的含量平均为139.3、32.9和9.3ng。结论蔗糖梯度离心法制备的Vero细胞乙型脑炎疫苗抗原活性、纯度、杂蛋白去除效果、HCP残余量均优于两种柱层析法。两步柱层析法优于一步法。

    2006年02期 177-179页 [查看摘要][在线阅读][下载 142K]
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  • 近年来流感病毒抗原性变异的比较

    范宇红;戚凤春;惠琦;毕业;于淑燕;单彭;王慧明;

    目的了解流感病毒既往流行株与当前流行株抗原性变异的幅度。方法用2000年以来流行的与当前流行的A1、A3、B三株流感病毒株的标准抗原与免疫血清作交叉血凝抑制试验,根据所得数据计算抗原比,进行抗原性变异幅度分析。结果A1型2个流感病毒毒株间的抗原比为2.6;A3型4个流感病毒毒株间的抗原比为1.2~13.2;B型5个流感病毒毒株间的抗原比为1.8~22.6。结论自2000年以来,A1、A3型流感病毒抗原性变异幅度较小,B型流感病毒抗原性变异幅度较大。

    2006年02期 180-181+190页 [查看摘要][在线阅读][下载 90K]
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  • 抗DNA单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其抗体的鉴定

    杨婉娟;高凯;饶春明;叶波平;王军志;

    目的制备抗DNA单克隆抗体,用以建立特异、灵敏、简便的外源性DNA残留量测定方法。方法将小牛胸腺DNA与阳离子化的牛血清白蛋白通过Mannich反应连接成为完全抗原,免疫BALB/c小鼠得到的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得稳定分泌抗DNA单抗的杂交瘤细胞株,对抗体进行纯化、浓缩及鉴定。结果得到3株可稳定分泌抗DNA单抗的杂交瘤细胞株,单抗的ELISA间接效价分别为1∶4×103、1∶8×104和1∶1×103;亚型分别为IgM/κ、IgM/λ和IgM/κ;亲和力常数分别为3.96×108、4.04×109和1.26×108L/mol;3株细胞分泌的单抗与ctDNA、DH5αDNA、GS115DNA和H.S.DNA均有较高的结合能力,而对RNA、BSA和酪蛋白结合较弱或不能结合;3株细胞分泌的单抗识别3个不同的抗原表位;可检出4ng/ml以上的DNA。结论成功制备了3株细胞分泌的抗DNA单抗,为外源性DNA残留量免疫测定方法的深入研究奠定了基础。

    2006年02期 182-186页 [查看摘要][在线阅读][下载 226K]
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  • 抗SARS冠状病毒单克隆抗体的制备和鉴定

    张囡;王志友;张爱华;金玉玲;闭兰;赵亚杰;罗先凤;

    目的建立能稳定分泌抗SARS-CoV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法用SARS-CoV灭活全病毒液免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术建立6株稳定分泌抗SARS-CoV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并进行全面鉴定。结果免疫双扩散证实1C6细胞株分泌的单抗为IgG2a亚类,其余5株细胞分泌的单抗为IgG1亚类;腹水效价均达到10-6以上;6株细胞分泌的单抗均不与麻疹病毒等其它5种呼吸道病毒发生交叉反应;Westernblot证实6株细胞分泌的单抗均识别相对分子质量约150000的S蛋白及其相对分子质量为120000的裂解片段;相加指数证实6株细胞分泌的单抗识别相关的抗原表位;用硫氰酸铵洗脱法比较了6株细胞分泌的单抗的相对亲和力大小,依次为1A4>4F6>1C6>1B10>2H2>1F3;中和试验证实单抗4F6和1F3具有中和活性,中和效价均为1∶10;杂交瘤细胞株连续培养3个月以上及冻存半年后复苏,细胞生长良好,效价稳定。结论已获得抗SARS冠状病毒的单克隆抗体,为SARS的早期诊断及进一步研究奠定了基础。

    2006年02期 187-190页 [查看摘要][在线阅读][下载 243K]
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  • 抗咽喉炎常见菌IgY抗体的制备及其特性的研究

    张玲;董涛;宋立兵;

    目的制备抗β-溶血性链球菌、G簇溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌3种咽喉炎常见菌IgY抗体,并分析其特性。方法采用超声波破碎法将3种咽喉菌制备成可溶性抗原液,免疫产蛋母鸡,从鸡蛋黄中提取IgY抗体,应用免疫电泳、ELISA、SDS-PAGE检测抗3种咽喉菌IgY抗体的特性及热稳定性。结果抗原免疫母鸡10d后,鸡蛋黄中即有抗3种咽喉菌的IgY抗体产生,60d时抗体滴度高达1∶102400,IgY抗体滴度在室温可保持5~6个月不变。结论制备的抗3种咽喉菌IgY抗体滴度高,特异性强,稳定性好。

    2006年02期 191-193页 [查看摘要][在线阅读][下载 258K]
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  • 人LNα4链LG3-4组件的优化表达及活性检测

    戴旭芳;连继勤;张玉静;胡仲明;

    目的优化人层粘连蛋白α4链LG3-4组件基因在大肠杆菌中的表达条件。方法分别从诱导温度、诱导时间、IPTG浓度等方面进行优化。表达产物经Ni-NTA介质纯化,MTT法检测目的蛋白对人肺癌A549细胞粘附及增殖功能的影响。结果在20℃下,1mmol/L的IPTG诱导6h,目的蛋白呈最佳可溶性表达;在37℃下,2mmol/L的IPTG诱导4h,呈最佳包涵体形式表达。纯化后目的蛋白纯度达96%,且具有良好的增强人肺癌A549细胞伸展和粘附的功能。结论已确立了hLNα4LG3-4重组蛋白在大肠杆菌中的最佳表达条件。

    2006年02期 194-197页 [查看摘要][在线阅读][下载 387K]
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  • 统计学方法在麻疹疫苗生产工艺改进中的应用

    刘松友;付永其;王长太;王淑珍;王子柱;梁荣根;

    目的以适用生物统计学方法指导麻疹疫苗生产工艺改进,提高疫苗质量。方法总结疫苗病毒滴度分布规律,确定疫苗标准参考品使用参数及改进麻疹疫苗生产工艺设计。细胞维持液中加入蔗糖明胶病毒稳定剂,提高疫苗病毒原液滴度,改进冻干保护剂配方,减少疫苗冻干过程滴度损失,过滤并稀释高滴度病毒原液,提高疫苗产量。结果同一条件下生产疫苗病毒滴度为对数正态分布数据。病毒培养阶段加入稳定剂可提高麻疹疫苗原液病毒滴度,山梨醇可明显降低疫苗冻干过程滴度损失,并有效降低疫苗水分,疫苗的热稳定性未受原液稀释加工影响。结论疫苗病毒滴度属于对数正态分布资料,据此设计麻疹疫苗生产工艺改进实验,可以优化生产条件,并为其它疫苗生产提供参考。

    2006年02期 198-200页 [查看摘要][在线阅读][下载 75K]
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  • 虾类食品过敏性疾病诊断方法的建立

    李振兴;林洪;曹立民;王静雪;

    2006年02期 200页 [查看摘要][在线阅读][下载 22K]
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  • 金银花水溶性抗菌物质的提取及其抑菌效果研究

    赵良忠;蒋贤育;段林东;王放银;

    目的确定从金银花中提取天然抗菌物质的最佳工艺条件及抗菌效果。方法以绿原酸为评价标准,通过正交试验法确定最佳工艺条件,用滤纸片法检测提取物的抑菌效果。结果最佳工艺条件是物料比1∶10,浸提温度80℃,浸提时间40min。提取物绿原酸含量为0.2642mg/ml,用7520分光光度计测得金银花水提取物的最高吸收峰出现在327nm。金银花提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌、青霉、黄曲霉、黑曲霉的抑菌浓度分别为30%、60%、50%、80%、80%和60%(相当于绿原酸含量为7.926、15.852、13.210、21.136、21.136和15.852mg/100ml)。加热处理可强化金银花提取物的抑菌效果。结论已确定了最佳工艺条件,所提金银花提取物抑菌效果显著。

    2006年02期 201-203页 [查看摘要][在线阅读][下载 82K]
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  • 国产冻干水痘减毒活疫苗免疫持久性达国际领先水平

    王立成;

    2006年02期 203页 [查看摘要][在线阅读][下载 23K]
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  • 重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)冻干参考品的制备

    赵小琳;李德娟;陈万革;罗旋;蔡岩;金立杰;

    目的制备冻干参考品,用于重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)的效力检测。方法配制含氢氧化铝的保护剂,加入抗原至规定浓度,使各组分含量分别为明胶1%、蔗糖5%、氢氧化铝0.9mg/ml、抗原10μg/ml,分装冻干,制成冻干参考品,并对其理化指标进行全面检定。采用小鼠效力试验方法检测冻干对疫苗效力的影响,并比较冻干参考品与同批液体疫苗的稳定性。结果冻干参考品各项指标均符合规程要求,冻干前后疫苗效力无明显变化,冻干参考品与同批液体疫苗效力差异无显著意义,37℃热加速8周,冻干参考品效力未见显著下降,液体疫苗效力则明显下降。结论冻干对疫苗效力无影响,冻干参考品热稳定性良好。

    2006年02期 204-205页 [查看摘要][在线阅读][下载 52K]
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  • 无佐剂狂犬病疫苗的反应及免疫效果观察

    查力;高军;侯剑英;白珠穆;袁德明;杨俊伟;李旭;李庆岸;陈焕玉;吴小红;唐建蓉;李艳萍;李荣成;

    目的观察无佐剂狂犬病疫苗的反应及免疫效果。方法以巴斯德PV2061为生产毒株,以143代以内的Ve-ro细胞为培养基质,采用生物反应罐灌流方式培养,连续收获病毒液,经浓缩、灭活、纯化,制成无佐剂Vero细胞狂犬病纯化疫苗。作为受试疫苗,按暴露后程序接种,无佐剂疫苗502人(A组),进口疫苗100人(对照组B组),观察反应和免疫效果。结果所有接种对象均未出现局部和全身强副反应。首剂免疫后14d,A组与B组抗体阳转率均达100%,中和抗体几何平均滴度为5.2IU/ml和5.6IU/ml。第45天A组抗体几何平均滴度上升到9.5IU/ml,B组9.8IU/ml。结论无佐剂狂犬病疫苗具有良好的安全性和免疫原性。

    2006年02期 206-207页 [查看摘要][在线阅读][下载 62K]
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  • 人血浆蛋白质组研究方法及其应用

    马秋平;白坚石;

    人血浆蛋白质组(Proteome)是人类血浆中可以检测到的所有蛋白质,承担着维持渗透压、运输物质、免疫防御等多种生理功能。本文对人血浆蛋白质组的性质、功能和研究方法以及应用情况进行了综述。

    2006年02期 208-211页 [查看摘要][在线阅读][下载 137K]
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  • 淋巴组织肿瘤中p53、p73基因的研究进展

    刘建惠;姜玉珍;徐文;

    淋巴组织肿瘤是血液系统疾病中的一大类,主要包括急性淋巴细胞白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤,其发病机理不是很明确。p53基因突变在淋巴组织肿瘤的发生、疾病的进展演变中发挥重要的作用。p73基因在淋巴组织肿瘤中多呈低表达或阴性表达,其失活的主要机制是基因的高甲基化,而不是突变。

    2006年02期 212-214页 [查看摘要][在线阅读][下载 110K]
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  • 鸡转移因子的研制及其临床应用

    张文生;李富桂;

    鸡转移因子在禽类疾病中的预防和治疗方面均取得了较好的效果。本文作者就近10多年来,国内鸡转移因子的制备方法、理化及生物学特性以及在禽类疾病的预防和治疗方面的研究成果作了全面的介绍。

    2006年02期 215-217页 [查看摘要][在线阅读][下载 96K]
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