中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

  • 抗转铁蛋白受体鼠源性单链抗体基因的构建、表达及初步鉴定

    张爱华,彭夫望,闭兰,张智,王志友,史良如

    目的 利用基因工程技术将鼠源性单克隆抗体WuT9改造成单链抗体。方法 从分泌抗CD71单克隆抗体的杂交瘤细胞WuT9中提取总RNA ,采用OligodT为逆转录引物 ,逆转录合成cDNA第一链 ,然后分别采用VL 和VH 框架区的PCR引物 ,扩增VH(重链可变区 )和VL(轻链可变区 )DNA片段 ,利用事先合成的存在于VL 下游引物和VH 上游引物的部分人工连接子重叠互补序列 ,将VL 和VH 的PCR回收产物进行部分重叠PCR(SOE) ,形成单链抗体基因。最后将此基因重组进表达载体pBAD gIII C中 ,经L arabinose(左旋阿拉伯糖 )诱导表达并初步鉴定。结果 构建出 70 0bp左右的单链基因 ,并获得阳性重组表达载体克隆 ,表达产物为相对分子质量 2 70 0 0左右的蛋白分子。结论 经因特网查询表明 ,单链抗体基因重链部分属于小鼠H链可变区ⅠA亚组 ;轻链属于小鼠κ轻链可变区Ⅱ亚组 ,此单链抗体基因的表达产物具有一定的特异结合活性。本研究为抗CD71单链抗体的临床应用打下了基础。

    2005年02期 81-84页 [查看摘要][在线阅读][下载 86k]
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  • 人破骨细胞形成抑制因子活性域片段在大肠杆菌中的融合表达

    张兴群,王梁华,焦炳华,袁勤生

    目的 在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子 (Osteoclastogenesisinhibitoryfactor,OCIF)活性域片段。方法 从中国人正常肝细胞系LO2中提取总RNA ,利用RT PCR得到OCIF活性域编码基因cDNA ,将其与pMD18 T连接 ,转化大肠杆菌K80 2 ,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18 OCIFAD ,经双酶切得到OCIF活性域编码片段 ,将其插入pMAL c2载体中 ,转化大肠杆菌TB1。筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达。结果 所获得的OCIF活性结构域编码序列片段经测序与GenBank报道的完全一致。所表达的产物经SDS PAGE分析可见在相对分子质量 6 0 0 0 0处出现一条特殊条带 ,与预期的相对分子质量一致。Westernblot证实了表达产物能与抗人OCIF单抗发生特异性反应。结论 已成功地获得了人OCIF活性结构域编码片段的克隆 ,并实现了其在大肠杆菌中的融合表达。表达产物对体外培养破骨细胞的骨吸收功能有明显的抑制作用。

    2005年02期 85-88页 [查看摘要][在线阅读][下载 60k]
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  • 幽门螺杆菌粘附素基因hpaA的克隆、表达及鉴定

    郑丽舒,衣作安,李武平,张成海,王刚,侯云德

    目的 克隆幽门螺杆菌粘附素基因hpaA ,构建其原核表达系统并鉴定融合蛋白免疫原性。方法 采用PCR技术从幽门螺杆菌总DNA中扩增hpaA基因 ,T -A克隆后测定核苷酸序列 ,构建pET30a的HpaA表达载体 ,在E .coliBL2 1DE3宿主菌中用IPTG诱导表达 ,Ni2 + 柱纯化后经Westernblot鉴定其免疫原性。结果 所克隆的hpaA基因与报道的相应核苷酸序列同源性为 94 . 8%~ 97. 3% ,氨基酸序列同源性为 94 . 6 %~ 97 .7% ,在 134~ 139位存在一段KRTIQK结构 ,HpaA融合蛋白在pET30a载体中可高效表达 ,经纯化后可获得高纯度的重组蛋白。结论 成功构建HpaA原核表达系统 ,所表达的融合蛋白具有较好的免疫原性 ,可作为Hp疫苗的候选抗原。

    2005年02期 89-92页 [查看摘要][在线阅读][下载 66k]
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  • 宫颈癌CTL表位疫苗TATHPV蛋白的构建与表达

    张晓姝,万敏,张培因,王华,王燕媚,王丽颖,于永利

    目的 构建宫颈癌的CTL表位疫苗 ,并在大肠杆菌中表达。方法 应用PCR的方法合成编码CTL表位疫苗基因序列 ,将其亚克隆入pET2 8a- TAT表达载体中 ,并在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达重组蛋白 ,用Westernblot对重组蛋白进行鉴定。结果 通过 4轮PCR获得疫苗的基因片段 ,构建的重组表达载体pET2 8a -TAT -HPV在大肠杆菌中得到高效表达 ,Westernblot检测显示特异性条带。结论 构建的宫颈癌CTL表位疫苗在大肠杆菌中得到了表达 ,为该疫苗的功能性研究奠定了基础。

    2005年02期 93-96页 [查看摘要][在线阅读][下载 73k]
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  • 激活素受体相互作用蛋白在海马神经细胞中的表达及其作用

    台桂香,徐桂月,张鹏宇,劳凤学,王奭骥,崔雪玲,杨煜,土田邦博,柳忠辉

    目的 在发现和克隆新的激活素受体相互作用蛋白 3(ActRIP3)基因的基础上 ,探讨ActRIP3在海马神经细胞介导激活素信号传导的作用。方法 利用GST- ActRIP3融合蛋白免疫家兔制备抗ActRIP3抗体 ,采用RT -PCR及免疫组化染色分析ActRIP3在脑组织中的表达与分布 ,采用pcDNA-ActRIP3与CAGA -lux质粒共转染海马神经细胞 ,分析信号传导作用。结果RT- PCR及免疫组化染色显示ActRIP3在海马神经细胞中高表达 ,构建的pcDNA- ActRIP3表达载体在体外培养海马神经细胞中可有效表达ActRIP3蛋白 ,过表达ActRIP3可促进激活素诱导的海马神经细胞特异信号传导。结论 ActRIP3具有促进激活素信号传导作用 ,是介导激活素作用于海马神经细胞的关键性信号传导蛋白。

    2005年02期 97-100页 [查看摘要][在线阅读][下载 61k]
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  • 结核杆菌Ag85A蛋白与日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶的融合表达与纯化

    杨爱琼,谢勇恩

    目的 对结核杆菌Ag85A抗原基因进行克隆、表达与纯化 ,为研制新型结核杆菌血清学诊断试剂奠定基础。方法 以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板 ,经PCR扩增Ag85A抗原基因成熟肽编码区 ,定向克隆入原核表达载体pGEX1 λT中日本血吸虫谷胱苷肽硫转移酶 (GST)编码区下游构建重组质粒 ,经DNA测序鉴定后 ,转化大肠杆菌JM10 9株 ,IPTG诱导表达 ,采用GST蛋白纯化试剂盒进行重组融合蛋白纯化 ,SDS -PAGE和Westernblot鉴定重组表达产物。结果 PCR扩增获得了约 90 0bp的目的基因片断 ,定向克隆入原核表达载体pGEX1 -λT后 ,对重组质粒进行DNA测序发现 ,插入片段与GenBank中结核杆菌Ag85A抗原基因成熟肽编码区同源性为 99 .8%。重组质粒转化大肠杆菌后 ,经IPTG诱导表达 ,纯化的融合蛋白相对分子质量为 5 80 0 0 ,Westernblot检测该融合蛋白能与兔抗结核杆菌多价抗血清发生反应。结论 本研究为研制结核杆菌血清学检测试剂盒及相关分子免疫学研究奠定了基础。

    2005年02期 101-103页 [查看摘要][在线阅读][下载 44k]
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  • 重组人成骨蛋白-1基因在大肠杆菌中的克隆和非诱导表达

    潘红春,刘红,王伯初,杨红涛,陈喜文,周玲

    目的 研究重组人成骨蛋白 -1(rhOP -1)在大肠杆菌中的克隆和非诱导表达。方法 利用RT -PCR技术 ,从正常胎儿肾组织总cDNA中扩增得到rhOP- 1成熟肽基因片段 ,再将rhOP- 1成熟肽基因克隆于原核融合表达载体pGEX- 4T- 2中 ,构建表达质粒pCCBC- OP- 1,并转化到大肠杆菌JM10 9(DE3)中 ,在发酵过程中不添加任何诱导剂。表达产物经SDS -PAGE分析。结果 扩增的目的基因序列与文献报道一致。表达的目的蛋白相对分子质量为 14 0 0 0 ,表达量达到菌体蛋白的 4 0 %。结论 克隆了人OP -1成熟肽基因 ,并实现了rhOP- 1的非诱导高效表达。

    2005年02期 104-106页 [查看摘要][在线阅读][下载 56k]
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  • 优化密码子提高EGF-PE35KDEL表达量

    李树民,李俊植

    目的 提高EGF- PE35KDEL融合蛋白的表达量。方法 设计合成含优化密码子的EGF序列 ,定向克隆于pET2- 8a- EGF PE35KDEL的NcoⅠ和NdeⅠ位点 ,构建表达质粒pET2 8a pBEGF PE35KDEL。将两种表达质粒转化至BL2 1中 ,经IPTG诱导 ,比较表达量。结果 优化密码子的EGF- PE35KDEL表达量要高于未优化的EGF -PE35KDEL。结论 优化密码子能促进EGF -PE35KDEL的表达。

    2005年02期 107-108+110页 [查看摘要][在线阅读][下载 42k]
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  • 人食管癌及宫颈癌组织中HSP70基因的表达

    赵桢,王晓涛,陈兰英,陈建南

    目的 了解HSP70基因在不同癌组织中的表达情况。方法 采用人的HSP70基因探针P1 7与从人食管癌及宫颈癌组织中提取的RNA进行Northernblot。结果 食管癌和宫颈癌组织中出现的杂交信号均比正常组织强。结论 HSP70基因在癌组织中有高表达。HSP70可能在癌变过程中起着重要的作用。

    2005年02期 109-110页 [查看摘要][在线阅读][下载 23k]
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  • 胸腺素α1串联体的表达、纯化及生物学活性检测

    宫照龙,徐义辉,展瑞,高昱,蒋作君

    目的 表达胸腺素α1 (Thymosinalpha1,Tα1 )三串体 ,并进行纯化及生物学活性鉴定。方法 使用大肠杆菌偏爱密码子 ,人工合成Tα1 三串体 (Tα1 ③ )基因 ,在表达载体pET -2 2b(+)中克隆 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,经DEAE SepharoseFF阴离子柱纯化Tα1 ③蛋白 ,采用Westernblot鉴定表达产物 ,MTT法检测其生物学活性。结果 获得了纯化的Tα1 ③蛋白 ,相对分子质量约为 10 0 0 0 ,并具有Tα1 ③的生物学活性。结论 利用基因串联表达小分子多肽是一种可行的方法。

    2005年02期 111-113+122页 [查看摘要][在线阅读][下载 54k]
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  • 人TRAIL细胞外段基因在大肠杆菌中的表达及其包涵体的复性

    田生和,全家妩

    目的 在大肠杆菌中表达人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体细胞外段 (sTRAIL)基因 ,并研究其包涵体的复性。方法 应用RT- PCR法从正常人外周血单核细胞中获得sTRAIL的编码基因 ,将其克隆到原核表达载体pBV2 2 0 ,于大肠杆菌DH5α中通过温控诱导表达 ;将包涵体进行变性和复性处理后 ,采用离子交换层析纯化表达产物 ,并经Dotblot及MTT试验鉴定。结果 通过温度诱导 ,目的基因主要以包涵体形式高效表达 ,包涵体蛋白经梯度透析法复性可获得具有抗肿瘤活性的重组人sTRAIL。结论 已获得大量纯化重组人sTRAIL ,为开发新型抗肿瘤制剂奠定基础。

    2005年02期 114-116页 [查看摘要][在线阅读][下载 43k]
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  • 重组人乳铁蛋白基因克隆及表达

    张述,王革非,王贞慧,张裕平,吴海祥,熊春发,余永恒

    目的 构建重组人乳铁蛋白 (HLF)的毕赤酵母分泌表达菌株 ,并对表达产物进行评价。方法 由外周血白细胞总RNA经RT- PCR克隆获得HLF基因结构cDNA ,测序后克隆入酵母表达载体获得质粒pPIC9K- HLF ,线性化后电转化入毕赤酵母 ,经G4 -18 YPD筛选多拷贝后进行甲醇诱导表达。结果 获得基因与GenBank中的人HLF0 1基因基本相符。 2株多拷贝菌株诱导表达产物均能与人HLF抗体反应 ,具有抑制大肠杆菌生长的作用。结论 获得了能分泌有活性HLF的重组人乳铁蛋白 (HLF)的毕赤酵母分泌表达菌株。

    2005年02期 117-119页 [查看摘要][在线阅读][下载 40k]
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  • Sabin1型脊髓灰质炎病毒在人二倍体细胞适应过程中5′端非编码区序列变异与滴度的关系

    李华,胡凝珠,瞿素,刘国栋,谢忠平,姬秋彦,胡云章

    目的 探索Sabin 1型脊髓灰质炎病毒在人胚肺二倍体细胞适应过程中 5′端非编码区序列变异及其与病毒感染性滴度的关系。方法 将Sabin 1型脊髓灰质炎病毒疫苗株在人胚肺二倍体细胞KMB17中连续传 11代 ,检测连续传代后感染性滴度 ,并检测 11个代次 5′端非编码区序列。结果 随着传代次数的增加 ,感染性滴度逐渐升高 ,在第 7代达到最高 ,为8 12 5LgTCID50 ml。在传代过程中 ,从第 3代起 5′端非编码区 74 2个核苷酸只出现 1个位点发生变异 ,第 6 39位由A变为G。结论 Sabin 1型脊髓灰质炎病毒经KMB17细胞传 11代 ,已适应KMB17细胞。Poliovirus 5′端非编码区与毒力直接相关的第4 80位核苷酸未发生回复突变。

    2005年02期 120-122页 [查看摘要][在线阅读][下载 31k]
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  • 密码替换后人促红素基因在大肠杆菌中的高效表达及工程菌的发酵

    葛永红,严君喜,陈智勇,谢觉林,张雪艳

    目的 研究人工合成的hEPO基因在大肠杆菌中高效表达及工程菌高密度发酵条件。方法 将hEPO基因中大部分大肠杆菌稀有密码子替换成使用频率较高的密码子 ,人工合成hEPO全基因 ,然后将其插入表达载体PBV2 2 0中 ,转化大肠杆菌DH5α ,挑选构建正确的PBV2 2 0 hEPO DH5α菌落 ,经升温诱导 ,SDS- PAGE和Westernblot鉴定表达产物 ;观察改变培养基、培养时间、pH及溶氧量等条件对表达产物的影响。结果 经酶切分析 ,DNA测序鉴定 ,人工合成的hEPO基因已正确构建到表达载体中。通过高密度发酵培养 ,最终菌体密度达A6 0 0 =30 (相当于菌体 35g L) ,hEPO表达量达 30 %左右。结论 人工合成的hEPO基因在大肠杆菌中得到高效表达 ,并确定了该工程菌高密度发酵的适宜条件。

    2005年02期 123-125页 [查看摘要][在线阅读][下载 50k]
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  • 治疗性HIV-1重组DNA疫苗的构建与免疫效果评价

    宋英今,金宁一,张立树,李子建,金洪涛,郎守民

    目的 构建编码HIV- 1多表位抗原基因 (MEG)与p2 4基因嵌合的核酸疫苗 ,并评价其免疫效果。方法 将编码HIV -1多表位抗原基因 (MEG)与p2 4基因插入到真核表达载体pVAXI中 ,构建HIV- 1治疗性重组核酸疫苗质粒。通过ELISA试剂盒检测免疫恒河猴血清中HIV -1特异性抗体 ,并通过淋巴细胞转化实验检测HIV -1特异性T淋巴细胞增殖反应。结果 构建的重组核酸疫苗质粒pVAXI -MEGp2 4免疫恒河猴后 ,能有效地刺激产生T淋巴细胞特异性增殖反应 ,并诱导产生抗HIV -1特异性抗体。结论 所构建的重组核酸疫苗质粒能诱导机体产生免疫反应。

    2005年02期 126-128页 [查看摘要][在线阅读][下载 42k]
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  • 家兔肋软骨生长板软骨细胞增殖特点的研究

    王欣,赵轶卓,郭丽,颜炜群

    目的 研究家兔肋软骨生长板软骨细胞增殖的特点 ,为软骨性疾病提供治疗措施。方法 取家兔肋软骨 ,分别切取静止期和肥大期软骨组织 ,经消化制成细胞悬液 ,采用流式细胞仪检测软骨细胞的增殖特点。结果 静止带软骨细胞中G0 G1期细胞占比例最大 ,而肥大带软骨细胞中S期细胞数明显高于静止带软骨细胞 ,且不同的区带内的软骨细胞都有凋亡的存在。结论 此结果有助于软骨疾病治疗的研究。

    2005年02期 129-151页 [查看摘要][在线阅读][下载 18k]
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  • 冻干风疹减毒活疫苗免疫动力学模型的建立和抗体持久性的预测

    罗凤基,董春明

    目的 建立国产冻干风疹减毒活疫苗的免疫动力学模型 ,并对其免疫持久性进行预测。方法 采用队列研究的方法 ,对国产冻干风疹减毒活疫苗接种者的血凝抑制抗体 (HI)滴度进行 5年的追踪观察 ,利用观察数据建立免疫动力学模型 ,并利用该模型对其免疫持久性进行预测。结果 接种国产冻干风疹减毒活疫苗 5年后 ,HI抗体的几何平均滴度 (GMT)由接种后第 1月的 15 7 6下降到 31 2。按照模型预测 ,到初免后第 6年时 ,其GMT为 12 3,已接近 1∶8临界水平。结论 国产冻干风疹疫苗抗体的保护性水平理论上可维持 6年 ,加强免疫应在初免后第 6年进行。这个预测结果与国家所建议的 6~ 8月龄时初免 ,到学龄前进行加强的免疫程序相一致。

    2005年02期 130-131页 [查看摘要][在线阅读][下载 18k]
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  • 表达人肝细胞生长因子突变体——NK4工程菌的发酵工艺研究

    常冰梅,王勇,解军,张悦红,程牛亮,牛勃,胡晓年,向前

    目的 建立重组NK4融合基因工程菌的发酵工艺。方法 采用锥形瓶、发酵罐发酵 ,对工程菌生长和表达条件如pH、诱导时间及诱导剂浓度等方面进行优化。确定其最佳诱导表达条件 ,在 15L自控发酵罐中进行分批补料培养。结果 在 15L发酵罐进行工程菌发酵 ,菌体收获量湿重可达 2 4 .6g L± 0 .98g L ,目的蛋白的表达量保持在菌体总蛋白的 5 0 %左右 ,发酵时间为 11h。结论 建立了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺。

    2005年02期 132-134页 [查看摘要][在线阅读][下载 40k]
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  • MUC1核心肽多克隆抗体的制备及鉴定

    唐艳,李慧,张培因,卫红飞,王莉,李大鹏,于永利,王丽颖

    目的 制备MUC1核心肽多克隆抗体 ,用于靶向MUC1肿瘤治疗的研究。方法 以 8R -MUC1核心肽 6重复序列重组蛋白 (8R MUCPT)为抗原免疫家兔 ,以ELISA法确定抗MUC1多克隆抗体效价 ,以Westernblot和ELISA阻断试验鉴定抗体特异性。结果 MUC1核心肽多克隆抗体效价为 1∶2 5 6 0 0 0 ,能与MUC1核心肽特异性结合。结论 利用原核表达的 8R -MUCPT蛋白 ,可有效地诱导免疫动物产生MUC1核心肽特异性抗体 ,为MUC1核心肽靶向肿瘤特异性免疫研究提供了有力的实验材料。

    2005年02期 135-137页 [查看摘要][在线阅读][下载 41k]
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  • 聚乙二醇化重组人生长激素的性质及活性

    魏练平,王荣海,戎隆富,宋礼华

    目的 研究聚乙二醇化重组人生长激素的性质及活性。方法 通过分子筛高效液相 (SizeexclusionHPLC)、毛细管等电聚焦 (CIEF)、圆二色谱 (CD)以及荧光光谱等方法检测单聚PEG- GH的纯度、等电点、二级结构以及分子构象 ;采用妊娠兔肝细胞放射受体分析法 (RRA)检测单聚PEG GH的体外受体亲和力 ,采用未成年去垂体大鼠体重增加法检测体内生物活性。结果 分子筛高效液相图谱上仅出现一个峰 ,表明样品纯度很高 ,等电点范围为 5 .1~ 5 .2 ,与未修饰的rhGH的等电点相一致 ;CD谱与荧光光谱均表明单个mPEG ALD的修饰对rhGH的二级结构以及分子构象没有明显影响 ;与未修饰的rhGH相比 ,单聚PEG GH体外受体亲和力明显降低 ;但体内作用时间更长 ,且更加有效。结论 此结果为进一步研究和开发长效重组人生长激素提供了理论依据。

    2005年02期 138-140页 [查看摘要][在线阅读][下载 33k]
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  • 干扰素脂质体的制备及理化性质分析

    王玉梅,郭桥,李秀芝,迟春萍,王志武

    目的 制备干扰素α2b脂质体 ,分析其理化性质。方法 采用旋转逆相蒸发法制备干扰素α2b脂质体 ,通过正交试验进行制备条件的优选 ,电镜观察其粒径大小 ,酶联免疫分析法测定包封率 ,并观察脂质体的稳定性。结果 干扰素α2b脂质体平均粒径为 98. 6nm ,最高包封率为 78 .2 3% ,脂质体存放于 4℃及 - 2 0℃稳定性良好。结论 本试验方法制备的脂质体包封率高 ,理化性质较稳定。

    2005年02期 141-142页 [查看摘要][在线阅读][下载 20k]
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  • HBV壳聚糖微球疫苗鼻腔免疫的初步研究

    胡云章,李菁,刘国栋,胡凝珠

    目的 研究HBV表面抗原亚单位微球疫苗及DNA微球疫苗鼻腔免疫的效果 ,为新型鼻腔疫苗的研制提供实验基础。方法 选取HBV表面抗原亚单位疫苗及HBVDNA疫苗作为模型 ,以壳聚糖作为载体 ,通过沉淀 凝聚法制备壳聚糖微球疫苗 ,分别通过鼻腔、腹腔及肌肉免疫小鼠 ,在不同时间点收集小鼠血清 ,用ELISA检测血清中抗HBVIgG ,分析不同免疫途径的免疫效果。结果 在HBV亚单位微球疫苗免疫组中 ,腹腔与鼻腔免疫效果差异无显著意义 ;而在HBVDNA疫苗免疫组中 ,肌肉免疫后 12周IgG达到峰值 ,随后开始出现下降趋势 ;而微球疫苗则在 16周才达峰值 ,且鼻腔免疫组要高于肌肉免疫组。结论 鼻腔免疫可作为亚单位疫苗及DNA疫苗的免疫途径 ,且相对于DNA疫苗而言 ,壳聚糖微球具有保护作用及缓释作用。

    2005年02期 143-145页 [查看摘要][在线阅读][下载 38k]
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  • 重组羧肽酶原B的复性及纯化

    张晓彦,袁勤生

    目的 建立重组羧肽酶原B复性方法及活性羧肽酶B的纯化方法。方法 重组大肠杆菌发酵后 ,表达的羧肽酶原B包涵体经洗涤、变性 ,采用凝胶过滤的方法对其进行复性及纯化。所得的复性液经Trypsin酶解后 ,采用DEAE FF阴离子交换层析进行羧肽酶B的分离纯化 ,并采用SDS PAGE检测纯度。结果 经凝胶过滤后得到了复性和纯化的羧肽酶原B包涵体 ,在蛋白终浓度相同的情况下 ,复性效率比稀释复性提高了 5 0 % ,经DEAE离子交换柱一步纯化 ,得到了活性羧肽酶B ,纯度达到 90 %以上。以Hippuryl -L arg为底物测活 ,得到的活性酶的比活为 15 0u mg。结论 所建立复性方法及纯化方法为进一步的研究奠定了基础。

    2005年02期 146-148页 [查看摘要][在线阅读][下载 38k]
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  • 木瓜凝乳蛋白酶的分离纯化及性质研究

    邓静,吴华昌,赵树进

    目的 建立简单有效的木瓜凝乳蛋白酶分离纯化方法 ,并研究其酶学性质。方法 采用离子交换层析直接将木瓜凝乳蛋白酶分离纯化 ,通过温度、葡萄糖、盐酸胍及其他因素研究酶学性质。结果 木瓜凝乳蛋白酶有较高的热稳定性 ,盐酸胍对其有抑制作用 ,葡萄糖对其有激活作用。结论 离子交换层析是简单有效的分离纯化木瓜凝乳蛋白酶的方法 ,木瓜凝乳蛋白酶值得进一步开发利用。

    2005年02期 149-151页 [查看摘要][在线阅读][下载 36k]
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  • 不同培养基对肠毒素大肠杆菌疫苗株产生菌毛的影响

    王令春,郑继平,李淑琴,展德文,方门忠,张兆山

    目的 通过比较不同培养基对疫苗株产生菌毛的影响 ,获得一种有利于细菌生长和菌毛产生 ,而且费用低廉的培养基。方法 通过测定培养物的密度 ,观察疫苗菌株的生长规律 ,用斑点ELISA和全菌ELISA检测菌毛抗原的表达情况。结果 LB培养基既有利于疫苗株的生长 ,又有利于细菌菌毛的表达。结论 LB培养基可以用于疫苗株中试和大规模培养

    2005年02期 152-154页 [查看摘要][在线阅读][下载 42k]
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  • 蛇毒中趋化活性成分的筛选

    李旭,马莉,王晓辉,王福生

    目的 从由蛇毒提取的短肽中筛选趋化活性成分。方法 利用趋化小室和细胞微生理检测仪 ,从国内外 12种蛇毒中筛选具有趋化活性的成分。结果 从蝰蛇蛇毒中筛选出Knis2- 2、Knis3- 5、Knis5 - 3和Knis3- 6 ;从长白黑眉蛇蛇毒中选出Chsv7- 8。经进一步检测去除了活性弱的Chsv7- 8和具有细胞毒作用的Knis5 - 3,得到Knis2 -2、Knis3- 5和Knis3 -6三个活性成分。结论 为进一步研制生物药剂奠定了基础。

    2005年02期 155-156页 [查看摘要][在线阅读][下载 20k]
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  • HIV抗体酶联免疫诊断试剂批内和批间精确性分析

    宋爱京,李秀华,李娟,张春涛,王佑春

    目的 了解HIV抗体酶联免疫试剂批内和批间的精确性。方法 用同一批试剂多次检测同一样品和不同批次试剂分别检测同一样品 ,分别计算其批内和批间的变异系数 (CV) ,分析试剂的批内和批间的精确性。结果 用 1份样品对12家试剂的批内精确性分析结果显示 ,所有试剂的批内变异系数均在 15 %以内 ,符合要求 ,但不同试剂的变异系数不同 ,且有统计学差异。用 5份样品对 12家不同批次试剂的批间变异系数进行分析 ,在所得到的 6 0个变异系数中 ,仅有 3个变异系数小于或等于 15 % ,大部分试剂的批间变异系数均在 2 0 %以上。结论 HIV抗体酶联免疫试剂的批间精确性变异较大 ,其批间稳定性有待进一步提高。

    2005年02期 157-158页 [查看摘要][在线阅读][下载 19k]
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  • 酶标法相对定量检测Vero细胞疫苗中宿主细胞蛋白

    田博,丁志芬

    目的 建立定量检测Vero细胞疫苗中宿主细胞蛋白 (hostcellprotein ,HCP)的方法 ,并用该方法检测Vero细胞乙脑疫苗中HCP含量。方法 模拟Vero细胞疫苗生产工艺 ,制备Vero细胞HCP及其免疫血清 ,经过DEAEProteinASepharoseCL -4B亲和层析 ,制备纯化的抗Vero细胞HCPIgG。通过对检测条件的优化 ,确立了酶标法相对定量检测Vero细胞疫苗中宿主细胞蛋白的方法 ,并用该方法对Vero细胞乙脑疫苗的收获物、中间产品及纯化样品收样前杂蛋白中HCP进行定量分析。结果 该方法可以检测Vero细胞疫苗加入保护剂前任何阶段产品中HCP含量。结论 ELISA法可以相对定量检测Vero细胞HCP的含量。

    2005年02期 159-161+164页 [查看摘要][在线阅读][下载 38k]
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  • 热力灭菌效果的验证

    张可畏,刘晔,王鹏,刘志强,商林,张双庆,庄茂欣,郑晓丽

    目的 探讨对不同种灭菌设备及灭菌工艺进行验证的方法。方法 采用多种温度检测记录仪进行检测 ,并对记录结果进行比较分析。结果 不同种灭菌设备及灭菌工艺 ,验证要点不同 ,验证结果差异较大。结论 热力灭菌效果应依据验证要点不同 ,采取相应的验证方法。

    2005年02期 162-164页 [查看摘要][在线阅读][下载 28k]
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  • 二次曲线拟合在比色分析中的应用

    陈智勇,刘大为

    用分光光度计进行比色分析中 ,常用直线拟合确定标准曲线的方程参数 ,但在生物制品的生化分析中常有偏离直线的情况发生 ,如用二次曲线拟合则可方便地进行数据处理 ,实际上也扩展了相应分析方法的测量范围。本文重点介绍了如何用二次曲线拟合处理微量蛋白测定的实验结果 ,并初步探讨了相关的理论基础。

    2005年02期 165-167页 [查看摘要][在线阅读][下载 31k]
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  • 反向疫苗学及其应用前景

    刘光清,郭建宏,刘在新,谢庆阁

    反向疫苗学是近年来新兴的一门交叉学科 ,该学科的诞生引发了疫苗研究领域的一场革命。与传统疫苗学相比 ,它具有省时、省力、经济而有效的优点。对于那些不能应用传统方法研制疫苗的病原尤为适用。本文即对近年来反向疫苗学的研究进展情况及其应用前景作一综述。

    2005年02期 168-170页 [查看摘要][在线阅读][下载 30k]
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  • 动脉粥样硬化疫苗的研究进展

    任丽丽,于洪涛

    动脉粥样硬化 (Atherosclerosis ,AS)是一种血管疾病 ,它以血管平滑肌细胞增生和血脂在粥样硬化斑块沉积为特征。粥样斑块的形成与脂代谢紊乱、低密度脂蛋白 (LDL)、胆固醇酯转运蛋白 (CETP)、CD4 0 CD4 0配体及肺炎衣原体 (Cpn)感染等多种因素有关。目前 ,有些药物虽有一定疗效 ,但仅仅是暂时抑制AS病情的发展 ,不能有效治疗AS ,所以研制LDL疫苗、CETP疫苗、CD4 0疫苗、Cpn疫苗等是非常有效的手段 ,将有助于抑制动脉硬化的发生与发展 ,减少这些疾病对人类的危害。

    2005年02期 171-173页 [查看摘要][在线阅读][下载 36k]
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  • 乳铁转运蛋白的研究进展

    苑玉和,黄秉仁

    乳铁转运蛋白 (Lactoferrin ,LF)是一种具有抑菌、杀菌及抗病毒作用的蛋白 ,广泛存在于各种粘膜表面。乳铁蛋白除了具有抗菌活性以外 ,其他功能及其保健作用也引起多方关注。本文就近年来对LF的研究进展作一综述。

    2005年02期 174-176页 [查看摘要][在线阅读][下载 36k]
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