中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

  • 幽门螺杆菌鞭毛蛋白B亚单位原核表达系统的构建及其产物的免疫性

    孙爱华,邵浙新,严杰

    目的 构建幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)鞭毛蛋白B亚单位 (flaB)原核表达系统 ,并鉴定其表达产物的免疫性。方法 采用PCR从幽门螺杆菌基因组DNA中扩增全长flaB基因 ,T A克隆后测定核苷酸序列 ,构建pET32a flaB表达载体 ,以E .coliBL2 1DE3为表达宿主菌 ,用SDS PAGE检测重组蛋白 (rFlaB)的表达水平。采用Hp全菌抗体的Westernblot和兔抗rFlaB血清的免疫扩散试验鉴定其免疫反应性和抗原性。结果 所克隆的flaB基因与文献报道的核苷酸序列同源性为 96 .31%~ 97.73% ,氨基酸序列同源性高达 99.4 1%~ 10 0 %。构建的原核表达系统pET32a flaB E .coliBL2 1DE3的rFlaB产量为细菌总蛋白的 4 0 %左右。Hp全菌抗体能识别rFlaB。rFlaB免疫家兔能获得高效价血清抗体。结论 已成功地构建了HpflaB高效原核表达系统 ,所表达的rFlaB有良好的免疫反应性和抗原性 ,可作为Hp疫苗的候选抗原

    2004年04期 193-195+213页 [查看摘要][在线阅读][下载 106k]
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  • 我国水痘-带状疱疹病毒VZV84-7减毒株基因特征研究

    李秀玲,谢云,何薇薇,张中洋,庞宇,刘立新

    目的 建立水痘 带状疱疹病毒 (VZV)毒株的特异性鉴定方法 ,研究我国分离的VZV84 7减毒株(VZV84 7株 )基因特征。方法 利用PCR分别扩增VZV84 7株和Oka株R2和R5可变区基因 ,比较两者串联重复单位拷贝数 ;用PCR结合限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)分析VZV84 7株和Oka株基因的BglI、PstI酶切位点突变 ;并对gpI编码区基因进行序列分析。结果 VZV84 7株R2、R5区PCR产物分别为 4 2 5bp和 2 5 5bp ,对应的串联重复单位拷贝数分别为 7和 1;Oka株R2、R5区PCR产物分别为 4 2 5bp和 36 7bp ,对应的串联重复单位拷贝数分别为 7和 2。VZV84 7株基因存在PstI酶切位点 ,而Oka株无PstI酶切位点 ;两者均存在BglI酶切位点。基因序列分析显示 ,VZV84 7株与Oka株在gpI区存在 4个碱基差异 ,并导致 1个编码氨基酸不同 ,氨基酸序列同源性为99 8%。结论 所建立的PCR和PCR RFLP方法简便、特异 ;VZV84 7株的基因特征与Oka株存在一定差异 ,但两株之间gpI编码区氨基酸序列具有较高的同源性

    2004年04期 196-199页 [查看摘要][在线阅读][下载 49k]
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  • DRG2基因的克隆、表达及抑瘤活性研究

    陈杰,张翊,饶春明,吴梧桐,王军志

    目的 克隆、表达抑癌基因NDRG2 ,纯化后考察其对肿瘤细胞的抑制作用。方法 将NDRG2基因克隆进pQE30 M15表达载体 ,经DNA测序 ,IPTG诱导表达 ,SDS PAGE测定表达量及相对分子质量 ,复性后浓缩 ,脱盐 ,亲和层析纯化 ,对纯化表达产物进行一系列检测 ,考察其抑瘤作用。结果 克隆构建的表达载体经DNA测序证明构建正确 ,表达产物相对分子质量为 39977,表达量为 4 0 0 5 % ,纯度为 94 % ,等电点为 6 3,表达蛋白N端氨基酸序列正确 ,NDRG2蛋白对肿瘤细胞有较强抑制作用。结论 构建了NDRG2的pQE30 M15表达载体并取得高表达 ,该蛋白对 790 1和HHCC肿瘤细胞均有抑制作用 ,为基因功能研究奠定了基础

    2004年04期 200-203页 [查看摘要][在线阅读][下载 53k]
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  • 人类白细胞抗原DRB等位基因多态性与克罗恩病遗传易感性的研究

    王丽英,王江滨,周长玉,于建勋

    目的 研究人类白细胞抗原 (HLA) DRB等位基因多态性与汉族人克罗恩病 (CD)的遗传易感性的关系。方法 应用基因芯片技术分析了 2 0例汉族CD患者和 2 0例健康对照者HLA DRB的基因分型 ,采用Fisher’s精确概率法比较两组各位点等位基因频率分布的差异。结果 CD患者DRB1 0 4和DRB1 0 7等位基因表达频率明显增高 ,OR分别为 12 6 6 7和 18 379,P <0 0 5 ;DRB1 12等位基因表达频率明显下降 ,OR为 0 14 4 4 ,P <0 0 5。其它等位基因在两组之间差异无显著意义。病变累及回肠者DRB1 0 7等位基因表达频率较病变累及其它部位者显著增加 (P <0 0 5 )。结论 DRB1 0 4和 或DRB1 0 7等位基因可能是我国汉族人群CD的易感基因 ,DRB1 12则为抵抗基因。HLA DR不同基因型的表达与疾病的临床特征有一定关系

    2004年04期 204-206页 [查看摘要][在线阅读][下载 33k]
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  • 纤溶酶原饼环区5蛋白重组大肠杆菌高效表达体系的建立

    陈显久,王惠珍,于保锋,程牛亮,解军,胥显民,张悦红,郝一彬,牛勃

    目的 建立纤溶酶原饼环区 5 (Humanplasminogenkringle 5 ,hPK 5 )蛋白重组大肠杆菌高效表达体系 ,为高密度发酵创造条件。方法 观察一级、二级种子的生长状态 ,比较表达hPK 5蛋白的 4种重组工程菌株在相同条件下的表达情况 ,选出首选发酵种子 ;对其培养时间、诱导时间、培养基种类、pH等条件进行优化 ;并用凝胶成像分析系统对SDS PAGE结果进行分析。结果 经过筛选 ,JM10 9 pBV2 2 0 hPK 5 (简称JP5 )是获取hPK 5蛋白的首选工程菌株 ,其最佳表达条件是LB培养基 (pH 7.4、溶解氧充足 )、30℃培养 3h、4 2℃诱导 6h。在此条件下 ,JP5表达目的蛋白占菌体总蛋白的 38%左右。结论 为高密度发酵获取hPK 5蛋白奠定了实验基础

    2004年04期 207-210页 [查看摘要][在线阅读][下载 63k]
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  • 一种新型HBsAg真核表达载体的构建

    孔双泉,时成波,单连慧,张连忠,李洋,杨亦代,盛军

    目的 在CHO细胞中高效表达HBsAg。方法 通过PCR方法扩增出S和dhfr基因片段 ,分别克隆到T载体上。然后分别将S和dhfr基因克隆到pCI载体上 ,构建pCI S dhfr真核表达载体。转染CHO(dhfr )细胞 ,并用ELISA方法检测HBsAg表达量。结果 S和dhfr基因经测序与Genbank报道一致。PCR和测序结果与预期一致。转染后检测结果呈阳性。结论 已成功构建在CHO(dhfr )细胞中高效表达的pCI S dhfr双顺反子真核表达载体

    2004年04期 211-213页 [查看摘要][在线阅读][下载 42k]
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  • 替换稀有密码子提高HBsAg在CHO细胞中的表达量

    单连慧,时成波,孔双泉,田晓乐,杨亦代,盛军

    目的 通过替换S基因稀有密码子 ,提高HBsAg在CHO细胞中的表达量。方法 利用重叠PCR技术 ,将S基因上 3个稀有密码子替换成哺乳动物细胞偏爱的密码子 ,得到Sm 基因。把S和Sm 基因分别克隆到pCI载体上 ,并转染CHO(dhfr )细胞 ,利用ELISA方法检测HBsAg的表达量。结果 获得预期的Sm 基因。在CHO细胞中 ,Sm 基因表达量明显高于S基因。结论 替换S基因稀有密码子可以提高HBsAg的表达量

    2004年04期 214-216页 [查看摘要][在线阅读][下载 45k]
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  • 肾移植微嵌合体与免疫耐受相关性研究

    张文岚,傅耀文,王伟刚,杨绍娟,薛立娟

    目的 探讨肾移植术后受者微嵌合体与免疫耐受的相关性。方法 采集接受男性供体肾脏移植术后女性受者不同生存期外周血及尿沉渣标本 ,采用Y染色体 3对引物SRY1、DYZ11st和DYZ12nd,应用PCR和RT PCR方法检测标本中微嵌合体特异性标志Y染色体DNA和mRNA的表达 ,同时测定移植肾功能。结果 在 130例肾移植受者中 ,检测到嵌合阳性者 98例 ,占 75 .39% ,嵌合阴性者 32例 ,占 2 4 .6 1%。嵌合阳性与阴性两组比较 ,移植肾平均存活时间分别为 8.7± 3.5年和 5 .4± 3.3年 ;嵌合阳性者发生过排斥反应者 11例 ,占 11.2 2 % ,而嵌合阴性者9例 ,占 2 8.13% ;血清肌酐在嵌合阳性者为 74 .3μmol L±32 .5 μmol L ,而嵌合阴性者为113.6 μmol L±37.8μmol L。结论 受者体内嵌合阳性比阴性者具有更好的移植肾功能和低排斥率 ;受者生存期愈长 ,嵌合阳性率愈高 ;体内的嵌合状态与免疫耐受具有相关性

    2004年04期 217-219页 [查看摘要][在线阅读][下载 39k]
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  • 抗瘤酮A_(10)、5Fu、GM-CSF和IL-2的抗癌效果

    刘淑玲,张秀霞,迟春萍,王妍,刘哲,屈阿妮,孙妍红,佟祥山

    目的 比较A1 0 、5Fu、GM CSF和IL 2的抗癌效果。方法 选取NIH小鼠 ,分别腹腔接种肝腹水HeP A 2 2细胞、骨肉瘤S180细胞及胃癌MFC细胞 ,10d后将注射每种细胞的小鼠分为 3组 ,每组 12只 ,分别于小鼠腹腔注射A1 0 、5Fu、GM CSF和IL 2 ,每日 1次 ,每次 1ml 只 ,连续给药 8d后改为每 3d给药 1次 ,观察小鼠生存时间及抑瘤效果。结果 A1 0 、5Fu、GM CSF及IL 2均能延长小鼠生存时间 ,A1 0 抑制肝HeP A 2 2肿瘤效果显著。结论 A1 0 、5Fu、GM CSF和IL 2均有抑制癌细胞生长作用

    2004年04期 220-222页 [查看摘要][在线阅读][下载 32k]
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  • 人胚肺二倍体细胞2BS株的不同细胞系对甲肝病毒的敏感性

    辛忠,刘建华,岳丹,刘令久,徐秀文,范广川,王信鹏,顾丹阳,刘景晔

    目的 筛选人胚肺二倍体细胞 2BS株中对HAV敏感的细胞系。方法 在相同条件下 ,用同一批HAV感染 2BS株的 4个细胞系细胞 ,采用免疫荧光法 (IFA)每周检测细胞中HAV的荧光强度 ,Ridit分析法计算各细胞系对HAV的敏感性系数 ,即Ridit值。结果  4个细胞系对HAV敏感性不同 ,且差异有显著意义。结论 选择人胚肺二倍体细胞 2BS株中敏感的细胞系可提高HAV增殖强度

    2004年04期 223-224页 [查看摘要][在线阅读][下载 18k]
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  • 双价肾综合征出血热纯化疫苗的研究

    韩亮,惠连,王晓宏,赵丽红,王琪,岳立广,冉姝,郝富勇,王伟,赵建,马军,李彤,柳梅,张连忠

    目的 研制包含Ⅰ型和Ⅱ型病毒抗原的肾综合征出血热纯化疫苗 ,以提高疫苗质量及临床应用效果。方法 用金黄地鼠肾细胞培养的PS 6株 (Ⅰ型 )病毒和L99株 (Ⅱ型 )病毒以体积比 1∶1的比例配制成双价疫苗 ,经醋酸锌沉淀、超滤浓缩、Sepharose 4FF柱层析制备成双价纯化疫苗。结果 双价纯化疫苗经中国药品生物制品检定所检测 ,各项指标全部合格。疫苗于 37℃放置 2周和 4℃放置 3年 ,效力试验均合格。临床观察血清中和抗体阳转率大于 85 % ,仅出现 0 .5 %的轻反应。结论 研制的出血热双价纯化疫苗 ,各项质量指标均符合《双价肾综合征出血热纯化疫苗试行规程》的要求 ,临床应用效果良好

    2004年04期 225-228页 [查看摘要][在线阅读][下载 43k]
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  • 脊髓灰质炎减毒活疫苗中SV40和泡沫病毒的检测

    李华,胡凝珠,谢忠平,袁兵,洪超,段维国,崔萍芳,钱兴丽,何跃

    目的 检测脊髓灰质炎减毒活疫苗中的SV4 0和猴泡沫病毒 (SimianFoamyVirus,SFV)。方法 用PCR方法检测我所 1997年至 2 0 0 3年生产用的毒种 10批、半成品 14 0批及成品糖丸疫苗 12 8批。结果 脊髓灰质炎减毒活疫苗毒种、半成品和成品糖丸疫苗中均未检测到SV4 0和SFVDNA。结论 我所生产的脊髓灰质炎减毒活疫苗是安全的

    2004年04期 229-232页 [查看摘要][在线阅读][下载 56k]
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  • 在搅拌培养和静态培养中造血细胞亚群组成的分析

    迟占有,蔡海波,姜华,谭文松,戴干策

    目的 分析转瓶和方瓶培养过程中造血细胞亚群组成的变化。方法 观察培养过程中脐血单个核细胞总细胞扩增倍数 ,CD34+ 细胞、CD33+ 细胞、CFU GM、CD4 1+ 细胞、CFU Mk和BFU E占总细胞的比例及其随培养时间的变化。结果  14d的培养中 ,无论是用转瓶和方瓶 ,总细胞不断扩增 ,CD34+ 细胞含量在第 7天、CFU GM含量在第 10天、BFU E含量在第 5天达到最高 ,而后出现分化 ,转瓶和方瓶培养的CD34+ 细胞和CFU GM和BFU E含量差异无显著意义 ;CFU Mk则不同 ,其含量在转瓶培养第 7天时达到最高 ,而在方瓶第 10天达到最高 ,在转瓶中CFU Mk的含量一直低于方瓶培养 ;两种培养过程中CD33+ 细胞比例均在 5 0 %~ 70 %之间 ,而且差异无显著意义。转瓶培养中CD4 1+ 细胞含量到后期出现下降 ,而方瓶中则一直增加。结论 与静态培养环境相比 ,搅拌环境对干 祖细胞分化速度、粒 巨噬系祖细胞和红系祖细胞的分化没有明显影响 ,但不利于巨核系祖细胞的扩增 ,促进了其分化

    2004年04期 233-236页 [查看摘要][在线阅读][下载 42k]
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  • 乙型脑炎灭活疫苗效力参考品的制备及稳定性

    宋宗明,岳广智,洪成龙,贾丽丽,刘双军,林辉,韩亮,董关木

    目的 制备乙型脑炎灭活疫苗国家效力参考品。方法 按《中国生物制品规程》要求制备乙型脑炎灭活疫苗原液 ,经超滤处理后加入冻干保护剂 ,制成冻干参考品并进行检测标定。结果 经检测 ,效力参考品外观、水分、无菌试验、效力试验均合格 ,稳定性好 ,且T值可保持在较高水平。结论 该批乙型脑炎灭活疫苗效力参考品可作为国家效力参考品

    2004年04期 237-238页 [查看摘要][在线阅读][下载 20k]
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  • 应用ELISA法检测静脉注射用人血免疫球蛋白抗补体活性

    任跃明,程雅琴,倪道明

    目的 建立检测静脉注射人血免疫球蛋白的抗补体活性的ELISA方法及其相应的标准品。方法用C1q包被酶标板 ,以辣根过氧化物酶标记的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA HRP)作为酶标记物 ,邻苯二胺为底物。结果 应用ELISA法检测静脉注射用人免疫球蛋白抗补体活性具有准确性高 (97 2 % ) ,精确性好 (试验内精密度为6 7% ,试验间精密度为 9 1% ) ,特异性强 ,灵敏性高 (测定限度为 0 2ACA单位 ,测量限度为 0 3ACA单位 )等特点。结论 ELISA法检测抗补体活性简便、快捷、准确

    2004年04期 239-241页 [查看摘要][在线阅读][下载 24k]
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  • 牛血清质量及其中甲肝抗体对甲肝疫苗生产的影响

    龙润乡,谢忠平,洪超,徐琼芬,李华,段维国,张雪梅

    目的 对牛血清质量及其中的甲肝病毒抗体进行检测 ,评估此类抗体对甲肝疫苗生产的影响。方法 根据《中国生物制品主要原辅材料质控标准》检测项目 ,全检 4个厂家共 17批新生牛血清 ,另用EIA法检测血清中的甲肝抗体 ,并用此血清中和甲肝病毒抗原 ,用EIA法检测中和后剩余的甲肝病毒抗原 ,以此来评估新生牛血清中的甲肝抗体对甲肝病毒的影响。结果  17批牛血清 (未灭活 ) ,检出 3批噬菌体阳性 ,4批内毒素和 1批蛋白含量超标。 12批甲肝抗体阳性 ,其中最高 6 87 5 2mIU ml,最低 8 91mIU ml。甲肝抗体阳性牛血清可将甲肝病毒抗原中和 ,1mIU ml的抗体可中和 7 5 3~ 11 6 4EU ml甲肝抗原。结论 牛血清蛋白含量、无菌试验、牛病毒等项目质量控制较好 ,其它则有待提高。牛血清中存在甲肝抗体 ,能将甲肝病毒大量中和。用于甲型肝炎疫苗生产的新生牛血清除按《中国生物制品主要原辅材料质控标准》进行质控外 ,还必须进行甲肝抗体的检测

    2004年04期 242-243页 [查看摘要][在线阅读][下载 19k]
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  • 两种方法制备甲乙肝联合疫苗的效果比较

    史荔,褚嘉祐,于亮,黄小琴,俞建昆,李长友,孙浩

    目的 观察两种不同方法制备甲乙肝联合疫苗的效果。方法 将甲肝抗原和乙肝抗原分别加Al(OH) 3吸附后混合 ,制备甲乙肝联合疫苗 (方法 1)或将甲肝抗原与乙肝抗原等量混合后 ,加Al(OH) 3吸附 ,制备甲乙肝联合疫苗 (方法 2 ) ,并进行吸附效果、理化性质及效力检测。结果 两种方法制备的联合疫苗理化性质稳定 ,免疫效果良好 ;方法 2制备的联合疫苗其小鼠效力优于方法 1(方法 1甲肝ED50 为 4 2 .0 9EU ml,方法 2为 8.2 0EU ml,P =0 .0 10 )。结论 两种方法制备的联合疫苗均达到了单价疫苗的免疫效果 ,方法 2优于方法 1

    2004年04期 244-245页 [查看摘要][在线阅读][下载 17k]
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  • 人血纤维蛋白胶在功能性鼻腔内窥镜术后的临床疗效观察

    徐焱,席惠君,王门华,杨明

    目的 观察人血纤维蛋白胶治疗功能性鼻腔内窥镜术后的临床疗效。方法 将 6 0例施功能性鼻腔内窥镜术的鼻窦炎患者随机分成两组 ,治疗组术后用人血纤维蛋白胶 ,对照组术后用止血灵 ,两组均观察 7d。结果 人血纤维蛋白胶具有促进黏膜愈合 ,减轻糜烂、肿胀、结痂以及减少术后血液渗出等作用。上述作用治疗组均优于对照组。结论 人血纤维蛋白胶治疗功能性鼻腔内窥镜术后疗效显著

    2004年04期 246-248页 [查看摘要][在线阅读][下载 28k]
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  • 粉尘螨滴剂中硫柳汞限度的比色检查

    周琳,翟晨淏,王培源,陈东英

    2004年04期 248页 [查看摘要][在线阅读][下载 9k]
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  • 母牛分枝杆菌疫苗对PPD强阳性者预防性治疗效果

    孙燕芝,顾美红,李少珍,苏坚,刘智,付向东

    目的 观察母牛分枝杆菌疫苗 (微卡 )对结核菌素试验 (PPD)强阳性的人群预防性治疗的效果。方法 将 6 0例PPD皮试强阳性者随机分成两组 ,每组 30例 ,治疗组肌注微卡 ,对照组服用异烟肼片 (INH) ,分别于治疗前和治疗后 12周 ,再检测PPD皮试反应变化程度及预防治疗后的效果。结果 治疗组的PPD硬结平均直径显著缩小 ,强阳率也显著减少 ,与对照组比较差异有显著意义。治疗组随访 2年无发病 ;对照组则有 2例感染。结论微卡对PPD强阳者有预防性免疫治疗效果

    2004年04期 249-250页 [查看摘要][在线阅读][下载 16k]
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  • HIV疫苗的研究进展

    高红军,代解杰

    2004年04期 251-253页 [查看摘要][在线阅读][下载 33k]
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  • 国产牛血清的现状

    金亦宏,马欣,周莉薇

    本文概述了牛血清中的生长因子、激素、贴壁和扩展因子、结合蛋白质等 8种主要成分在细胞培养中的重要作用 ;全面介绍了自 2 0 0 0年版《中国生物制品规程》颁布生物制品用牛血清质量标准以来 ,国产牛血清的现状。 4年间 ,牛血清在质量管理GMP化 ,生产模式产业化 ,加工工艺现代化 ,产品开发多元化 ,人员培训系统化等方面取得了长足的进步 ;目前与国外产品的差距主要表现在现行质量标准有局限性 ,生产规模小 ,技术、设备、工艺落后 ,品种单一 ,在生产用牛的溯源管理上不完善等。了解这些 ,对进一步推动国产牛血清产业的发展大有益处

    2004年04期 254-256页 [查看摘要][在线阅读][下载 25k]
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