中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

  • 胰岛素样生长因子I(IGF-I)基因的克隆及分泌表达

    赵大鹏,王晓宇,刘畅,郭桥,戚凤春,蒙冲,吴晓娟,王妍,盛君,杨煜,傅学奇

    目的 构建原核分泌型表达载体并高效表达胰岛素样生长因子I(IGF I)。方法 构建出 2种分泌型表达载体 ,命名为pCSA和pCST ,并将胰岛素样生长因子I(IGF I)基因插入pCSA和pCST中 ,转化E .coliW3110 ,经筛选获得工程菌pCSA/IGF I/W3110和pCST/IGF 1/W3110 ,并进行表达。结果 经SDS PAGE检测 ,在相对分子质量 76 0 0处有明显表达带 ,Westernblot表明重组蛋白具有IGF I的抗原性。结论 原核分泌型IGF I的高效表达 ,为进一步研究人IGF I的功能和生物学特性打下基础

    2004年01期 1-3页 [查看摘要][在线阅读][下载 51k]
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  • 水泡性口炎病毒核蛋白基因的克隆和序列分析

    花群义,徐自忠,金宁一,杨云庆,董俊,杨晶焰,周晓黎

    目的 对水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因进行PCR扩增、克隆和序列分析。方法 将水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因片段克隆至pMD18 T载体中 ,构建N基因重组质粒载体。进行PCR及限制性内切酶分析 ,筛选获得N基因插入的阳性克隆。经核苷酸序列分析 ,并与Genbank中的VSV编码核衣壳蛋白N基因序列进行比较。结果 该序列与VSVNewJersey型的 0 9/ 82 HD B株同源性最高 ,核苷酸和推测氨基酸的同源性分别为 98.9%和 98.8% ,有 13个核苷酸差异 ,伴有 5个氨基酸改变 ,第 72位的酪氨酸变为组氨酸 ,第 89位的缬氨酸变为异亮氨酸 ,第 183位的天冬氨酸变为天冬酰胺 ,第 2 0 5位的苯丙氨酸变为亮氨酸 ,第 4 18位的丙氨酸变为缬氨酸 ;与In diana型各株的同源性较低 ,与Glasgow株相比 ,核苷酸和氨基酸的同源性分别为 6 7.9%和 71.6 %。结论 已成功地克隆了水泡性口炎病毒N基因 ,为水泡性口炎免疫血清学诊断试剂的制备和分子生物学研究打下了坚实基础

    2004年01期 4-7页 [查看摘要][在线阅读][下载 56k]
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  • 慢性粒细胞白血病树突状细胞对T细胞增殖作用的研究

    崔久嵬,李薇,王冠军,李荔

    目的 体外诱导慢性粒细胞白血病 (CML)患者外周血单个核细胞 (PBMCs)为树突状细胞 (DCs) ,并对其形态、表型及对T细胞刺激增殖作用进行研究。方法 利用GM CSF、IL 4、TNF α体外定向诱导生成树突状细胞 ,对所诱生的细胞进行细胞表型及形态检测 ,用D FISH方法检测所诱生DCs的白血病源性 ,应用MTT法检测所诱生的DCs刺激T细胞增殖的能力。结果 CML患者PBMCs在体外可诱导生成bcr/abl融合基因阳性的DCs(CMLDCs)。CMLDCs对自体T细胞有明显刺激增殖作用 ,而CML细胞无此作用。CMLDCs刺激同一异体T细胞增殖能力弱于正常DCs,但当培养体系中加入 30 0U/ml干扰素 α(IFN α)时可使其刺激能力接近正常DCs。结论 CMLDCs具有刺激自体及异体T细胞增殖的能力 ,但对异体T细胞的刺激作用弱于正常DCs,IFN α可提高CMLDCs刺激T细胞增殖能力

    2004年01期 8-11页 [查看摘要][在线阅读][下载 57k]
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  • 流行性乙型脑炎减毒活疫苗生产毒种(SA14-14-2株)及其疫苗的表型和E基因稳定性研究

    贾丽丽,俞永新,黄莺,王志伟,岳广智,郑铮,董关木

    目的 对乙脑减毒活疫苗SA14 14 2株生产毒种及其疫苗病毒滴度、脑内毒力和E区核苷酸序列进行回顾性测定。方法 应用乳金黄地鼠肾传代细胞 (BHK 2 1)结晶紫蚀斑法进行病毒滴度的测定 ,小鼠脑内法检测疫苗脑内毒力。应用RT PCR方法扩增SA14 14 2生产毒种和疫苗E区的核苷酸 ,经凝胶层析纯化的PCR产物直接用于测序或克隆到pGEM T载体中 ,经酶切和PCR鉴定后进行测序。结果 疫苗在 - 2 0℃保存长达 10多年 ,疫苗病毒滴度下降不超过 0 5lg;脑内毒力未见毒力回升。病毒蚀斑形态仍保持较SA14野毒株形态小的特性 ;以不同批次疫苗和生产毒种提取的病毒RNA作为模板进行RT PCR扩增 ,扩增的基因片段与预期大小一致 ;E区基因序列与野毒株差异的 8个氨基酸没有一个发生回复突变。结论 SA14 14 2生产毒种及其不同年度不同批次疫苗的生物表型和E区核苷酸的特性是十分稳定的

    2004年01期 12-15页 [查看摘要][在线阅读][下载 55k]
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  • 大肠杆菌O_(157):H_7 Stx2毒素B亚单位基因的克隆、序列分析及表达载体的构建

    曾明,许文香,王斌

    目的 克隆出血性大肠杆菌O157:H7的Stx2毒素B亚单位基因 ,进行序列分析并构建表达载体。方法 利用PCR技术从出血性大肠杆菌O157:H7染色体基因组中扩增出Stx2毒素B亚单位基因 ,并连接至质粒载体上 ,进行序列测定和分析 ,亚克隆构建表达载体 ,经SDS PAGE电泳分析目的蛋白表达量。结果 所克隆的基因序列与Genbank上基因序列高度同源 ,所表达目的蛋白约占宿主菌蛋白的 2 0 %。结论 为进一步的疫苗研究奠定了基础

    2004年01期 16-17+22页 [查看摘要][在线阅读][下载 42k]
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  • 嵌合蛋白sTNFRⅡ-IgG Fc纯化与生物学活性研究

    徐春晓,姚立红,黄国锦,柴映爽,陈爱珺,张智清

    目的 建立嵌合蛋白sTNFR IgGFc的纯化工艺 ,并对该蛋白的理化和生物活性进行研究。方法 嵌合蛋白sTNFRⅡ IgGFc经变性、复性后 ,用金属螯合层析进行纯化 ,纯化的蛋白进行配基结合实验和拮抗TNF活性检测。结果 该嵌合蛋白的纯度大于 95 % ,在体外能够二聚化 ,保留了sTNFRⅡ对hTNFα的结合特性 ,同单体sTNFRⅡ相比 ,对hTNFα的拮抗活性明显提高。结论 为进一步研究奠定了基础

    2004年01期 18-22页 [查看摘要][在线阅读][下载 68k]
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  • 重组人促红细胞生成素聚乙二醇修饰及纯化研究

    刘兰军,葛永红,沈富兵,郭洪金,张雪艳,张雪梅,孟延发

    目的 研究重组人促红细胞生成素 (rhEPO)聚乙二醇修饰条件及纯化方法。方法 用SDS PAGE分析不同反应条件对产物成分的影响 ;用红细胞压积法测定各组分的体内生物学活性 ;用分子筛柱层析进行纯化。结果 rhEPO的修饰度随蛋白浓度、蛋白与PEG2 NHS活性酯质量比的增加而提高 ,体内生物学活性随修饰度增加而降低 ,分子筛柱层析纯化效果好。结论 确立了rhEPO聚乙二醇化的影响因素及纯化方法

    2004年01期 23-25页 [查看摘要][在线阅读][下载 41k]
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  • 具有中和活性抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的制备及鉴定

    林林,孟淑芳,郎叔惠,王佑春,尹红章,李德富

    目的 制备具有中和活性抗呼吸道合胞病毒的单克隆抗体。方法 采用杂交瘤技术制备单克隆抗体 ,并以ELISA结合免疫组化技术进行筛选。结果 获得 8株分泌抗呼吸道合胞病毒的特异性单克隆抗体的细胞株 ,其中 2株分泌的单抗具有中和活性 ,效价 1∶16 0和 1∶32 0。结论 成功制备出具有中和活性的呼吸道合胞病毒的单抗

    2004年01期 26-28页 [查看摘要][在线阅读][下载 59k]
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  • 重组人CTAL4-Ig活性测定参考品的制备及标定

    张翊,侯盛,饶春明,王皓,王军志

    目的 建立用于效价测定的重组人CTAL4 Ig参考品。方法 按WHO标准品有关要求制备参考品 ,分装、冻干后进行检测 ,采用Raji细胞体外活性测定法进行标定。结果 冻干重组人CTAL4 Ig参考品经检测外观、无菌实验合格 ,水分为 2 2 % ,经 10次标定活性值位于 336~ 4 6 3U/支 ,平均值为 4 19U/支 ,10次结果的标准差为36 0 3U/支 ,变异系数为 8 6 1% ,加速热稳定实验表明其生物学活性在 - 2 0℃、4℃和 2 5℃下 12个月保持稳定。结论 该批重组人CTAL4 Ig活性参考品各项指标均符合标准品的要求 ,效价定为 4 0 0AU/支 ,编号为 2 0 0 2 /0 1。

    2004年01期 29-30+55页 [查看摘要][在线阅读][下载 31k]
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  • CpG对狂犬病疫苗免疫效果的影响

    李宇辉,袁彦宝,李淑兰,张莹,代长海,胡晓明,于洪涛

    目的 研究寡脱氧核苷酸 (简称CpG)对狂犬病疫苗免疫效果的影响。方法 用狂犬病疫苗原液 +Al(OH) 3 、狂犬病疫苗原液 +CpG、狂犬病疫苗原液 +Al(OH) 3 +CpG 3种配伍方式分别免疫地鼠 ,同时用狂犬病疫苗原液作对照 ;免疫途径分为腹腔、皮下和肌肉 ,全程免疫结束后 2周采血 ,进行小白鼠中和试验。同时用NIH法对不同配伍的疫苗进行效力检测。结果  3种免疫途径以皮下和肌肉免疫效果较腹腔为好 ;3种配伍方式中以狂犬病疫苗原液 +Al(OH) 3+CpG的免疫效果最好 ;狂犬病疫苗原液 +CpG较狂犬病疫苗原液对照免疫效果好。结论 CpG对狂犬病疫苗免疫效果有明显的增强作用

    2004年01期 31-32页 [查看摘要][在线阅读][下载 19k]
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  • 重组人干扰素-β(rhIFN-β)中试工艺研究

    李武平,宋瑜丽,张成海,衣坐安,吕洪亮,段招军,侯云德,唐旭东

    目的 建立适合大规模生产重组人干扰素 β(rhIFN β)的分离纯化工艺。 方法 采用超声破菌、离心分离包涵体、仲丁醇萃取、Sephacryl 10 0、HIC层析等分离纯化步骤。结果 纯化的rhIFN β纯度达 98%以上 ,比活性为 2 .0× 10 7IU/mg,各项质量指标均符合质控标准。结论 此纯化工艺简便 ,可重复性好 ,适于大规模生产。

    2004年01期 33-35页 [查看摘要][在线阅读][下载 42k]
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  • 精制甲型肝炎灭活疫苗(YN5株)狨猴试验安全性和免疫原性

    马波,胡彩珍,何丽芳,黄果勇,练幼辉,王馨

    目的 检测精制甲型肝炎灭活疫苗的安全性和免疫原性。方法 甲型肝炎病毒YN 5株经Vero细胞培养制成精制甲型肝炎灭活疫苗。采用普通狨猴 (commonmarmoset)进行疫苗的安全性、免疫原性和保护力试验。结果 实验疫苗组和对照疫苗组狨猴均有特异抗体产生 ,对甲型肝炎病毒强毒株的攻击亦有保护作用。结论 该疫苗 (YN 5株 )有良好的安全性和免疫原性

    2004年01期 36-38页 [查看摘要][在线阅读][下载 29k]
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  • α_1-抗胰蛋白酶的制备及其防治急性肺损伤的疗效

    祝慈芳,朱威,揭志军,蔡映云

    目的 以FIV 1为原料 ,制备较高纯度α1 AT制剂 ,用该制剂干预急性肺损伤动物模型作疗效考核。方法 FIV 1抽提液经PEG沉淀 ,离子交换 ,病毒灭活、超滤、除菌、分装 ,冻干制备α1 AT制剂。用急性肺损伤动物模型 ,比较静脉注射与雾化吸入α1 AT的治疗效果。结果  3批制剂纯度 >70 % ,无菌、热原、安全试验均符合生物制品规程要求。静脉注射或雾化吸入 ,可降低由内毒素诱发急性肺损伤程度。结论 α1 AT制备工艺适合大规模生产。在防治急性肺损伤时有一定效果

    2004年01期 39-41页 [查看摘要][在线阅读][下载 34k]
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  • 重组人肽抗生素hPAB-β的初步纯化

    胡金川,汪正清,胡福泉,金晓琳,黎庶,胡晓梅,朱军民,黄建军,陈志瑾,饶贤才

    目的 探索重组人肽抗生素hPAB β的纯化工艺 ,为制备高纯度、高活性的重组hPAB β奠定基础。方法 将构建的含pQE32 CP hPAB β重组质粒的基因工程菌扩大培养 ,诱导表达后所得菌体经溶菌酶法裂解 ,鉴定融合蛋白表达形式 ;以含融合蛋白的溶液作为纯化的初始样品 ,采用Ni NTAresin亲和层析柱对融合蛋白进行纯化 ,用CNBr裂解 ,利用SephadexG 5 0、Bio gelP6DG凝胶进行分子筛层析 ,利用Macro PrepHighS进行阳离子交换层析 ,对层析峰行Tris Tricine电泳分析。结果 融合蛋白以包涵体形式存在 ;亲和层析获得了纯度为 82 .6 %的融合蛋白 ,CNBr作用 2 0h可完成融合蛋白的裂解 ;目的肽经纯化后 ,纯度达 95 %以上。结论 已初步建立了重组人肽抗生素hPAB β的纯化工艺 ,并获得了高纯度的肽抗生素hPAB β。

    2004年01期 42-44页 [查看摘要][在线阅读][下载 44k]
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  • 检测疫苗中小牛血清残存量ELISA试剂盒的研制

    刘颖,牟忠梅,童军,吴迪平,王冬倩,李勇

    目的 建立一种简便、灵敏、特异、准确的疫苗中小牛血清残存量检测方法。方法 采用ELISA双抗体“夹心法” ,即固相载体上包被特异性抗小牛血清抗体 ,加入待测样品 ,反应后再加入酶标记抗小牛血清抗体 ,经显色后测定。结果 固相载体最适包被抗体的量为 1μg/孔 ,反应体系的pH为6 .8~ 7.2 ,两步反应的最佳时间各为 1h ,最适温度为 37℃。检测的最适抗原 (小牛血清 )范围为 2 0~ 10 0ng/ml,该试剂盒的灵敏度为 3ng/ml ,变异系数CV(n =2 8孔 /次 )平均为 5 .7%。经检测 6批疫苗的结果与放免结果相符合。结论 该法特异性强 ,灵敏度高 ,为疫苗中小牛血清残存量的检测提供了一种新方法

    2004年01期 45-46页 [查看摘要][在线阅读][下载 21k]
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  • 注射用呋异丙苷的安全性实验

    范瑞泉,魏青,陈铁江,丘钦英,杨克志,刘移民

    目的 观察注射用呋异丙苷的安全性。方法 选取NIH小鼠、新西兰兔和豚鼠分别进行急性毒性试验、过敏试验、肌肉刺激试验、血管刺激试验及溶血性试验。结果 呋异丙苷无过敏反应和溶血现象 ,对静脉血管及肌肉无刺激反应 ,NIH小鼠经尾静脉及腹腔注射LD50 分别为 130 9.2mg/kg和 170 7.4mg/kg。结论 注射用呋异丙苷是安全的

    2004年01期 47-48页 [查看摘要][在线阅读][下载 16k]
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  • 应用定量动态浊度法检测牛血清中的内毒素

    栗铭谏,马学才

    目的 应用定量动态浊度法检测牛血清中细菌内毒素。方法 应用BET 32B型细菌内毒素测定仪 ,应用定量动态浊度法检测牛血清中内毒素含量。同时与鲎试剂凝胶法进行比较。结果 采用该法可定量检测牛血清中内毒素含量 ,变异系数≤ 10 % ,快速简捷 ,一次检测样品多 ,稳定性好 ,精确度、灵敏度高 ,可以在 0 0 0 1~ 10EU/ml的范围内定量 ,与鲎试剂凝胶法测定结果比较 ,符合率达 96 2 %。结论 应用BET 32B型细菌内毒素测定仪 ,采用定量动态浊度法检测牛血清中内毒素的方法准确性好 ,性能稳定 ,具有广阔的应用前景。

    2004年01期 49-50页 [查看摘要][在线阅读][下载 15k]
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  • 药用玻璃容器质量现状分析

    陈哲文,张亚达,金于兰,秦洁,汤云峰

    目的 分析药用玻璃容器质量现状。方法 对药用玻璃容器的内表面耐水性、pH值、规格尺寸、内应力、热稳定性和热震性进行检测。结果 经检测的药用安瓿 ,管制瓶和模制瓶各项指标均符合使用要求。结论 目前的药用玻璃容器的质量是可靠的

    2004年01期 51-52页 [查看摘要][在线阅读][下载 18k]
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  • 冰冻解冻红细胞的制备及临床应用

    赵宏祥,戴为人,杜玲霞

    目的 探讨冰冻解冻红细胞的制备方法 ,并对临床输注效果进行观察评价。方法 用甘油作为冰冻保护剂 ,采用羟乙基淀粉洗涤法制备冰冻解冻红细胞 ,按国家卫生部规定的检测方法对该制品进行质量检测 ;并对临床上RH阴性病人的输注效果进行调查分析。结果 应用该方法制备的冰冻解冻红细胞 ,其质量符合国家规定的有关标准 ,经临床输注后 ,除有不明显的进行性出血外 ,其余效果良好。结论 该方法适用于临床上稀有血型病人的输血需要

    2004年01期 53-55页 [查看摘要][在线阅读][下载 28k]
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  • 重组人干扰素α_(2a)软膏剂的检定及其临床疗效观察

    石晓丽,张雪梅,王晓宇,姜崴,盛军

    目的 对重组人干扰素α2a软膏的质量进行检定及临床疗效观察。方法 连续试制 3批样品进行稳定性试验及生殖器疱疹的临床疗效观察。结果 本品性质稳定 ,2~ 10℃保存 18个月生物学活性无明显下降 ,其他各项检定指标均符合质量要求。生殖器疱疹的临床疗效观察 ,治疗组有效率为 85 .72 % ,对照组的有效率为 6 5 .2 7% ,差异有显著意义。结论 该制品生产工艺稳定 ,疗效确切 ,安全性好

    2004年01期 56-57页 [查看摘要][在线阅读][下载 18k]
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  • 胸腺蛋白口服液与复方嗽口液对急性放射性口腔粘膜反应的临床疗效

    蓝玉宏,白力,毕晓霞,孙明莉,杨济洲,孔繁飞

    目的 观察胸腺蛋白口服液 (欣洛维 )对急性放射性口腔粘膜反应的疗效。方法  6 0例鼻咽癌患者随机分为两组 :(A)欣洛维用药组 ,(B)复方嗽口液用药组 ,用药与放射治疗同期进行。根据WHO急性放射性口腔粘膜反应分级进行临床评价。结果 放射治疗DT≤ 10GY时 ,欣洛维组与复方嗽口液组放射性口腔粘膜反应发生率分别为 33.3% ( 10 / 30 )和 70 % ( 2 1/ 30 )。治疗过程中Ⅲ级、Ⅳ级急性口腔粘膜反应发生率 ,欣洛维组为 5 3.3%( 16 / 30 ) ,复方嗽口液组为 80 % ( 2 4 / 30 )。治疗结束时 ,欣洛维组Ⅰ~Ⅱ级反应为 83.3% ( 2 5 / 30 ) ,复方嗽口液组仅为33.3% ( 10 / 30 )。结论 欣洛维可明显推迟放射性口腔粘膜反应的发生 ,并降低Ⅲ、Ⅳ级急性口腔粘膜反应的发生率 ,促进口腔粘膜溃疡的愈合

    2004年01期 58-59页 [查看摘要][在线阅读][下载 17k]
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  • 免疫毒素研究及临床应用进展 (一)临床前研究

    李俊植

    免疫毒素和 /或融合蛋白毒素 ,是用化学方法或基因工程方法将肿瘤选择性配体与经修饰的多肽毒素共价连接而成的肿瘤治疗药物。这种药物是通过抑制肿瘤细胞蛋白质合成和诱导细胞凋亡而达到杀伤肿瘤细胞的目的。二十多年来 ,人们已进行了很多临床试验 ,但在药理学及毒理学方面的诸多问题尚未得到解决。令人兴奋的是 ,美国FDA首次批准了ONTAK(DAB389 IL2 )用于治疗人皮肤T细胞淋巴瘤 ,还有很多正在进行I/II期临床试验的其它靶向药物 ,均已呈现出显著的抗肿瘤作用 ,预期这些药物在未来的十年将得到更长足的发展。

    2004年01期 60-63页 [查看摘要][在线阅读][下载 44k]
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  • SARS疫苗的研究进展

    董关木,王军志

    本文综述了研制SARS疫苗的临床和流行病学依据 ;研究各类型疫苗的可能性及在疫苗研究中应考虑的免疫学和病毒变异问题 ;我国SARS全病毒灭活疫苗的研究进展情况 ,并着重介绍了疫苗毒种的筛选检定 ,疫苗的安全性及免疫原研究等 ,提示我国的SARS全病毒灭活疫苗研制成功的希望是很大的。

    2004年01期 64-66页 [查看摘要][在线阅读][下载 32k]
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  • 《中国生物制品学杂志》第四届编委会成立大会纪要

    本刊编辑部

    2004年01期 67页 [查看摘要][在线阅读][下载 76k]
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