中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

  • 脊髓灰质炎病毒诱导细胞凋亡过程中bcl-2基因家族表达的研究

    李菁 ,胡凝珠 ,施海晶 ,刘国栋 ,瞿素 ,陈洪波 ,李华 ,胡云章

    目的 研究脊髓灰质炎病毒感染与细胞凋亡的关系及凋亡过程中bcl-2基因家族的表达特点。方法 采用人胚肺二倍体细胞(KMB17),在脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV)感染后不同时间经RT-PCR等方法分析凋亡过程中bcl-2基因家族(bcl-2、bax、bak)转录水平的表达情况。结果 PV感染后诱导细胞凋亡过程中bcl-2家族中抗凋亡基因和促凋亡基因的表达均呈现趋势变化,bak和bax表达增强、bcl-2表达较弱。结论 bcl-2基因家族中抗凋亡基因和促凋亡基因表达水平的差异是脊髓灰质炎病毒诱导凋亡的机制之一。

    2003年03期 129-131页 [查看摘要][在线阅读][下载 352k]
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  • PEG化猪血红蛋白偶联物的设计与产物分析

    白坚石,李松,胡远东

    目的 采用结构分析和分子模拟方法修饰猪血红蛋白,制备人血代用品的可行性。方法 通过蛋白质结构分析方法比较猪血红蛋白αβ二聚体晶体表面氨基的数量及其反应活性,以分子模拟方法确定修饰产物的可能结构,以mPEG修饰猪血红蛋白,并分析修饰产物理化性质。结果 修饰产物的相对分子质量增大,平均偶联程度达到27%。结论 计算机模拟技术可以用于异源血红蛋白的修饰。

    2003年03期 132-135页 [查看摘要][在线阅读][下载 336k]
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  • 有症状胆囊结石开腹手术前ERCP的选择

    张红裔,李亚刚,黄显利,师锦波

    <正> 内窥镜技术(ERCP)作为胆道结石较准确的检查方法,可显示结石的部位和胆道形态,已被广泛应用于一些胆道疾病的术前应用,但由于它在造影后可引起急性胆管炎、发热,甚

    2003年03期 135页 [查看摘要][在线阅读][下载 63k]
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  • 人BLys 78-285的高效表达、纯化及功能鉴定

    高会广,何凤田,郑英如,李蓉芬,陈姗,彭家和,陈敏

    目的 克隆人B淋巴细胞刺激因子(B-lymphocyte stimulator,BLyS)胞外区cDNA,并行高效表达、纯化及功能鉴定。方法 提取 HL-60细胞总RNA,经RT-PCR扩增编码人 BLyS胞外区 78-285氨基酸 cDNA,行序列测定后,构建高效原核表达载体pQE-80L,经 IPTG诱导表达及 Ni-NTA层析纯化,SDS-PAGE和 Wester blot检测活性。结果 RT-PCR扩增得到627bp的DNA片段,序列分析与CenBank中报道的编码BLyS 78-285的cDNA序列一致,并在大肠杆菌中得到高效表达,纯化后纯度可达95%,并能刺激B淋巴细胞增殖。结论 成功克隆人 BLyS胞外区cD-NA,并获得了高效表达,纯化产物具有生物学活性,为进一步研究奠定了基础。

    2003年03期 136-139页 [查看摘要][在线阅读][下载 368k]
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  • HIV-2跨膜蛋白gp36的截短及表达

    张涛,彭祥兵,端义坤,余模松

    目的 将HIV-2跨膜蛋白gp36进行截短,并在大肠杆菌中表达。方法 用PCR将gp36的编码基因进行截短,回收的PCR产物纯化后克隆到连接载体pGEM-T上,然后用 BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ切下目的基因,并构建到表达载体pGEX-4T3上,导入宿主细胞BL21(DE3),用IPTG诱导表达。结果 成功地对gp36进行了截短,并且构建到表达载体上进行表达。结论 截短的HIV-Ⅱ跨膜蛋白gp36能直接在大肠杆菌内进行表达,为跨膜蛋白的进一步应用打下基础。

    2003年03期 140-142页 [查看摘要][在线阅读][下载 344k]
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  • 麻疹血凝素效价的稳定性

    王玮,王连成,王拥军,孙金华,藤洪刚,刘在维

    <正> 麻疹血凝素(HA)是检测麻疹血凝抑制(HI)抗体水平的试剂之一。 本实验室1985年用原代人羊膜细胞和传代人羊膜(FL)细胞分别制备了若干批麻疹粗制血凝素,保存于-28℃冰

    2003年03期 142页 [查看摘要][在线阅读][下载 146k]
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  • 微小隐孢子虫gp40基因的克隆与核苷酸序列分析

    薛霞,张西臣,尹继刚,李建华,田忠成,杨举

    目的 获取微小隐孢子虫侵入蛋白40基因(gp40),并将其克隆到 pMD18-T载体中进行核苷酸序列分析。方法 应用PCR技术,从牛源微小隐孢子虫基因组中扩增出 975bp的gp40基因,然后将其克隆到 pMD18-T载体中,用Sanger’s双脱氧法对重组质粒中的插入片段进行序列分析。结果 测得的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与Cenbank公布的序列核苷酸同源性为98%,氨基酸同源性为98%。结论 获得了序列正确的gp40基因,为其相关研究奠定了基础。

    2003年03期 143-146页 [查看摘要][在线阅读][下载 366k]
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  • 应用pET系统表达rhIFN-α2b基因的研究

    张一折,刘照惠,吴隼,关晓峰

    目的 以构建的pET28a为表达载体,探讨人 IFN-α2b基因在pET系统中的表达。方法 合成引物,通过PCR扩增人 IFN-α2b基因并引入点突变,在不改变天然 IFN-α2b氨基酸序列的前提下,使原 IFN-α2b基因4个大肠杆菌稀有密码子改变为偏爱密码子,在起始密码子后,编码前16个氨基酸的碱基序列均成为大肠杆菌的偏爱密码子。将PCR产物次级克隆人pET28a载体,构建重组表达载pET28a-IFN-α2b。筛选正确的重组表达质粒pET28a-IFN-α2b转入感受态表达菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,粗提并检测 IFN-α2b活性。结果 重组质粒pET28a-IFN-α2b在宿主菌 BL21(DE3)中表达出的rhIFN-α2b以可溶性蛋白形式存在于粗提上清液中,与原来 pBV889系统表达的干扰素相比,具有更高的生物学活性。结论 应用pET表达系统可表达出具有更高生物学活性的rhIFN-α2b蛋白。

    2003年03期 147-150页 [查看摘要][在线阅读][下载 404k]
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  • 幽门螺杆菌过氧化氢酶基因克隆及表达

    陶惠,朱道银,邹全明,毛旭虎,洪愉

    目的 克隆幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)过氧化氢酶(katA)基因并在大肠杆菌中进行表达。方法 采用PCR扩增幽门螺杆菌katA全长基因,将其克隆入pET-11c载体中,经测序证实后,在大肠杆菌中进行表达,产物用Western blot检测其抗原性并进行N末端氨基酸的测序。结果 幽门螺杆菌katA基因全长1 518bp,编码氨基酸505个。在BL21(DE3)中的表达量约占细菌总蛋白的24.9%,表达产物经SDS-PAGE显示其相对分子质量与软件预测结果 58 000相符,N末端5个氨基酸测序结果与Hp中天然的katA完全一致,经Western blot检测可被 Hp全菌抗血清识别。结论 katA能在大肠杆菌中进行高效表达,具有良好的免疫反应性,可望为研究 Hp的致病机理、实验诊断及亚单位疫苗等提供充足的katA原材料。

    2003年03期 151-154页 [查看摘要][在线阅读][下载 398k]
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  • 视网膜色素上皮细胞光损伤早期基因的差异表达

    宋忆淑,张晓光,刘维全,邹啸环

    目的 分离视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞光损伤早期差异表达的基因。方法 对光损伤早期培养的 RPE细胞,应用差异显示(differential display,DD)技术和银染变性 SDS-PAGE分析方法,分离差异表达的基因。结果 获得一段长为458bp新的基因序列,在GenBank登录,登录号为:AF509472。结论 在可见光对培养的RPE细胞损伤的过程中,除一些已知基因的表达外,可能还有新的基因参与了这一过程。

    2003年03期 155-157页 [查看摘要][在线阅读][下载 276k]
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  • 从人血浆组分Ⅲ中制备天然血管生成抑制素

    邵华,赵小琳,王玉光,李光谱,陈子杨,郭立君,杨明,郭凤云

    目的 从人血浆组份Ⅲ中制备天然血管生成抑制素(angiostatin)。方法 采用Lysine Sepharose-4B亲合层析、Sephcryl S200层析,纯化人纤溶酶原,经弹性蛋白酶水解、Lysine Sepharose-4B亲合层析制备血管生成抑制素。结果 获得相对分子质量43 000和35 000两种蛋白。经鸡胚实验,显示出明显血管生成抑制活性。结论应用该工艺从血浆中提取血管生成抑制素是可行的。

    2003年03期 158-160页 [查看摘要][在线阅读][下载 331k]
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  • 蛇毒类凝血酶基因真核表达载体的构建

    张红梅,文姝,许晓楠,安利佳

    目的 构建大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶(Gloshedobin,GSB)基因真核表达载体,试图借助IL-2的分泌通路,使GSB分泌至胞外而达到溶栓和防栓的目的。方法 应用PCR重组技术,将GSB的5’端和3’端分别与IL-2基因的信号肽和poly A尾相连接,将此重组基因克隆入逆转录病毒载体 pLNCX,以脂质体介导转染人外用血淋巴细胞,并以绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因检测转染效率、确定DNA和脂质体的比例。转染24h后从mR-NA、DNA和蛋白质水平检测GSB的表达情况。结果 mRNA和DNA水平均有外源基因GSB的表达;SDS-PAGE显示在相对分子质量 30 000左右出现一条带,且转染上清具有精氨酸酯酶活性。结论 构建的真核表达载体可表达具有活性的GSB,为GSB基因治疗血栓的体内研究打下基础。

    2003年03期 161-164页 [查看摘要][在线阅读][下载 506k]
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  • 促红素对人血小板活动度与血红蛋白水平的影响

    马曙轩,刘景汉,林宏杰,周健,李锡金,骆群

    目的 观察促红素(EPO)对人血小板活动度和血红蛋白水平的影响。方法 采用随机、对照、双盲法将30名健康男性志愿者分为3组;静脉注射EPO100U/kg、静脉注射EPO500U/kg和静脉注射安慰剂组。每周注射2次,共注射3周。分另在第8天和第15天对志愿者采静脉血200ml,检测血小板活动度和血红蛋白水平。结果在注射促红素期间,接受EPO的志愿者血红蛋白水平均有不同程度升高,血小板上P-选择素含量和CD63阳性血小板增加 2~3倍。同时血浆中循环的P-选择素增加 50%,也反映出血小板活动度明显增高。血浆中循环的E-选择素显示出剂量依赖性增加100%,表明内皮细胞具有潜在活性。在用药第5天接受EPO的志愿者血小板计数增加在10%~20%之间。安慰剂组中仅在第1次采血几天后血小板计数略有增长。结论 促红素在提升人血红蛋白水平的同时可以明显增加血小板的活动度和内皮细胞的活性,从而使出凝血时间缩短。

    2003年03期 165-167+174页 [查看摘要][在线阅读][下载 280k]
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  • 新型佐剂及其与重组HBsAg结合物的理化性质的研究

    袁有成,易学瑞,祖萍,张宜俊

    目的 制备一种新型正电荷脂质体免疫佐剂,研究其粒径、稳定性,及其与重组乙肝表面抗原的结合率和结合物的稳定性。方法 合成DC胆固醇(DC-Chol),并采用薄膜法制备脂质体,电镜测其粒径。脂质体与HBsAg混合后高速离心,用 ELISA分别测定游离和结合的 HBsAg含量,计算HBsAg与脂质体的结合率。将 DC-Chol与HBsAg结合物免疫BALB/c小鼠,检测其抗体的滴度。结果 合成DC-Chol的产率为67%,C、H、N含量与理论含量相比,在测量误差范围内。脂质体平均粒径180mm,4℃放置10个月约产生15%的沉淀。结合物明显沉淀,上清清亮,结合率在 98%左右。初次免疫 3周脂质体组的IgG1的 A值是铝佐剂组的 6倍,IgG 2a是 14.9倍。结论本法制备的脂质体粒径小,稳定性好,与HBsAg结合率高,能有效地促进体液免疫和细胞免疫,为制备新型乙肝疫苗打下基础。

    2003年03期 168-171页 [查看摘要][在线阅读][下载 427k]
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  • 表达重组人白细胞介素11的毕赤酵母两种培养方式比较

    孙瑛,李辉,田方曦,钟文韬

    目的 将表达重组人白细胞介素11(rhIL-11)的毕赤酵母,分别进行常规的补料分批培养和连续培养,以获得一种高蛋白产率及低蛋白降解的培养方式。方法 两种培养方式均在10L的发酵罐中进行,常规的补料分批培养方式历时3~4d,连续培养方式则是在前者的基础上,以D=0.05/h的稀释率进入连续培养阶段,整个过程历时约20d。发酵过程取样测菌体A_(600)及SDS-PAGE分析。结果 连续培养方式rhIL-11蛋白的产出率约为常规补料分批培养方式的1.5倍。在发酵过程中,常规补料分批培养方式在第2天就出现了降解,而连续培养方式则在第17天才出现。结论 连续培养方式对rhIL-11生产具有较大的使用前景。

    2003年03期 172-174页 [查看摘要][在线阅读][下载 354k]
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  • 应用高效液相色谱法定量检测重组人干扰素α1b

    吴美英,曹艳,孙俭波

    目的 寻找一种快速检测重组人干扰素α1b含量的方法。方法 采用美国Waters 600型高效液相色谱仪,选用Protein-Pak125 7.8mm×300mm柱,以25mmol/L pH7.0磷酸缓冲液为流动相,流速为1ml/min,检测吸收波长为280nm,以外标法按峰面积计算回收率。结果 平均回收率为95%,s=2.9%。结论 高效液相色谱法可以用于检测重组人干扰素α1b的含量,而且灵敏度高,结果准确。

    2003年03期 175-176页 [查看摘要][在线阅读][下载 110k]
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  • 胸腺肽纯化工艺的改进

    李光谱,迟春萍,张秀霞,关晓峰,王志武,盛军,郭岩

    目的 建立高效、快速、简便的纯化胸腺肽方法,以便提高胸腺素α1含量及活性,减少过敏反应。方法 采用 DEAE Sepharose FF、CM-Sephrose两种串联柱层析纯化。结果 纯化后的胸腺肽电泳结果出现明显的胸腺素α1带、玫瑰花结率可达33%(绝对值)以上,相对分子质量明显在3 100左右,无过敏反应。结论 建立了高效、规模化的胸腺肽纯化方法,提高了胸腺肽质量。

    2003年03期 177-189页 [查看摘要][在线阅读][下载 212k]
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  • 冻干重组乙型肝炎疫苗国家参考品的制备及标定

    胡忠玉,梁争论,李津,星海,张弛,钟熙,朱征宇,唐巧英,张华远,赵铠,李河民

    目的 制备1批冻干参考品,用于体外相对效力测定准确评价重组(啤酒酵母)乙肝疫苗的生物学活性。方法 疫苗原液中分别加入5%和1%的蔗糖和明胶作为保护剂,制成冻干参考品。检测各项质量指标并观察其稳定性,并以Merck公司的参考品为标准,以ELA法协作标定其体外相对效力。结果 各项质量指标均符合现行规程要求,体外相对效力保持稳定,分装量准确,原液蛋白均值为24.72μg/ml,相应液体疫苗蛋白均值为12.27μg/ml。并经3家实验室协作标定,24次检定结果合并计算相对效力为0.993。结论 该冻干参考品可用作重组啤酒酵母乙肝疫苗效力检定的质控参考品,该批参考HBsAg含量定为11.0μg/ml。

    2003年03期 178-180页 [查看摘要][在线阅读][下载 220k]
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  • 卡介菌多糖核酸相对分子质量分布及其热稳定性

    栗克喜,罗丽,谢姗姗,黄凤琼,冯晓虎,刘波,林晓军,王叔桥,晏子厚

    目的 测定卡介菌多糖核酸相对分子质量分布,并观察其热稳定性。方法 采用高效液相分子筛凝胶色谱法测定相对分子质量,并用煮沸或高压强热处理。结果 用该法测定卡介菌多糖核酸相对分子质量分布,有2个色谱峰,第1峰峰值相对分子质量为783 000,第 2峰为 3 200,面积分别为 21%和 79%。热处理后,其第 1峰相对分子质量大约有8%解聚合成第2峰。结论 卡介菌多糖核酸相对分子质量分布集中在3200,约占80%,对热较为稳定。

    2003年03期 181-182+194页 [查看摘要][在线阅读][下载 195k]
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  • 丙型肝炎病毒和人类免疫缺陷病毒核酸扩增荧光检测试剂盒在血液筛查中的敏感性

    朱文斯,张克强,罗光弼,高小博

    目的 评价深圳匹基公司开发的HCV和HIV核酸扩增(PCR)荧光检测试剂盒在血液筛查中的灵敏度和检测极限。方法 以阴性血浆梯度稀释WHO的HCV及HIV标准品,病毒稀释液滴度分别为200、100、50、25和0 IU/ml,每个满度平行做24个重复,利用该试剂盒及检测方案测定各滴度的 HCV和 HIV的24个重复的检出例数和阳性率(检测阳性例数/总重复数)。结果 滴度≥50IU/ml的HCV检出率为100%(24/24),而25IU/ml为75%(18/24)。滴度≥100IU/ml的HIV检出率为100%(24/24),50IU/ml为92%(22/24)。结论 匹基公司开发的HCV和HIV核酸扩增荧光检测试剂盒在特异性和灵敏度方面已经达到核酸检测(Nucleic Acid Test,NAT)的要求,基本达到国际同类试剂的检测水平。

    2003年03期 183-184页 [查看摘要][在线阅读][下载 143k]
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  • 口蹄疫新型疫苗的研究进展

    张洪勇,金宁一

    <正> 口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起偶碗动物一种急性、高度接触性传染病。本病传播迅速,感染率高。近几年,FMD在亚洲国家及英、法等欧洲国家(包括一些原来宣布

    2003年03期 185-187页 [查看摘要][在线阅读][下载 246k]
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  • 欧盟、日本和美国对体外诊断用品的注册管理情况介绍

    张丽

    <正> 《中华人民共和国药品管理法》中明确规定体外诊断试剂为药品,但体外诊断试剂与治疗和预防用药品相比有其特殊性,在产品注册、上市后管理、使用说明书、包装标签等方面都不同于治疗用药品。

    2003年03期 188-189页 [查看摘要][在线阅读][下载 154k]
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  • WHO召开修订天花疫苗规程研讨会

    雷殿良,赵凯

    <正> 世界卫生组织于2002年5月2~3日在日内瓦总部召开了“天花疫苗生产和检定规程修订研讨会”。参加会议的有来自欧洲EMEA、美国FDA和CDC、英国NIBSC、俄国生物制品标准化研究所、比利

    2003年03期 190-191页 [查看摘要][在线阅读][下载 190k]
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  • 应采用细胞培养法取代动物试验法检定狂犬病疫苗

    严家新,祝玉桃,徐葛林,黄仕和,方志正

    <正> 在《中国生物制品规程》2000年版中,规定的狂犬病疫苗的多项检定均采用小鼠实验,如病毒滴定、病毒灭活确证试验以及疫苗效力测定等。

    2003年03期 192-194页 [查看摘要][在线阅读][下载 264k]
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