中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

  • 中国人丙型肝炎病毒全长NS3基因的克隆、序列分析及表达

    王尊文,祁自柏,谷金莲,于洋,杨振,张华远,李河民

    目的 为改进HCV试剂的质量克隆 1b型丙型肝炎病毒 (HCV)全长NS3基因并在原核细胞中表达。方法 用RT PCR方法从中国人血清中扩增全长NS3片段 ,进行序列分析 ,并克隆到pET3 0a(+)原核表达载体中 ,构建的原核表达载体pET NS3 180 0在大肠杆菌BL2 1(DE3 )中表达 ,用Westernblot方法进行验证。结果 扩增到 1b型HCV全长NS3片段 ,经Westernblot实验表明该片段具有抗原活性。结论 构建的质粒可在大肠杆菌中表达完整的NS3蛋白

    2003年02期 65-67页 [查看摘要][在线阅读][下载 41k]
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  • EGF-PE35KDEL重组毒素的基因构建及表达

    李树民,李丽萍,岳玉环,李铁征,邱业峰,朱平

    目的 构建表达有特异细胞毒性融合蛋白的工程质粒。方法 利用PCR扩增出PE3 5KDEL基因片段 ,经酶切后插入EGF PET2 8A载体 ,并转化至BL2 1(DE3 )中。采用Westernblot对重组毒素进行鉴定。结果EGF PE3 5KDEL重组毒素占菌体总蛋白的 2 0 % ,分子量约为 410 0 0。结论 EGF PE3 5KDEL的成功构建和表达为开发靶向抗癌药物奠定了基础

    2003年02期 68-70页 [查看摘要][在线阅读][下载 46k]
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  • 表达HIV-1结构蛋白靶细胞的制备及鉴定

    江文正,金宁一

    2003年02期 70页 [查看摘要][在线阅读][下载 11k]
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  • 人铜锌超氧化物歧化酶(hCu,Zn-SOD)基因在马铃薯中的表达

    刘晓鹏,姜宁,余伯胜,向常青,袁勤生

    目的 构建转基因马铃薯植株 ,以便大规模生产人铜锌超氧化物歧化酶 (hCu ,Zn SOD)。方法 采用RT PCR技术从人肝总RNA中分离扩增了hCu Zn SOD基因 ,并将其重组到植物表达载体pPSCuSOD中 ,用三亲交配法将重组质粒pPSCuSOD转化到农杆菌LBA44 0 4,再用农杆菌介导转化马铃薯。结果 经PCR和PCR Southern分析证明hCu Zn SOD基因已整合到马铃薯基因组中。Westernblot分析证明 ,hCu Zn SOD基因已在马铃薯植株中得到表达。NBT光还原法检测转基因马铃薯块茎中的SOD总酶活性为 192 0U g .FW。结论 已成功地构建了转基因马铃薯植株

    2003年02期 71-74页 [查看摘要][在线阅读][下载 54k]
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  • 人乙酰胆碱酯酶(AchE)cDNA克隆及真核表达载体的构建

    马兴元,谭建华,李阳芳,万忠海,朱平,姜力,孙曼霁

    目的 克隆人乙酰胆碱酯酶 (AchE)cDNA并构建真核表达载体。方法 根据GeneBank中hAchE核苷酸序列 ,设计并合成 1对特异性扩增hAchE的引物 ,从 18周龄引产的胎儿大脑组织中提取RNA为模板 ,利用RT PCR技术扩增出hAchEcDNA片段 ,并与pGEM T载体连接 ,转化大肠杆菌DH5α中 ,经IPTG X gal诱导培养 ,筛选白斑提取重组载体 ,经酶切和PCR鉴定及序列测定与分析 ,并构建hAchE真核表达载体pcDNA3 .1(+) hAchE。结果 已克隆的hAchEcDNA片段全长约 1.9kb ,其测序结果与基因文库中的人乙酰胆碱酯酶cDNA序列相符。结论 在国内首次利用RT PCR成功地克隆了hAchEcDNA全长 ,并构建了hAchE真核表达载体pcDNA3 .1(+) hAchE ,为进行hAchE的结构与相关功能研究和基因工程生产奠定了基础。

    2003年02期 75-78页 [查看摘要][在线阅读][下载 57k]
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  • ActRⅡA在小鼠巨噬细胞中的表达

    劳凤学,柳忠辉,张学军,于春雷,徐桂月,李一

    目的 克隆、表达重组融合蛋白ActRⅡA的C末端肽 ,制备抗ActRⅡAC末端抗体 ,并检测其在小鼠巨噬细胞中的表达。方法 构建GST ActRⅡAC末端蛋白表达质粒 ,经SDS PAGE分析表达蛋白。以GST ActRⅡAC末端蛋白为抗原免疫家兔制备抗ActRⅡAC抗体 ,采用免疫细胞化学染色技术观察ActRⅡA在巨噬细胞的分布。结果 克隆得到的ActRⅡAC末端cDNA ,经DNA测序证实所克隆的cDNA与GenBank收录的ActRⅡAC末端基因序列完全相符。SDS PAGE分析表达的GST ActRⅡAC蛋白相对分子质量约为 3 70 0 0。采用亲和层析纯化的抗ActRⅡAC末端抗体进行免疫细胞化学染色显示 ,ActRⅡA在小鼠巨噬细胞中高水平表达。结论 已成功地构建了ActRⅡAC末端表达质粒 ,制备了抗ActRⅡAC末端抗体并证实小鼠巨噬细胞表面存在ActRⅡA。

    2003年02期 79-81页 [查看摘要][在线阅读][下载 44k]
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  • 中国部分地区甲型肝炎病毒基因型分析

    刘国栋,胡凝珠,梁燕,瞿素,施海晶,邵聪文,胡云章

    目的 分析中国部分地区甲型肝炎病毒 (HepatitisAvirus,HAV)的基因型。方法 采自辽宁 (LN1、LN2、LN3 )、上海 (Lu3 8)和云南 (YN)甲型肝炎病人的粪便标本共 5份 ,从中分离纯化HAV并提取病毒RNA ,以逆转录 半嵌套聚合酶链式反应 (RT hnPCR)合成VP1 2A交接区及VP1氨基端 ,经克隆筛选后进行测序分析。结果 所分离到的 5株HAV野毒株VP1 2A交接区 168个核苷酸 (nt)的片段与IB亚型的野毒株HM175比较 ,核苷酸差异 >7.5 % ;与IA亚型的日本野毒株AH1、AH2、AH3、FH1、FH2和FH3比较差异 <7.5 % ,因而均属IA基因亚型。但与IB亚型的野毒株MBB比较 ,LN1、LN3和Lu3 8在该区域的核苷酸差异 <7.5 %。进一步将LN1的VP1 2A交接区 3 3 9nt的片段、LN3和Lu3 8的VP1氨基端的核苷酸序列与MBB进行比较 ,核苷酸差异 >7.5 % ,表明这 3株HAV仍属IA基因亚型。结论 所分离到的HAV野毒株LN1、LN2、LN3、Lu3 8和YN均属IA基因亚型

    2003年02期 82-86页 [查看摘要][在线阅读][下载 57k]
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  • 胸腺五肽固相合成及免疫增强作用的研究

    张春莉,刘照惠,王妍,石玉华,霍洪霞,李惟

    目的 合成有生物活性的胸腺五肽并研究其免疫增强作用。方法 用Fmoc固相肽合成法合成胸腺五肽 ,用E玫瑰花实验检测生物活性。合成的胸腺五肽经小鼠腹腔注射后进行淋巴细胞转化实验、溶血空斑实验及IL 2活性实验 ,研究其免疫增强作用。结果 合成 2批胸腺五肽 ,精肽产量分别为 2 7mg和 3 4mg ,具有生物活性 ,实验组动物脾淋巴细胞的转化率、空斑形成细胞及IL 2活性皆明显高于空白对照组。结论 用Fmoc固相肽合成法可以成功地合成有生物活性的胸腺五肽 ,且具有免疫增强作用。

    2003年02期 87-89页 [查看摘要][在线阅读][下载 30k]
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  • P-糖蛋白基因疫苗的构建与鉴定

    胡艳萍,王英丽,刘力华

    目的 制备P 糖蛋白基因疫苗。方法 利用PCR方法扩增编码人类P 糖蛋白多药耐药基因序列胞外区约 1kb片段 ,与真核表达载体pcDNA3进行定向重组 ,限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切反应及测序鉴定该重组基因疫苗 ,磷酸钙共沉淀法转染人类K5 62红白血病细胞 ,经G418筛选后 ,免疫组化分析该重组基因疫苗表达产物的抗原特异性。结果 构建了pcDNA3 MDR1重组基因疫苗。限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切分别显示 5 .4kb的载体片段及约 1kb的插入序列 ,测序 948个碱基中除 2个碱基突变外均与原序列排列相符。免疫组化方法证实细胞膜表面MDR1约 1kb片段的表达产物可被抗Pgp抗体识别。结论 构建的pcDNA3 MDR1重组基因疫苗可被市售的Pgp抗体特异性识别 ,具有Pgp抗原特异性

    2003年02期 90-92页 [查看摘要][在线阅读][下载 44k]
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  • C50株抗CEA杂交瘤细胞抗体生成动力学及体外培养条件的优化

    王祥斌,孔健

    目的 研究C5 0株抗CEA杂交瘤细胞的抗体生成动力学 ,确定优化体外培养条件。方法 体外静态培养C5 0细胞 ,采用ELISA和细胞计数的方法检测培养上清抗体浓度和细胞数量 ,分析细胞生长与抗体分泌的关联性。采用体内复壮和添加新型免疫增强剂CpGODN的方法 ,尝试恢复长期体外培养的C5 0细胞的抗体生成能力。结果 C5 0细胞的抗体生成动力学为非生长关联型 ,经过体内复壮 ,C5 0细胞体外培养上清中抗体浓度显著提高 ,但活细胞密度或细胞活力均未发生明显变化。在培养基中添加一定浓度的CpGODN ,可以恢复长期体外培养的C5 0细胞的抗体生成能力。结论 根据细胞的抗体生成动力学特征 ,通过调节细胞的生长状态 ,可提高上清抗体浓度。根据抗体基因的组织特异性表达的机制 ,通过优化杂交瘤细胞的体外培养条件 ,能保持细胞正常的抗体生成能力 ,维持细胞高且稳定的上清抗体浓度

    2003年02期 93-96页 [查看摘要][在线阅读][下载 51k]
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  • 去氧胆酸钠裂解流感病毒的效果研究

    戚凤春,王敏文,薄洪,郭桥,范宇红,王志刚,张玉辉,阎长太,盛军

    目的 研究去氧胆酸钠对流感病毒最佳的裂解条件。方法 流感病毒在不同浓度的去氧胆酸钠作用一定时间后 ,经蔗糖梯度密度离心纯化 ,制备出流感裂解疫苗样品。以电镜观察病毒裂解情况和血液凝集反应 ,测定病毒效价作为评价指标 ,确定最佳裂解条件。结果 裂解纯化后的样品经电镜、SDS PAGE检测表明病毒颗粒完全裂解 ,裂解后的血凝效价收率约为 80 %。结论  0 .8%的去氧胆酸钠作用 12 0min可使流感病毒达到最佳裂解效果。

    2003年02期 97-99页 [查看摘要][在线阅读][下载 45k]
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  • 国产梅毒ELISA试剂(双抗原夹心)在血液筛查中的初步应用

    张健,李雪丽,黄守民,邓爱玲

    2003年02期 99页 [查看摘要][在线阅读][下载 10k]
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  • 表达酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)工程菌的培养及aFGF的纯化

    冯秀萍,杨洪存,曲红艳,李效堃

    目的 从大肠杆菌中大规模纯化aFGF。方法 建立aFGF发酵和纯化工艺 ,连续大量纯化 9批 ,并对纯品进行全面鉴定。结果 建立了稳定的发酵和纯化工艺流程 ,采用IPTG诱导表达的haFGF ,其表达量为2 0 8mg L ,经离子交换及肝素亲合层析后得到的aFGF纯品 ,SDS PAGE纯度达 98.8%。比活性为 2 .5× 10 5U mg ,所有检测指标均符合 2 0 0 0版《中国生物制品规程》 ,适宜产业化生产。结论 成功纯化符合规程要求的aFGF纯品。

    2003年02期 100-101页 [查看摘要][在线阅读][下载 22k]
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  • 医用生物陶瓷粉末β-TCP制备工艺探讨

    樊东辉,徐政,闫玉华,陈晓明,李世普

    目的 探讨医用生物陶瓷粉末Ca3(PO4) 2 (β TCP)的制备工艺。 方法 分别利用干磨法、湿磨法及沉淀反应法 3种不同的工艺制备了 β TCP陶瓷粉末 ,分析了不同的制备工艺对产品性能的影响。 结果 通过沉淀法所制得的 β TCP粉末比表面积大 ,颗粒均匀 ,但产量小。干磨法因烧成温度太高 ,所得产品的降解性能会受到影响。湿磨法烧成温度低 ,颗粒均匀 ,其粉末平均粒径约 0 .64 μm ,具有良好的生物可降解特性。 结论 湿磨法是制备具有优良生物理化性能和生物降解性能的 β TCP粉末陶瓷的最佳工艺方法。

    2003年02期 102-103页 [查看摘要][在线阅读][下载 19k]
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  • 静注丙球激活补体活性测定方法的建立

    王箐舟,程雅琴

    目的 建立静注丙球 (IVIG)激活补体活性的测定方法 ,并对国内不同工艺生产的IVIG制品Fc段的生物学功能进行分析。方法 采用补体经典激活途径激活补体的方法。结果 应用该方法检测不同工艺生产的制品活性均有差别。该方法操作简便 ,重复性好。结论 将检测Fc段的生物学活性列为IVIG常规检测质控指标是可行的

    2003年02期 104-105+107页 [查看摘要][在线阅读][下载 31k]
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  • 梅毒螺旋体优势表位抗原嵌合表达蛋白对国家参考品的反应性

    陈坤,张贺秋,宋晓国,王国华,朱翠侠,刘荷中,邱艳,凌世淦

    目的 采用含梅毒螺旋体 (Tp)不同优势表位抗原连接嵌合表达 ,筛选用于ELISA试剂检测梅毒抗体的多表位抗原。方法 筛选Tp优势抗原表位 ,进行不同的连接嵌合表达 ,用于ELISA试剂检测 3 0份国家参考品血清。结果 不同抗原组合连接 (Tp15 47、Tp42 15 47、Tp17 42 15 47)对血清的反应性不同。结论 含有多个抗原表位的嵌合抗原 ,能提高检测灵敏度

    2003年02期 106-107页 [查看摘要][在线阅读][下载 22k]
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  • 丙型肝炎病毒抗体诊断试剂的质量检测

    于洋,周诚,祁自柏,张华远,李河民

    目的 了解丙型肝炎病毒 (HCV)抗体酶联免疫诊断试剂反应时间与灵敏度及特异性的关系。方法 用丙型肝炎病毒抗体酶联免疫诊断试剂对阴、阳性血清进行检测 ,在加入样品后的不同反应时间分别进行显色终止 ,波长 492nm下测A值。结果 加入样品后的反应时间影响丙型肝炎病毒抗体酶联免疫诊断试剂灵敏度 ,对特异性没有影响。加入样品后的 2 0~ 3 0min ,反应时间对灵敏度影响变化最大。结论 延长反应时间 ,可提高阳性样品特别是弱阳性样品的检出率 ,对阴性样品无明显影响。

    2003年02期 108-109页 [查看摘要][在线阅读][下载 22k]
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  • 应用化学发光法定量测定游离雌三醇

    郭兰英,刘均生,李振勇

    目的 以碱性磷酸酯为发光底物 ,应用化学发光法定量测定人血清中游离雌三醇。方法 采用碱性磷酸酶标记雌三醇 ,包被雌三醇单抗 ,以竞争抑制法为基础进行测定。结果 检测敏感度为 0 .1ng ml,检测范围为 0 .1~ 10 0ng ml,反应准确率在 90 %~ 110 % ,变异系数小于 10 % ,与RIA法测定的相关系数在 96.3 % ,与雌二醇、雌酮的交叉反应小于 0 .1%。结论 化学发光法定量测定雌三醇的灵敏度高 ,特异性强 ,稳定性好 ,具有广阔的应用前景

    2003年02期 110-112页 [查看摘要][在线阅读][下载 25k]
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  • 抗-HBs阳性患者检测HBV DNA和肝活检的临床意义

    李修范,徐丽,郑丽

    2003年02期 112页 [查看摘要][在线阅读][下载 8k]
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  • 甲型副伤寒杆菌鞭毛抗原酶联免疫方法的建立及初步应用

    彭志刚,田素娟,朱国珍,杨艳艳,王伟,谢媛媛

    目的 采用甲型副伤寒杆菌鞭毛抗原单克隆抗体 ,建立检测甲型副伤寒杆菌鞭毛抗原ELISA双抗体夹心法。方法 采用纯化的甲型副伤寒杆菌鞭毛抗原 ,制备 3株鞭毛抗原单克隆抗体细胞 (2C8、2E6和 5D7)。应用免疫印迹试验、交叉反应试验及表位分析进行特异性鉴定。结果  3株单抗细胞与甲型副伤寒杆菌鞭毛抗原及甲型副伤寒杆菌发生免疫反应 ,与伤寒、乙、丙型副伤寒杆菌及部分沙门氏菌、大肠杆菌无交叉反应。选用其中 2株单抗细胞建立了ELISA双抗体夹心法。检测 163份献血员和 65份发热待查患者血清标本均为阴性 ,15份血培养阳性的甲型副伤寒患者血清标本有 14份为阳性。结论 可直接用单克隆抗体进行检测 ,具有简便、快速等特点

    2003年02期 113-114页 [查看摘要][在线阅读][下载 23k]
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  • 不同代次毒种冻干风疹减毒活疫苗的临床反应及免疫原性观察

    陈海平,宋立志,杜桂芝,董春明,王长银,王文庆,郭绍红,迮文远

    目的 观察风疹BRDⅡ 3 0、3 1和 3 2代次毒种的免疫原性和反应原性。方法 选择风疹血清HI抗体阴性儿童 2 77名和女青年 141名 ,各随机分 3组 ,分别接种由 3 0、3 1和 3 2代毒种制备的风疹疫苗 ,观察接种反应及血清学效果。结果 儿童组的血清中HI抗体阳转率分别为 97.8%、98.9%和 98.9% ;GMT分别为 2 78.7、2 3 7.1和 2 92 .9,女青年组HI抗体阳转率分别为 94.8%、97.5 %和 10 0 .0 % ;GMT分别为 10 1.5、13 2 .9和 96.6。 3批疫苗间免后HI抗体阳转率和GMT差异无显著意义。结论 风疹毒种从 3 0~ 3 2代间的生物学特性是稳定的 ,均可用于疫苗的生产。

    2003年02期 115-116页 [查看摘要][在线阅读][下载 19k]
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  • 卡介苗加α-干扰素膀胱灌注预防膀胱癌术后复发的疗效

    史明,那万里

    目的 探讨卡介苗 (BCG)加α 干扰素 (α IFN)膀胱灌注预防膀胱癌术后复发的疗效。方法 对 66例经病理证实为膀胱癌的患者分为BCG组与BCG加α IFN组 ,分别进行疗效对比观察。结果 BCG组复发率为2 6.7% ,BCG加α IFN组复发率为 8.3 % ,两组比较差异有显著性意义 ,(χ2 =3 .96,P <0 .0 5 )。结论 BCG加α IFN联合用药能明显降低膀胱癌的复发率

    2003年02期 117-118页 [查看摘要][在线阅读][下载 16k]
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  • 重组人粒细胞集落刺激因子预防恶性肿瘤患者化疗期感染的效果

    董梅,肖艳

    目的 观察重组人粒细胞集落刺激因子预防恶性肿瘤患者化疗期感染的效果。方法 分析 67例(112例次 )小细胞肺癌、非小细胞肺癌和肠癌患者化疗期辅用或不辅用重组人粒细胞集落刺激因子的感染情况。结果  2组患者化疗期感染 40例次 (感染率 3 5 .7% ) ,其中非重组人粒细胞集落刺激因子组 (5 0 .0 % )是重组人粒细胞集落刺激因子组 (2 6.5 % )的近两倍 ,在不同性别、年龄和临床分期方面 ,重组人粒细胞集落刺激因子组患者感染率只有男性组明显低于非重组人粒细胞集落刺激因子组。但 2组感染后治疗效果差异无显著性意义。结论 重组人粒细胞集落刺激因子可明显减少恶性肿瘤患者化疗期感染的机会 ,从而使其所导致的死亡率降低。同时可缩短患者住院时间 ,减少住院费用 ,提高患者的生活质量

    2003年02期 119-120页 [查看摘要][在线阅读][下载 22k]
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  • 进口与国产流感疫苗接种反应及免疫效果比较

    唐伟,李峰光,王锋,高洪彩,刘传红

    目的 比较进口与国产流感疫苗接种后反应及效果。方法 在接种进口苗和国产苗的人群中 ,分别选出 2 2 0 0人进行反应观察 ,选出 9491人进行预防效果观察 ,选出 160人进行抗体水平监测。结果  2种疫苗接种后的反应率差异无显著意义 ,且均未见严重的异常反应 ,接种后的抗体水平、抗体阳转率、抗体保护率及预防效果差异均无显著意义 ,均有良好的免疫原性。结论 国产疫苗价格低廉 ,更易于大规模推广应用

    2003年02期 121-123页 [查看摘要][在线阅读][下载 36k]
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  • 新型亲和配体的筛选

    李世崇,陈昭烈

    2003年02期 124-125页 [查看摘要][在线阅读][下载 16k]
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  • WHO召开细胞基质安全问题工作组会议

    雷殿良

    2003年02期 126-127页 [查看摘要][在线阅读][下载 16k]
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  • 百日咳疫苗现状和发展方向

    杨晓明

    2003年02期 128-130页 [查看摘要][在线阅读][下载 30k]
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  • 《中国生物制品学杂志》第三届编辑委员会委员名单

    2003年02期 64页 [查看摘要][在线阅读][下载 9k]
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