中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

  • 汉坦病毒核蛋白基因截短片段在大肠杆菌中表达及其产物的初步应用

    祝晓春,姚智慧,贺争鸣,胡经畬,董关木,俞永新

    目的 获得汉坦病毒重组核蛋白 ,并将其应用于血清学诊断。方法 采用PCR方法 ,从带有HTN型Z10株病毒全长核蛋白基因的质粒上扩增读码框的前 35 4bp的核蛋白基因片段。将截短的核蛋白基因片段插入表达载体pGEX 2 0T ,得到重组质粒pGEX2 0 Z10trNP ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达 ,表达产物经Glu tathioneSepharose 4B柱纯化 ,并进行抗原性及抗原特异性检测。结果 pGEX2 0 Z10trBP表达产物是相对分子质量约为 4 0 0 0 0的谷光甘肽转移酶 (GST)融合蛋白GST Z10trNP。经Westernblot分析 ,GST Z10trNP具有良好的抗原性。用纯化GST Z10trNP为抗原 ,用ELISA间接法检测出血热病人血清、出血热疫苗免疫的家兔及小鼠血清 ,均能很好地区分阴性和阳性血清。结论 GST Z10trNP表达量高 ,易于纯化 ,并且具有良好的抗原性及抗原特异性 ,是一种安全、廉价的诊断抗原。

    2003年01期 1-4页 [查看摘要][在线阅读][下载 62k]
    [下载次数:31 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:2 ] |[阅读次数:2 ]
  • 汉坦病毒76-118株G2基因的克隆及其在甲基营养型酵母中的表达

    姚智慧,祝晓春,董关木,贺争鸣,俞永新

    目的 获得汉坦病毒囊膜蛋白G2体外表达产物。方法 应用RT -PCR方法扩增汉坦病毒 76 -118株M片段编码的G2蛋白基因 ,并将扩增产物分别插入pPIC9K和pHIL -S1载体 ,命名为pPIC9K -G2和pHIL -S1-G2 ,分别与酵母的α因子信号肽和PH0 1信号肽 3’端融合 ,处于醇氧化物酶 (AOX1)启动子下游。这 2个载体经线性化后分别转化甲基营养型酵母菌株GS115和SMD116 8,筛选后分别得到His+ Muts 转化子和His+ Mut+ 转化子 ,诱导表达后 ,用Dot ELISA检测。结果 Dot-ELISA检测为阳性。结论 成功地表达了汉坦病毒G2囊膜蛋白 ,为进一步研究其结构功能以及生物学特性奠定了良好基础。

    2003年01期 5-8页 [查看摘要][在线阅读][下载 47k]
    [下载次数:36 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:3 ] |[阅读次数:1 ]
  • 人白细胞介素18的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

    赵春艳,赵宝昌

    目的 在大肠杆菌中高效表达IL 18。方法 从人外周血中提取RNA ,用RT -PCR方法得到IL 18的cDNA ,双酶切将其插入pET 2 3(b) + 载体中 ,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性菌落 ,提取质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)中进行表达。结果 所获得人IL 18克隆 ,经测序与GenBank报道的完全一致。所表达的产物经SDS -PAGE显示在相对分子质量 2 0 0 0 0处出现一条特殊条带 ,与预期的分子量一致。结论 已成功获得了人IL 18克隆并在大肠杆菌中表达

    2003年01期 9-12页 [查看摘要][在线阅读][下载 61k]
    [下载次数:114 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:3 ] |[阅读次数:1 ]
  • 胸腺素α1的基因合成、表达及活性测定

    曹颖瑛,郑钦岳,姜远英,朱臻宇

    目的 合成胸腺素α1(Tα1)基因并在原核细胞中表达。方法 用半酶半化学合成并克隆Tα1基因 ,将该基因插入表达质粒pGEX 4T 1并在大肠杆菌进行表达 ,对表达的融合蛋白GST Tα1利用亲和层析法纯化 ,再经Thrombin酶切后 ,获得重组Tα1进行生物学活性检测。结果 经测序证实合成的Tα1序列与设计的一致。构建的重组表达载体pGEX 4T 1 Tα1在大肠杆菌中得到高效表达。E玫瑰花结形成试验证明重组Tα1具有生物学活性。结论 合成的Tα1基因在大肠杆菌中表达出具有生物活性的蛋白。

    2003年01期 13-15页 [查看摘要][在线阅读][下载 33k]
    [下载次数:117 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:9 ] |[阅读次数:1 ]
  • 可溶性重组蛋白EGF-Ang构建及体外细胞毒性检测

    岳玉环,朱平,李丽萍,吴广谋,李铁征,何畅

    目的 构建人源化的免疫融合蛋白 ,以期获得具有较低免疫原性的靶向治疗药物。方法 利用基因工程技术将人表皮生长因子 (EGF)和人血管生成素 (Ang)基因连接起来 ,克隆到高效表达载体pET2 0b(+)中 ,构建重组表达质粒pET2 0 EA ,并在大肠杆菌中表达该融合蛋白 (EGF Ang)。用MTT法检测可溶性蛋白的细胞毒性作用。结果 经SDS PAGE和薄层扫描分析表明 ,外源蛋白表达量占菌体裂解蛋白总量的 6 .4 %。细胞活性检测表明EGF Ang重组蛋白在体外对过度表达EGFR的Hep2 和SP2 / 0细胞具有明显杀伤作用。结论 人源化免疫融合蛋白EGF Ang的构建为进一步研制具有较低免疫原性的靶向抗癌药物奠定了基础

    2003年01期 16-18页 [查看摘要][在线阅读][下载 46k]
    [下载次数:56 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:1 ]
  • 生长抑素基因在大肠杆菌pThioHis表达系统中的克隆与表达

    刘永庆,潘杰彦,陈溥言,杜念兴,赵国屏,褚仲海,邓芳,杨胜利

    目的 在大肠杆菌表达系统中高效表达生长抑素 (SS)基因。方法 以天然SS的氨基酸和基因序列为标准 ,将大肠杆菌使用频率较低的密码子分别更换成了使用频率较高的密码子 ,在SS基因的两端加上了合适的酶切位点 ,头部 :KpnI和NcoI;尾部 :PstI(这一酶切位点可与NsiI的切口互补 )。克隆至pThioHisA质粒的KpnI/PstI酶切位点后 ,再克隆至pThioHisA质粒的KpnI/NsiI酶切位点 ,使SS基因分别位于多克隆位点的尾部和前部。结果 重组质粒经酶切鉴定和基因序列测定证明 ,基因完全正确 ,在大肠杆菌TOP10中均得到较好的表达 ,IPTG诱导后 4h表达量基本达到最高 (37℃ ) ;在A60 0 0 .4~ 1.5之间用IPTG诱导均可获得到较好的表达 ,但以 0 .6左右为最佳诱导时机 ;在LB、TB和 2YT培养基中表达量依次为 :TB >LB >2YT ;表达的SS融合蛋白基本为水溶性的 ,具有良好的SS抗原性和免疫原性。结论 为基因工程SS大肠杆菌疫苗的研制奠定了基础

    2003年01期 19-23页 [查看摘要][在线阅读][下载 86k]
    [下载次数:114 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:9 ] |[阅读次数:1 ]
  • 重组毕赤酵母高密度发酵表达水蛭素过程中产物的生成和降解

    周祥山,周卫斌,范卫民,张元兴,董美玉

    目的 研究重组毕赤酵母高密度发酵表达水蛭素过程中产物的生成和降解。方法 通过质谱和氨基酸序列分析确定水蛭素的 4种活性异构体 ,再用HPLC监测发酵过程中水蛭素的降解情况。结果 发酵过程中产生了 4种具有较高比活的水蛭素异构体 ,它们分别是目的产物水蛭素Hir6 5及Hir6 5的C 末端降解 1~ 3个氨基酸的产物。发酵时细胞干重达到 16 2g/L ,水蛭素的总活性一直在增加 ,最高为 2 .4 5× 10 4ATU/ml,相当于总产量1.8g/L。但Hir6 5在 4种水蛭素异构体总量中的比例一直在下降。Hir6 5的产量先升高再降低 ,最高为 2 80mg/L。结论 毕赤酵母发酵过程中水蛭素存在降解 ,Hir6 5降解产生了Hir6 2和Hir6 3。

    2003年01期 24-27页 [查看摘要][在线阅读][下载 48k]
    [下载次数:245 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:16 ] |[阅读次数:1 ]
  • 甲肝和麻疹病毒混合感染人胚肺二倍体细胞病毒增殖动态及与细胞相互作用的研究

    赵亚力,赵晓青,孙姝,刘建华,潘丽娜,周捷,郑晓丽,岳丹

    目的 探讨甲肝病毒 (HAV)和麻疹病毒 (MV)混合感染人胚肺二倍体细胞 2BS株 (2BS)病毒增殖动态及病毒与细胞相互作用的关系 ,为制备甲肝 -麻疹二联活疫苗提供基础资料。方法 将HAV和MV先后感染2BS ,应用细胞病理学、亲和素 生物素系统免疫组化技术和电镜技术检测HAV和MV在 2BS内增殖动态及 2种病毒与细胞的相互关系 ,观察HAV和MV在细胞内的超微结构。结果 HAV和MV能在同一种细胞基质中增殖 ,也能在同一个细胞中增殖 ,但 2种病毒与细胞的相互作用明显不同。结论 HAV对MV的再感染似乎无明显干扰现象

    2003年01期 28-32页 [查看摘要][在线阅读][下载 119k]
    [下载次数:82 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:3 ] |[阅读次数:3 ]
  • 含preS2免疫表位乙型肝炎表面抗原DNA疫苗诱导小鼠的免疫应答

    丁永和,金立杰,陈万革,谷铁军,罗璇,邵华

    目的 探讨含preS2免疫表位基因质粒DNA疫苗诱导小鼠的免疫应答。方法 质粒转染COS 7细胞 ,用ELISA法测定瞬时表达产物。质粒经碱裂解法大量提取 ,Sepharose 4FF柱层析纯化后 ,直接肌肉注射免疫NIH小鼠。检测小鼠的体液免疫和细胞免疫应答效果。结果 preS2表位多肽和HBsAg高效表达。免疫小鼠血清中检测到高滴度的抗 HBs和抗 preS2。淋转刺激指数SI和IL 2活性 ,质粒DNA疫苗与单纯主蛋白疫苗免疫对照组比较 ,差异有显著意义。结论 含preS2免疫表位基因质粒DNA疫苗能诱导NIH小鼠产生较强的体液免疫和一定强度的细胞免疫应答

    2003年01期 33-35页 [查看摘要][在线阅读][下载 37k]
    [下载次数:34 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:3 ] |[阅读次数:2 ]
  • 甲肝麻疹二联活疫苗猴体安全性研究

    郭建军,孙姝

    目的 观察甲肝麻疹二联活疫苗 (简称HAM)的安全性。方法 选用 1.5~ 4 .5kg抗甲肝病毒抗体(HAVAb)及麻疹血凝抑制抗体 (MVH1Ab)皆阴性 ,SGPT正常的健康恒河猴 4 4只。麻疹嗜神经毒力试验分 3组 ,HAM及MV分别接种于 5只及 10只猴丘脑内 ,空白对照 4只 ;甲肝疫苗嗜肝毒力试验分 5组 ,HAM、HA和MV各分别接种于 5只猴的静脉内。进行SGPT、中枢神经 (CNS)和肝穿病理学检查 ,以及抗HAVAb和MVH1Ab测定。结果 第 1组所有实验猴及空白对照猴其临床观察均未发生由MV引起的神经症状 ,CNS组织学检查未见由MV引起的麻疹性脑脊髓的病变。第 2组全部猴均无SGPT异常升高和病毒性肝炎的病理改变。结论 该HAM与对照单价活疫苗相同 ,具有可靠的安全性

    2003年01期 36-38页 [查看摘要][在线阅读][下载 39k]
    [下载次数:23 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ] |[阅读次数:2 ]
  • 梅花鹿免疫细胞活性因子对乙醇型胃粘膜损伤模型鼠的保护作用

    张晓姝,常雅萍,于永利

    目的 观察梅花鹿免疫细胞活性因子 (SIAF)对小鼠乙醇型胃粘膜损伤的保护作用。方法 制备小鼠乙醇型胃粘膜损伤模型 ,测定溃疡指数 ,观察胃的出血情况 ,免疫组化染色检测胃粘膜EGFR的表达 ,用酶法测定血清中NO的含量。结果 SIAF组的溃疡指数、胃出血情况与模型组相比 ,差异均有显著意义。SIAF组小鼠损伤周围胃粘膜EGFR表达与模型组相比明显增强。该组小鼠血清NO含量与模型组相比也明显增高。结论 SIAF具有显著的保护此种胃粘膜损伤的作用

    2003年01期 39-41页 [查看摘要][在线阅读][下载 28k]
    [下载次数:85 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:10 ] |[阅读次数:3 ]
  • 河北省2000~2001年初免儿童白喉、破伤风和百日咳免疫水平监测

    梁勇,刘兰芬,柳絮婷

    2003年01期 41页 [查看摘要][在线阅读][下载 10k]
    [下载次数:14 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:1 ]
  • 海藻糖对重组人铜锌SOD酶的保护作用

    葛宇,刘玲,高俊杰,袁勤生

    目的 考察不同工艺处理过程中不同糖类对rhCuZn SOD活性的影响。方法 酶液与不同保护介质均匀混合后 ,研究冷藏、反复冻融、真空干燥、冷冻干燥和保存等工艺过程前后酶活性的变化。结果 与其他糖类相比 ,海藻糖具有最好的抗冷冻、抗脱水能力。保护作用与工艺过程具有一定的相关性。海藻糖的最适添加量为 5 %~ 10 % (w/v)。结论 为设计最佳的生物活性保护体系提供依据。

    2003年01期 42-45页 [查看摘要][在线阅读][下载 42k]
    [下载次数:212 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:18 ] |[阅读次数:1 ]
  • 两种鹿茸多肽生物学活性检测方法的比较

    翁樑,刘丹,刘永强,周秋丽,王本祥

    目的 采用两种方法检测鹿茸多肽生物活性 ,并进行两种方法优劣比较。方法 分别采用MTT比色法及3 H TdR掺入法检测多肽对NIH 3T3细胞增殖的影响。结果 这两种方法均能检出多肽促进NH3T3细胞增殖的作用 ,且具有相关性 ,与对照组相比 ,差异有显著意义。结论 MTT比色法简便、迅速 ,重复性较差。3 H TdR掺入法灵敏度高 ,但有放射性污染

    2003年01期 46-47页 [查看摘要][在线阅读][下载 19k]
    [下载次数:236 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:6 ] |[阅读次数:2 ]
  • 应用环糊精代替血清培养幽门螺杆菌

    陈翠萍,杨朝晖,蒋奕

    目的 应用环糊精代替培养基中的血清和血液衍生物培养幽门螺杆菌。方法 将同样菌量的细菌接种于 2种布氏培养基中 (分别含 0 .1%环糊精和 7%小牛血清 ) ,培养 3d和 6d后 ,分别检测其A值 ,计算细菌浓度。将取自患者的胃粘膜标本接种于上述培养基上 ,6d后观察其分离培养效果。结果 含 0 .1%环糊精培养基的细菌生长浓度略高于其他配方的培养基。 2 4个胃粘膜标本在 2种培养基上的分离效果完全相同。结论 用环糊精代替培养基中的血清和血液衍生物 ,能够用于从胃粘膜中分离培养和大量培养幽门螺杆菌

    2003年01期 48-49页 [查看摘要][在线阅读][下载 16k]
    [下载次数:84 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:12 ] |[阅读次数:1 ]
  • ELISA在梅毒检测中的价值

    李基,包军

    2003年01期 49页 [查看摘要][在线阅读][下载 9k]
    [下载次数:16 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ] |[阅读次数:2 ]
  • 喉癌组织中P53与微血管密度相关性

    周维国,赵丽波,成伟,杨占泉

    目的 探讨P5 3蛋白在喉癌中的表达及其与血管生成和转移的相关性。方法 通过免疫组化SP法检测 4 2份喉癌患者标本中P5 3蛋白表达及微血管密度 (microve -ssedensity ,MVD)。结果 喉癌组织中P5 3蛋白阳性表达率为 4 7 6 2 % ,MVD平均为 35 .79,标准差为 9.4 9。淋巴结转移的肿瘤中P5 3阳性表达及MVD明显高于非转移组 ,P5 3蛋白阳性表达标本中MVD值较高的现象多于有颈淋巴结转移的喉癌。结论 突变型P5 3基因的表达对喉癌肿瘤微血管生成及肿瘤颈淋巴结转移可能具有协同作用。

    2003年01期 50-52页 [查看摘要][在线阅读][下载 39k]
    [下载次数:21 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:1 ]
  • 双价纯化肾综合征出血热地鼠肾原代细胞疫苗的免疫效果

    董关木,韩亮,安祺,刘文雪,孔艳,杨立宏

    目的 考核双价肾综合征出血热地鼠肾原代细胞纯化疫苗 (汉滩型 +汉城型 )对人体的安全性及免疫原性。方法 分别选择南方和北方两个观察点 ,分别接种 5 18人和 6 5 0人 ,观察接种对象的副反应 ,并测定血清荧光抗体和中和抗体。结果 在观察中仅有 2人呈现度局部副反应 ,总反应率为 0 .5 0 %。IFA抗体阳转率为89.95 % ,ELISA抗体阳转率为 10 0 % ,GMT为 1735。中和抗体阳转率大于 87.38%。结论 该疫苗对人体安全 ,具有较好的免疫原性

    2003年01期 53-55页 [查看摘要][在线阅读][下载 29k]
    [下载次数:56 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:13 ] |[阅读次数:2 ]
  • 甲型肝炎减毒活疫苗加强免疫的效果

    马景臣,韩常全,丁月新,刘洪斌,张勇,张英林,汪萱怡,张玉伟,邢占春,赵卉,孟宗达,徐志一

    目的 观察国产甲肝减毒活疫苗不同免疫程序的加强免疫效果 ,以探求适宜的甲肝减毒活疫苗加强免疫程序。方法 在河北省正定县对 1~ 7岁的儿童采血检测抗 -HAV ,筛选甲肝易感者 ,按出生月份的单双数随机分为疫苗组和对照组 ,疫苗组接种 1针 ,观察免疫效果。在 1针法的基础上 ,随机抽取部分观察对象 ,分别按0、12月和 0、2、6月程序进行加强免疫 ,并于免疫后 1、2、3、6、7、12、13和 2 4个月采血清 ,观察免疫后的抗体动态。结果 接种 1针疫苗后 2~ 3个月抗体阳转率和几何平均效价均达高峰 ,分别为 92 .2 %~ 94 .9%和 12 6 .2~ 131.3mIU/ml,以后开始下降 ,12个月时降至 79.8%和 79.6mIU/ml。加强免疫后 ,抗体阳转率均达 10 0 % ,抗体水平成倍上升 ,其中以 0、12月程序免疫后抗体几何均值最高 ,为 32 94 .5mIU/ml。结论 甲型肝炎减毒疫苗具有良好的免疫记忆反应 ,采用 0、12月程序免疫效果更佳

    2003年01期 56-58页 [查看摘要][在线阅读][下载 30k]
    [下载次数:55 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:8 ] |[阅读次数:1 ]
  • 甲乙肝联合疫苗的研究进展

    史荔

    2003年01期 59-62页 [查看摘要][在线阅读][下载 42k]
    [下载次数:113 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:4 ] |[阅读次数:1 ]
  • CD40与CD40L研究

    张庶民

    2003年01期 63-64页 [查看摘要][在线阅读][下载 24k]
    [下载次数:160 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:5 ] |[阅读次数:1 ]
  • 疫苗开发的动向

    张延龄

    2003年01期 65-66页 [查看摘要][在线阅读][下载 15k]
    [下载次数:54 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:1 ]
  • 下载本期数据