中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

  • 人IL-10 cDNA克隆、表达及其生物学活性

    赵跃然,游力,高春义,冯进波,许晓群,田志刚

    目的 在大肠杆菌中表达重组人白细胞介素10(Human Interleukin,hIL-10)。方法 用RT-PCR自白血病细胞株K562 RNA扩增hIL-10 cDNA片段(约500bp),克隆至质粒载体pSK(+),并对克隆的DNA片段进行序列分析。用限制酶EcoRI和 BamHI消化pSK/IL-10重组质粒,分离hIL-10片段,并插入原核表达载体pBV220的相应限制酶位点,酶谱分析鉴定重组表达载体pBV/IL-10。转化菌株经42℃诱导,用SDS-PAGE和Westem blot鉴定表达的重组蛋白。表达的重组蛋白经谷胱甘肽复性缓冲液复性,用RT-PCR检测其对外周血单核细胞(PBMC)合成IFN-γ的抑制作用。结果 RT-PCR扩增的DNA片段与hIL-10 cDNA大小一致。重组质粒pSK/IL-10的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列与文献报道的hIL-10 cDNA序列一致。SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为18000,其表达量达菌体总蛋白的20%左右。Westem blot分析显示,重组蛋白能特异性地与抗hIL-10抗体结合,复性的重组蛋白能明显抑制PBMC合成IFN-γ。结论 已成功地构建了表达具有生物学活性的重组hIL-10(Recombinant hIL-10,rhIL-10)的工程菌株。

    2002年06期 321-324页 [查看摘要][在线阅读][下载 584k]
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  • 重组人Tau蛋白的表达、纯化及鉴定

    司少艳,郑燕华,李新元,张建中,杨晋德

    目的 重组人Tau蛋白的诱导表达和纯化。方法 将携带 Tau蛋白基因的工程菌株经IPTG诱导表达后,通过超声破碎、硫酸按盐析、离子交换层析、电洗脱等方法纯化Tau蛋白,以SDS-PAGE、非变性PAGE、Westem blot和N末端氨基酸测定等方法进行鉴定。结果 纯化Tau蛋白的得率为28.5%,在SDS-PAGE和非变性PAGE上呈均一的蛋白条带,其相对分子质量约为59000,N末端5个氨基酸测定结果为NH2-Met-Ala-Glu-Pro-Arg-。结论 本实验采用纯化重组人Tau蛋白方法是可行的。

    2002年06期 325-327页 [查看摘要][在线阅读][下载 473k]
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  • 人组织激肽释放酶基因的克隆及融合蛋白的表达

    石之嶙,李体远,杜珙,黄瑞芳,陈德珩,戴勇

    目的 开发激肽释放酶基因工程产品,为开展基因治疗高血压奠定基础。方法 采用RT-PCR的方法合成人胰腺 cDNA,从中扩增出Kallikrein(KK)基因。经 XhoI和EcoR I双酶切后,连接到pET-28b(+)载体上,酶切鉴定后,进行核苷酸序列分析和融合蛋白的表达。结果 将IPTG诱导表达的菌体进行SDS-PAGE电泳,与蛋白标准品比较,在相对分子质量31800处可见明显的高表达带。免疫印迹实验表明重组蛋白具有KK的抗原性。结论 已成功克隆并表达了人胰腺组织激肽释放酶基因,为进一步开发基因工程产品及进行基因治疗高血压研究打下了基础。

    2002年06期 328-330页 [查看摘要][在线阅读][下载 476k]
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  • 抗HIV-1gp120单链抗体的原核表达与初步纯化

    金洪涛,金宁一,王宏伟,江文正,王宏

    目的 在原核细胞表达抗HIV-1gp120单链抗体基因,纯化后检测其活性。方法 将单链抗体基因插入pET28原核表达载体进行诱导表达,对包涵体进行变性复性处理后,利用Ni-NTA金属螯合层析柱对表达的蛋白进行初步纯化,纯化后的单链抗体与gp120标准抗原膜条反应。结果 表达产物主要以包涵体形式存在,最高表达量占菌体总蛋白量的51%,金属螯合层析一步纯化后纯度超过85%。纯化后的单链抗体可以特异地识别gp120标准抗原。结论 在原核细胞表达的单链抗体,复性纯化后具有生物学活性。

    2002年06期 331-333页 [查看摘要][在线阅读][下载 493k]
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  • 新城疫病毒F_(48)E_8株 HN基因在杆状病毒系统中表达

    李太元,殷震,金宁一,丁壮,王兴龙

    目的 采用新型杆状病毒表达系统(Bac to Bac系统)在昆虫细胞Sf-9中进行新城疫病毒F48 E8株HN基因表达。方法NDV F48 E8株 HN基因插入到转座载体 pFast Bac Ⅰ,构建重组转座载体 pFast HN,转化到感受态细胞 DH10后,将目的基因转座到穿梭载体Bacmid中,经筛选获得重组Bacmid HN转染到Sf-9昆虫细胞,并进行检测。结果 表达产物经SDS-PAGE、Westem blot检测获得蛋白特异带,相对分子质量约63000。结论NDVF48E8株HN基因能通过新型杆状病毒表达系统在昆虫细胞Sf-9中进行表达,表达量约为细胞总蛋白的10%。

    2002年06期 334-336页 [查看摘要][在线阅读][下载 383k]
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  • LHRH-PE40对荷瘤BALB/c小鼠抗肿瘤效果的实验研究

    李树民,李俊植,吴广谋,张国利,朱平

    目的 观察LHRH-PE40对小鼠腹水瘤及实体瘤的治疗效果,为确定药理、毒理学实验剂量提供依据。方法 分别给BALB/c小鼠腹腔内和背部皮下接种骨髓瘤SP2/0细胞,接种后第4d和第9d,分别腹腔注射LHRH-PE40,并设空白对照组,停药后第5d处死,观察两组小鼠腹水和腹腔内肿瘤生长情况,称量瘤重,计算抑瘤率。结果 腹水瘤实验组所有小鼠腹部未见腹水,腹腔未见肿瘤。实体瘤实验组抑瘤率为54%。结论LHRH-PE40可以有效地抑制荷瘤小鼠实体瘤的生长。

    2002年06期 337-339页 [查看摘要][在线阅读][下载 543k]
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  • 结核分支杆菌DNA疫苗抗结核作用的研究

    吴雪琼,李洪敏,史迎昌,张俊仙,张灵霞,梁建琴,金关甫,由昆

    目的 研究结核分支杆菌 MPT64、ESAT6和Ag85A DNA疫苗的抗结核作用。方法 用结核分支杆菌H37 Rv腹腔内注射BALB/c。小鼠2个月后,将小鼠随机分为8组,分别用生理盐水(A)、载体质粒(B)、卡介苗(C)、微卡菌苗(D)、MPT64 DNA疫苗(E)、ESAT6 DNA疫苗(F)、Ag85A DNA疫苗(G)和联合DNA疫苗(H)免疫小鼠,ELISA法检测血清抗体。免疫治疗2个月和5个月时,分别取肺、肝和脾脏观察病理改变并称取重量,作菌落计数、肺组织涂片及脾淋巴细胞转化试验。结果 各DNA疫苗组抗原特异性抗体均不同程度升高。免疫治疗2月时,各组鼠脾淋巴细胞转化率差异无显著意义,各治疗组肺组织涂片细菌数和肺菌落数均比对照组不同程度地减少,只有D组的肺菌落数和E组脾菌落数显著低于对照组,C、E和B组的肺病变指数较低。免疫治疗5个月时,各治疗组鼠脾淋巴细胞转化率均显著增高,各组肺、脾细菌数无显著差别,G和D组的肺未见明显病变。结论DNA疫苗具有一定的抗结核治疗作用。

    2002年06期 340-345页 [查看摘要][在线阅读][下载 523k]
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  • 缓释破伤风类毒素微球的制备及其免疫原性

    郝国荣,李群英,杨丽华,刘伟丰,刘志强,赵立萍,白新卿

    目的 用可生物降解缓释微球,单剂投递破伤风类毒毒。方法 用溶剂挥发法,将破伤风类毒素(TT)包入两种丙交酯-乙交酯共聚物制备成微球,用电镜观察微球的粒经与表面形态,用Bradford法及SDS-PAGE检测微球内蛋白含量及抗原结构的变化。TT微球免疫豚鼠后,观察抗体应答。结果 微球表面光滑,成球规律,两种微球平均粒径为8.4μm及9.7μm,包裹率为48%及56%,包裹后的TT结构未改变。TT微球免疫豚鼠后,1针诱导的抗TT-IgG及中和抗体滴度与3针铝吸附TT相似;TT微球免疫血清及铝吸附TT免疫血清与游离破伤风毒素有相似的结合特性。加强免疫后,TT微球的回忆应答优于铝佐剂疫苗。结论 可生物降解缓释微球单剂投递破伤风类毒素,可产生持续高的免疫应答。

    2002年06期 346-349页 [查看摘要][在线阅读][下载 654k]
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  • 人重组生长激素对豚鼠心室肌细胞动作电位钙通道的作用

    孟繁波,杨萍,赵林阳,周方君,辛暨华,许建春,谭艳华,邹洪霞

    目的 探讨人重组生长激素正性肌力作用的机制。方法 利用Langendorff模型以及膜片钳技术研究心肌细胞内向钙电流。结果 受到人重组生长激素作用10min后,动作电位平台期延长,APD50、APD90分别由261.14±15.42ms至354.65±31.22ms和311.23±13.7至401.33±18.13ms。最大内向峰电流(Ica)由 2.03±0.09升至2.85±0.11PA,增加约40%。结论 人重组生长激素延长动作电位平台期,促进正常豚鼠心肌细胞L-Ca2+通道开放。

    2002年06期 350-352页 [查看摘要][在线阅读][下载 174k]
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  • 6B型肺炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合疫苗的制备及其免疫原性

    栗克喜,谈宁芝,刘玉清,冯晓虎,蔡勤,王国钦,余文山

    目的 制备6B型肺炎球菌荚膜多糖(6B-PNCPS)-破伤风类毒素蛋白(TT)结合疫苗,并研究其免疫原性。方法6B-PNCPS用溴化氰活化后与己二酰肼形成多糖-酰肼基衍生物,然后在蛋白活化剂碳二亚胺作用下将6B-PNCPS与TT进行共价结合。分别将其结合物及多糖免疫NIH小鼠,用ELISA检测小鼠血清中抗6B-PNCPS抗体。结果6B-PNCPS-TT结合物经凝胶色谱分析显示具有较6B-PNCPS更大的相对分子质量,多糖/蛋白比为1.42-1.66。结合物具有6B-PNCPS的血清学特异性,所诱生的抗6B-PNCPS特异性IgG抗体滴度与6B-PNCPS差异有显著意义。结论 用该法制备6B-PNCPS-TT结合疫苗,具有良好的免疫原性。

    2002年06期 353-356页 [查看摘要][在线阅读][下载 246k]
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  • 重组人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(sTNFRⅡ)的纯化

    徐春晓,姚立红,祖东,黄国锦,严馨蕊,柴映爽,陈爱珺,张智清

    目的 从大肠杆菌破碎液中纯化可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ,获得能够中和TNF活性的受体蛋白。方法 菌体破碎液经热沉淀处理后,用金属鳌合层析柱纯化重组蛋白。并对蛋白的理化特性和生物学活性进行分析。结果 纯化的重组蛋白纯度大于95%,并且能中和TNF的生物学活性,抑制其对细胞的杀伤作用。结论该工艺能简便有效地纯化出TNF受体蛋白,为进一步深入研究奠定了基础。

    2002年06期 357-360页 [查看摘要][在线阅读][下载 632k]
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  • 他克莫司酶免检测试剂盒的质量分析

    秦进才,辛晓芳,薄淑英

    <正>他克莫司(Tacrolimus)是从放线菌Streptomyces tsukubaea-sis的代谢产物中提取的新型大环内酶类物质,比环孢菌素具有更强的免疫抑制作用,主要用于肝、肾和小肠等脏器移植中,抑制机体的排异反应,具有十分重要的临床实用价值。 由DiaSorin公司在美国明尼苏达州生产的他克莫司ELISA试剂盒,已在世界70多个国这有和地区销售使用。它主用于临床病例中他克莫司血液内药物浓度的监测,以指导该药物安全有效使用。该检测方法简便、快速、敏感、特异,并获得美国专利(1997,No.5650288)。

    2002年06期 360页 [查看摘要][在线阅读][下载 68k]
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  • 甲型肝炎减毒活疫苗冻干保护剂的研究

    李光谱,刘景晔,王鹏富,李淑焱,张喜珍,刘晶

    目的 研究冻干甲型肝炎减毒活疫苗的保护剂。方法 甲型肝炎病毒L-A-l株经2BX二倍体细胞培养,制备成甲型肝炎减毒活疫苗,再添加不同保护剂进行冷冻干燥。结果 以山梨醇、蔗糖、脂肪酸盐等为主的保护剂,对甲型肝炎减毒活苗病毒显示了较好的保护性,疫苗冻干前后感染滴度下降在1.0Log CCID50/ml以内,符合《中国生物制品规程》要求。结论 以山梨醇、蔗糖、脂肪酸盐等为主的保护剂是一种安全性较高、疫苗冻干效果较好,适合于疫苗规模化生产的保护剂。

    2002年06期 361-362页 [查看摘要][在线阅读][下载 127k]
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  • 治疗用卡介苗抗肿瘤动物实验方法的建立

    晏子厚,何菊,曹慧,杨永芳,徐永革,严东珍,秦若蜀,马昭明,孙卓,荣祖元

    目的 建立治疗用卡介苗在小鼠体内抗肿瘤的药效学实验方法。方法 观察治疗用卡介苗(BCG)对小鼠实体瘤S180和腹水瘤(EC)的抑瘤作用。结果BCG可明显减轻S180荷瘤鼠的瘤重,其瘤重抑制率>30%;可明显延长EC腹水瘤小鼠的生存时间,其生命延长率>75%。其中以12.5%和6.25mg/kg两剂量组的效果较佳。结论 该方法可用于卡介苗抗肿瘤动物药学实验。

    2002年06期 363-365页 [查看摘要][在线阅读][下载 183k]
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  • 人血白蛋白制品浊度与稳定性的分析

    肖林,郝杰,程雅琴,吕秀华

    目的 研究和确定浊度测定方法用于人血白蛋白的外观和热稳定性试验。方法 采用美国HACH公司2100N Turbidimeter测定人血白蛋白浊度值。结果 压滤法制备的产品的浊度及其热稳定性试验后的浊度增加百分比明显高于离心法。pH值和稳定剂不影响制品的浊度。结论 人血白蛋白浊度及浊度增加百分比可用于制品的外观和热稳定性试验。

    2002年06期 366-368页 [查看摘要][在线阅读][下载 305k]
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  • 纤维蛋白原对凝血酶活性测定的影响

    王坚,曹勤立,王丹君

    目的 探讨纤维蛋白原(FNG)试剂对冻干人凝血酶原复合物(PCC)中凝血酶活性测定的影响。方法5个批号的FNG按不同浓度稀释后,分别加入不同生产厂家、不同效价的凝血酶(TB),测定其凝固时间,同时分别按我国2000年版《暂行规程》、《欧洲药典》(EP)、《英国药典》(BP)中冻干人凝血酶原复合物(PCC)测定方法,对4批冻干PCC作凝血酶清性测定。结果 不同FNG对凝血酶活性测定的结果影响很大,且目前国内的FNG与EP、BP要求作为测定FNG试剂的标准差异很大。结论 凝血酶活性测定中必须采用专用FNG试剂。

    2002年06期 369-370页 [查看摘要][在线阅读][下载 111k]
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  • 应用HIV免疫阳转血清评价HIV抗体检测试剂的质量

    李秀华,宋爱京,孟淑芳,尹红章,李德富

    目的 应用免疫阳转血清对HIV抗体检测试剂质量进行评价。方法 采用HIV-1核心区p24、gp41、膜区gp120和全病毒抗原免疫家兔制备系列兔血清,评价国内外HIV抗体双抗原夹心法试剂的质量。结果免疫阳性血清可用于测定试剂对各不同区域抗体检测的能力。结论 对评价试剂盒敏感性有实际意义。

    2002年06期 371-373页 [查看摘要][在线阅读][下载 155k]
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  • 中国株HIV-1融合基因gag-gp120在大肠杆菌中的表达

    江文正,金宁一,金洪涛

    <正>艾滋病是目前人类最难控制、耗资最大的一类病毒性疾病,引起艾滋病的主要病原为HIV-1。GaP蛋白是HIV-1的主要结构蛋白之一,它在病毒的复制、成熟、感染和形态维持等方面均起着重要的作用,并能诱导机体产生体液免疫和细胞免疫。由于它在不同毒株间相对保守,因此,其诱导的抗体水平在临床上成为HIV感染的主要检测指标。Gp120蛋白是由HIV-1Env蛋白经剪切而形成的,在gp120上的C2区及其羧基末端等都与中和抗体的产生有关,因此,它已作为首选的HIV-1亚单位疫苗和重要的诊断试剂。在大肠杆菌中表达外源基因具有操作简便,成本低廉等优点。尽管有些表达的产物不能被忠实地翻译后加工,但可作为检测和诊断方面的研究。

    2002年06期 373页 [查看摘要][在线阅读][下载 68k]
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  • 应用核素显像方法评价~(89)SrCl_2和~(153)Sm-EDTMP治疗效果

    李勇,马铎,徐岩松,徐文贵

    目的 寻找准确、客观地评价核素治疗效果的方法。方法 采用99Tcm-MIBI和90Tcm-MDP显像方法检查72例经过89SrCl2和153Sm-EDTMP治疗后,影像改善的人数及疼痛改善的人数并进行比较。结果9mTc-MDP显像在治疗后第1、3、5、7个月改善的人数分别为14例、45例、56例、65例,与疼痛改善的人数差距较大,99Tcm-MIBI显像在第1、3、5、7个月改善的人数分别为49例、69例、71例、70例,与疼痛改善人数相符性较好。结论99Tcm-MIBI和99Tcm-MDP显像方法均可以客观评价同位素的治疗效果,但以99Tcm-MIBI显像的准确性高。

    2002年06期 374-375页 [查看摘要][在线阅读][下载 134k]
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  • 书讯

    <正>《生物制药的原理及方法·抗生素的制备》一书已在近日(2002.9.25)由中国科学文化出版社正式出版,该书由西北农林科技大学安德荣教授、博士生导师编著。 21纪是生物和电子科学的世纪,而生物科学的核心是生物技术和生物制药,该书在介绍一般生物制药原理及方法的基础上,系统地介绍了抗生素制备的理论和实践,以及有关微生物发酵工程的相关理论。全书共分15章,内容包括生物制药的基本概念及原理、微生物学导论、土壤微生物、细菌、放线菌、真菌、抗生素、拮抗菌的分离和培养、抗生素的筛选方法、抗生素的工业发酵和制备、抗生素的工业分离和提

    2002年06期 375页 [查看摘要][在线阅读][下载 75k]
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  • 肺癌患者GM-CSF、CEA联合检测及临床意义

    周海鸥,黄卫平,王明山

    目的 探讨联合检测血清、胸水中粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和癌胚抗原(CEA)对肺癌的诊断价值和临床意义。方法 利用放射免疫法检测32名健康人的血清及78名肺癌患者(其中腺癌28例,鳞癌27例,小细胞癌23例)血清和胸水中GM-CSF和CEA的含量。结果 肺癌各组血清GM-CSF均明显低于正常组,而各组之间血清与胸水的含量差异均无显著意义。血清中CEA含量各组均明显高于正常组,且腺癌组升高幅度最大,小细胞癌升高幅度最小,各组之间差异均有显著意义。胸水CEA含量各组变化与血清相似。血清和胸水GM-CSF的含量随临床症状的加重而逐渐降低。而CEA含量逐渐升高,相关性显著。结论 肺癌的病情严重程度不同,GM-CSF、CEA的含量也不同。检测GM-CSF、CEA对临床应用GM-CSF治疗肺癌具有指导作用。

    2002年06期 376-377页 [查看摘要][在线阅读][下载 116k]
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  • 我国狂犬病细胞疫苗的发展和存在问题

    俞永新

    <正>我国1980年前生产和使用的狂犬病疫苗是经石碳酸灭活的羊脑组织悬液的疫苗,接种后副反应大,特别是由脑组织引起的变态性脑脊髓炎副反应更为严重,同时免疫效果也不够满意。为解决这些问题,由武汉生物制品研究所牵头,中国药品生物制品检定所、长春、兰州生物制品研究所等单位合作,于1965年开始用北京株狂犬病固定毒株通过原代地鼠肾细胞适应传代,获得aG株适应株,研制成功一种原代地鼠肾细胞培养的狂犬病灭活疫苗。该疫苗是经福尔马林灭活加Al(OH)3佐剂制成,于1980

    2002年06期 378-380页 [查看摘要][在线阅读][下载 298k]
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  • 植物细胞悬浮培养

    王素芳,王志林,蒋琳兰,赵树进

    <正>植物细胞能合成许多具有重要价值的次级代谢产物,它们可作为农药、杀虫剂、调味剂及香精等。这些产物传统上是从天然植物中直接提取,但天然植物生长周期较长,而且生长还受地域和环境因素的限制,所以采用直接提取具有较大的局限性。化学合成法已用于多种产品的生产,但是有些物质不能通过化学法合成,或虽能合成,却比较困难。植物

    2002年06期 381-383页 [查看摘要][在线阅读][下载 277k]
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  • 《中国生物制品学杂志》2002年第15卷总目录

    2002年06期 384-385页 [查看摘要][在线阅读][下载 144k]
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