中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

  • CD25抗体轻链及重链可变区基因的克隆和序列分析

    左建民,王志友,张囡,张爱华,闭兰,陈明洁,陈敬,余模松

    目的 获得抗人CD25分子单抗的轻链及重链可变区基因,并进行序列分析。方法 采用RT- PCR,从WuTac细胞总RNA中扩增出轻链、重链可变区基因,进行克隆并作核苷酸序列分析。结果 构建的PMD18 -T-VL和PMD18-T-VH重组克隆载体,酶切与预期结果相符。VH和VL基因序列与鼠抗体的同源性大于 80%。克隆的重链可变区基因长度为351bp,属于鼠重链Ⅲ(C)亚类。轻链可变区基因长度为324bp,属于鼠轻链 Ⅳ 亚类。结论 本研究采用RT-PCT法扩增出轻链及重链可变区基因,并进行了序列测定和分析,为进一步构建嵌 合抗体以及单链抗体奠定了基础。

    2001年03期 129-131页 [查看摘要][在线阅读][下载 392k]
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  • 中国流行株HIV-1Gag蛋白在重组鸡痘病毒的表达及鉴定

    罗坤,金宁一,郭志儒,方厚华,郭焱,秦云龙,安汝国,邵一鸣,殷震

    目的 以鸡痘病毒为载体,表达HIV-1 Gag蛋白,进而研制AIDS疫苗。方法 以鸡痘病毒282E4株 非必需区TK基因为侧翼,插入VV突变型P7.5串联启动子和牛痘病毒A包涵体晚期启动子与20个串联的突变型 早期痘苗病毒P7.5启动子组成复合启动子及LacZ报告基因构建重组表达质粒pUTAL。在AT1-P7.5复合启动子 下游,插入编码中国流行株 HIV-1 Gag基因(B亚型),构建了重组表达质粒pUTAL-Gag。重组质粒Gag与FPV共 转染CEF细胞,进行同源重组。通过BUdR加压筛选,X-gal染色,获得重组鸡痘病毒vUTALG,用于感染BHK细胞 并免疫小鼠。结果 经Western blot检测,重组病毒表达了Gag蛋白相对分子质量分别为55000、48000、24000和 17000,为Gag蛋白的P55、P48、P24和P17蛋白。重组病毒免疫小鼠可诱导产生特异性抗体。结论 所重组的病毒 成功地表达了目的蛋白并进行了正确加工。

    2001年03期 132-135页 [查看摘要][在线阅读][下载 365k]
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  • 低pH病毒灭活工艺对抗人淋巴细胞免疫球蛋白质量的影响

    康光明,艾智武,邹莉,陶柳宏,王前喜,俞霖,李萍,吴克

    2001年03期 135页 [查看摘要][在线阅读][下载 58k]
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  • 人血管生成素基因的克隆与表达

    岳玉环,姜力,许崇波,李丽萍,朱平,朱冬冬,刘新

    目的 为了获得人的血管生成素基因,并在原核表达系统中进行表达。方法 利用RT-PCR技术 从人的肝脏组织中扩增出Ang基因片段,并将其克隆到pGEM-T载体中进行序列分析,再亚克隆到原核表达到 pET28a(+)载体中。结果 构建了重组表达载体pETA,转化宿主菌BL21(DE3)后,经IPIG诱导,Ang基因蛋白在 BL21(DE3)中表达了相对分子质量约为17000的重组蛋白。SDS-PAGE和薄层扫描分析表明,外源蛋白的表达量 占菌体蛋白总量的10.64%。结论 Ang基因的克隆与表达为进一步研究其生物活性及应用奠定了基础。

    2001年03期 136-138页 [查看摘要][在线阅读][下载 378k]
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  • 类胰岛素生长因子I(IGF-I)基因的克隆及融合蛋白的表达

    赵大鹏,王晓宇,刘畅,戚凤春,蒙冲,王影,王妍,盛君,杨煜,傅学奇

    目的 扩增类胰岛素生长因子I(IGF-I)210bp的DNA片段,将其克隆到PGEX-1 λT质粒,并转化到 E.coli NH522中高效表达。方法 用改进的RT-PCR法合成人肝脏cDNA,然后从该cDNA文库中扩增出IGF-I基 因。将扩增的IGF-I cDNA用 BamHI和EcoR I双酶切后,插入到同样双酶切处理的pGEX-1λT载体中,连接转化 E. coli NM522,筛选克隆,酶切鉴定后,进行了核苷酸序列分析及表达。结果 将IPTG诱导表达的菌体离心收集,经 SDS-PAGE分析,在相对分子质量34000处可见明显高表达带,表达量可占菌体蛋白总量的20%以上。免疫印迹表 明重组蛋白具有IGF-I的抗原性。结论 重组人IGF-I的成功克隆与表达,将为进一步研究人ICF-I的生物学特性 打下基础。

    2001年03期 139-142页 [查看摘要][在线阅读][下载 630k]
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  • 治疗用抗HFRS病毒单克隆抗体质量分析

    邹昌勇,雷继军,邬义安,杜厚明,喻远祥,杨明,赵良,赵亚杰,孙可芳

    2001年03期 142页 [查看摘要][在线阅读][下载 43k]
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  • 聚乙二醇改性聚乳酸幽门螺杆菌微球疫苗的制备与体外控释

    任建敏,王缚鲲,邹全明,彭承琳,王宁

    目的 应用聚乳酸与聚乙二醇共聚物(PELA)包裹Hp超声上清液,制备 Hp口服微球疫苗,探讨共 聚物PELA总相对分子质量r、PEG含量与不同相对分子质量PELA共聚物的相对分子质量分布(Mr/Mn)对微球疫 苗体外释药特性的影响。方法 采用复乳法溶剂挥发技术,制备Hp微球疫苗,用电子显微镜与扫描电镜观测微球 疫苗的粒径,用紫外光谱分光光度法测定抗原包裹效率与Hp抗原释放量,并在pH7.3、浓度为 0.01mol/L的PBS溶 液中作体外控释实验。结果 Hp微球疫苗抗原包裹效率在75%左右,平均粒径在51μm以下。若PEG量低于 10%,PELA组成对微球疫苗的粒径和抗原包裹效率影响不大。结论 Hp抗原体外释放量与 PELA中PEG的量和 相对分子质量、PELA的相对分子质量分布成正比,而与PELA的总相对分子质量成反比。

    2001年03期 143-145页 [查看摘要][在线阅读][下载 186k]
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  • 非O1群霍乱弧菌O139型荚膜多糖的制备及生物学特性

    李生迪,张萍,吴朝今,杜琳,王秉瑞

    目的 提取O139型霍乱弧菌荚膜多糖,并检测其理化特性及免疫原性。方法 采用Catavlon、冷 酚、不同浓度乙醇沉淀、离心等步骤精制O139霍乱弧菌荚膜多糖,用生物学、免疫学等方法分析检定。结果 提取 的霍乱O139型荚膜多糖具有良好的多糖特性、结构特征和免疫原性。结论 为组分疫苗的研制打下基础。

    2001年03期 146-148页 [查看摘要][在线阅读][下载 414k]
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  • 心房利钠多肽的规模化制备及活性分析

    戴宗祥,赵石,刘少林,戴长柏,陈必义,程志和

    目的 建立一种简便、有效的心房利钠多肽(atrial  natriureticpolypeptide,ANP)的规模化制备方法。 方法 以恒河猴心房为原料,采用匀浆、分级超滤制备m-ANP,用SDS-PAGE测定纯度和相对分子质量,用Wistar大 鼠检测生物学活性。结果 所制备的m-ANP相对分子质量主要分布在2000~6000,包含了ANP的主要活性成分。 具有降低血压,扩展血管和利钠利尿的生物学活性。结论 该工艺可用于规模化生产ANP。

    2001年03期 149-151页 [查看摘要][在线阅读][下载 377k]
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  • 《中国生物制品学杂志》将于明年改为双月刊

    2001年03期 151页 [查看摘要][在线阅读][下载 49k]
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  • 第一批重组人红细胞生成素国家标准品的研制

    程雅琴,周勇,王箐舟,刁勇,古卓良

    目的 建立符合国家标准品要求,用于重组人红细胞生成素(rHuEPO)质量控制的rHuEPO国家标 准品。方法 用英国 NIBSC提供的 WHO rHuEPO(87/684),采用经典的多血症小鼠-”Fe体内生物学活性测定法, 对我国第一批重组人红细胞生成素国家标准品(980528)进行了标定。用阿根廷INSTTTUTO SIDUS S.A.进行了复 核标定。结果 该批国家标准品效价为82IU/瓶,生物学活性稳定。结论980528批rHuEPO可作为国家标准品, 用于重组红细胞生成素制品体内生物学活性测定。

    2001年03期 152-153页 [查看摘要][在线阅读][下载 120k]
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  • CNTF工程菌培养及产物纯化

    马红雨,朱美才,蔡庆,占志

    目的 建立CNIF生产工艺,获得高产量的CNTF活性蛋白质。方法 通过摇瓶和发酵罐培养研究 了培养基成分、pH、诱导时间对工程菌 pBV220-CNTF/DH5Aα生成和表达的影响,并对表达产物进行纯化和生物学活 性检测。结果 应用正交试验确定了培养基成分配比为酵母粉10g/L,葡萄糖8g/L,MgSO40.5g/L,磷酸盐0.05mol/L, pH7.4时最有利于工程菌的生长及CNIT的表达。CNTT纯化后纯度达95%以上,并具有较高的生物学活性。结论 为CNTF的结构和功能的研究及临床应用打下基础。

    2001年03期 154-156页 [查看摘要][在线阅读][下载 375k]
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  • 肺炎球菌荚膜多糖的特性鉴定

    栗克喜,袁忠,谈宁芝,冯晓虎,谢姗姗,毛秀珍,蔡勤,刘波,杨耀

    目的 鉴定 23个型的肺炎球菌荚膜多糖并研究其特性。方法 按1997年版欧洲药典,对未作规 定的鉴定项目作了全面鉴定。结果9V和20型的O-乙酰基含量,11A、18C、20和23F型的糖醛酸含量以及7F型 的氨基己糖含量均较高,其他型及甲基戊糖含量则较低或未检出。用高压液相分子筛色谱检测各型多糖平均相对 分子质量显示出Kd值均较低。结论 对肺炎球菌荚膜多糖的特性进行了全面分析,并取得了完整的资料。

    2001年03期 157-158页 [查看摘要][在线阅读][下载 101k]
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  • 可生物降解微球甲型肝炎减毒活疫苗口服免疫恒河猴的免疫应答

    侯宗柳,龙润乡,谭顺革,金炜翔,李华,任丽虹,全文琦

    目的 探索用一种新型的甲型肝炎减毒活疫苗及其免疫途径。方法 用可生物降解的材料聚乳 酸/乙醇酸(PLA/PLG)包裹甲型肝炎减毒活疫苗,制成微球型疫苗,检测微球的大小及在体外病毒释放的状况,和口 服免疫恒河猴后病毒在体内繁殖及免疫应答状况。结果 微球大小在6~10μm范围,体外病毒抗原释放长达27d 左右,体外抗原释放高峰在3~7d,口服免疫恒河猴后,约1w左右开始排毒,以后一直呈间断排毒。抗体应答于第 3w出现,高峰期在5~6w,达1261MmIU/ml,随后逐渐下降,口服加强免疫后,抗体回升,野毒株攻击后,抗体再度回升 达1244mIU/ml。结论 微球型甲型肝炎减毒活疫苗口服免疫恒河猴后,能引起一定水平的免疫应答。

    2001年03期 159-161页 [查看摘要][在线阅读][下载 389k]
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  • 国产rhG-CSF不同给药次数对肺癌化疗所致白细胞减少的疗效比较

    石建华

    2001年03期 161页 [查看摘要][在线阅读][下载 74k]
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  • 乙肝病毒DNA疫苗诱导小鼠体液免疫应答

    刘丹,姚为民,王妍,刘丽军,翁梁,王志武

    目的 通过DNA疫苗诱生乙肝病毒表面抗原(HBsAg)特异性体液免疫应答。方法 将编码乙肝 病毒表面抗原的真核表达质粒免疫BALB/c小鼠,并分别于第1w、第3w后加强免疫1次,同时设对照组注射质粒 pcDNA3.1。第2次加强免疫3d后采血检测血清中 HBsAg和 HBsAb。结果 实验组2w时检测到HBsAb,2个月后达 到高峰。对照组未检测到 HBsAb。实验组和对照组始终均未检测到 HBsAg。结论 乙肝病毒 DNA疫苗能引起小 鼠特异性体液免疫应答。

    2001年03期 162-164页 [查看摘要][在线阅读][下载 355k]
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  • 麻疹乙脑二联活疫苗猴体神经毒力试验

    郎书惠,方捍华,岳广智,冯建平,王键峰,贾丽丽,俞永新,姚亚夫,李声友,周卫,刘启良,周容,王寿贵

    目的 观察麻疹乙脑二联活疫苗对猴体的安全性。方法 应用麻疹乙脑二联活疫苗注射恒河猴 脑内和脊髓,以麻疹和乙脑单价苗作对照,进行临床体征和组织病理学观察以及抗体测定。结果 全部试验猴临 床体征无异常反应,组织病理学检查联苗组大脑皮质和中脑黑质、颈髓仅见轻微炎症反应,病变均<5%,未见神经 细胞坏死现象。麻疹抗体应答较好,乙脑抗体有轻微的升高。结论 麻疹乙脑二联活疫苗的神经毒力与两种单价 苗比较未见增强。

    2001年03期 165-167页 [查看摘要][在线阅读][下载 584k]
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  • 甲型肝炎减毒活疫苗检定方法精确度的探讨

    汪萱怡,徐志一,田美英,陈启明

    目的 提高甲肝减毒活疫苗检定方法的精确度。方法 比较不同刑量组与剂量组不同的试验数,以 及采用点斜法与Reed-Muench法计算TCID50。结果 通过比较4种不同的试验设计,发现随着稀释倍数减小或/和各 稀释度试验管数增加,TCID50的标准误减小,以减小稀释倍数同时增加各稀释度试验管数,其标准误的缩小最为明显。 点斜法计算的ICID5095%可信区间较Reed-Muench法为窄。结论 减小稀释倍数同时增加各稀释度试验管数,并采 用点斜法计算TCID50,能使疫苗检定方法的精确度满足规范化甲肝活疫苗滴定的要求。

    2001年03期 168-170页 [查看摘要][在线阅读][下载 157k]
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  • 重组人干扰素-γ的复性方法在不同规模中的应用

    杨春涛,屠宗青,石玮,张一鸣,童葵塘

    目的 观察重组人干扰素-γ复性方法在不同规模中应用效果。方法 用高压匀浆法破碎工程菌, 提取包涵体,经变性剂溶解后快速稀释进行复性。结果 在实验研究、中试、扩大试制、试生产和大规模生产中,生 物活性恢复良好,纯度也有提高。结论 此种复性方法简单、快速,活性提高3.05~5.65倍。

    2001年03期 171-173页 [查看摘要][在线阅读][下载 162k]
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  • HEV部分ORF_2重组蛋白的纯化及其在酶标试剂中的初步应用

    王玉梅,刘彦彬,李秀芝,刘欣荣,蒙冲,刘畅,郭凤云

    目的 获得具有生物学活性的重组蛋白,用于制备抗-HEV酶标试剂盒。方法 将插入的含HEV 部分开放读码框2(ORF2)的重组菌扩大培养,诱导表达,纯化,鉴定,组装酶标试剂盒。结果 纯化的重组蛋白经 SDS-PAGE鉴定,在相对分子质量56000处有一明显的蛋白带,经CS-930薄层扫描纯度达95%以上,经免疫印迹 分析,具有良好的免疫学特异性。此HEV试剂盒,检测阳性病人血清样品阳性率为94.74%,检献血员血清样品阳 性率为5.43%。结论 该纯化的HEV部分ORF2重组蛋白组装的试剂盒特异性及敏感性均较好。

    2001年03期 174-175页 [查看摘要][在线阅读][下载 319k]
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  • 用高压液相色谱法测定静脉注射用人免疫球蛋白(pH4)中麦芽糖含量

    宋青

    目的 用高压液相色谱法测定静脉注射用人免疫球蛋白(pH4)中麦芽糖含量。方法 采用外标 法,将麦芽糖含量与其相应峰面积进行直线回归,建立标准曲线。样品经磺基水杨酸去蛋白处理后,取上清液进样 测定。将样品峰面积代入标准曲线,计算出麦芽糖含量。结果 标准曲线回归系数r≥0.9990;回收率为99.6%~ 102.6%;以含9.00%、10.00%和11.00%麦芽糖的制品重复测定6次,CV值分别为1.01%、1.15%和0.59%;对一 批制品进行日间重复性测定,CV值为0.6%。本方法相关性和重复性好,回收率高,操作简便。结论 可作为静脉 注射用人免疫球蛋白(pH4)中麦芽糖含量的常规检测方法。

    2001年03期 176-177页 [查看摘要][在线阅读][下载 89k]
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  • 检测人血白蛋白中铝含量的石墨炉原子吸收分光光度法的建立

    肖林,程雅琴

    目的 建立一种人血白蛋白铝含量的检测方法。方法 用石墨炉原子吸收分光光度法检测人血白 蛋白(HAS)中的铝含量,并对该方法进行分析。结果 检测限度达1ng/ml,检测精确度的CV值为7.62%,均达满意标 准。结论 该方法可检测出的铝含量符合WHO铝含量应≤200ng/ml的要求,可作为实验室常规的铝含量检测方法。

    2001年03期 178-180页 [查看摘要][在线阅读][下载 161k]
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  • 抗猪EPEC特异性抗体(IgG)的制备及应用

    张媛,刘彤,申海清,刘清河

    2001年03期 180页 [查看摘要][在线阅读][下载 56k]
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  • 促红细胞生成素在老年肿瘤化疗后合并贫血中的应用

    鲁向明,许腾

    目的 观察促红细胞生成素(rHuEPO)治疗老年肿瘤化疗后贫血患者的效果。方法26例老年肿 瘤化疗后合并贫血患者,采用rHuEPO2000IU皮下注射,每周 3次,4周为一疗程。结果 26例患者在 Hb、RBC、 HCT、RC均较前明显好转,生命体征较前更加稳定,血液粘度、生化、肝肾功能治疗前后无明显变化。结论 老年肿 瘤化疗后合并贫血的患者应用rHuEPO有一定疗效,并可减少输血的副作用。

    2001年03期 181-182页 [查看摘要][在线阅读][下载 91k]
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  • 流行性乙型脑炎活疫苗11年的流行病学效果

    周本立,张岷,陈品全,江秀坤,张立平,权康华,刘信瑞,许碧鸿,王勇

    目的 观察连续大面积接种流行性乙型脑炎活疫苗的流行病学效果。方法 连续观察11年接种 乙脑活疫苗的182715人次的乙脑发病率。结果11年内均未出现异常反应,总发病率由接种前的21.89/10万下降 到2/10万左右,保护率为98.99%。结论 进一步证明乙脑活疫苗安全有效。

    2001年03期 183-185页 [查看摘要][在线阅读][下载 150k]
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  • 结核病疫苗研究进展

    范雄林

    2001年03期 186-187页 [查看摘要][在线阅读][下载 145k]
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  • 输血反应与血液制品的安全性

    徐德启,史维国

    2001年03期 188-191页 [查看摘要][在线阅读][下载 303k]
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  • 关于召开第一届中国艾滋病性病防治大会的预通知

    2001年03期 191页 [查看摘要][在线阅读][下载 55k]
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  • 生物制品分装线无瓶不灌装功能的改进

    刘金平,于晓达

    2001年03期 192页 [查看摘要][在线阅读][下载 46k]
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  • 三价精制流行性感冒灭活疫苗的免疫效果观察

    王敏文,颜淑芹,王志刚,范宇红,余录根,李陆逊,张玉辉,张松青,惠崎,方捍华,刘淑珍,倪大新,祖荣强

    2001年03期 193页 [查看摘要][在线阅读][下载 45k]
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  • 第六次全国生物制品学术研讨会纪要

    2001年03期 194页 [查看摘要][在线阅读][下载 69k]
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