中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

  • 利用中国流行株HIV-1 Gag重组痘苗病毒与核酸疫苗免疫的新程序

    金宁一,王莉馨,罗坤,秦云龙,王宏伟,张应玖,李萍

    目的 将中国流行株HIV-1 Gag基因在痘苗病毒中表达,以重组痘苗病毒与核酸疫苗混合免疫,进 而研制艾滋病疫苗。方法 将中国流行株HIV-1 Gag基因片段插入到pJ38载体启动子下游,经同源重组和血凝素 阴性空斑筛选重组痘苗病毒,经 SDS-PAGE和 Western检测目的蛋白。以重组痘苗病毒与核酸疫苗进行小鼠免 疫试验,淋巴细胞转化实验,CIL,CD+4;CD+8细胞计数及细胞免疫和体液免疫水平检测。结果 重组痘苗病毒vJ38 Gag具有良好的免疫原性,与2rVV-DNA混合免疫效果更好。结论 重组痘苗病毒 vJ38 Gag能够表达Gag蛋白并诱 导机体产生细胞免疫和体液免疫。

    2001年02期 65-67页 [查看摘要][在线阅读][下载 483k]
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  • 新城疫病毒F_(48)E_8株HN基因的克隆和序列分析及与国外NDV HN基因的同源性比较

    李太元,金宁一,丁壮,王兴龙,金扩世,吕杰,米志强,殷震

    目的 克隆NDV F48E8株HN基因,与国外NDV HN基因进行比较分析。方法 提取 RNA,应用 RT-PCR一次性扩增出NDV F48E8株的全长HN基因,将该HN基因插入pKS(-)后进行克隆并测序。结果 NDV F48E8株的HN基因核苷酸长度为1713bp,编码571个氨基酸,有5个糖基化位点,12个极保守的半胱氨酸残基,与 国外发表的NDV序列相符。结论NDVF18E8株HN蛋白基因与国外发表的NDV HN蛋白基因核苷酸同源性在 83.3%~89.2%之间,推导的氨基酸同源性在87.6%-91.1%之间。

    2001年02期 68-71页 [查看摘要][在线阅读][下载 748k]
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  • 肾综合征出血热灭活疫苗毒株L99株的全基因序列分析

    姚智慧,董关木,韩亮,俞永新,刘文雪,杨立宏,郝富勇,赵丽红

    目的 了解我国肾综合征出血热疫苗生产毒株L99株的分子特征及抗原性的分子基础。方法 设计出不同的引物,用PCR方法提取细胞总RNA,逆转录扩增产物纯化后克隆T载体,纯化后测序,序列用DNAS TAR软件拼接,并对其序列进行分析。结果L99株全基因组由L片段6533个,M3652个,S1764个核苷酸组成, 分别编码2151、1133、429个氨基酸,L99与同型病毒间同源率高达95.5%-99.4%。结论 为研究疫苗毒株的生物 学特性、致病机理等提供了分子基础。

    2001年02期 72-74页 [查看摘要][在线阅读][下载 174k]
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  • 重组人巨细胞病毒gp52蛋白的纯化及鉴定

    陶开华,李越希,汪兴太,李长贵,郁兴明,黄培堂

    目的 对大肠杆菌表达的人巨细胞病毒gp52蛋白纯化及鉴定。方法 将表达gp52蛋白的菌体超 声裂解后,离心取上清,经DEALE-Sepharose FF阴离子柱纯化,收集纯化的gp52蛋白,再上S-Sepharose FF阳离子柱纯 化,收集纯化的gp52蛋白,经SDS-PAGE检测其纯度,用Westem blot和 EILSA检测其抗原性。结果 纯化的gp52蛋 白纯度达85%以上,并有较好的抗原性和特异性。结论 制备的重组gp52蛋白可用于人巨细胞病毒抗体的检测 等研究。

    2001年02期 75-77页 [查看摘要][在线阅读][下载 493k]
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  • 胰高血糖素基因克隆、表达及鉴定

    母敬郁,张桂荣,王峤,尚庆义,杨翰仪,Joni Lukwanize Wettai,Ananthanarayanan VS

    目的 研制基因工程胰高血糖素,用于治疗因注射胰岛素或口服抗糖尿病药物而引起的严重低血 糖反应。方法 依据人胰高血糖素氨基酸组成序列,采用大肠杆菌出现频率高的氨基酸密码子,体外合成胰高血 糖素基因序列,克隆于pGEX-1N质粒,转化人BL21(DE3)菌中,对阳性克隆转化质粒进行DNA测序。用IPTG诱导 转化的胰高血糖素工程菌,产生谷胱苷肽转移酶的融合蛋白,经谷胱苷肽Sepharose4B亲和层析后,由 Factor Xa酶 进行柱上切割,最后用RP-HPLC得到纯化产物。产品用质谱法测相对分子质量,并对N末端15个氨基酸测序。 结果DNA测序显示克隆基因序列正确,产品相对分子质量为3486J末端15个氨基酸序列与理论值相同,产率为 1.9mg/L。结论 获得以可溶性融合蛋白方式表达的胰高血糖素基因工程菌,适于快速生产天然序列重组胰高血 糖素。

    2001年02期 78-80页 [查看摘要][在线阅读][下载 486k]
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  • EHV-1_(CN)与IL-2基因共表达核酸疫苗诱导产生CTL的观察

    郭焱,金宁一,张应玖,夏志平,王宏伟,郭志儒,罗晶,殷震

    目的 观察HIV-1CN gp120基因与IL-2基因共表达核酸疫苗质粒pGPIL-2诱导产生CTL。方法 脂质体介导共表达中国流行株HIV-1Gag-gp120基因与IL-2基因的核酸疫苗质粒pGIL-2转染BHK-21细 胞,以间接免疫光法鉴定其表达。取pGPIL-2免疫鼠脾细胞,检测pGPIL-2诱导的细胞毒性T细胞杀伤活性。 结果pGPIL-2可有效地诱导CIL的产生,并可杀伤HIV-1CN嵌合基因转染的靶细胞。结论 为进一步设计中国流行株HIV-1核酸疫苗提供了重要实验依据。

    2001年02期 81-83页 [查看摘要][在线阅读][下载 429k]
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  • 幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位基因工程菌的发酵

    王缚鲲,张卫军,邹全明,郭学青,于长青,曾浩

    目的 研究幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位(HspA)基因工程菌的发酵工艺。方法 通过不同培 养基、不同葡萄糖浓度、不同溶氧条件、补料与非补料对幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位基因工程菌的菌体生长与 外源蛋白表达量的影响的比较,确定其较为合适的培养条件。结果 多批实验证明,菌体单产可达42g/L,目的蛋 白的表达率为38.5%。结论 此发酵工艺可以提高HspA基因工程菌菌体的得率和目的蛋白的表达。

    2001年02期 84-86页 [查看摘要][在线阅读][下载 521k]
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  • 应用蛋白质工程法制备含硒单链抗体酶

    牟颖,高姝娟,张岩,苏丹,苏大明,任晓君,由德林,罗元明,闫岗林,罗贵民,黄华梁,刘子

    目的 制备一种具有谷胱甘肽过氧化物酬(GPX)活性的含硒单链抗体酶。方法 利用RT-PCR方 法从杂交瘤细胞株2F3中扩增出单克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因。经DNA序列测定后,构建成表达载体 pTMF-scFv,经过金属螯合层析纯化、复性和化学诱变,得到含硒单链抗体酶。结果 将重组质粒pTMF-scFv分别转 化入大肠杆菌JM109(DE3)、BL21(DE3)和 BL21(coden plus),表达目的蛋白分别占菌体总蛋白的5%-10%、15%- 20%和 25%-30%。该重组蛋白以包涵体形式存在,相对分子质量为30000。其 GPX活性为3400U/μmol,接近天 然酌水平。结论 为工业化制备含硒单链抗体酶奠定基础。

    2001年02期 87-90页 [查看摘要][在线阅读][下载 867k]
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  • A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的研制

    杨丽华,吴玫,孙惠军,全爱顺,王云英,司阳乐,姜瑞香,杨宗辉,陈爽,王洪飞,李凤祥,李亚楠,何莉,袁曾麟

    目的 制备安全有效的A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。方法 通过碳二亚胺(EDAC)将A群脑膜 炎球菌多糖-AH衍生物与破伤风类毒素(TT)蛋白共价结合,制备A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。结果 所结合 成的多糖-蛋白结合物,具有A群脑膜炎球菌多糖和破伤风类毒素抗原特异性。单独用多糖免疫小鼠未能诱导出 高水平的血清Ps抗体,而用结合物免疫小鼠却诱导出高水平的血清Ps抗体及TT抗体,并有免疫记忆性。结论 为进一步临床评价该疫苗的人群免疫效果提供了实验基础。

    2001年02期 91-93页 [查看摘要][在线阅读][下载 491k]
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  • 重组牛碱性成纤维细胞生长因子国家标准品的研制

    饶春明,刘兰,丁有学,郭莹,王军志

    目的 建立效价测定用的重组牛碱性成纤维细胞生长因子(hFGF)国家标准品。方法 按WHO有 关要求制备标准品,分装、冻干后进行检定,以bFGF国际标准品为标准进行协作标定。结果 经检测外观、无菌实 验合格,水分为0.99%,于-20、4和25℃条件下放置23个月其生物活性稳定。该标准品经3家实验室协作标定, 共23次测定,平均效价为6971支。实验均数的95%可信区间为6266-7753IU/支,单次实验的95%参考值范围 为3394-10965IU/支,平均可信限率为 10.995%。结抡 该批重组牛bFGF国家标准品各项指标均符合要求,可作 为国家标准品使用,效价定为7000IU/支,批号为01/96。

    2001年02期 94-96页 [查看摘要][在线阅读][下载 165k]
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  • α_1-抗胰蛋白酶制剂的制备及其病毒灭活

    朱威,祝慈芳,刁武萍,周继东,吴玮

    目的 从Cohn FⅣ中提纯α1-抗胰蛋白酶(α1-Antitrypsin α1-AT,制备较高纯度α1-AT制剂。方法 对Cohn FⅣ抽提液经沉淀、超滤、离子交换及凝胶过滤,提纯 α1-AT用巴氏法(液态,60℃,10h加热)作病毒灭活, 并考察其效果。用免疫单扩散、双向交叉免疫电泳、SDS-PAGE及合成基质法检测α1-AT蛋白及生物活性。用区带 扫描法测定α1-AT制剂的纯度。结果3批试制的α1-AT制剂的纯度为91.3±1.52%,比活0.49±0.08μ/mg,比活性 比抽提液提高了27.4倍。巴氏法处理可使VSV、Sindbis、Polio I型疫苗病毒分别降低10.0±0.3,10.0±0.31及7.11 ±0.3lgTCID50/ml,但仍能检出Polio型疫苗病毒。结论 可从 Cohn FⅣ中制得较高纯度的 α1-AT制剂,巴氏法能对 α1-AT制剂作有效的病毒灭活处理。

    2001年02期 97-101页 [查看摘要][在线阅读][下载 809k]
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  • ToRCH-IgM ELISA试剂盒的研制和应用

    严银芳,陈晓,董长垣,杨小清,刘汉燕,姚学军

    目的 建立快速、敏感、特异性强、重复性好的抗ToRCH-IgM诊断方法。方法 在传统ELISA间 接法基础上进行了改良,在试剂盒的研制过程中,使用了自制的吸附剂、加速剂和稳定剂,建立一种抗ToRCH-IgM/ELISA快速诊断方法。结果 改良的ToRCH-IgM/ELISA诊断试剂具有快速、敏感、特异性强、重复性好等优点。结 论 该试剂可用于ToRCH-IgM的检测。

    2001年02期 102-103页 [查看摘要][在线阅读][下载 140k]
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  • 应用篮式生物反应器培养1A_5杂交瘤细胞及单克隆抗体分泌

    李云富,王妍,李健平,张秀霞,迟春萍,滕洪刚,关晓峰,王秋香

    目的 为了提高体外培养的杂交瘤细胞单克隆抗体的合成分泌,并为治疗型人源化单克隆抗体生 产摸索条件。方法 应用5L篮式及非篮式生物反应器培养1A5杂交瘤细胞,以分泌干扰素单克隆抗体,从中对 1A5细胞的接种浓度、反应动态、培养方式等进行研究。结果 细胞最适的接种浓度为2.0×105/ml左右;同非篮式 培养相比,在篮式培养过程中,通过葡萄糖消耗率的监测,及时地调节培养条件及换液时间,延长了培养周期,增加 了每罐收液批次,并且每次是全量换液,最高收液效价为1:4096。结论(1)1A5 细胞分泌干扰素单抗属于负生长 耦连型,葡萄糖消耗率与细胞的生长呈线性关系,可以利用糖消耗率的变化判断篮式生物反应器中细胞生长状况; (2)篮式生物反应器载体培养优于非篮式生物反应器悬浮培养;(3)适当地增加培养基中葡萄糖的量,可以提高干 扰素单抗的合成分泌。

    2001年02期 104-106页 [查看摘要][在线阅读][下载 194k]
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  • 应用三种方法测定水痘病毒抗体滴度比较

    郑官增,姚苹苹,朱函平,朱智勇

    2001年02期 106页 [查看摘要][在线阅读][下载 80k]
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  • 百日咳疫苗血清学效力试验与小鼠保护力试验结果的相关性

    孙述学,宋继萍,陈晓航,王剑虹,梁玉珍,杨淼,陈怀恭,王师真,罗广,孙晓琳,武毅

    目的 了解百日咳疫苗血清学效力试验(PSPT)与小鼠保护力试验(MPT)结果的相关性,为该法替代MPT积累资料。方法 用不同剂量的DTP疫苗免疫小鼠,4w后采血,用ELISA测定小鼠血清中抗百日咳菌表面 抗原的总抗体滴度。用平行线法计算疫苗的效力,与MPT测定结果进行相关性分析。结果15批疫苗分别用 PSPT和MPT法测定的效力单位相关性显著(r= 0.9358,p<0.001),二者差异无显著意义(P>0.05)。与 MPT法相 比,PSFF法有更高的重复性,而且95%可信限较小。结论PSPT法有望取代MPT。

    2001年02期 107-109页 [查看摘要][在线阅读][下载 498k]
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  • 冻干乙型脑炎活疫苗在不同温度下保存对免疫力的影响

    姚亚夫,张卓光,卢德芬,王洪彬,刘晓华,张月新,张静,廖轶,王寿贵

    目的 了解冻干乙脑活疫苗在不同温度下保存对滴度及免疫力的影响。方法 冻干乙脑活疫苗 在不同温度下存放不同时间后,进行病毒滴度及免疫力检测。结果 疫苗在4-8%下存放1年半滴度稍有下降 (0.32LogPFU),其免疫力仍稳定在高水平(ID50=4.1×10-5;在 25℃下存放 1个月和 37℃下存放7d,滴度分别下降 0.32和 0.65LogPFU,其免疫力仍保持在较高范围内(ID=8.8 ×10-5和 6.0×10-5);在50℃下存放24h滴度和免疫 力均显著下降(近10倍);存放72h后基本无免疫力。结论 疫苗不论在4-8、25、37℃下存放,其滴度保持在4. 87LogPFU以上时,仍有免疫力;疫苗滴度不低于5.7LogPFU/ml时,仍保持高免疫力。

    2001年02期 110-112页 [查看摘要][在线阅读][下载 131k]
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  • 三种方法检测静注免疫球蛋白中IgG含量的比较

    唐玉琴,黄凤琼,张月星,毛秀珍,林晓军,王叔桥

    目的 选定检测静注免疫球蛋白中IgG含量的方法。方法 采用紫外分光法、火箭免疫电泳法、单 向辐射状免疫扩散法检测静注免疫球蛋白中IgG含量。结果 火箭免疫电泳法与紫外分光法和单向辐射状免疫扩 散法之间差异有显著意义(P<0.01),紫外分光法与单向辐射状免疫扩散法之间差异无显著意义(P>0.05)。紫外 分光法变异系数(CV%)最小。结论 为选定静注免疫球蛋白IgG含量检测方法提供了依据。

    2001年02期 113-115页 [查看摘要][在线阅读][下载 147k]
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  • 应用改良抗体结合试验(ABT)方法检测狂犬病疫苗效力

    祝玉桃,严家新,方志正,何春辉,徐葛林

    目的 应用改良抗体结合试验(ABT)方法在体外快速测定狂大病疫苗效力。方法 将定量的狂犬 病毒中和抗体与疫苗样品进行结合,将剩余的中和抗体的滴度用快速荧光灶抑制试验(RFFIT)进行测定,然后计算 待测疫苗的效价,并与传统的NIH效力试验结果进行比较。结果ABT与传统的NIH效力试验的结果有良好的相 关性,而且快速、经济,重复性高。结论 该方法在大多数情况下可取代NIH效力试验。

    2001年02期 116-117页 [查看摘要][在线阅读][下载 115k]
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  • 应用24孔板培养法检测甲肝疫苗感染性滴度

    谢忠平,宋霞,李华,李文忠,杨婷,熊秋霞,徐琼芳,李琦涵

    目的 应用24孔培养板检测甲肝疫苗(HAV)感染性滴度。方法 采用24孔培养板培养单层细 胞,接种适宜稀释度的病毒,每稀释度接种6-8孔,100μl/ 孔,培养到期,用胰酶消化后收集细胞,每管沉淀细胞加 250ul细胞裂解液裂解细胞,释放HAV,然后用ELISA法检测HAAg。结果 HAV(H2株)在24孔板上的增殖高峰为 21-24d;板间差异平均为0.105Log;8批样品经2次重复检测,重复性较好,其差值的平均值为0.106Log,标准差为 0.099。用此方法检测12批样品,其结果与小方瓶培养法差异无显著意义(P>0.5)。结论 24孔板培养法有望用 于甲肝疫苗感染性滴度检测。

    2001年02期 118-119页 [查看摘要][在线阅读][下载 111k]
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  • 在微柱凝胶血小板血型配型实验中红细胞血型不规则抗体的影响及处理

    林宏杰,吕巍尧,童军,蔡岩,李勇

    目的 消除在微柱凝胶血小板血型配型试验中,红细胞血型不规则抗体造成的假阳性反应。方法设假阳性对照,并用指示红细胞吸收患者血清中不规则抗体。结果 经12例临床样本检测证明可以消除假阳 性反应。结论 该方法操作简便,结果可靠,易于临床上推广。

    2001年02期 120-121页 [查看摘要][在线阅读][下载 127k]
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  • 应用巢式PCR检测细胞培养物中的支原体污染

    张曦,滕峥

    2001年02期 121页 [查看摘要][在线阅读][下载 67k]
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  • 脊髓灰质炎灭活疫苗免疫效果观察

    王剑锋,李长贵,周铁群,邱平

    目的 了解脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)的免疫效果。方法 对2-3月龄婴幼儿免疫IPV,并采集 双份血样118份。来用特异性抗原抗体中和法,分别对血清中抗脊髓灰质炎病毒3个型的中和抗体进行测定。结 果 要幼儿免疫后其脊髓灰质炎 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒中和抗体阳转率分别为 100%、98.73%和 97.98%,几何平均滴度分别为282.41、154.88和340.84。结论 IPV在初免儿童中免疫效果良好。

    2001年02期 122-123页 [查看摘要][在线阅读][下载 121k]
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  • 腮腺炎疫苗保护剂的改进

    朱芮波,陈秀珍,朱洪生,吴斌,王丽霞,王淑珍

    2001年02期 123页 [查看摘要][在线阅读][下载 62k]
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  • 基因治疗及基因治疗产品的质量控制

    姜典财

    2001年02期 124-126页 [查看摘要][在线阅读][下载 211k]
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  • DNA疫苗研究的发展方向

    李忠明

    为促进海内外学术交流,《中国生物制品学杂志》自本期起,不定用地刊出国内外专家学者就生物技术领域的热点问题撰写的述评。欢迎业内人士就已发表的述评提出不同意见,并展开讨论,共同促进生物制品事业的发展。

    2001年02期 127-128页 [查看摘要][在线阅读][下载 189k]
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  • 首届“安万特·巴斯德健康论坛”纪要

    2001年02期 129页 [查看摘要][在线阅读][下载 65k]
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  • 《中国社区医学》简介

    2001年02期 129页 [查看摘要][在线阅读][下载 65k]
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