中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 不同灭活剂对柯萨奇病毒A组16型免疫原性的影响

    李华;岳磊;张也;杨婷;谢天宏;何鑫;高微捷;卫星辰;龙润乡;杨蓉;罗芳宇;谢忠平;

    目的评价甲醛及β-丙内酯对纯化柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CV-A16)灭活效果及免疫原性的影响。方法将制备的CV-A16-168病毒液经浓缩、纯化后,用不同浓度甲醛(1∶400、1∶2 000、1∶4 000、1∶8 000)及β-丙内酯(1∶1 000、1∶2 000、1∶3 000、1∶4 000)灭活,CV-A16抗原ELISA检测试剂盒检测抗原含量,确定最适灭活浓度。用1∶4 000甲醛及1∶2 000β-丙内酯灭活CV-A16-168,按抗原含量分别制备为640和320 U/mL,加入Al(OH)_3佐剂,制备灭活CV-A16-168实验疫苗,免疫BALB/c小鼠2次,间隔28 d,于首次免疫后28、35 d采血分离血清,采用体外微量中和试验检测小鼠血清中和抗体效价,流式细胞术检测血清细胞因子水平。将甲醛灭活和β-丙内酯灭活实验疫苗分别腹腔注射5只BALB/c雌鼠和雄鼠2次,间隔28 d,初免后7 d,雌雄小鼠合笼,怀孕后取出单独饲养,待乳鼠出生48 h内,分别用CV-A16-G10株(原型株,A基因型)、CV-A16-154株(B基因型)及CVA16-G20株(B基因型)进行1 000 LD50的病毒株颅内注射,观察21 d乳鼠的临床症状及生存情况。结果 1∶4 000甲醛37℃3 d及1∶2 000β-丙内酯4℃24 h均可完全灭活CV-A16-168。小鼠经灭活CV-A16-168实验疫苗免疫后,血清中和抗体阳转率均达到100%,甲醛灭活抗原含量640和320 U/mL组抗体GMT分别为1∶7 131.55和1∶5 042.77,平均增长42.2和45.3倍;β-丙内酯灭活抗原含量640和320 U/mL组抗体GMT分别为1∶10 085.54和1∶6 208.38,平均增长42.2和48.5倍;不同灭活剂处理的相同抗原含量间抗体GMT差异无统计学意义(P均>0.05),但组内二次免疫间的抗体GMT差异有统计学意义(P <0.001);甲醛和β-丙内酯灭活实验疫苗免疫小鼠后均诱导产生IFNγ,抗原含量640与320 U/mL组比较,有显著升高(P <0.001)。乳鼠经CV-A16不同基因型毒株攻毒,观察21 d后,全部存活,母传抗体可对不同基因型毒株颅内注射攻毒的乳鼠产生100%的保护。结论 1∶4 000甲醛及1∶2 000β-丙内酯均可完全灭活CV-A16,灭活后的免疫原性无显著差异,为CV-A16灭活疫苗的开发及研究奠定了基础。

    2020年11期 v.33 1217-1222+1229页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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基础研究

  • 基于生物信息学的淋巴瘤相关蛋白T细胞因子4的性质及功能预测分析

    穆秀丽;文朝朝;孟涛涛;王晰;魏艳;弓韬;孙公勤;张宏伟;于保锋;

    目的利用生物信息学软件分析淋巴瘤相关蛋白T细胞因子4(T cell factor 4,TCF4)的理化性质、空间结构、蛋白质修饰位点及蛋白相互作用关系。方法根据美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)蛋白数据库提供的人TCF7L2蛋白FASTA格式数据,使用ExPASy、SignalP 5.0 Server、TMHMM Server v.2.0、SOPMA、SWISS-MODEL、DISPHOS 1.3、PhosphoSitePlus、NetNGlyc 1.0、Uniprot数据库、NetOGlyc 4.0、YinOYang 1.2、STRING等软件对TCF4蛋白进行系统性分析。结果 TCF4为一种碱性不稳定的亲水性蛋白,无信号肽,无跨膜区;二级结构的主要形式是无规卷曲;在7款软件(DISPHOS 1.3、PhosphoSitePlus、KinasePhos、Scansite、NetPhosk、Musite、PlantPhos)中,共有33个磷酸化位点被重复预测到;Uniprot数据库和NetOGlyc 1.0软件未预测到重复的N型糖基化位点,NetOGlyc 4.0和YinOYang 1.2软件显示共有2个O型糖基化位点被重复预测到;蛋白相互作用网络显示,与TCF4形成蛋白网络的6个蛋白(EP300、MYC、CREBBP、CTNNB1、NLK和AXIN2)涉及到Wnt信号通路。结论经多种软件对TCF4的性质及功能的预测,为淋巴瘤等相关疾病抑制剂的研发及其发病机制提供参考。

    2020年11期 v.33 1223-1229页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 不同传代比例对MDCK细胞培养效果的影响

    王美皓;李自良;赵彩红;李倬;张雪梅;乔自林;马忠仁;王家敏;

    目的探讨不同传代比例对MDCK细胞培养效果的影响。方法用含10%牛血清的DMEM培养液培养MDCK细胞,按不同传代比例(1∶4、1∶5、1∶6、1∶7、1∶8)连续传5代,观察细胞形态、长势、致密程度,绘制生长曲线,并通过生长动力学方法评价不同传代比例对MDCK细胞培养效果的影响。同时按最佳传代比例于细胞工厂(1层、10层)中进行扩大培养。结果不同传代比例的MDCK细胞均可在48 h增殖至致密单层,细胞生长曲线均趋于"S"型,细胞最大增殖密度均达11×10~4个/cm~2以上。传代比例为1∶8的MDCK细胞平均最大比生长速率显著高于1∶4、1∶5、1∶6的比例(P <0.05),倍增时间显著短于1∶4、1∶5、1∶6、1∶7的比例(P <0.05)。按1∶8的比例在1层和10层细胞工厂中连续传代培养的MDCK细胞生长良好,且稳定。结论按1∶8比例传代的MDCK细胞培养效果最佳。

    2020年11期 v.33 1230-1234+1239页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 不同通气方式对抗破伤风毒素抗体工程细胞株生长及蛋白表达的影响

    宋兰兰;安晨;南建军;叶星;郭岚;毛晓燕;

    目的探讨生物反应器不同通气方式对抗破伤风毒素抗体的CHO工程细胞株生长、代谢及目的蛋白表达的影响。方法在3个3 L生物反应器中,分别选用微泡、大泡和膜供氧的通气方式,以相同的初始密度接种CHO种子细胞,设置相同的温度、pH、搅拌速度、溶氧(dissolved oxygen,DO)等关键培养参数,采用补料分批培养模式进行培养。每日取样,分别检测培养液的活细胞密度(viable cell density,VCD)、细胞活率、渗透压及葡萄糖、乳酸、NH_4~+和抗体蛋白浓度。筛选细胞生长较好及乳酸等代谢副产物累积较少且蛋白表达量高的一种通气方式。结果微泡通气方式下,CHO细胞生长缓慢,最高VCD为7.63×10~6个/mL,接种后细胞活率一直低于90%且下降较快,培养8 d,抗体蛋白浓度为76 mg/L。大泡通气方式下,最高VCD为12.45×10~6个/mL,培养1~6 d细胞活率均高于90%,培养第8天乳酸浓度开始下降,培养10 d,抗体蛋白浓度为534 mg/L。膜供氧通气方式下,最高VCD为13.54×10~6个/mL,培养1~8 d细胞活率均高于90%,培养第8天乳酸浓度开始下降,培养10 d,抗体蛋白浓度为755 mg/L。结论大泡及膜供氧通气方式下细胞生长和蛋白表达情况均较好,选取易进行工艺放大的大泡通气方式进行后续培养工艺的建立。

    2020年11期 v.33 1235-1239页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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治疗制剂

  • 重组人酸性成纤维细胞生长因子温敏凝胶及Rg3水凝胶促进SD大鼠烫伤创面愈合的作用机制

    陆超;沈思远;刘拓;陈敏;张文峰;惠琦;富力;

    目的探讨重组人酸性成纤维细胞生长因子(recombinant human acid fibroblast growth factor,rhaFGF)温敏凝胶及Rg3水凝胶对大鼠烫伤创面促愈合的作用机制。方法用SD大鼠建立烫伤模型,分别给予20μg/mL rhaFGF-泊洛沙姆温敏凝胶及235μg/cm~2 Rg3-卡波姆水凝胶治疗24 d,并以相应的凝胶基质为对照,分别于首次给药后1、7、19、24 d进行动物大体观察并计算创面愈合率;利用HE、Masson染色观察皮肤组织的重构;利用免疫组化(immunohistochemical,IHC)试验检测炎症相关因子IL-6、IL-10、IL-1β及细胞外基质蛋白CollagenⅢ和α-SMA的表达。结果在愈合面积及愈合率方面,rhaFGF及Rg3凝胶治疗组均优于对照组(P <0.05);在组织病理学上,两个治疗组在组织致密度及空化现象上优于对照组;在CollagenⅢ表达上,两个治疗组均高于对照组(P <0.01),但在α-SMA的表达上,rhaFGF凝胶治疗组高于对照组(P <0.05),而Rg3凝胶治疗组与对照组差异无统计学意义(P>0.05);在炎症因子表达方面,两个治疗组在7 d时均可降低IL-6的表达(P <0.05),且Rg3凝胶治疗组降低了IL-1β的表达(P <0.01),升高了抑炎因子IL-10的表达(P <0.01)。结论 rhaFGF-泊洛沙姆温敏凝胶与Rg3-卡波姆水凝胶均可促进烫伤创面愈合。rhaFGF-泊洛沙姆温敏凝胶在早期可通过促进成纤维细胞增殖及调控炎症发挥作用,而Rg3-卡波姆水凝胶在愈合过程中通过调控创面炎症微环境来促进创面愈合。

    2020年11期 v.33 1240-1246+1252页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 人α1抗胰蛋白酶的分离纯化及其对C-BSA型大鼠肾炎模型的影响

    孙兆健;蒋伟;张英;田建明;王妍;

    目的分离纯化α1抗胰蛋白酶(alpha 1-antitrypsin,AAT),并评价其对C-BSA型大鼠肾炎模型的影响。方法以Cohn组分Ⅳ(Cohn frcationⅣ,FⅣ)为原料,采用Q Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和S-200凝胶过滤柱层析纯化AAT,底物显色法检测其生物学活性。建立阳离子化小牛血清蛋白型大鼠肾炎模型,分别注射5.75和11.5 mg/kg的AAT,同时设正常组(未建模),隔日经大鼠腹腔注射给药1次,连续注射4周,模型组和正常组注射等体积的PBS。检测各组大鼠的尿常规及24 h尿液总蛋白量,并对肾脏组织进行病理学检查,同时检测肾脏中IgG沉积及AAT、Desmin、Nephrin、Podocin的表达情况。结果纯化的AAT纯度为96%,浓度为11.85 mg/mL,活性回收率为47.67%,比活为5.37。与模型组比较,高剂量AAT组大鼠24 h尿蛋白量明显降低(P <0.05),尿常规部分指标有所改善,肾小球体积增大程度有所减轻;高、低剂量AAT组大鼠肾小球IgG沉积均略减少(P> 0.05),肾小球与肾小管AAT阳性表达量明显增加(P <0.001),肾小球Desmin蛋白有减轻趋势,但差异无统计学意义(P> 0.05);高剂量AAT组大鼠肾小球Nephrin及Podocin蛋白均明显增多(P <0.05),低剂量AAT组略有升高趋势,但差异无统计学意义(P> 0.05)。结论本纯化工艺可获得纯度较高的AAT,其对大鼠肾炎具有一定提高疗效的作用。

    2020年11期 v.33 1247-1252页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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诊断制剂

  • 血筛四项复合质控品的制备及性能评价

    王少华;李妍;张涛;王新明;刘功成;

    目的制备血筛四项复合质控品,评价其均匀性及稳定性。方法分别筛选乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)表面抗原(HBsAg)、HBV表面抗体(HBsAb)、人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)抗体(Anti-HIV)、丙型肝炎病毒(hepatitis cvirus,HCV)抗体(Anti-HIV)及梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)抗体(AntiTP)检测指标中HBsAg、Anti-HIV、Anti-TP及Anti-HCV分别为单项阳性且其他项均为阴性的血浆,将筛选的血浆稀释至低、中、高水平的工作浓度,制备为血筛四项复合质控品,分析其均匀性及稳定性(比较2~8℃放置14 d、18~25℃放置7 d及反复冻融6次与-20℃以下储存检测结果的变化幅度)。分别使用3个公司的HBV表面抗原、HCV抗体、HIV抗原抗体及TP诊断试剂盒、4个厂家的全自动免疫分析仪检测复合质控品,评估其适用性。结果制备的复合质控品为澄清的淡黄色透明液体,无异物;低、中、高水平的HBsAg、Anti-HIV、Anti-TP和Anti-HCV瓶间CV均<7%;低、中、高水平复合质控品于2~8℃放置14 d、18~25℃放置7 d及反复冻融6次的检测结果降幅均在10%以内。除全自动免疫分析仪Roche e601不适用Anti-HCV项目上外,其余厂家仪器及各公司的诊断试剂盒均能找到适合各自检测的弱阳性质控浓度,可满足各平台的要求。结论成功制备了血筛四项复合质控品,其均匀性及稳定性良好,适合各个检测平台,符合室内质量控制的要求。

    2020年11期 v.33 1253-1257页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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临床研究

  • 流感病毒裂解疫苗在3~8岁及9岁以上人群中的安全性及免疫原性比较

    李晓波;顾建阳;丁丽丽;郭占龙;王平;郭雪;范宇红;姜崴;张雪梅;

    目的比较并评价3~8岁及9岁以上人群中,接种流感病毒裂解疫苗后的安全性及免疫原性。方法采用单中心无对照设计,在湖北省汉川市选择600名≥3岁受试对象,按3~8岁、≥9岁分为两组,比较两组受试者接种流感病毒裂解疫苗后的安全性及免疫原性。结果 3~8岁组H1N1、H3N2和B型流感病毒HI抗体阳转率分别为73.9%、68.1%和72.5%,≥9岁组分别为70.4%、89.2%和63.4%,3~8岁组H3N2型流感病毒抗体阳转率明显低于≥9岁组,差异有统计学意义(P <0.001),其他两型别抗体阳转率差异无统计学意义(P> 0.05);与免疫前比较,3~8岁组流感病毒HI抗体GMT增长倍数分别为11.4、9.1和14.5,≥9岁组分别为10.5、22.5和6.6,两组间差异无统计学意义(P> 0.05);3~8岁组免疫后抗体保护率分别为88.4%、100.0%和94.2%,≥9岁组分别为98.9%、100.0%和96.6%,≥9岁组H1N1型流感病毒抗体保护率明显高于3~8岁组,差异有统计学意义(P <0.001),其他两型别间差异无统计学意义(P> 0.05);总不良反应发生率3~8岁组为5.8%,≥9岁组为5.2%。结论流感病毒裂解疫苗在≥3岁人群中接种1剂,≥9岁组某些型别免疫效果优于3~8岁组。本研究为3~8岁儿童免疫新程序设计提供参考。

    2020年11期 v.33 1258-1261+1269页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 2018年武汉地区手足口病肠道病毒分子流行病学分析

    徐长征;文丹宁;周金戈;罗剑锋;王泽鋆;申硕;李华东;陈晓琦;

    目的研究2018年武汉地区手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)肠道病毒病原谱分布特征,并对流行的主要型别肠道病毒基于VP1基因进行分子进化特征分析。方法采集2018年6-12月武汉市金银潭医院HFMD患儿肛拭子和咽拭子样本,应用real-time RT-PCR技术对肠道病毒阳性样本进行筛选后,采用RT-PCR法对肠道病毒VP1区部分基因扩增并进行序列分析;采用DNAStar 7.0、MEGA 6.0等软件进行核苷酸序列比对及基因种系进化特征分析。结果 2018年6-12月共收集疑似HFMD样本1 350份,检出肠道病毒阳性样本1 137份,阳性率84.22%。共检出11种不同型别的肠道病毒,柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CV-A6)、A10、A16、A2、A4和肠道病毒A组71型(enterovirus A71,EV-A71)分别占病原构成的50.57%、19.88%、11.08%、5.28%、4.66%和1.50%,其他5种肠道病毒型别为柯萨奇病毒B组5型(coxsackievirus B5,CV-B5)、CV-A5、Echo11、CV-A9和CV-B2,与未能定型肠道病毒合计占病原构成的7.04%。对流行的几种主要病原VP1区分析结果表明,武汉地区CV-A6、A10、A16、A2和A4基因亚型分别为D3、C、B1b、D2和E2。结论 2018年武汉地区HFMD病原谱为多种基因型的肠道病毒共同流行,CV-A6为优势病原体,以VP1为基础的进化树展示了CV-A6、A10、A16、A2和A4多变的进化分支,并表明了EV-A71疫苗干预下武汉地区肠道病毒传播的复杂情况。

    2020年11期 v.33 1262-1269页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 基于肿瘤数据库分析SOX基因家族在肝癌中的表达及预后意义

    余水红;李艳;钱燕;严其高;王晓梅;龚莉;

    目的通过肿瘤数据库分析SOX基因家族在肝癌中的表达,及其对肝癌患者预后的影响。方法采用cBioPortal数据库检索分析SOX基因家族中12个基因在肝癌组织中的突变频率及变异情况;利用Ualcan数据库比较分析肝癌组织及癌旁组织中12个基因mRNA的表达;结合Kaplan-Meier plotter数据库的临床信息进一步分析SOX基因家族中12个基因在肝癌患者中潜在的预后价值。结果 SOX基因家族大多数成员扩增突变,SOX15为缺失突变。SOX4、SOX8、SOX11、SOX12、SOX15、SOX17、SOX18及SOX21基因在肝癌组织中mRNA表达均高于癌旁组织(P <0.05),SOX1、SOX3、SOX14及SRY基因差异无统计学意义(P> 0.05)。SOX1、SOX3、SOX8、SOX14、SOX15、SOX17、SOX18、SOX21及SRY基因在肝癌患者中的表达均上调(HR <1,Logrank P <0.05),利于患者预后;SOX4、SOX11及SOX12基因高表达与患者不良预后相关(HR> 1,Logrank P <0.05)。结论 SOX基因家族与肝癌发生发展密切相关,大部分成员可作为肿瘤患者的预后标志基因。

    2020年11期 v.33 1270-1275页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 陕西省铜川市风疹流行特征及健康人群抗体水平监测分析

    刘新利;胡改霞;梁丽琳;

    目的分析陕西省铜川市风疹流行特征及健康人群抗体水平,为有效控制风疹提供科学依据。方法采用描述流行病学方法,对铜川市2004-2018年报告的风疹病例进行统计分析,采集风疹患者咽拭子标本,分离病毒,并随机抽取铜川市健康人群采集静脉血,ELISA法检测风疹IgG抗体。结果铜川市2004-2018年共报告风疹病例698例,年均发病率为5.49/10万,发病呈现两个季节高峰,分别为3-6月和12月至翌年2月,以8-14岁儿童发病为主,职业分布上以中、小学生为多;共采集健康人群血样366份,风疹抗体阳性率为82.61%,抗体几何平均浓度(geometry mean concentration,GMC)为51.63 U/mL;风疹抗体阳性率及GMC均先随年龄增长而增高,抗体阳性率3~4岁最高,为95.35%,GMC 1~2岁最高,为67.20 U/mL,以后随年龄增长抗体阳性率及GMC均有所下降,8~14岁抗体阳性率最低,36~50岁平均GMC最低,各年龄抗体阳性率差异无统计学意义(P> 0.05),GMC差异有统计学意义(P <0.05)。共采集风疹病例咽拭子标本68份,分离到风疹病毒10株,均为2B基因型。结论近年来铜川市风疹发病呈现周期性波动升高趋势,每4~5年出现1个流行高峰,为典型的呼吸道传染病流行模式。铜川市风疹流行由风疹病毒2B基因型引起,今后风疹防控的重点人群仍为青少年及儿童。

    2020年11期 v.33 1276-1279+1291页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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技术方法

  • 柯萨奇病毒A组16型纯化液超滤浓缩工艺的探索

    田华平;常伟琪;陈璐;陆晓伟;刘碧云;张浩然;徐华;姜莉;杨二霞;

    目的探索柯萨奇病毒A组16型(coxackievirus A16,CA16)纯化液在小试条件下的最适超滤浓缩参数,并验证其在放大规模工艺中的适用性。方法制备CA16灭活纯化液,在小试条件下,对CA16纯化液进行超滤浓缩,比较采用不同截留分子量(10、30及100 KD)的超滤膜,以不同加液方法(恒体积及补液法)、浓缩倍数(10、20、30及50倍)、上样浓度(原倍、2及4倍稀释)及洗膜次数(1~5次)条件下浓缩样品的抗原回收率、蛋白含量和膜通量,筛选最适参数;应用此参数进行放大规模的3批CA16纯化样品超滤浓缩,验证其适用性。结果在小试条件下,截留分子量100 KD的超滤膜较30、10 KD的抗原回收率及蛋白含量均相近,但膜通量提升16%和100%;恒体积法较补液法浓缩样品的杂蛋白去除率提升约2倍,膜通量提高58%;10倍浓缩的样品回收率较30及50倍浓缩样品高10%~15%,蛋白含量较其他浓缩倍数低2~4倍;稀释上样与原倍上样的浓缩样品相比,抗原回收率和膜通量均无明显变化;膜表面多次洗涤可显著提高抗原回收率,但洗涤3次后即达峰值。在放大规模条件下,3批CA16纯化液抗原回收率均值为92.3%,蛋白含量均值为86.54μg/mL,膜通量均值为141.5 L/(m~2·h)。结论在小试条件下,采用截留分子量为100 KD的超滤膜,以恒体积法对原倍CA16病毒纯化液进行10倍浓缩,同时洗膜表面3次,可获得更高通量及抗原回收率且较低蛋白含量的浓缩样品;此条件在放大规模条件下亦适用。

    2020年11期 v.33 1280-1284页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 生物反应器不同搅拌速度的计算流体力学模拟及对悬浮培养CHO细胞的影响

    侯仰帅;费保进;梁洪;杨金亮;宋春雷;胡珍霞;张骞;黄娟;向雨秘;雷韬;

    目的考察搅拌式生物反应器不同搅拌速度对悬浮培养的CHO细胞生长、代谢及促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)表达的影响。方法采用计算流体力学(computational fluid dynamics,CFD)技术对5 L生物反应器在100、200、300、400 r/min搅拌速度下的内部流场进行模拟;对培养过程中的细胞密度、细胞活率、细胞直径、pH、生化参数及FSH浓度进行检测,根据细胞比生长速率、葡萄糖比消耗速率、谷氨酰胺比消耗速率、乳酸比生成速率、氨比生成速率以及FSH浓度变化,确定不同搅拌速度对细胞生长、代谢及FSH产量的影响。结果在100、200、300、400 r/min搅拌速度下,随着搅拌速度的增加,反应器内的剪切速率逐渐增大;导致最大细胞密度逐渐降低,依次为6.22×10~6、6.14×10~6、5.87×10~6、5.72×10~6个/mL;细胞比生长速率逐渐降低,依次为0.52、0.49、0.47、0.47/d;培养前5 d,在100 r/min搅拌速度下,较其他条件下细胞代谢变慢,培养后5 d无明显差异;搅拌速度对FSH产量无显著影响。结论本研究从微观角度了解了反应器内的流场特性,将仿真与实验结合,确定了不同搅拌速度下产生的剪切力对CHO细胞悬浮培养的影响,为细胞培养工艺参数的优化奠定了基础。

    2020年11期 v.33 1285-1291页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 无内毒素污染的基因工程鼠源SINE RNA的制备

    杨爽爽;曹洪益;闫丽芳;KHAN Murad;吉宁;刘鑫;宋志学;张东明;王秀芳;吕占军;

    目的研究从大肠埃希菌宿主提取基因工程RNA同时去除内毒素的条件。方法将串联的小鼠短散布核元件(short interspersed nuclear elements,SINE)B1插入pET-28a(pET)构建pET-B1×16反序质粒(pET-B1as),转化大肠埃希菌BL21(DE3),获得pET-B1as-DE3菌。用TRlzol法、SDS-热酚法、SDS-NaCl离心法和SDS-NaCl过滤法从p ET-B1as-DE3菌制备基因工程RNA,Triton X-114相分离法进一步去除内毒素,检测制备的RNA中内毒素含量及RNA产量、纯度、完整性,并进行小鼠体内毒性试验和家兔热源试验。结果 TRlzol法制备的RNA产量低;SDS-热酚法制备的RNA中内毒素含量高;SDS-NaCl过滤法去除内毒素的效果优于SDS-NaCl离心法,同时具有较高的RNA产量及较好的RNA完整性。小鼠静脉注射用SDS-热酚法和SDS-NaCl过滤法制备的RNA,前者引起小鼠不良反应,后者未引起小鼠不良反应。用Triton X-114相分离能进一步去除由SDS-NaCl过滤法制备的RNA中的内毒素,家兔热源试验证明SDS-NaCl过滤法联合Triton X-114相分离法制备的RNA,其热原符合动物体内试验要求。结论建立了用SDS-NaCl过滤法联合Triton X-114相分离法制备基因工程RNA的方法,可有效去除RNA中污染的内毒素。

    2020年11期 v.33 1292-1300页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 总前列腺特异性抗原第2次国际标准品协作标定

    于婷;孙楠;曲守方;孙晶;杨振;黄杰;

    目的对总前列腺特异性抗原(total prostate specific antigen,total PSA)第2次国际标准品候选品(批号17/100)进行协作标定。方法按照世界卫生组织(WHO)研究方案,采用多种化学发光免疫分析法、酶联免疫荧光法、流式荧光发光法和时间分辨免疫荧光法进行标定。结果全球8个国家10个实验室提交了数据。经标定,total PSA第2次国际标准品候选品的免疫效价几何平均值(geometric mean,GM)为0.514μg/安瓿(95%置信区间0.489~0.542μg/安瓿,n=22,GCV 12.3%),稳健均值为0.505μg/安瓿,且稳定性和均匀性满足要求。本实验室提交的免疫效价GM为0.520μg/安瓿(95%置信区间0.474~0.571μg/安瓿,n=11,GCV 14.8%),与WHO总结数据的相对偏差为1.2%。结论经WHO生物标准专家委员会审核通过,确定候选品(批号17/100)可作为第2次total PSA国际标准品使用,每安瓿效价定为0.50μg。

    2020年11期 v.33 1301-1306页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 不同途径免疫不同动物制备的F基因型腮腺炎病毒抗血清的比较

    王微;邱恒;杨振清;王雯慧;胡云光;李琦涵;王晶晶;

    目的利用F基因型腮腺炎病毒浓缩后疫苗原液,经不同途径免疫动物制备抗腮腺炎病毒血清。方法将F基因型腮腺炎病毒浓缩后疫苗原液与弗氏佐剂混合后,经皮下注射、肌肉注射及皮下+肌肉注射的三种途径免疫雌性家兔和雌性豚鼠,均于0、7、14、28和35 d免疫,每次7.5 lgCCID_(50)/mL,于每次免疫后7 d采用微量滴定法检测血清抗体效价。利用抗体效价较高血清对麻疹病毒、风疹病毒和腮腺炎病毒进行干扰试验。结果不同免疫途径均可诱导动物产生抗体,皮下+肌肉注射的免疫方式产生的血清抗体效价高于单独皮下及肌肉注射的免疫方式,差异有统计学意义(P <0.05);在同等免疫剂量下,家兔产生的抗血清效价明显高于豚鼠。家兔抗腮腺炎病毒血清对麻疹病毒、风疹病毒和腮腺炎病毒的滴度均无干扰。结论经皮下和肌肉注射结合的途径免疫家兔,可获得高效价血清抗体,对制备高效价F基因型腮腺炎病毒血清抗体提供了依据。

    2020年11期 v.33 1307-1311页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 狂犬病人免疫球蛋白低pH孵放工艺的病毒灭活验证

    张航;容新宗;黄琰;梁洪;刘波;李小姣;吴佳君;秦婷婷;

    目的对狂犬病人免疫球蛋白(human rabies immunoglobulin)低pH孵放生产工艺[pH 3.8~4.4,(24±1)℃,21 d]进行脂包膜病毒灭活验证。方法以伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)、水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)、辛德毕斯病毒(sindbis virus,SV)和人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)作为研究病毒,考察低pH孵放对这些脂包膜病毒的灭活能力。同时考察低pH孵放步骤对制品质量的影响。结果在工艺设定的参数范围内,低pH孵放后4种脂包膜病毒的滴度降低均在4.00 Log以上,且3批狂犬病人免疫球蛋白的纯度和分子大小分布保持稳定,抗体效价与灭活前差异均在方法允许的波动范围内。结论低pH孵放工艺能有效地灭活脂包膜病毒,保证了狂犬病人免疫球蛋白制品的质量及安全性。

    2020年11期 v.33 1312-1316页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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综述

  • 人α1-抗胰蛋白酶与慢性阻塞性肺病的相关性及其作用机制的研究进展

    蒋伟;王妍;

    α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,ATT)是肺中嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的重要抑制剂,ATT缺乏症(α1-antitrypsin deficiency,AATD)通常是由于Z基因突变(Z-AAT)导致的,是一种遗传异常病,其与慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)的早发、儿童和成人的肝硬化、不常见的复发性脂膜炎、血管炎和其他炎症、自身免疫、肿瘤等疾病均具有相关性。本文就AAT与COPD相关性、AAT在抗炎症中的作用及AAT作用机制的研究进展作一综述。

    2020年11期 v.33 1317-1320页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 靶向叶酸受体α抗体药物的临床研究进展

    徐晓竹;陈哲文;

    目前以叶酸受体α(folate receptorα,FRα)为基础的靶向肿瘤药物正在积极研发中,据了解可能针对上皮性卵巢癌(ovarian cancer,OC)及非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)等癌症有良好的临床前研究进展及结果。FRα已逐渐成为肿瘤免疫疗法中引人注目的治疗靶点之一。本文介绍了目前研究开发的靶向FRα的抗体药物,主要包括单克隆抗体药物和抗体偶联药物(antibody-drug conjugate,ADC),并对这两类药物的临床研究进展作一综述。

    2020年11期 v.33 1321-1325页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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专题报道

  • 我国疫苗质量的风险管理体系研究初探

    王冠杰;邵明立;

    <正>风险管理广泛应用于金融、保险、职业安全、公共健康、药物预警等领域。在制药行业,美国食品药品监管管理局(FDA)于2002年发布的《21世纪GMP》首次提出"一种基于风险管理的方法"用于制药企业管理技术,保障药品生产过程中的质量,该理念也在欧盟等国家的制药行业得到推广和应用。

    2020年11期 v.33 1326-1329+1335页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • ICH M4通用技术文档与2007年版《药品注册管理办法》关于疫苗注册申报资料要求的映射

    邓燕;李菁;梁燕;赵志梅;徐明珏;杨净思;

    <正>近年来,我国对疫苗的监管愈加严格,2018年,中央办公厅、国务院办公厅发布《关于改革和完善疫苗管理体制的意见》(中办发[2018]70号);2019年,国家先后修订和颁布施行《中华人民共和国药品管理法》(简称《药品管理法》)及《中华人民共和国疫苗管理法》(简称《疫苗法》),为疫苗管理提供了全面系统的政策引导和法治支撑。

    2020年11期 v.33 1330-1335页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • 静脉注射人免疫球蛋白生产工艺、质量控制的演变及评价思考

    邱晓;罗建辉;

    <正>人血浆中含有约20种蛋白,其中大部分是白蛋白(35~40 mg/mL),免疫球蛋白的浓度约为8~12 mg/mL。血液中的免疫球蛋白分为IgG、IgA、IgM、IgD及IgE,前3者占比分别约为75%、15%、10%,根据亚型不同IgG可分为IgG1、IgG2、IgG3和IgG4,不同亚型的IgG半衰期不同,IgG1、IgG2和IgG4的半衰期3~4周,IgG3的半衰期仅约2周。

    2020年11期 v.33 1336-1339页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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  • WMS与SAP系统接口实施对疫苗仓储信息化管理的影响

    徐志忠;周欣;侯晓辉;

    <正>随着仓储智能化、信息化的不断发展,以及疫苗管理要求的提高,疫苗仓储信息化发展越来越受重视。本文通过比较WMS系统(Warehouse Management System)与SAP ERP(Enterprise Resource Planning)系统(简称SAP系统,Systems Applications and Products in Data Processing)在仓储管理上的差异,结合疫苗仓储信息化管理的现状,在SAP系统完成企业资源整合和WMS系统实现疫苗仓储精细化智能化管理的基础上,对立体库WMS系统与SAP ERP系统集成接口项目的实施过程进行分析,比较项目实施前后的差异,总结接口实施带来的改进与变化,分析具体实践中遇到的问题及其应对处理,以及接口实施后的效果等,探究WMS与SAP系统集成对企业疫苗仓储信息化管理及相关工作产生的影响。

    2020年11期 v.33 1340-1344页 [查看摘要][在线阅读][下载 0]
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