中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 新冠灭活疫苗不同免疫针次和免疫间隔诱导抗体免疫反应的比较

    苍天乐;李克雷;蒋聪利;胡威;刘思远;王海欣;王美荣;刘建凯;刘建东;

    目的 比较新型冠状病毒灭活疫苗不同免疫程序免疫小鼠后诱导的抗体免疫反应,以期为后续新型冠状病毒灭活疫苗免疫策略的制定提供实验依据。方法 将新型冠状病毒灭活疫苗按1μg/(只·次)的免疫剂量免疫BALB/c小鼠,免疫间隔14 d免疫3针,免疫间隔28 d免疫2针,每次免疫后14 d采血,分离血清,检测针对原型株新型冠状病毒诱导产生的免疫反应。结果 新型冠状病毒灭活疫苗免疫间隔14 d 2针免疫后,针对原型株新型冠状病毒诱导产生的中和抗体滴度极显著低于3针免疫后(P <0.000 1);免疫间隔28 d 2针免疫后14 d诱导产生的中和抗体几何平均滴度显著高于免疫间隔14 d 2针免疫后14 d(P <0.05);灭活疫苗免疫血清诱导产生的针对原型株新型冠状病毒的中和抗体滴度显著高于Beta和Delta新型冠状病毒变异株(P均<0.05)。结论 新型冠状病毒灭活疫苗3针免疫能极大程度提高诱导产生的保护性抗体免疫反应,免疫间隔28 d诱导产生的免疫反应优于免疫间隔14 d;灭活疫苗免疫血清也能中和变异株新型冠状病毒。

    2022年04期 v.35 385-390+398页 [查看摘要][在线阅读][下载 303K]
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基础研究

  • 人骨髓间充质干细胞培养上清在SH-SY5Y细胞氧化应激损伤修复中的作用及其机制

    蒲文星;米旭光;周阳;汪文涛;景猛;孟繁凯;

    目的 探讨人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)培养上清(hBMSCs-Sup)在SH-SY5Y细胞氧化应激损伤修复中的作用及其机制。方法 将SH-SY5Y细胞分为4组:分别用含等容积磷酸盐缓冲液(对照组)、不同浓度1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridine ion,MPP+)(0.25、0.5、1、2、4 mmol/L)、0.25 mmol/L MPP++hBMSCs-Sup或0.25 mmol/L MPP++无外泌体的hBMSCs-Sup(hBMSCs-Supexo-)完全培养基培养不同时间(24、48和72 h),通过MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量及细胞凋亡率,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果 SH-SY5Y细胞的活性随着MPP+浓度的增加以及处理时间的延长逐渐下降。与对照组相比,MPP+组细胞存活率显著下降(P <0.001),ROS含量和凋亡率显著升高(P <0.001),凋亡相关蛋白Bax表达显著增加(P <0.01),增殖相关蛋白P-Akt和抗凋亡相关蛋白Bcl-2表达显著减少(P <0.01);与MPP+组相比,MPP++hBMSCs-Sup组细胞存活率显著升高(P <0.001),ROS含量和凋亡率显著降低(P <0.001和<0.01),Bax蛋白表达显著下降(P <0.05),P-Akt和Bcl-2蛋白表达显著增加(P <0.05);MPP++hBMSCs-Supexo-组细胞存活率和ROS含量与单用MPP+组之间差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 hBMSCsSup通过其外泌体组分降低细胞内的ROS含量,激活AKT途径,恢复MPP+下调的SH-SY5Y细胞存活率和MPP+提高的SH-SY5Y细胞凋亡率。

    2022年04期 v.35 391-398页 [查看摘要][在线阅读][下载 368K]
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  • miR-455-5p靶向RECK基因对A549细胞迁移及微血管形成的影响

    刘翠华;赵方新;孙鹏;红梅;武建强;张烜;

    目的 探讨miR-455-5p靶向RECK基因对人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549迁移及微血管形成的影响。方法 利用UALCAN网站对TCGA数据库中肺癌miR-455-5p和RECK基因表达数据进行分析,miRanda在线预测miR-455-5p与RECK基因的靶向关系,并通过双荧光素酶报告基因试验进行靶点验证;A549细胞中分别转染miR-455-5p模拟物、抑制剂及阴性对照后,qRT-PCR检测mi R-455-5p及RECK基因mRNA的表达,Western blot法检测RECK、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)和MMP9蛋白的表达;TranswellTM小室试验检测A549细胞的迁移能力;ELISA法检测A549细胞培养上清液中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)-A的表达;用A549细胞培养上清液作用人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),体外微管形成试验检测微血管形成能力。结果 肺癌组织中miR-455-5p表达显著高于正常组织,而RECK基因的表达显著低于正常组织,miR-455-5p在RECK基因的3′-UTR区有结合域,RECK为miR-455-5p直接调控靶基因。miR-455-5p下调靶基因RECK的表达,而上调MMP2、MMP9蛋白表达;miR-455-5p可明显促进A549细胞迁移及分泌VEGF-A,并增强其诱导HUVEC分化成管的能力。结论 mi R-455-5p通过靶向RECK上调MMPs和VEGF-A,来促进NSCLC细胞A549的迁移及微血管形成。

    2022年04期 v.35 399-406页 [查看摘要][在线阅读][下载 396K]
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  • 大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚基的原核表达及其多克隆抗体的制备

    龚志远;张梦瑶;金宏丽;黄培;张海丽;李媛媛;王化磊;

    目的 原核表达大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚基(heat-labile enterotoxin B subunit,LTB),并制备其多克隆抗体。方法 利用PCR技术扩增LTB基因,并将其连接至pET30a(+)原核表达载体,构建重组原核表达质粒pET30a(+)-LTB-8×His,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对目的蛋白表达条件进行优化。利用His镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,免疫大耳白家兔制备兔源抗LTB多克隆抗体。结果 重组原核表达质粒pET30a(+)-LTB-8×His经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组LTB蛋白相对分子质量约为13 000,以包涵体形式表达,最佳诱导条件为:用0.4 mmol/L IPTG于30℃诱导4 h;纯化后蛋白浓度为3.7 mg/m L;制备的多克隆抗体可用于LTB的Western blot及IFA检测。结论 利用大肠埃希菌表达系统成功表达了重组LTB蛋白,并制备了具有良好反应原性和特异性的多克隆抗体,为产肠毒素型大肠埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)疾病的诊断及LTB黏膜免疫佐剂特性的研究奠定了基础。

    2022年04期 v.35 407-412+417页 [查看摘要][在线阅读][下载 298K]
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  • 瑶鸡粪便中乳酸菌的分离鉴定及筛选

    金正雨;邓永军;杨泽敏;李双;杨颖;

    目的 从瑶鸡粪便中筛选优质的宿主源性乳酸菌。方法 采集健康成年瑶鸡粪便,将鸡粪汁接种至MRS肉汤培养基富集后,按5%体积比取菌液于PBS(pH 3)中处理1 h,离心后的菌泥用含0.3%胆盐的PBS处理1 h,再倍比稀释涂布MRS琼脂平板,选取优势菌株,对其进行菌落形态、革兰染色镜检、16S r RNA基因序列分析鉴定,并测试生长曲线、产酸性能、耐酸特性、耐胆盐特性、抑菌能力等生物学特征。结果 分离株为海氏肠球菌,命名为GZYY2021,该菌株在8 h达到稳定期,培养24 h的菌液pH值接近4.43,该菌株对鸡白痢沙门菌有较强的抑菌活性,抑菌圈直径约为18.46 mm,对低pH和胆盐环境均耐受。结论 分离获得的GZYY2021菌株可为后续瑶鸡及其他家禽用微生态制剂的研究及其应用提供可选择的菌种资源。

    2022年04期 v.35 413-417页 [查看摘要][在线阅读][下载 309K]
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  • 蓖麻矮化相关RcDof蛋白的原核表达及纯化

    张帅;王双;李跃;李国瑞;黄凤兰;陈永胜;

    目的 原核表达并纯化蓖麻矮化相关RcDof蛋白。方法 利用SignalP 4.0 server和Iprscan软件分别预测RcDof基因的信号肽和结构域。从pMD-18T-RcDof质粒中PCR扩增RcDof(44-101)基因,克隆入原核表达载体pETMBP-XE,构建原核表达质粒pETMBP-XE-RcDof(44-101),IPTG诱导表达重组蛋白,利用亲和层析、阳离子交换层析以及分子筛层析对目的蛋白进行纯化。结果 RcDof基因无信号肽剪切序列,在44~101个碱基之间存在1个锌指保守结构域。重组表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确。表达的重组蛋白相对分子质量约43 000,以可溶形式存在于上清中。纯化的重组蛋白纯度较高,浓度为10 mg/mL。结论 获得了高纯度可溶RcDof蛋白,为解析其晶体结构及探索其在蓖麻中作用的分子机制提供了实验依据。

    2022年04期 v.35 418-423页 [查看摘要][在线阅读][下载 331K]
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  • 2020—2021年冬季长春市水痘-带状疱疹病毒流行株基因特征分析

    付兴烨;李晴;吕品;姜雪鸥;孟迪;张夫坤;

    目的 分析2020—2021年冬季长春市水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)流行株的基因特征。方法 选择48例2020—2021年长春市水痘或带状疱疹患者为研究对象,制备疱疹液样本。提取VZV的DNA,以其为模板PCR扩增VZV基因组ORF22、ORF38、ORF54及ORF62特异性片段,并测序。将测序结果与各基因型VZV代表株的ORF22单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点进行比对;应用SnapGene软件寻找测序结果中ORF38-PstⅠ、ORF54-BglⅠ和ORF62-SmaⅠ酶切位点,并与Oka株(PstⅠ-BglⅠ+SmaⅠ+)进行比对。结果 48份疱疹液样本VZV基因ORF22-SNP位点碱基均与pOka株一致,为Clade2基因型。其中47份为PstⅠ-BglⅠ+SmaⅠ+,1份为PstⅠ-BglⅠ+SmaⅠ+,均为野毒株。结论 2020—2021年冬季长春市流行的VZV均为Clade2基因型的野毒株,且具有高度保守性。

    2022年04期 v.35 424-426+432页 [查看摘要][在线阅读][下载 389K]
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治疗制剂

  • 两种贝伐珠单抗生物学活性检测方法的对比

    邓春平;陈航;王英华;曹迪;俞金泉;刘翠华;

    目的 对比两种贝伐珠单抗生物学活性检测方法,比较两种方法的检测性能。方法 对两种贝伐珠单抗生物学活性检测方法[人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖抑制法和荧光素酶报告基因法(reporter gene assay,RGA)]分别进行验证,比较两种方法的检测性能;采用两种方法同时检测53批贝伐珠单抗样品(包括原研药及其生物类似药),并对两种方法的稳定性指示能力进行分析。结果 RGA法检测周期更短,曲线的R2、信噪比、线性段范围均优于HUVEC增殖抑制法,检测范围更宽,精密度更高;两种方法检测的贝伐珠单抗生物学活性差异无统计学意义(P> 0.05);除强光照外,RGA法与HUVEC增殖抑制法相比,在反映贝伐珠单抗生物学活性变化方面相似或略好。结论 RGA法的检测性能优于HUVEC增殖抑制法,且能更好地反映贝伐珠单抗生物学活性变化,可作为HUVEC增殖抑制法的替代方法,用于产品的放行检测及稳定性研究等。

    2022年04期 v.35 427-432页 [查看摘要][在线阅读][下载 429K]
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诊断制剂

  • 19A型肺炎球菌多糖国家参考品的制备

    陈琼;王珊珊;吕雪艳;周学益;韩菲;张亭;叶强;

    目的 制备19A型肺炎球菌多糖国家参考品。方法 根据《中国药典》三部(2020版)对19A型肺炎球菌多糖候选参考品进行质量分析,包括蛋白质、核酸等杂质含量检测,氨基己糖和甲基戊糖等基团含量检测,以及分子大小分布等。以企业参考品为标定标准品,组织3个实验室采用速率比浊法对肺炎球菌多糖候选参考品进行协助标定。随机抽取50瓶候选参考品进行分装均匀性考察。由中国食品药品检定研究院通过速率比浊法对37、25和2~8℃放置一段时间的候选参考品进行热加速稳定性检测,并观察反复冻融3次对候选参考品19A型多糖含量的影响。结果 19A型肺炎球菌多糖候选参考品的各项质量指标均符合《中国药典》三部(2020版)标准;1H核磁共振结果确定候选参考品为19A型肺炎球菌多糖;协作标定结果显示,3个实验室测得的多糖含量RSD均小于5%,均值为565μg/mL。50瓶候选品多糖含量RSD为3.16%。2~8℃存放8周,25℃存放14 d,37℃存放3 d,以及反复冻融3次,稳定性均良好。结论 成功制备了19A型肺炎球菌多糖国家参考品,并通过协作标定确定了多糖含量,可用于肺炎球菌多糖疫苗中的多糖含量检测。

    2022年04期 v.35 433-436页 [查看摘要][在线阅读][下载 180K]
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临床研究

  • 上海市长宁区健康人群流行性腮腺炎抗体水平调查

    庞红;施玮;刘小祥;朱晓华;郑敏;

    目的 分析2017年上海市长宁区不同年龄组人群腮腺炎IgG抗体水平,并观察麻疹风疹流行性腮腺炎联合减毒活疫苗(live attenuated measles,mumps and rubella combined vaccine,MMR)纳入免疫规划后人群抗体水平的变化情况。方法 2017年采集上海市长宁区不同年龄人群血清标本共计2 662份,应用ELISA法定量检测血清中腮腺炎IgG抗体水平,并与2009年健康人群腮腺炎抗体水平监测结果进行比较。结果 经年龄标化后,2017年人群腮腺炎IgG抗体总阳性率为90.09%。5~9岁儿童IgG抗体阳性率(99.13%)和几何平均浓度(geometric mean concentrations,GMC)(632.06 U/mL)最高,之后逐渐下降。与2009年相比,2017年1~4、5~9和10~14岁年龄组抗体阳性率和GMC均明显上升(P <0.05)。结论 2017年长宁区人群腮腺炎IgG抗体总阳性率达到较高水平,且被疫苗覆盖的人群抗体阳性率和GMC水平均显著上升。2剂MMR接种程序能使受种者维持较高的抗体阳性率和GMC水平。

    2022年04期 v.35 437-439+447页 [查看摘要][在线阅读][下载 179K]
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技术方法

  • 流感疫苗神经氨酸酶含量双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立及应用

    邓涛;吕传硕;刘京;马宁;周蓉;张国梅;乐洋;张家友;杨晓明;

    目的 建立用于定量检测流感疫苗神经氨酸酶(neuraminidase,NA)含量的双抗体夹心ELISA方法,并进行验证。方法 采用多肽合成方式合成NA保守序列,经皮下多点免疫日本大耳白兔和豚鼠,共免疫5次,末次免疫后2周分别经颈动脉和心脏采血,分离血清,通过Protein G/A层析纯化,制备NA通用抗体。以鼠源通用抗体作为包被抗体,兔源通用抗体经HRP标记后作为酶标抗体,建立双抗体夹心ELISA法。确定包被抗体(32、16、8、4、2、1μg/mL)的工作浓度及酶标抗体(1∶50~1∶6 400)的稀释度。验证方法的线性范围、准确度、重复性、中间精密度及耐用性。采用建立的方法测定流感裂解疫苗H1N1、H3N2、BV和BY型单价原液中的NA含量,并与荧光底物法进行比较。结果 兔源和鼠源通用抗体的效价分别为128 000和64 000,纯度分别为95%和96%,蛋白浓度分别为2 339和1 780μg/mL。建立双抗体夹心ELISA法的最佳包被抗体工作浓度为16μg/mL,最佳酶标抗体稀释度为1∶400。NA(H3N2型)参考品在20~640 ng/mL浓度范围内与A450呈良好线性关系,R2均> 0.99;500、200、50 ng/mL的NA(H3N2型)参考品的平均样品回收率分别为102.15%、100.89%、100.70%,重复6次检测结果的CV均<10%,2名实验员3次检测结果的CV均<15%;不同抗原反应时间及酶标二抗孵育时间的样品回收率为85.41%~103.81%。建立的双抗体夹心ELISA法检测流感裂解疫苗H1N1、H3N2、BV、BY型单价原液NA含量分别为8.06、13.20、6.93、6.18μg/mL,荧光底物法检测的NA活性分别为29 833、36 800、28 907、25 871 U/L,两者结果呈正相关(R2=0.979 2)。结论 建立的NA含量双抗体夹心ELISA定量检测法具有良好的准确度、重复性、中间精密度和耐用性,可用于流感疫苗的检定及生产过程中对NA含量的质量控制。

    2022年04期 v.35 440-447页 [查看摘要][在线阅读][下载 311K]
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  • 乙型肝炎表面抗体不同检测方法的比较与评价

    陈诗怡;赵钰萍;赵婷;李菁;施红媛;李颖;杨净思;

    目的 采用电化学发光免疫分析法(electrochemiluminescence immunoassay,ECLIA)和酶联免疫吸附法(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)对乙型肝炎表面抗体(hepatitis B surface antibody,HBsAb)进行检测,对比分析两种检测方法的应用效果。方法 选取955份广西壮族自治区柳州市已按国家免疫规划要求按时接种乙型肝炎疫苗(hepatitis B vaccine,HepB)的血清样本,分别采用ECLIA法和ELISA法检测HBsAb水平,检测前先对两种方法进行精确度、正确度和可报告范围(线性评价)验证,比较两种方法检测结果的差异。结果 两种检测方法的精确度、正确度和可报告范围(线性评价)的验证结果均在可接受范围内。对于血清样本,两种检测方法的定性检测结果具有较强的一致性(Kappa系数为0.787 8),而定量检测结果一致性较差(P <0.001)。结论 在HBsAb定性检测上,两种方法检测结果无明显差异,但定量检测上却存在明显差异,ELISA法对于低水平抗体检测灵敏度不足,易造成检测结果为假阴性,而ECLIA法灵敏度更高、假阴性率更低、检测结果更可靠。

    2022年04期 v.35 448-453页 [查看摘要][在线阅读][下载 240K]
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  • 胰高血糖素样肽-1受体激动剂融合蛋白纯度反相高效液相色谱检测方法的建立及验证

    高雪峰;王婉如;郑伟峰;杨军;张艳丽;马亚茹;陈勇;

    目的 建立用于检测胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)受体激动剂融合蛋白纯度的反相高效液相色谱(reverse phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)法,并进行验证。方法 采用Agilent ZORBAX 300Extend-C18(4.6 mm×150 mm)分析柱和ZORBAX 300Extend-C18(4.6 mm×12.5 mm)保护柱。色谱条件:流动相A液:0.1%三氟乙酸水溶液;流动相B液:0.1%三氟乙酸的乙腈溶液;上样体积:100μL;工作流速:0.50 mL/min;A相溶液平衡系统至基线平稳,开始进样;0~5 min:0~50%B;5~15 min:50%~60%B;15~20 min:60%~100%B;20~30 min:100%B;8 min:100%A;检测波长:280 nm;柱温箱温度:40℃。验证方法的系统适用性、专属性、灵敏度、重复性、中间精密性和耐用性。采用建立的方法检测6批GLP-1受体激动剂融合蛋白的纯度。结果 理论塔板数为26 891,对称因子为0.64;空白对照(稀释液)、阴性对照[抗凝血酶-Ⅲ(antithrombin-Ⅲ,AT-Ⅲ)及睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)]对色谱图无干扰峰,GLP-1受体激动剂融合蛋白与阴性对照分离度> 1.5;方法的灵敏度为4.8μg/mL;重复性验证峰面积百分比的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.35%,保留时间RSD为0.07%;中间精密性验证峰面积百分比RSD为0.75%,保留时间RSD为0.07%;不同系统温度下测定峰面积百分比RSD为3.94%,保留时间RSD为0.10%。6批GLP-1受体激动剂融合蛋白的纯度均≥95.0%。结论 建立的用于检测GLP-1受体激动剂融合蛋白纯度的RP-HPLC法具有良好的系统适用性、灵敏度、精密性和耐用性,可用于GLP-1受体激动剂融合蛋白的质量控制。

    2022年04期 v.35 454-457+463页 [查看摘要][在线阅读][下载 211K]
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  • 重组假丝酵母尿酸氧化酶等电点毛细管等电聚焦检测方法的建立及验证

    刘家鑫;张婷婷;杨丽华;唐其凤;靳征;

    目的 建立检测重组假丝酵母尿酸氧化酶等电点(isoelectric point,pI)的毛细管等点聚焦(capillary isoelectrie focusing,cIEF)方法,并进行验证。方法 通过优化cIEF过程中稳定剂比例、聚焦时间等参数,建立cIEF方法,并对方法的专属性、精密度、准确性、耐用性进行验证。结果 确定稳定剂精氨酸(arginine,ARG)︰亚氨基二乙酸(iminodiacetic acid,IDA)比例60μL︰6μL,聚焦时间15 min为最适条件。样品基质在重组假丝酵母尿酸氧化酶主峰位置无干扰峰;重复性、中间精密度、批间精密度验证相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)分别为0.81%~0.87%、0.91%~1.5%和0%~0.79%;3-10两性电解质载体、cIEF凝胶、毛细管柱等物料批号改变,方法不受影响。结论 建立的cIEF方法专属性、精密度、准确度、耐用性良好,适用于重组假丝酵母尿酸氧化酶pI的检测。

    2022年04期 v.35 458-463页 [查看摘要][在线阅读][下载 279K]
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  • 卡介苗活性快速检测方法的建立及验证

    黄岳;吴宇杰;朱克骏;江秋虹;张健;卢荣江;韦芬;陶立峰;蒲江;

    目的 建立卡介苗(Bacille Calmette-Guérin vaccine,BCG)活性的快速测定方法,并进行初步验证。方法 将ATP标准品稀释为6.25×10~(-10)~2×10~(-8) mol/L,采用生物荧光法进行检测,获得相对荧光强度(relative light unit,RLU),建立ATP浓度与RLU的标准曲线。分别通过离心法、本底法和ATP酶法提取9批低剂量(0.25、0.375、0.5 mg/mL)和6批高剂量(60 mg/mL)BCG的ATP,采用生物荧光法检测ATP含量,并评价其与活菌数(活菌计数法检测)的相关性。验证该方法的重复性和中间精密性。结果 ATP浓度在6.25×10~(-10)~2×10~(-8)mol/L范围内,与RLU呈良好线性关系,回归方程为y=1 680.4 x-574.46,R2=0.998 7。离心法提取高剂量及低剂量BCG的ATP的含量与相应活菌数无显著相关性(P> 0.05);本底法和ATP酶法提取高剂量BCG的ATP的含量与相应活菌数具有显著相关性(P <0.05),两种方法提取低剂量BCG的ATP的含量与相应活菌数无显著相关性(P> 0.05)。重复性和中间精密性验证的RSD均<8%。结论 建立的高浓度BCG活性的快速检测方法具有良好的重复性和中间精密性。

    2022年04期 v.35 464-467+474页 [查看摘要][在线阅读][下载 200K]
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  • 乳糖含量离子色谱检测方法的建立及应用

    卓晓琴;褚冰洁;姜珊;强鹏侠;傅元欣;冯潇;雒丽红;冯德杰;

    目的 建立检测原辅料乳糖和多糖疫苗中乳糖含量的离子色谱法。方法 原辅料乳糖用纯化水溶解后过滤上样;多糖疫苗用纯化水溶解后,离心后过滤,取滤液上样。均采用CarboPac PA20分析柱(3 mm×150 mm)分离,依外标法建立校正曲线,并对建立的方法进行系统适应性、专属性、准确度、精密度验证,确定检测限、定量限及线性范围。采用建立的方法检测原辅料乳糖和多糖疫苗中的乳糖含量。结果 该方法系统适应性、特异性均较好;准确度回收率为93.9%~100.2%;重复性及中间精密度相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于1.0%;检测限及定量限分别为0.001和0.05 mg/L;乳糖浓度在2~10 mg/L范围内与峰面积具有良好的线性关系,标准曲线相关系数r2均达到0.999以上;耐用性较好,实际应用中RSD为0.2%~0.8%。结论 该方法操作简单、结果准确可靠,具有高准确度、精密度和灵敏度等优点,可作为多糖疫苗中乳糖含量检测的常规方法。

    2022年04期 v.35 468-474页 [查看摘要][在线阅读][下载 229K]
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  • WAVE25生物反应器对白细胞介素-12表达的工艺放大

    乔磊;郑彬彬;杨盼盼;陈文成;闫乐乐;王建刚;吴明远;

    目的 利用WAVE25生物反应器进行白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)表达的工艺放大,为后期的大规模工业化生产提供参考。方法 采用BIOSTAT B 10 L生物反应器和GE WAVE25 50 L生物反应器进行IL-12表达的工艺放大,依据细胞活率、密度、pH及葡萄糖、乳酸、铵根离子、谷氨酰胺等生长代谢参数对工艺放大过程中间控制进行监测,依据SDS-PAGE、蛋白产量、等电点、肽图等理化检测指标对表达产物进行初步质量检测和鉴定。结果 工艺放大前后中间过程控制参数变化曲线及表达产物的质量指标均一致,各参数均在质量标准范围内。结论 该表达工艺可从BIOSTAT B 10 L生物反应器到GE WAVE25 50 L稳健放大,为后续更大规模的工业化生产提供了参考。

    2022年04期 v.35 475-480页 [查看摘要][在线阅读][下载 293K]
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综述

  • SARS-CoV-2检测方法的研究进展

    黄慧丽;吴佳静;梁春南;

    2020年,新型冠状病毒肺炎(Coronavirus Disease 2019,COVID-19)疫情肆虐全球,该病传播能力强、感染范围广、且防控难度大。国际病毒分类委员会(International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)将造成本次疫情的病毒命名为严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)。SARS-Cov-2主要通过呼吸道飞沫和人体密切接触传播,人感染后一般会有数天无症状潜伏期,后续可出现乏力、干咳、发热等症状;另有一些病例长期无症状但携带病毒,增加了诊断的困难,不利于疫情的控制。因此,快速、准确诊断与筛查是COVID-19防控工作中的最重要环节。本文主要就应用于COVID-19诊断的核酸检测法、抗体检测法及抗原检测法的研究进展作一综述。

    2022年04期 v.35 481-485+492页 [查看摘要][在线阅读][下载 204K]
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  • 狂犬病病毒单克隆抗体的研究进展

    蔡美娜;许四宏;

    狂犬病是由狂犬病病毒感染引起的烈性传染病,一旦发病,致死率接近100%,一般采用抗狂犬病病毒免疫球蛋白(rabies immunoglobulin,RIG)进行暴露后预防(post-exposure prophylaxis,PEP)阻止疾病发生。RIG主要来自人或马的免疫血清,存在成本高、供不应求及安全性、免疫原性等问题。免疫保护性中和抗体主要针对狂犬病病毒糖蛋白(G)产生,WHO建议使用至少2个表位不重叠的单克隆抗体(MAb)来替代RIG。本文对狂犬病病毒G蛋白结构、中和表位及可用于替代RIG的具有广谱中和活性的候选MAb等的研究进展作一综述,为单抗鸡尾酒(MAb cocktail)疗法抗体组合的研究提供参考。

    2022年04期 v.35 486-492页 [查看摘要][在线阅读][下载 258K]
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  • 抗菌肽重组表达的优化策略

    宗西翠;张翼;方彭华;陈玉清;

    抗菌肽是由特定基因编码并诱导产生的一类多肽,具有相对分子质量小、热稳定性高、作用机制独特、杀菌范围广等特点,同时在刺激伤口愈合、激素调节及免疫调节等方面有重要作用。基因工程表达技术是大量获得抗菌肽最经济、科学、有效的途径,但由于表达量低、表达产物不稳定、与宿主之间的毒性作用等因素制约了其规模化生产。本文就抗菌肽重组表达过程中的融合标签选择、偏爱密码子选择、最适菌株选择、基因共表达、融合蛋白纯化方法及基因表达设计等方面的优化策略作一综述,以期为抗菌肽的应用和规模化生产提供参考。

    2022年04期 v.35 493-499+507页 [查看摘要][在线阅读][下载 310K]
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  • 腺相关病毒载体的研究进展

    陈平;张利娟;李娜;

    腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)是目前应用较为广泛的病毒载体之一。AAV载体作为基因治疗的工具,具有较高的生物安全性和稳定性、较低的免疫原性、较广的宿主范围、较强的特异性、可长时间表达外源基因等特点,因此,在基因治疗的研究过程中备受关注。本文就AAV的发现与生物学特性、重组AAV(r AAV)载体的设计、AAV载体在临床基因治疗中的应用及其可能引发的不良反应作一综述,以期为AAV载体今后的研究方向提供参考。

    2022年04期 v.35 500-507页 [查看摘要][在线阅读][下载 277K]
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  • 人类内源性逆转录病毒在多发性硬化症发病机制中作用的研究进展

    俞坤;武世萍;巩盼盼;王满侠;

    多发性硬化症(multiple sclerosis,MS)是一种复杂的中枢神经系统(central nervous system,CNS)自身免疫性脱髓鞘疾病,主要病理特征为免疫细胞的浸润及随之出现的神经炎症反应、脱髓鞘反应及神经元损伤,其发病机制目前尚未明确。人类内源性逆转录病毒(human endogenous retroviruses,HERV)是一大类RNA病毒,其特征是编码逆转录酶,并能将病毒基因组整合至宿主基因组中。HERV及其表达产物与MS的发病机制密切相关。因此,本文就HERV与MS的相关性、HERV在MS发病机制中的作用及MS的治疗作一综述。

    2022年04期 v.35 508-512页 [查看摘要][在线阅读][下载 167K]
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