中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

专栏——党为人民谋幸福的100年

  • 手足口病相关肠道病毒及疫苗的研究进展

    靳卫平;钱莎莎;申硕;

    自2008年安徽阜阳暴发肠道病毒A群71型(enterovirus A71,EV-A71)引起的手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)疫情后,我国与东南亚地区成为HFMD流行区,疫情的流行推动了HFMD相关肠道病毒的基础研究和疫苗研发。2016年单价EV-A71全病毒灭活疫苗上市,由EV-A71感染引起的HFMD的发病率、重症率和病死率降低。然而,2012年前后,中国HFMD相关肠道病毒的病原谱发生了改变,非EV-A71、非柯萨奇病毒A组16型(coxsackie-virus A16,CV-A16)逐步替代EV-A71和CV-A16成为主要病原体,其中包括CV-A6和CV-A10及其他血清型。单价EV-A71灭活疫苗难以预防由其他血清型引起的HFMD。含EV-A71和其他几种主要血清型的多价疫苗研发,已成为公认的预防HFMD、控制肠道病毒传播、延缓变异和重组株出现的手段。本文就肠道病毒的流行病学、分子生物学及相关疫苗,特别是多价疫苗的研究进展和面临的挑战作一综述。

    2021年11期 v.34 1273-1283页 [查看摘要][在线阅读][下载 392K]
    [下载次数:93 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:38 ]

疫苗研究

  • 肠道病毒71型灭活疫苗高温条件下的稳定性

    周振歆;易力;胡云光;杨家方;何佳宁;邹静;袁洋梅;陈镜休;梁靖;董少忠;

    目的考察肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)灭活疫苗于(40±2)℃条件下放置的稳定性,为该疫苗储存和运输过程中冷链破坏时(高温),疫苗有效期内的有效性和安全性提供参考。方法将3批(P1、P2、P3)出厂检验合格、按储存要求2~8℃储存至有效期2年的EV71灭活疫苗分别于(40±2)℃放置0、24、48、72、96 h后,检测其抗原含量,了解高温条件下疫苗的稳定性。再选取另3批(P4、P5、P6)储存条件一致的EV71灭活疫苗,于(40±2)℃放置24 h后,按照企业注册标准的要求进行各项检测,分析高温条件对疫苗全部质量检测指标的影响。结果P1、P2、P3批疫苗于(40±2)℃储存24 h后,其抗原含量均符合企业注册标准要求,随着(40±2)℃超温时间的延长,3批疫苗的抗原含量均呈下降趋势;与0 h相比,疫苗于(40±2)℃放置24 h后,抗原含量有所下降,但并未达到显著差异,放置48 h后,抗原含量明显降低,直至放置96 h,抗原含量又相对稳定。P4、P5、P6批疫苗于(40±2)℃放置24 h后,按照企业注册标准要求进行的各项检测结果均符合要求。结论 EV71灭活疫苗暴露于(40±2)℃24 h内具有一定的稳定性,本研究为(40±2)℃高温极端条件下疫苗的质量研究提供了参考。

    2021年11期 v.34 1284-1288+1294页 [查看摘要][在线阅读][下载 230K]
    [下载次数:23 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:34 ]
  • 幽门螺杆菌Hp1188蛋白的免疫保护效果

    韩飞;张帅帅;

    目的研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H. pylori)重组Hp1188蛋白免疫反应性及口服免疫后对小鼠的保护效果,以探讨其在制备预防性疫苗中的价值。方法纯化H. pylori重组Hp1188蛋白,Western blot鉴定其免疫反应性。将纯化的重组Hp1188蛋白作为H. pylori抗原,ELISA法检测100例临床病例血清样本的相应抗体,并与尿素呼气试验(urea breath test,UBT)和快速尿素酶试验(rapid urease test,RUT)结果进行比较,评价其临床应用的可行性。将纯化的重组Hp1188蛋白免疫小鼠后,用H. pylori悉尼株1(Sydney strain 1,SS1)攻击感染,ELISA法检测小鼠血清和小肠黏液中抗Hp1188抗体(IgG、IgA和sIgA)产生情况;胃黏膜H. pylori培养、RUT、病理组织学检查观察H. pylori定植量及炎症情况。结果重组Hp1188蛋白纯化后纯度达90%,浓度为1.0 mg/mL。Western blot分析显示,该蛋白能被H. pylori患者血清识别。血清学结果显示,Hp1188抗体试剂检测的敏感性为93.8%,特异性为94.3%。经重组Hp1188蛋白免疫后,小鼠体内IgG、IgA、sIgA含量均明显高于PBS对照组(P <0.05),H. pylori活菌定植量、RUT及病理学检查指标均明显低于PBS对照组(P <0.05),对小鼠的保护率为70%。结论 Hp1188蛋白对小鼠具有免疫保护作用,本研究为研制H. pylori相关疫苗提供了试验依据。

    2021年11期 v.34 1289-1294页 [查看摘要][在线阅读][下载 314K]
    [下载次数:21 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:29 ]
  • 截短型水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E的原核表达及免疫原性评价

    李春明;王丽;马成;刘佳羽;许源航;牟忠梅;

    目的原核表达截短型水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)糖蛋白E(glycoprotein E,gE),并评价其免疫原性。方法通过GenBank获取VZV gE的第25~537位氨基酸(gE25-537)相应的核酸序列,经密码子优化,合成质粒pUC-VZV-gE25-537-His;以其为模板扩增目的片段,克隆至载体pET-21b,构建重组表达质粒pET-21b-VZV-gE25-537-His,转化感受态E. coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,包涵体经Urea溶解后,进行镍离子层析柱纯化。将纯化蛋白与弗氏佐剂混合,经皮下多点免疫小鼠,共免疫3次,末次免疫2周,经尾部静脉采血,分离血清,检测血清效价和中和效价。结果重组表达质粒pET-21b-VZV-gE25-537-His经双酶切及测序鉴定证明构建正确。目的蛋白相对分子质量约62 000,主要以包涵体形式表达,纯化后纯度达85%,且可与鼠抗gE单克隆抗体发生特异性结合。免疫3次后,小鼠血清效价可达1∶54 954,中和效价为1∶21.75。结论原核表达了VZV gE,该蛋白具有良好的免疫原性,有望成为制备带状疱疹疫苗的候选抗原。

    2021年11期 v.34 1295-1299页 [查看摘要][在线阅读][下载 211K]
    [下载次数:27 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:33 ]

基础研究

  • 不同细胞培养基对抗破伤风毒素人源单抗关键质量属性的影响

    王建锋;汪艳艳;郭岚;叶星;南建军;安晨;宋兰兰;陈继军;毛晓燕;

    目的探讨不同培养基对抗破伤风毒素人源单抗工程细胞株生长状态及抗体关键质量属性的影响,筛选出适应抗破伤风毒素人源单抗工程细胞株的培养基。方法选取Growth A、Dynamis、T54 3种商用培养基,采用Fed-batch培养模式培养,观察活细胞密度及细胞活率;并通过SEC-HPLC和CE-SDS分析抗体纯度、cIEF法分析pI及电荷异构体。结果 Growth A medium培养的细胞活细胞密度最高,细胞活率在Dynamis medium和T54 medium之间;Growth A medium培养的细胞抗体纯度最高;3种培养基培养的细胞抗体pI差异不明显;Growth A medium培养的细胞抗体电荷变异体酸性峰数量和占比均少于其他两种培养基,主峰占比在其他两种培养基之间。结论 Growth A medium较适合抗破伤风毒素人源单抗工程细胞株的培养。

    2021年11期 v.34 1300-1306页 [查看摘要][在线阅读][下载 393K]
    [下载次数:26 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:41 ]
  • 水溶性辅酶Q10对鱼藤酮诱导帕金森病模型大鼠疾病的延缓作用及其机制

    冯驰;萨日盖其其格;李海宁;吕玥;李慧蕾;董武;杨景峰;

    目的探讨水溶性辅酶Q10(coenzyme Q10,CoQ10)对鱼藤酮诱导帕金森病(Parkinson disease,PD)模型大鼠疾病的延缓作用及其机制。方法将Wistar大鼠随机分为5组:CoQ10对照组、葵花油对照组(溶媒对照)、鱼藤酮造模组(PD)、CoQ10预治疗+PD组(CoQ10B)和PD+CoQ10后治疗组(CoQ10A),每组10只。通过旷场试验、神经运动功能试验、组织病理学观察及氧化应力关联基因和氨基酸脱羧酶基因表达水平评价水溶性CoQ10对鱼藤酮诱导PD模型大鼠疾病的恢复作用。结果水溶性CoQ10显著恢复了PD模型大鼠直立次数的减少和悬挂持续时间的缩短。在转轴试验中,水溶性CoQ10也有延长持续时间的趋势。组织病理学观察显示,鱼藤酮引起大鼠部分神经元出现核浓缩和细胞变性,而水溶性CoQ10前后治疗均能减缓这种变性。鱼藤酮增加了Nrf2/HO-1关联基因的表达,降低了TPH和5-HT1A受体基因的表达,而水溶性CoQ10降低了Nrf2/HO-1关联基因的表达,恢复了THP和5-HT1A受体基因的表达。结论水溶性CoQ10对鱼藤酮诱导的神经性病变具有一定的神经保护作用。

    2021年11期 v.34 1307-1313页 [查看摘要][在线阅读][下载 456K]
    [下载次数:48 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:30 ]
  • 茶树Ⅲ类过氧化物酶基因家族的鉴定及表达模式分析

    史晓霞;张宝会;姚新转;吕立堂;

    目的鉴定茶树中的Ⅲ类过氧化物酶(classⅢperoxidases,POD)基因家族成员,并分析其表达模式。方法利用生物信息学方法鉴定茶树基因组中的POD基因家族成员,并检测其染色体定位、基因结构、蛋白质保守基序、进化关系及共线性关系;同时分析其在茶树不同组织中及经干旱胁迫、盐胁迫和冷胁迫后茶树中的转录组数据。结果鉴定出茶树基因组中共有122个POD基因。122个茶树POD基因在茶树染色体上分布不均,并有较多串联基因重复序列;相同亚家族的基因结构和保守基序基本一致;根据进化关系茶树POD基因可分为5个簇;共存在23对共线性关系。茶树POD基因在根中呈高表达,部分基因随着叶片成熟度的增加,表达水平升高;不同的茶树POD基因在干旱胁迫、盐胁迫、冷胁迫后存在差异表达。结论茶树POD基因在茶树生长发育和非生物胁迫响应中发挥重要作用,本实验为茶树POD基因功能的进一步研究奠定了基础。

    2021年11期 v.34 1314-1319页 [查看摘要][在线阅读][下载 654K]
    [下载次数:48 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:26 ]
  • 奶牛乳腺上皮细胞来源外泌体中bta-miR-126-5p靶基因及调控功能的生物信息学分析

    许浩天;连帅;武瑞;王建发;

    目的对奶牛乳腺上皮细胞来源外泌体中bta-miR-126-5p的候选靶基因进行预测,利用相关生物信息学技术对靶基因进行功能分析,为bta-miR-126-5p的功能验证奠定基础。方法应用Targetscan和miRWalk在线分析系统预测bta-miR-126-5p的候选靶基因,利用DAVID、STRING、KEGG等生物信息分析系统对靶基因进行GO富集、蛋白质互作、KEGG富集分析。结果 bta-miR-126-5p成熟区序列在不同物种间高度保守,共筛选出203个bta-miR-126-5p的候选靶基因,候选靶基因主要参与金属离子结合(尤其是锌离子结合)以及ATP结合等细胞内部分子功能过程,富集的信号通路集中于脂肪酸生物合成及降解、嘌呤代谢、丙酸盐代谢、磷酸肌醇代谢。结论 bta-miR-126-5p可能通过调节候选靶基因参与相关生物学进程,在奶牛炎症反应过程和生理性代谢活动中发挥重要作用。

    2021年11期 v.34 1320-1324+1329页 [查看摘要][在线阅读][下载 410K]
    [下载次数:42 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:28 ]

治疗制剂

  • 超活化血小板裂解液对成骨细胞增殖的影响及凋亡修复作用

    崔同;吴奇剑;刘春香;廉洪宇;赵雪;李子涛;张怡;

    目的探讨超活化血小板裂解液(super-activated platelet lysate,sPL)对成骨细胞增殖的影响及凋亡修复作用,以明确其能否有效应用于骨组织愈合。方法在成骨细胞hFOB. 1.19中分别加入不同浓度的sPL(0%、5%、10%、20%),连续7 d计数,并绘制生长曲线,分析不同浓度sPL对成骨细胞的增殖作用;用转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)诱导建立成骨细胞凋亡模型,流式细胞术检测不同浓度sPL(0%、5%、10%、20%)作用36 h后,对凋亡细胞的修复作用。结果 5%和10%sPL对成骨细胞具有较高的促增殖作用,5%sPL的促细胞增殖效果高于10%;20%sPL未见显著促细胞增殖作用。与0%sPL组比较,5%和10%sPL对凋亡的成骨细胞具有显著修复作用(P均<0.01);而20%sPL未见显著凋亡修复作用(P> 0.05)。结论 sPL可促进成骨细胞增殖以及凋亡修复,进而可达到促进骨组织愈合的效果,sPL浓度为5%时,效果更佳。

    2021年11期 v.34 1325-1329页 [查看摘要][在线阅读][下载 236K]
    [下载次数:11 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:29 ]

诊断制剂

  • 人类白细胞抗原组织配型基因分型国家参考品的协作标定

    胡泽斌;孙彬裕;刘湘;兰更欣;孙晶;于婷;黄杰;

    目的对人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)组织配型基因分型国家参考品进行协作标定。方法选择具有良好资质的4家实验室按统一的协作标定方案进行实验。采用PCR-SSO法、PCR-SBT测序法、NGS测序法对38支HLA组织配型基因分型国家参考品样本进行协作标定,NGS测序法及PCR-SBT测序法每个样本测定1次,PCR-SSO法每个样本测定3次。同时采用PCR-SBT测序法检测国际HLA质控盘(51份样本),进行实验的质量控制。结果 4家协作单位对38支HLA组织配型基因分型国家参考品样本的HLA-A、B、C、DRB1、DQB1位点均能全部检出,5个位点的2或4位分辨率的分型结果均一致,最终选用4位高分辨率的分型结果作为国家参考品定值。51份国际HLA质控盘样本全部检出,且其HLA-A、B、C、DRB1、DQB1分型结果与IHWG公布结果一致。结论 HLA组织配型基因分型国家参考品定值准确,可用于HLA-A、B、C、DRB1、DQB1分型检测试剂准确性的评价。

    2021年11期 v.34 1330-1333页 [查看摘要][在线阅读][下载 139K]
    [下载次数:19 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:29 ]

临床研究

  • 云南省6岁以下婴幼儿家长脊髓灰质炎及其疫苗接种认知调查

    石昊昱;仲志磊;王竞冬;李颖;李佳炫;陈秋雨;尹兴晓;杨净思;

    目的了解云南省6岁以下婴幼儿家长对脊髓灰质炎(poliomyelitis,简称脊灰)及其疫苗接种认知现状,探讨消灭脊灰科普教育的有效方法。方法采用方便抽样方法选取云南省内24个社区卫生服务中心儿童疫苗接种点,对6岁以下婴幼儿家长进行问卷调查。结果发放问卷600份,回收有效问卷553份。接种医生为婴幼儿家长获取疫苗知识的主要来源(70.5%);在选择疫苗时,接种医生的建议是最大的影响因素(68.2%)。亲子关系、文化程度、家庭收入及家庭主要成员职业是否与医学相关等特征不同的儿童家长,选择疫苗时的影响因素不同。不同特征的婴幼儿家长对4方面的脊灰及其疫苗知识的回答正确率不同。是否会选择接种自费IPV,不同特征婴幼儿家长的选择有显著差异。选择自费IPV时,不同亲子关系、家庭月收入特征的家长在优先考虑因素差异有统计学意义(P <0.01)。结论婴幼儿家长对脊灰及其疫苗接种认知情况存在差异,应根据家长情况及其需求,采取有针对性的科普教育方式,以提高家长对脊灰及其疫苗知识的认知,有助于我国维持无脊灰状态。

    2021年11期 v.34 1334-1339+1351页 [查看摘要][在线阅读][下载 217K]
    [下载次数:24 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:31 ]
  • 2018—2019年内蒙古自治区疑似预防接种异常反应监测分析

    李东颖;闫绍宏;田晓灵;雷霞;

    目的分析2018—2019年内蒙古自治区疑似预防接种异常反应(adverse events following immunization,AEFI)的流行病学特征,为提高疫苗安全性及预防接种服务质量提供依据。方法通过中国免疫规划信息管理系统收集2018—2019年内蒙古报告的AEFI监测数据,采用描述性流行病学方法进行分析。结果 2018—2019年内蒙古自治区共报告AEFI个案6 696例,平均报告发生率为48.10/10万剂。报告个案中男女性别比为1.26∶1,主要集中在6岁及以下,共6 536例(97.61%),3—8月份报告数最多。一般反应6 221例,占92.90%,主要以发热(4 426例,31.79/10万剂)为主;异常反应418例,占6.24%,主要以过敏反应(222例,2.77/10万剂)为主。AEFI报告发生率前3位的分别为A+C+Y+W135群脑膜炎球菌多糖疫苗、无细胞百白破联合疫苗、流行性乙型脑炎减毒活疫苗。结论内蒙古自治区AEFI监测敏感性有所下降,报告以一般反应为主,需加强AEFI监测的培训及指导。

    2021年11期 v.34 1340-1343+1357页 [查看摘要][在线阅读][下载 189K]
    [下载次数:15 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:27 ]

技术方法

  • 静注COVID-19人免疫球蛋白(pH4)原料血浆筛选用试剂盒(ELISA)的确定及其定量检测方法的建立、验证及应用

    周志军;邢延涛;梁小龙;肖龙;曾双迎;李璞;邓琨;王月;喻剑虹;李陶敬;胡勇;韩韧;李策生;

    目的通过比较特异性、敏感度、线性范围对目前市售的5家新型冠状病毒IgG抗体检测试剂盒(厂家A、B、C、D、E)进行筛选,建立定量检测方法并验证,用于静注COVID-19人免疫球蛋白(pH4)所需原料血浆的检测。方法将已知有中和活性的新型冠状病毒康复者恢复期血浆作为内控标准品,进行2倍系列稀释共7个稀释度(S1~S7),按照5个厂家试剂盒说明书操作,比较最高浓度S1的吸光值,用四参数拟合曲线比较5家试剂盒的线性范围;用候选的3家试剂盒初步建立定量检测方法并检测部分有代表性的阴性和阳性样本,比较结果的相关性;综合考虑选定一家试剂盒,将内控标准品进行系列稀释检测,确定其稀释度赋值,拟合标准曲线建立定量检测方法,并验证其线性范围、准确度和精密度,用于建立血浆筛查的模式。结果内控标准品的线性范围显示,厂家A可用倍比6个稀释度,S1吸光值为2.8;厂家B可用5个倍比稀释度,S1吸光值为2.4;厂家C可用5个倍比稀释度,S1吸光值为1.4;厂家D可用倍比3个稀释度,S1吸光值为3.3;厂家E可用5个倍比稀释度,S1吸光值为3.3。线性范围相近的厂家A、B、E试剂盒利用内控标准品建立了定量检测方法,曲线的决定系数R2和各稀释度的回收率均符合要求,厂家A检测有代表性的阴性样本本底较高,特异性不好;3家试剂盒与中和试验检测有代表性的阳性样本结果的相关性均> 0.9。选定用厂家B试剂盒,用其3个批次试剂盒4次检测的内控标准品的稀释度赋值为32,四参数拟合曲线线性成立,稀释度的线性范围为1~16,R2> 0.99,准确度、精密度符合要求。建立了单孔检测的筛浆模式,确定了复测样品的稀释度。结论厂家B试剂盒优化为定量检测试剂盒,经验证后可用于静注COVID-19人免疫球蛋白原料血浆的筛选。

    2021年11期 v.34 1344-1351页 [查看摘要][在线阅读][下载 373K]
    [下载次数:56 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:29 ]
  • C群脑膜炎球菌多糖层析纯化工艺条件的优化

    苏晓叶;高磊;程亚君;李倩;田雨;刘刚;

    目的在保证分离效果、多糖回收率的前提下,优化层析法纯化C群脑膜炎球菌多糖的工艺条件,以提高层析介质柱容量,同时降低脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,SDC)使用量。方法将C群粗糖样品溶于1%SDC的TrisHCl缓冲液中进行预处理,用串联的装填Capto Adhere和Capto DEAE介质的层析柱,将多糖分离纯化,超滤脱盐后获得多糖原液。考察缓冲液中SDC含量、上样粗糖浓度、上样量对层析分离效果的影响,优化获得最佳工艺条件;在最佳工艺条件下,考察层析柱的使用寿命以利于层析介质的清洁再生。结果层析流速控制在90 cm/h时,粗多糖上样浓度可提高至5 g/L,流动相SDC浓度降至0.5%,上样量升高至25%;超滤脱盐后SDC残留量<10 mg/g多糖;层析纯化可连续进行5次,且层析柱的纯化分离效果基本不受影响。结论 C群脑膜炎球菌多糖可在层析柱上流穿,在最优条件下,层析法可用于C群多糖制备时的分离及纯化。

    2021年11期 v.34 1352-1357页 [查看摘要][在线阅读][下载 379K]
    [下载次数:21 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:27 ]
  • 重组人肠道病毒71型病毒样颗粒等电点全柱成像毛细管等电聚焦电泳测定方法的建立及验证

    王文伟;何成;王蓓;楼觉人;

    目的建立重组人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)等电点(isoelectric point,pI)全柱成像毛细管等电聚焦电泳(whole column imaging detection-capillary isoelectric focusing,WCID-CIEF)测定方法,并进行验证。方法采用WCID-CIEF测定重组人EV71 VLPs的pI,对WCID-CIEF的聚焦时间和尿素浓度进行优化,并对方法的专属性、准确度、重复性和中间精密度进行验证。结果选择3 000 V聚焦5 min作为WCIDCIEF的聚焦条件,样品处理时不添加尿素。空白缓冲液对重组人EV71 VLPs pI的测定无干扰;WCID-CIEF分别重复测定pI marker 5.85和pI marker 7.05样品6次的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)分别为0.18%和0.06%;重复测定6次重组人EV71 VLPs pI的RSD为0.08%;不同实验人员在不同日期重复测定12次重组人EV71 VLPs pI的RSD为0.14%。结论 WCID-CIEF测定重组人EV71 VLPs pI的专属性、准确度、重复性和中间精密度均良好,该方法快速、准确,可用于重组人EV71 VLPs的质量评价。

    2021年11期 v.34 1358-1361+1369页 [查看摘要][在线阅读][下载 222K]
    [下载次数:18 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:29 ]
  • 无血清悬浮培养MDCK细胞系的建立及生物反应器高密度培养

    赵彩红;王美皓;李自良;靳冬武;马花;马忠仁;乔自林;陈宏;张家友;王家敏;

    目的建立无血清悬浮培养MDCK细胞系,分析该悬浮细胞的生长特性、病毒敏感性、代谢动力学特征及生物反应器线性放大的可行性。方法通过逐步降血清和无血清悬浮驯化的方式获得1株MDCK悬浮细胞,检测其病毒敏感性,在1.2 L四联平行生物反应器中分析该悬浮细胞以不同初始接种密度(50×10~4、100×10~4、150×10~4、200×10~4个/mL)培养的细胞生长特性、代谢动力学特征和最佳传代时间,并进行5 L到75 L生物反应器的线性放大培养。结果贴壁培养型MDCK细胞以3%低血清稳定培养5代后,将该细胞直接适应无血清培养基获得1株MDCK悬浮细胞(命名为MDCK-XF03)并建库,复苏活力为96.8%;细胞接种不同型别的流感病毒均能较好增殖;以不同初始接种密度培养MDCK-XF03细胞,其最大增殖浓度均达1 000×10~4个/mL以上,且差异无统计学意义(P> 0.05),在培养前48 h均具有较大比生长速率,且差异有统计学意义(P <0.05),此时倍增时间也较短,且差异有统计学意义(P <0.05),MDCK-XF03细胞在84 h之前可充分利用葡萄糖。结论成功获得1株MDCK悬浮细胞MDCK-XF03,选择以200×10~4个/mL的初始接种密度进行生物反应器大规模培养,实现了从5 L到75 L的高密度线性放大培养,为流感疫苗的工业化生产提供了细胞基质。

    2021年11期 v.34 1362-1369页 [查看摘要][在线阅读][下载 725K]
    [下载次数:22 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:32 ]
  • 重组人白细胞介素-1受体拮抗剂生物学活性检测方法的建立及验证

    俞露;王莹;张宇;刘莹;刘景会;刘玉林;

    目的建立重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)生物学活性检测方法,并对方法进行验证。方法根据IL-1Ra阻断IL-1β杀伤人黑色素瘤细胞A375. S2的能力评价IL-1Ra的生物学活性,结果用标准品进行校正。对方法的样品起始浓度(8、10、12、14μg/mL)和IL-1β终浓度(2、4、6 ng/mL)进行优化,并验证方法的专属性、准确度、线性范围、中间精密度、耐用性。用建立的方法检测本公司在研产品3批原液和3批成品的生物学活性。结果确定该方法的样品起始浓度为8μg/mL,IL-1β终浓度为4 ng/mL。IL-1Ra原液缓冲液成分及成品中辅料成分对检测结果无影响;线性范围为6~13μg/mL,相关系数R2为0.992 1;准确度验证线性回归方程的斜率为0.975 8;不同试验人员于不同时间对1批原液、1批成品检测结果的几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)分别为13.895%和8.670%,均<20%;不同细胞代次、不同细胞密度下相对效价测定值的GCV为5.595%,<20%。用建立的方法检测3批原液和3批成品的结果较稳定。结论成功建立了重组人IL-1Ra生物学活性检测方法,该方法准确度高,精密度好,耐用性强,检测结果稳定可靠,可用于产品的生物学活性评价和质量控制。

    2021年11期 v.34 1370-1374页 [查看摘要][在线阅读][下载 224K]
    [下载次数:18 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:33 ]

综述

  • 狂犬病病毒CTN-1株在人用狂犬病疫苗中的应用及研究进展

    石磊泰;李玉华;

    狂犬病病毒CTN-1株在我国分离、驯化、减毒、建立和应用,具有自主知识产权,并已完全适应Vero细胞。具有效价高、免疫原性好、浓缩倍数少、生产成本低等优点。该毒株对人群有较好的保护作用。经生物学、免疫学、免疫化学、分子生物学、基因测序和动物流行病学等综合验证,该毒株符合国家和WHO相关人类疫苗生产的要求和质量标准,目前已实现产业化生产。本文对狂犬病病毒CTN-1株在狂犬病疫苗中应用的研究进展作一综述。

    2021年11期 v.34 1375-1381页 [查看摘要][在线阅读][下载 227K]
    [下载次数:55 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:33 ]
  • 小分子化合物在诱导多能干细胞领域的研究进展

    刘鑫洋;秦杰琛;赵庆;

    使用转录因子可以让已经分化的细胞重编程为诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs),但转录因子易产生基因突变,会带来安全性问题。直接获取患者体细胞并通过小分子化合物诱导成有分化潜能的多能干细胞是再生医学的最终目标,而小分子化合物诱导多能干细胞是有效产生高质量i PSCs的重要工具。结构稳定、作用相对可控的小分子化合物种类较多,本文主要针对目前已经报道的小分子化合物的分类、作用以及全化合物诱导获取i PSCs的方法作一综述。

    2021年11期 v.34 1382-1386页 [查看摘要][在线阅读][下载 169K]
    [下载次数:27 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:25 ]
  • CD44表达对乳腺癌干细胞的影响

    张瑞娟;杨英;

    在乳腺癌细胞中主要靠CD44标准亚型(CD44 standard isoform,CD44s)维持其干性,而CD44变异亚型(CD44variant isoform,CD44v)主要维持细胞的增殖。CD44作为重要的信号分子,能够接受细胞微环境的细胞因子的作用,将接收的信号进行整合,通过裂解酶的作用释放CD44胞内域(CD44ICD),将其信号传到细胞核。表达CD44的乳腺癌干细胞(breast cancer stem cells,BCSCs)也在乳腺癌转移过程中由CD44v细胞起主导作用。在上皮到间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)期间,CD44的亚型转变及结构的改变对细胞的侵袭、迁移及远端定位具有重要作用。本文综述了CD44对乳腺癌细胞干性的维持及在转移过程中乳腺癌细胞不同亚型向肺、骨、肝、脑转移的偏好性。

    2021年11期 v.34 1387-1390+1396页 [查看摘要][在线阅读][下载 196K]
    [下载次数:30 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:34 ]
  • 人类白细胞抗原分型检测与白血病相关性的研究进展

    裴永峰;余梅;

    人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)是人类的主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex,MHC),目前其分型检测方法以低分辨率的聚合酶链反应-序列特异性引物(low-resolution polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)和高分辨率的聚合酶链反应-直接测序分型(high-resolution ppolymerase chain reaction-direct sequencing typing,PCR-SBT)为主。白血病的发病机制尚不完全清楚,研究发现,HLA是白血病重要的遗传因素。许多HLA基因与白血病的发生具有遗传易感或拮抗作用,一些HLA分子与白血病的诊断、治疗及预后关系密切。本文对近年来有关HLA分型检测与白血病相关性的研究进展作一综述,为白血病发病机制、诊断及其预防等的研究提供参考。

    2021年11期 v.34 1391-1396页 [查看摘要][在线阅读][下载 210K]
    [下载次数:43 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:30 ]

专题报道