中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

一切为了人民健康——我们这十年

  • 新型冠状病毒灭活疫苗BIBP-CorV的真实世界研究进展

    张云涛;付强;杨云凯;严兵;张耀文;穆蔚云;王莹;谢德颖;姜鑫;秦守义;李兆丰;刘晓丹;申彦娜;苏晨;徐天放;来博男;吴之宸;梁擎宇;段晓晓;王征;曲靓;车宏;王倩;范喜芳;李燕;董俊;舒祥;张可欣;丁德天;李红玲;杨晓明;

    北京生物制品研究所有限责任公司研发生产的新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞,BIBP-CorV疫苗)相继完成了Ⅰ/Ⅱ、Ⅲ期临床试验,广泛应用于多个国家和地区。本文对BIBP-CorV疫苗在各国开展的真实世界研究进展作一综述,回顾总结了目前已报道的BIBP-CorV疫苗的真实世界研究数据,包括一般人群、高风险人群和特殊人群接种疫苗的有效性(vaccine effectiveness,VE)、免疫原性和安全性,为BIBP-CorV疫苗在大样本量的广泛人群中使用提供参考。

    2022年11期 v.35 1281-1286+1292页 [查看摘要][在线阅读][下载 921K]
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疫苗研究

  • 不同解离液及解离条件下新型冠状病毒灭活疫苗中铝佐剂的解离效果

    施金荣;申瑷琳;邓涛;潘俊杰;刘青;程小玲;罗敏;段凯;

    目的 探讨不同解离液及解离条件下新型冠状病毒灭活疫苗中铝佐剂的解离效果。方法 配制6种解离液(1~6),将新型冠状病毒灭活疫苗成品分别与6种解离液混合,于37℃解离20 h,ELISA法检测抗原含量,解离度最高的为最佳解离液。将新型冠状病毒灭活疫苗成品与最佳解离液混合,于室温或37℃分别解离2、10和20 h,ELISA法检测A_(450),以A_(450)最高的解离条件为最佳。对最佳解离液及解离条件进行干扰试验及准确性、精密性、耐用性、适用性验证。结果 最佳解离液为解离液5[0.1%(v/v)TritonX-100,0.1 mol/L EDTA,0.05%(v/v)Tween20],最佳解离条件为:37℃解离20 h。添加与未加解离液5的新型冠状病毒灭活疫苗原液检测结果差异无统计学意义(t=0.963,P> 0.05);重复检测6次新型冠状病毒灭活疫苗参考品的抗原含量回收率在98.13%~100.63%之间;同一实验员于不同时间及不同实验员于同一时间重复检测6次结果的CV均<10%;解离16、20、24 h检测结果的CV均<10%,ELISA检测过程中终止反应后放置0、10、20 min检测结果的CV均<1%;4批新型冠状病毒灭活疫苗成品检测结果的CV均<10%。结论 本研究确定的最佳解离液和解离条件效果较好,解离液干扰小,且准确性、精密性、耐用性和适用性良好,为新型冠状病毒灭活疫苗的质量控制提供了可靠的检测方法。

    2022年11期 v.35 1287-1292页 [查看摘要][在线阅读][下载 866K]
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  • 1株人3型副流感病毒减毒活疫苗候选毒株在小鼠动物模型上的安全性、免疫原性及保护效力评价

    关文竹;火文;李雄雄;王云瑾;王晓;程亚慧;寇桂英;包红;白慕群;

    目的 评价1株人3型副流感病毒(human parainfluenza virus type-3,HPIV-3)减毒活疫苗候选毒株CPW3在小鼠中的安全性、免疫原性及保护效力,以期为HPIV-3减毒活疫苗的研发提供候选毒株。方法 从甘肃省妇幼保健医院下呼吸道感染住院患儿下呼吸道分泌物标本中分离培养HPIV-3,采用诱变剂加逐步降温法筛选具有冷适应(coldadaptation,Ca)及温度敏感(temperature sensitivity,Ts)特性的HPIV-3毒株CPW3。用CPW3经鼻腔免疫雌性BALB/c小鼠,免疫30 d内每天测定小鼠体质量和体温;噬斑减少试验测定小鼠血清中和抗体;qRT-PCR法检测小鼠肺部和鼻洗液中HPIV-3病毒载量;ELIspot法测定小鼠肺脏、脾脏和外周血中HPIV-3特异性IgG/IgA抗体分泌淋巴细胞(antibody secreting cells,ASC)应答;流式细胞术测定小鼠肺脏、脾脏和外周血中IFNγ-CD4~+T/IFNγ-CD8~+T/IL-4-CD4~+T细胞应答。HPIV-3野毒株攻毒试验测定CPW3免疫对小鼠肺脏HPIV-3感染的保护效力。结果 CPW3可在小鼠上、下呼吸道增殖,但在小鼠肺脏的病毒载量比其亲本株低约100倍;免疫后30 d内,CPW3对小鼠的体质量和体温无影响;体液免疫应答结果显示,CPW3不仅可诱导小鼠产生显著的血清中和抗体应答(t=7.296,P <0.000 1,n=12),还可产生显著的小鼠肺部局部定植记忆性IgG(t=3.296,P=0.007 6,n=6)和IgA(t=2.884,P=0.021 5,n=6)ASC免疫应答;细胞免疫应答结果显示,CPW3可显著诱导小鼠肺部局部定植记忆性IFNγ-CD4~+T(t=4.941,P=0.038,n=6)和IFNγ-CD8+T(t=4.005,P=0.000 5,n=6)细胞应答。CPW3免疫对小鼠下呼吸道HPIV-3感染具有显著的保护效力(t=2.836,P=0.007 1,n=21)。结论 在小鼠动物模型中,CPW3具有安全性和免疫原性,对小鼠HPIV-3感染具有显著的保护效力,是1株有前途的HPIV-3减毒活疫苗候选株。

    2022年11期 v.35 1293-1305页 [查看摘要][在线阅读][下载 1417K]
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  • 2015—2019年森林脑炎灭活疫苗批签发质量分析

    刘晶晶;李玉华;

    目的 对2015—2019年森林脑炎灭活疫苗批签发进行质量分析。方法 企业按照《中国药典》三部(2015版)规定的方法对47批森林脑炎灭活疫苗的效价、氢氧化铝含量及硫柳汞含量进行测定;中国食品药品检定研究院(简称中检院)抽取16批森林脑炎灭活疫苗进行效价测定,6批进行氢氧化铝含量测定,6批进行硫柳汞含量测定。对上述检测结果进行趋势分析,评价疫苗相关指标的批间一致性。结果 企业效价测定结果中有2个不连续批次超出行动下限,但均在质量标准范围内,其他数据无过高或过低的情况,也未见连续3批超出警戒限的批次;中检院效价测定结果中有1批疫苗超出警戒下限,未见超出行动限和连续3批超出警戒限的批次。企业测定氢氧化铝及柳硫汞含量的结果均未超出警戒限,均在其质量标准的范围内;中检院的测定结果均符合其质量标准。结论 2015—2019年森林脑炎灭活疫苗批签发的效价、氢氧化铝和硫柳汞含量测定结果均符合相关质量标准,具有较好的批间一致性,该疫苗的生产工艺和产品质量较稳定。

    2022年11期 v.35 1306-1309+1316页 [查看摘要][在线阅读][下载 908K]
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基础研究

  • miR-31靶向SATB2对结肠癌上皮细胞HCT116焦亡的促进作用

    张文琴;都新新;张一楠;任彩佩;崔香丽;

    目的 探讨miR-31通过靶向SATB2对结肠癌上皮细胞HCT116焦亡的促进作用,以期为结肠癌发病机制的研究及治疗提供新的靶标。方法 常规培养HCT116细胞,采用脂质体瞬时转染方法转染miR-31 mimic(miR-31模拟物)和miR-31 inhibitor(miR-31抑制剂)分别过表达和敲低miR-31,转染si-SATB2敲低SATB2的表达;另转染pEXPRB-Mam-SATB2质粒(过表达SATB2)和pEXP-RB-Mam质粒(空载体)。试验均设加入无血清、无青链霉素的DMEM的细胞作为对照,均重复3次。72 h后收集各组细胞,提取蛋白,Western blot方法检测SATB2及焦亡信号通路相关蛋白NLRP3、胱天蛋白酶(Caspase)-1、胃泌素蛋白D(gasdermin D,GSDMD)-N、IL-18和IL-1β的表达。结果 与对照组相比,miR-31过表达组和敲低SATB2组细胞SATB2蛋白的表达水平均显著下降(t分别为4.677和4.463,P分别<0.01和<0.05),NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-18和IL-1β蛋白表达水平均显著升高(t=2.859~6.843,P <0.05或<0.01);敲低miR-31组SATB2蛋白表达水平显著升高(t=3.313,P <0.05),NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-18和IL-1β蛋白表达水平均显著下降(t=2.747~3.545,P <0.05或<0.01)。与对照组相比,空载体组SATB2、NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-18和IL-1β蛋白表达水平差异均无统计学意义(t=0.033 10~0.811 1,P均>0.05);SATB2过表达组SATB2蛋白表达水平显著升高(t=6.186,P <0.01),NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-18和IL-1β蛋白表达水平均显著下降(t=2.963~7.894,P <0.05或<0.01),与敲低miR-31组趋势一致。结论 miR-31通过靶向SATB2上调HCT116细胞中经典的细胞焦亡信号通路蛋白的表达,促进细胞焦亡。

    2022年11期 v.35 1310-1316页 [查看摘要][在线阅读][下载 900K]
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  • 截短型神经连接蛋白-1原核表达载体的构建、表达、纯化及其对阿尔茨海默症的初步治疗效果

    苏晓男;毕鹏翔;李超;黄青;于欣洋;吴丹;郭艳芹;

    目的 克隆并构建5种截短型神经连接蛋白-1(tneuroligin-1,tNL-1)可溶性细胞外片段的原核表达载体,经表达、纯化后获得重组GST-tNL-1融合蛋白,初步探讨其对阿尔茨海默症(Alzheimer disease,AD)的治疗效果。方法 对神经连接蛋白-1(neuroligin-1,NL-1)的结构特征及理化性质进行生物信息学分析。利用NL-1细胞外片段设计5个截短片段(tNL-1(1)~(5)),以NL-1细胞外片段1-691质粒为模板PCR扩增目的片段,构建pGEX-6P1-tNL-1原核表达载体,筛选最佳诱导条件后,表达重组tNL-1蛋白,经GST亲和层析法纯化重组蛋白。制备β淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)寡聚体,并进行Western blot鉴定。将体外培养的人SHSY-5Y细胞随机分为3组:对照组(不加任何干预)、模型组(40μg/mL Aβ处理24 h)、实验组(Aβ与20、40、60μg/mL tNL-1(2)共处理24 h),MTT法检测tNL-1(2)对Aβ诱导的SHSY-5Y细胞的保护作用。结果 NL-1有12个蛋白修饰位点,预测其中有8个修饰位点两两相关联,据此关联设计了5个截短体。质粒pGEX-6P1-tNL-1经双酶切及测序鉴定证明构建正确。最佳诱导条件为:37℃培养2 h,A600为0.8时降温至16℃,加入0.1 mmol/L IPTG诱导12 h。表达及纯化的重组tNL-1(1)~(5)蛋白相对分子质量分别约为68 000、90 000、66 000、53 000和62 000,大小均与预期相符,且可被抗体特异性识别。制备的Aβ寡聚体在相对分子质量约4 000和12 000处条带明显,主要以单体和三倍体形式存在。MTT结果显示,与对照组相比,模型组细胞生存率明显下降(P=0.001);与模型组相比,实验组细胞生存率均明显升高(P <0.001)。结论 Aβ对SHSY-5Y细胞存在毒性作用,制备的tNL-1能缓解Aβ对SHSY-5Y细胞模型的的增殖抑制作用。后续会将tNL-1蛋白应用于更多体内外试验中,为AD的治疗提供新思路。

    2022年11期 v.35 1317-1325页 [查看摘要][在线阅读][下载 1027K]
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  • 化脓隐秘杆菌溶血素和铁结合蛋白的抗体应答分析

    刘德珍;沈克飞;付利芝;徐登峰;张素辉;

    目的 对化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)溶血素(pyolysin,PLO)和铁结合蛋白(iron-binding protein,IBP)的抗体应答情况进行分析。方法 采用腹腔注射途径建立化脓隐秘杆菌小鼠感染模型,观察不同剂量细菌对小鼠的致死性和注射部位形成的组织病变。制备化脓隐秘杆菌灭活抗原,采用肌肉注射途径免疫45只雌性昆明小鼠和10只山羊,每只小鼠0.2 mL,每只山羊1 mL,均进行3次免疫,每次间隔2周,第3次免疫后2周采血分离血清。采用ELISA法测定感染小鼠、健康圈养羔羊、化脓隐秘杆菌灭活抗原免疫小鼠和山羊血清中抗PLO和IBP的IgG抗体水平。结果 注射部位出现化脓和皮肤坏死的小鼠血清中能检出高水平的抗PLO和IBP抗体;无组织病变小鼠血清中仅能检测到低水平的抗IBP抗体;连续注射无组织病变剂量细菌的小鼠血清能检出抗PLO和IBP抗体。圈养羔羊血清抗PLO抗体阳性率高,而抗体水平低。免疫小鼠和山羊血清中均能检出抗IBP抗体,但部分动物检测不出抗PLO抗体。结论 IBP是化脓隐秘杆菌感染和灭活疫苗免疫诱导抗体应答的主要抗原之一,PLO抗体水平具有反映感染所造成的组织损伤与灭活疫苗免疫效果的潜力。

    2022年11期 v.35 1326-1330页 [查看摘要][在线阅读][下载 856K]
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  • 绿色荧光蛋白标记的BHK-21细胞源性外泌体的构建及鉴定

    张娟;鲁明;朱海莲;何丽存;顾冉;李代英;陈俊英;潘玥;孙强明;

    目的 构建稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和外泌体标志蛋白CD63的BHK-21细胞,获得GFP标记的BHK-21源性的外泌体。方法 将慢病毒表达质粒pCT-CD63-GFP与辅助质粒pVS-VG(Env)和pSPAX(structure)共转染293T细胞,包装重组慢病毒,测定病毒滴度后感染BHK-21细胞,72 h后用嘌呤霉素筛选稳定表达GFP的细胞。Western blot检测BHK-21细胞中CD63的表达量。取其无外泌体血清培养36 h的稳定转染株细胞上清,获得提取物,经Western blot、透射电镜及粒径分析进行鉴定。将提纯的外泌体与受体细胞BHK-21共培养6 h后,观察外泌体在细胞中的摄取情况。通过Transwell试验检测登革病毒(Dengue virus,DENV)感染后细胞外泌体分泌量的变化。结果 筛选出可稳定表达GFP的BHK-21细胞株,并从细胞上清中提取了外泌体。外泌体存在特异性标志蛋白CD63和CD81;透射电镜下,外泌体呈椭圆形,具有双凹圆盘状膜结构,直径在30~200 nm之间;纳米颗粒示踪分析显示,外泌体在110.2 nm处有峰值;荧光显微镜下可见提纯的外泌体发出强烈的绿色荧光信号。提纯的外泌体与受体细胞BHK-21共培养6 h后,可在BHK-21细胞质内见到大量绿色荧光颗粒。Transwell试验发现,DENV感染后,可促进细胞释放外泌体。结论 成功构建了携带GFP标记的BHK-21源性外泌体,为研究外泌体在病毒感染细胞中的信号传递提供了工具。

    2022年11期 v.35 1331-1337页 [查看摘要][在线阅读][下载 1394K]
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  • 人泛素特异性蛋白酶42在肿瘤组织中的表达及其shRNA干扰重组质粒的构建

    郭紫婵;魏媛;王秀丽;赵蓉;王晓霞;

    目的 评价人泛素特异性蛋白酶42(ubiquitin-specific protease 42,USP42)在不同肿瘤组织中的表达水平,并构建其shRNA干扰重组质粒。方法 通过网络数据库GEPIA和Ualcan分析USP42在不同肿瘤组织中的表达水平。以人USP42 mRNA为靶序列设计合成含有shRNA序列的寡核苷酸,克隆至真核表达载体pGPU6/Neo,构建重组质粒USP42-shRNA。采用Neofect~?DNA转染试剂将重组质粒转染至人结肠癌细胞HCT116(干扰组),同时设对照组(转染NC-shRNA),Western blot法检测USP42表达的干扰效果,Transwell小室试验检测USP42对结肠癌细胞迁移和侵袭功能的影响。结果 经GEPIA和Ualcan数据库分析发现,USP42在胆管癌、胃癌、胸腺癌和结肠癌等肿瘤组织中呈高表达。测序鉴定证明重组质粒USP42-shRNA构建正确。与对照组比较,干扰组HCT116细胞中USP42蛋白表达水平明显降低(t=16.97,P <0.001),且能显著抑制HCT116细胞的侵袭和迁移能力(t分别为4.974和7.787,P <0.01)。结论 USP42可能在多种肿瘤的发生发展中发挥重要作用。建立的重组质粒USP42-shRNA可在HCT116细胞中有效干扰USP42的表达,并能抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移。

    2022年11期 v.35 1338-1341页 [查看摘要][在线阅读][下载 906K]
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治疗制剂

  • 聚乙二醇修饰的重组人睫状神经营养因子对非酒精性脂肪肝的药效学作用

    李素贞;闫甲丽;刘建伟;祁芳冰;刘明杨;郭蓓蕾;晁华;王健;

    目的 研究聚乙二醇(PEG)修饰的重组人睫状神经营养因子(recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF)对ob/ob小鼠非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的治疗作用,为PEG-rhCNTF的临床应用提供参考。方法 以14只4~10周龄雌性野生型C57BL/6J小鼠为正常对照组,83只4~10周龄雌性ob/ob小鼠分为赋形剂组、利拉鲁肽0.1 mg/kg组(每天给药2次)和0.2 mg/kg组(每4 d给药1次)、rhCNTF 0.1 mg/kg组(每天给药1次)以及PEG-rhCNTF 0.05、0.1和0.2 mg/kg组(每4 d给药1次),每组11~12只,均经皮下注射给药。给药期间测定小鼠体质量、24 h饲料消耗量、连续血糖和随机血糖水平及口服葡萄糖耐量;实验终点时,先测定小鼠空腹血糖水平,再测定空腹血清胰岛素(fasting serum insulin,FINS)水平,并计算胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR);取肝脏、肠系膜脂肪、后腹膜脂肪以及皮下脂肪称重;对肝脏组织HE染色病理切片进行脂肪变性程度分析。结果 与C57BL/6J小鼠相比,赋形剂组ob/ob小鼠的体质量、24 h饲料消耗量、血糖水平、皮下脂肪重量、内脏脂肪重量和肝脏湿重均明显升高,糖耐量出现异常,FINS水平及HOMA-IR升高;肝脏组织出现严重脂变、汇管区纤维组织增生伴炎细胞浸润、小叶间胆管增生、小灶状炎细胞浸润、嗜酸样变及核固缩等病变;与赋形剂组相比,利拉鲁肽各剂量组、rhCNTF组和PEG-rhCNTF各剂量组ob/ob小鼠的体质量、24 h饲料消耗量、血糖、HOMA-IR、皮下脂肪、肝脏湿重均明显降低,糖耐量异常有所改善,肝脏组织脂变程度、汇管区纤维组织增生伴炎细胞浸润、小叶间胆管增生、小灶状炎细胞浸润、嗜酸样变、核固缩等病变有所减轻。结论 PEGrhCNTF每4 d给药1次可显著减轻ob/ob小鼠的体质量和皮下脂肪重量,抑制食欲,降低血糖,改善糖耐量异常,减轻高胰岛素血症和胰岛素抵抗及肝脂肪变性。与rhCNTF相比,PEG-rhCNTF稳定、免疫原性低且长效,对肥胖症及其相关疾病具有良好的治疗效果。

    2022年11期 v.35 1342-1350页 [查看摘要][在线阅读][下载 1075K]
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诊断制剂

  • 蜱传脑炎病毒非结构蛋白1的原核表达、纯化及应用

    张婷婷;王伟;陈子杨;李景良;张颖;孙宏亮;常军亮;

    目的 原核表达、纯化蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)非结构蛋白1(non-structural protein 1,NS1),并评价其在蜱传脑炎(tick-borne encephalitis,TBE)临床诊断中的应用价值。方法 根据GenBank登录的TBEV“森张”株NS1基因序列设计引物,PCR扩增TBEV NS1基因,克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-NS1,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经GST bestarose 4FF亲和层析纯化后,Western blot检测其反应原性;以重组NS1蛋白为固相抗原,采用间接ELISA法检测临床血清。结果 重组表达质粒pGEX-4T-1-NS1经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约65 000,表达量为22.1%,主要以包涵体形式存在;纯化蛋白纯度达93%以上,与TBEV全病毒感染小鼠血清具有良好的反应原性。采用NS1作为包被抗原的间接ELISA法检测临床血清,特异性为95%,敏感度为100%。结论 成功在大肠埃希菌中表达并纯化了TBEV NS1蛋白;作为病毒特异性抗原,经间接ELISA法验证,该蛋白在临床疾病的血清学诊断上具有一定的应用价值。

    2022年11期 v.35 1351-1356页 [查看摘要][在线阅读][下载 862K]
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  • Rh血型抗原检测卡行业标准的首次制定

    胡泽斌;孙楠;孙晶;于婷;黄杰;

    目的 首次制定Rh血型抗原检测卡(柱凝集法)行业标准,并对其可行性进行验证。方法 按照拟定行业标准的要求,选择6个厂家的Rh血型抗原检测卡进行外观、特异性、灵敏度、重复性、稳定性验证。结果 外观、特异性、灵敏度、批间和批内重复性以及效期和热稳定性均符合行业标准规定。结论 Rh血型抗原检测卡(柱凝集法)行业标准的制定科学合理,有助于规范该类试剂盒的技术要求和检验方法,提高该类试剂盒的产品质量,并为其上市前后的监管提供了依据。

    2022年11期 v.35 1357-1360页 [查看摘要][在线阅读][下载 810K]
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临床研究

  • 6和8月龄婴儿接种肠道病毒71型疫苗的安全性及免疫原性比较

    王圣怡;常少英;王莉;王锐泽;许青;张岷;刘小琴;陈海平;罗林云;徐爱强;肖艳慧;

    目的 比较6和8月龄婴儿接种肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)疫苗后的安全性及免疫原性。方法采用随机和对照原则选取山东、湖南、山西和陕西4个省份6和8月龄健康婴儿共540人,按月龄分为2组,分别在入组第0天采血并接种第1剂EV71疫苗,第30天接种第2剂EV71疫苗,60 d后采血。分离血清,微量中和试验检测抗体滴度;观察并记录每剂疫苗接种后全身及局部不良事件。结果 6和8月龄婴儿最终纳入分析人数分别为243和236人。总体安全性结果和分针次安全性结果均显示,6和8月龄组婴儿总体不良事件、全身不良事件及局部不良事件发生率差异均无统计学意义(χ~2=0.000~5.234,P> 0.05)。6月龄组婴儿免疫前EV71中和抗体阳性率和几何平均滴度(GMT)均高于8月龄组,差异均有统计学意义(χ~2_(阳性率)=18.812,t_(GMT)=2.51,P均<0.05);6和8月龄组婴儿EV71中和抗体阳转率分别为98.8%和99.2%,差异无统计学意义(χ~2=0.174,P> 0.05);6月龄组婴儿免疫后GMT明显高于8月龄组,差异有统计学意义(t=2.537,P <0.05)。结论 6和8月龄组婴儿均未观察到严重反应和严重不良事件,均具有较好的安全性。由于6月龄组婴儿免疫效果更好,建议尽早接种EV71疫苗以获得更好的免疫效果。

    2022年11期 v.35 1361-1365页 [查看摘要][在线阅读][下载 818K]
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  • 相关疫苗上市后中国大陆肠道病毒71型C4亚型的分子流行特征分析

    杜瑞晓;王茜;刘明琛;高帆;白玉;吴星;毛群颖;梁争论;卞莲莲;

    目的 分析相关疫苗上市后中国大陆肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)C4亚型的分子流行特征。方法基于贝叶斯的马尔可夫链蒙特卡罗(markov chain monte carlo,MCMC)分析方法,对EV71疫苗上市前后中国大陆EV71毒株VP1基因相似性进行比较。应用贝叶斯天际线模型和SpreaD3 v0.9. 6软件对中国大陆C4亚型病毒进行系统发生地理学分析,通过绘制贝叶斯天际线图描绘种群动态历史变化,并应用EasyCodeML软件分析正选择压力位点。结果 中国大陆EV71 C4亚型VP1基因序列的平均进化速率为2.25×10-3site/year,C4a亚型毒株平均进化速率为3.1×10-3site/year;EV71 C4亚型的起源可追溯至1990年的华东地区,C4a亚型可能起源于1999年。2002—2007年C4亚型经历了种群规模扩张,种群规模于2007年达峰值,且在EV71疫苗上市后仍保持较高水平。C4亚型病毒VP1基因中有5个氨基酸位点承受正选择压力,比对分析EV71疫苗上市后2015—2018年C4亚型病毒序列,筛选到VP1基因第289位点承受正选择压力。结论 本研究揭示了EV71 C4亚型的遗传进化信息,为制定手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的防控策略提供了科学的数据支持。

    2022年11期 v.35 1366-1371页 [查看摘要][在线阅读][下载 1038K]
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  • 扩大免疫对福建省人群风疹病毒抗体水平分布的影响

    杨秀惠;陈致飞;张苏晗;张海荣;郑凝旋;李东;周勇;

    目的 在不同时期开展人群风疹病毒抗体水平监测,以评估风疹疫苗纳入扩大免疫策略的实施效果。方法 在2009、2011和2019年分别按分层随机抽样原则,调查福建省0~60岁一般人群,并采集静脉血标本。采用定量ELISA法检测风疹病毒IgG抗体水平,分析比较不同时期人群风疹病毒抗体水平的分布特征变化。结果 2009、2011和2019年人群风疹病毒IgG抗体阳性率分别为64.16%、68.00%和70.10%,抗体几何平均浓度(geometric mean concentration,GMC)分别为20.97、28.72和27.91 IU/mL。实施扩大免疫11年后的2019年,人群风疹病毒抗体水平已较2009年显著提高(Z=2.91,P <0.01),尤其是8月龄~10岁扩大免疫服务对象含风疹疫苗(rubella-containing vaccine,RCV)接种率达95.22%,抗体阳性率达79.39%,GMC为36.98(95%CI:35.51~38.50)IU/mL,显著高于2009年同一年龄组[64.68%和21.21(95%CI:19.07~23.54)IU/mL](χ2=95.23,P <0.01;F=129.61,P <0.01)。2019年福建省人群风疹病毒抗体水平年龄组分布模式已从2009和2011年免疫不充分情况下自然感染模式转变为疫苗免疫模式,扩大免疫服务对象获得了高免疫水平,10~19岁非扩大免疫对象抗体水平(抗体阳性率为52.92%,GMC为18.42 IU/mL)低于2009和2011年同年龄组,为发病的高风险人群。2019年免疫服务对象在1岁组风疹病毒抗体水平达到最高(95.66%和64.17 IU/mL)后,随年龄增长,抗体阳性率和GMC分别以平均每年6.65%和12.09%速度下降,至6岁组时降至较低水平(62.41%和25.38 IU/mL)。结论 RCV扩大免疫服务对象风疹病毒抗体水平升高显著,但免疫获得的抗体水平随年龄增长呈下降趋势;部分非免疫对象因抗体水平较低而成为高风险发病人群,因此需继续加强免疫水平监测,并及时根据抗体水平衰减情况调整免疫策略措施。

    2022年11期 v.35 1372-1377+1383页 [查看摘要][在线阅读][下载 904K]
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技术方法

  • 前列腺癌组织中胶原三股螺旋重复蛋白1基因转录水平微滴数字PCR检测方法的建立及验证

    杨德平;张艳;刘莹;张培燕;孔娜娜;郑江花;

    目的 建立前列腺癌组织中胶原三股螺旋重复蛋白1(collagen triple helix repeat containing 1,CTHRC1)基因转录水平的微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,并进行验证。方法 根据GenBank中登录的CTHRC1基因序列设计引物,扩增CTHRC1保守区基因片段,并合成含有该基因片段的PUC57质粒。经2%琼脂糖凝胶电泳验证引物的特异性后,采用PUC57质粒验证ddPCR法的正确度、精密性,并确定检测限及线性范围。采用建立的ddPCR法检测复旦大学附属中山医院泌尿外科住院患者73份前列腺穿刺组织样本(前列腺癌组织40份,非前列腺癌组织33份)中的CTHRC1基因转录水平,同时采用试剂盒检测患者血清中的总前列腺特异抗原(total prostate specific antigen,TPSA)水平,将相应结果进行ROC曲线分析,以获得CTHRC1-TPSA联合检测对诊断前列腺癌的预测概率。结果经2%琼脂糖凝胶电泳验证设计的引物具有良好的特异性。检测值和理论值之间的Log值差异均<1,且拟合度高,R2=0.995 9,表明该方法具有良好的正确度;重复性验证CV均<10%,中间精密性验证CV均<15%;该方法的检测限为10~0copies/μL;检测值在100~104copies/μL范围内,与理论值呈良好的线性相关性,R~2=0.997 2。ddPCR法检测前列腺癌组织中CTHRC1基因转录水平显著高于非前列腺癌组织(Z=-4.339,P <0.001)。CTHRC1与TPSA联合诊断前列腺癌的ROC曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.847,灵敏度为83.3%,特异性为67.7%。结论 ddPCR法可用于前列腺癌组织中CTHRC1基因转录水平的检测,与TPSA指标联合可提高临床诊断前列腺癌的准确性。

    2022年11期 v.35 1378-1383页 [查看摘要][在线阅读][下载 954K]
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  • 去除无细胞百日咳疫苗丝状血凝素纯化液中内毒素TritonX-114液相分离法的建立及其效果评价

    温嘉纳;王虓宇;张光贤;陈林涛;张晓华;赵宸;李娜;孙明波;梁疆莉;

    目的 建立去除无细胞百日咳疫苗丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)纯化液中内毒素的TritonX-114液相分离法,并评价其效果。方法 以影响TritonX-114液相分离法效果的TritonX-114加入量、4℃混匀时间、37℃分层时间、25℃16 743×g离心时间为试验因素,每个因素设计3个水平,通过正交试验设计12组试验。每组试验获得的样品均检测蛋白回收率,以蛋白回收率最高的条件为最佳。采用最佳条件去除3批无细胞百日咳疫苗FHA纯化液内毒素,检测FHA蛋白含量、内毒素含量及TritonX-114残留量。结果 TritonX-114液相分离法最佳条件:TritonX-114加入量为1%,4℃混匀时间为30 min,37℃分层时间为60 min,25℃167 43×g离心时间为10 min。最佳条件下去除3批无细胞百日咳疫苗FHA纯化液内毒素后,内毒素含量均<0.25 EU/mL,TritonX-114残留量均值为0.183%,蛋白回收率均值为91.04%。结论 TritonX-114液相分离法能够有效去除无细胞百日咳疫苗FHA纯化液中的内毒素,且方法耗时短,操作简便。

    2022年11期 v.35 1384-1387页 [查看摘要][在线阅读][下载 814K]
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  • Vero细胞生物反应器微载体无血清培养甲型流感病毒

    钏鸿云;阮朝列;莫明和;王静;王多义;朱莲海;刘云璨;廖国阳;周健;

    目的 采用Vero细胞生物反应器微载体无血清培养甲型流感病毒。方法 将Vero细胞分别采用无血清和有血清培养基于生物反应器(pH 7.2,温度37℃,溶氧量50%,转数60 r/min)中培养24 h,均用无血清培养基进行灌流培养至7 d,进行计数,并按MOI=0.1接种H1N1型流感病毒,加入终浓度为1μg/mL的TPCK-胰酶,于生物反应器(pH 7.8,温度33.0℃,溶氧量25%,转数60 r/min)中培养18、22、42、48、66 h,取样,检测血凝效价。结果 Vero细胞经无血清和有血清培养基培养7 d的细胞数分别为(133.4±2.0)×10~4和(193.8±1.3)×10~4个/mL,接种H1N1流感病毒66 h后血凝效价几何平均数分别为1∶388和1∶675,前者细胞数及病毒血凝效价几何平均数均显著低于后者(t分别为7.068和4.332,P均<0.05)。结论 采用Vero细胞通过生物反应器微载体无血清培养H1N1型流感病毒的血凝效价可满足流感病毒裂解疫苗制备的要求。

    2022年11期 v.35 1388-1391页 [查看摘要][在线阅读][下载 890K]
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  • 静注人免疫球蛋白纯化用层析介质使用寿命的验证

    张宝献;刘亚芳;张剑涛;李冠军;李光飞;孙振国;张学成;

    目的 验证用于静注人免疫球蛋白生产的Fractogel?EMD TMAE(简称TMAE)层析介质的使用寿命。方法 建立TMAE凝胶层析缩小模型,通过对层析介质运行过程中的层析图谱、蛋白回收率、IgA、IgM、分子大小分布、压力、理论塔板数、对称系数和总有机碳(total organic carbon,TOC)进行趋势分析。对每次层析过程中的参数进行比对,分析随着循环次数的增加关键参数的变化情况,确定层析介质使用寿命。结果 IgA检测均值≤100μg/mL,IgM检测均值≤50μg/mL,IgG单体与二聚体含量之和> 95.0%,均符合产品质量标准。层析介质的压力呈逐步升高的趋势,蛋白回收率下降,均在可接受范围内,同时层析柱的每米理论塔板数和对称系数符合使用要求。结论 用于静注人免疫球蛋白生产的TMAE层析凝胶使用寿命暂定为240次。

    2022年11期 v.35 1392-1396页 [查看摘要][在线阅读][下载 887K]
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综述

  • 狂犬病病毒PV株在人用狂犬病疫苗中的应用及研究回顾

    石磊泰;李玉华;俞永新;

    狂犬病病毒(rabies virus,RV)PV株源于1882年巴斯德最初分离的RV,经兔脑传代保存后,又历经胎牛肾细胞、BHK21细胞和Vero细胞等多种细胞适应传代,目前普遍应用的是Vero细胞的适应株L Pasteur2061/Vero 15pass。该毒株于2005年被WHO生物标准化专家委员会纳入人用狂犬病疫苗生产用毒种库,在巴西、印度和中国等国家用于人用狂犬病疫苗的生产,为本国和周边国家的狂犬病疫情防控发挥了一定的积极作用。本文就RV PV株在人用狂犬病疫苗中的应用及研究回顾作一综述。

    2022年11期 v.35 1397-1401页 [查看摘要][在线阅读][下载 836K]
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  • mRNA药物研发的主要关键技术

    凡文超;史新昌;周勇;

    基于mRNA的基因治疗药物及预防疫苗已成为开发热点,其技术原理是递送至机体细胞内的mRNA,通过宿主细胞的翻译机制表达产生治疗性蛋白或免疫原蛋白,对机体产生治疗作用或刺激机体产生免疫作用。mRNA药物研发的主要关键技术如体外合成、修饰、纯化以及递送等均具有较好的通用性。通过设计合成不同的目的基因序列,结合上述高度相似的下游关键技术,可实现不同目的蛋白的体内表达,使开发出基于mRNA的标准技术体系成为可能,从而针对疾病进行预防及治疗。高效低成本体外获取目的 mRNA,修饰、处理使得mRNA具备高效翻译效率的同时降低机体免疫排斥,以及将外源性mRNA高效递送至体内,解决这些问题是mRNA药物研发的重点。本文主要综述了基于mRNA药物设计的主要关键技术,如mRNA体外转录合成(in vitro transcription,IVT)、核苷及帽尾结构修饰的技术原理及研究进展,其次对mRNA纯化方法、递送系统进行了简要介绍,为mRNA基因治疗药物及疫苗开发提供支持。

    2022年11期 v.35 1402-1408页 [查看摘要][在线阅读][下载 871K]
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