中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

  • 细胞工厂在麻腮风系列疫苗生产中的应用

    付永其;宋艳梅;高静;张颖欣;刘辉;孙雅;申亚楠;律苗;杨云凯;

    目的 利用细胞工厂培养麻疹、腮腺炎和风疹病毒,并制备麻腮风各单价及联合疫苗。方法 应用40层细胞工厂培养原代鸡胚细胞和2BS细胞,制备麻疹、腮腺炎和风疹病毒原液(同时以15 L转瓶培养工艺作为对照),并制备麻腮风各单价及联合疫苗,按照《中国药典》三部(2015版)方法进行病毒滴度检测。结果 细胞工厂制备的麻疹、腮腺炎和风疹病毒原液滴度分别为大于5.2、6.1和5.7 lg CCID50/m L,高于转瓶工艺,且符合《中国药典》三部(2015版)相关规定;1个40层细胞工厂制备的病毒原液量相当于1个转瓶的4至8倍,产量较高。细胞工厂制备的多批次麻腮风各单价及联合疫苗的病毒滴度均符合《中国药典》三部(2015版)相关标准,且病毒滴度热稳定性下降均不超过1个lg。结论 利用细胞工厂制备麻腮风各单价及联合疫苗的工艺稳定,重复性好,质量可控,可用于规模化生产。

    2018年10期 1049-1054页 [查看摘要][在线阅读][下载 262K]
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  • 壳聚糖介导甲型副伤寒沙门菌nmpC和pagCDNA疫苗的构建及其免疫效果

    梁昊宇;任慧梅;张影;董思国;王斌;曾明;

    目的 构建壳聚糖(chitosan,CS)介导的甲型副伤寒沙门菌nmp C和pag C的DNA疫苗,并探讨该疫苗的免疫效果。方法 按哺乳动物的密码子偏好性对nmp C和pag C的基因序列进行优化,并将优化后的序列克隆至真核表达载体provax中,构建provax-nmp C和provax-pag C DNA疫苗。采用复凝聚法制备载DNA疫苗的CS纳米粒,并对CS/DNA纳米粒的特性进行检测。将provax-nmp C和provax-pag C DNA疫苗及其相应的CS纳米粒体外转染BHK细胞,采用Western blot检测目的蛋白的表达。采用活体电击法分别用不同组分的蛋白免疫小鼠,ELISA法检测血清抗体水平及抗体类型。结果 provax-nmp C和provax-pag C DNA疫苗经双酶切鉴定,构建正确。疫苗可与CS发生有效结合,纳米粒形似球形,粒径均一,包封率均达90%以上,且CS可防止DNA被DNaseⅠ酶降解。provax-nmp C及CS/provax-nmp C均能诱导小鼠产生有效的免疫反应,两组间差异无统计学意义(P>0.05);provax-pag C与CS/provaxpag C均能诱导小鼠产生有效的免疫反应,且provax-pag C组的抗体水平明显高于CS/provax-pag C(P<0.05)。provax-nmp C和provax-pag C组的Ig G1及Ig G2a抗体水平均高于相应的CS组(P<0.05),且Ig G1和Ig G2a间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DNA疫苗provax-nmp C和provax-pag C均可诱导有效的免疫反应;载基因CS纳米粒并未增强DNA疫苗的免疫效果;CS未改变DNA疫苗的免疫应答类型,但具有调节Th1和Th2平衡的作用。

    2018年10期 1055-1060页 [查看摘要][在线阅读][下载 378K]
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  • 甲型流感病毒在贴壁MDCK细胞上增殖条件的优化

    席莉;刘旭光;李爽;李可新;李雪;邹钰莹;邹勇;

    目的 确定甲型流感病毒在贴壁MDCK细胞上最佳增殖条件。方法 将3株甲型流感病毒(H1N1 NYMC X-181、H1N1 NYMC X-275和H3N2 NYMC X-263B)在贴壁MDCK细胞上进行传代培养,以其血凝效价和半数细胞感染剂量(median cell culture infective dose,CCID50)为检测指标,分别对其增殖条件胰酶浓度(0.5、1.25、2.5、3.5和4.5μg/m L)、MOI(0.000 1、0.001、0.01、0.1、1)、培养温度(33、34、35、36、37℃)、吸附时间(0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h)、培养时间(24、48、72、96、120 h)进行优化。结果 H1N1 NYMC X-181、H1N1 NYMC X-275和H3N2 NYMC X-263B 3株流感病毒在贴壁MDCK细胞上增殖的最适胰酶浓度分别为2.5、1.25、1.25μg/m L;最适MOI值均为0.01;最适培养温度均为34℃;最适吸附时间分别为1.5~2.0、1.5、1.5 h;最适培养时间均为72 h。结论 确定了3株甲型流感病毒在贴壁MDCK细胞上的增殖条件,为后续相关疫苗的研发工作奠定了基础。

    2018年10期 1061-1065页 [查看摘要][在线阅读][下载 297K]
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  • 人热休克蛋白10在毕赤酵母中的表达及纯化

    李晓颖;侯增淼;邓晗;李敏;李哲;杨小琳;赵金礼;

    目的 在毕赤酵母中表达及纯化人热休克蛋白10(heat shock protein 10,Hsp10)。方法 取新鲜人胎盘组织提取总RNA,反转录合成c DNA。以其为模版PCR扩增Hsp10基因片段,构建外分泌重组表达载体p PIC9KHsp10,电击转化毕赤酵母GS115菌株,经组氨酸缺陷筛选,获得阳性菌株p PIC9K-Hsp10/GS115。重组菌经甲醇诱导,SDS-PAGE检测蛋白含量,Western blot分析Hsp10特异性。结果 获取了序列正确的Hsp10基因及高表达菌株。表达产物在相对分子质量11 000处可见特异表达条带,Hsp10蛋白表达量为400 mg/L,纯度大于90%;Western blot分析表明,Hsp10具有良好的反应原性和特异性。结论 Hsp10在毕赤酵母GS115中成功表达,为该蛋白的放大生产及应用奠定了基础。

    2018年10期 1066-1070页 [查看摘要][在线阅读][下载 345K]
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  • 宿主TRIM56蛋白与猪瘟病毒Npro蛋白的相互作用及其对猪瘟病毒复制的影响

    张恩瑜;朱妍;王竞晗;李素;仇华吉;师东方;

    目的 分析宿主TRIM56蛋白与猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)Npro蛋白之间的相互作用,并检测TRIM56对CSFV增殖的影响。方法 si RNA干扰法下调细胞中TRIM56表达后接种CSFV,利用Western blot及荧光定量RT-PCR法检测TRIM56表达下调对CSFV增殖的影响;利用免疫共沉淀技术(Co-IP)和Western blot法分析TRIM56与Npro之间的相互作用关系;利用激光共聚焦试验检测TRIM56与Npro共定位于细胞内的具体位置。结果 下调TRIM56表达后接种CSFV,细胞中CSFV基因组拷贝数和滴度均明显升高。TRIM56与Npro能特异性相互作用,并共定位于HEK 293T细胞的胞桨内。结论 宿主TRIM56蛋白与CSFV的Npro蛋白存在相互作用,并且能够负调控CSFV的增殖。

    2018年10期 1071-1074+1083页 [查看摘要][在线阅读][下载 296K]
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  • 13个血清型肺炎球菌荚膜多糖稳定性考察

    任珍芸;刘倩;张轶;陈晓航;刘爱萍;王玺;熊明郁;沈荣;

    目的 考察13个血清型肺炎球菌荚膜多糖在-60℃以下储存60个月的稳定性。方法 将13个血清型(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F型)各3批共39批次原料多糖,-60℃以下条件储存,每隔6个月取样,分别对多糖成分基团含量、分布系数(KD)、分子质量分布激光图谱和多糖抗原活性进行测定。检测时长为60个月。结果 60个月内39批次多糖的成分基团含量及KD均符合质量标准;分子质量分布激光图谱并无明显变化;抗原活性良好。结论 -60℃储存条件下,13个血清型肺炎球菌原料多糖在60个月内稳定性良好。

    2018年10期 1075-1083页 [查看摘要][在线阅读][下载 502K]
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  • 奶牛miR-124a靶基因预测及生物信息学分析

    杨卓妮娜;王秀伟;郭丽;张伟红;杨焕民;沈冰蕾;刘胜军;

    目的 预测奶牛mi R-124a(bta-mi R-124a)的靶基因,并对其生物学功能、调控机制以及参与的信号转导通路进行富集分析,为bta-mi R-124a调控乳品质代谢的功能验证研究提供理论依据。方法 利用mi RBase、mi RWalk和Targetscan等在线数据分析系统,获得bta-mi R-124a的前体及成熟区序列,同时预测其候选靶基因并取交集,进而对筛选获得的候选靶基因进行GO功能注释及信号通路富集分析。结果 bta-mi R-124a序列在各物种间高度保守,其候选靶基因主要富集在生物调控、细胞生长、代谢等生物学过程中。KEGG信号通路显示,在癌症、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMP-activated protein,AMPK)、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)信号转导、脂肪酸降解、脂肪酸生物合成等信号通路中,候选靶基因均被富集。结论 bta-mi R-124a的候选靶基因在癌症发生、AMPK信号转导、脂肪酸代谢中发挥重要作用。其中,脂肪酸代谢是bta-mi R-124a可能参与的主要代谢调控通路。为后期bta-mi R-124a在奶牛乳腺组织中调控乳脂代谢的功能机制的研究提供参考。

    2018年10期 1084-1089+1094页 [查看摘要][在线阅读][下载 278K]
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  • 2001~2014年吉林省麻疹病毒核蛋白基因变异分析

    黄飚;单元春;周剑惠;王爽;田鑫;杨尧;魏雷雷;

    目的 分析2001~2014年吉林省麻疹病毒核蛋白(nucleoprotein,N)基因变异情况。方法 采用病毒分离、核酸提取及扩增、测序等方法获得麻疹病毒N蛋白基因序列,并通过Bio Edit、Mega等生物信息学软件对所得序列进行变异分析。结果 吉林省2005、2006、2009和2014年为麻疹高发年份;麻疹病毒流行株核苷酸变异率为0.59%~1.85%,氨基酸变异率为1.00%~2.67%,氨基酸的第100位点均出现L→I的突变,可能为吉林省特异性位点,2009年第82位点出现S→G的回复性突变,且一直延续至2014年,与第47和122位点的变异处于同一病毒株上,2013和2014年第63(R→I)、69(S→T)、77(R→L)和82位(R→I)点出现一致的突变;2009、2010年麻疹病毒株错义突变率最高;第47、82、122位点的氨基酸变异持续稳定流行多年,且其熵值最高。结论 2001~2014年吉林省麻疹病毒N蛋白基因的核苷酸和氨基酸变异率随年份的推移呈波动上升趋势,建议持续监测关键位点的氨基酸变异情况,结合流行病学资料对麻疹疫情的发展提供预测预警。

    2018年10期 1090-1094页 [查看摘要][在线阅读][下载 380K]
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  • 分子伴侣共表达对牛成纤维细胞生长因子-2在大肠埃希菌中表达水平和生物活性的影响

    孙丹;王莉洁;徐晓辉;何伟;

    目的 研究分子伴侣共表达对重组牛成纤维细胞生长因子-2(recombinant bovine fibroblast growth factor-2,rb FGF-2)表达水平及生物活性的影响。方法 根据大肠埃希菌密码子使用偏好性,设计合成rb FGF-2核苷酸序列全长,构建表达rb FGF-2的载体p ET-15b-rb FGF-2。将编码伴侣蛋白Gro ES-Gro EL的质粒p Gro7和载体p ET-15b-rb FGF-2先后转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中进行共表达。表达产物进行Western blot鉴定,经Ni-Agarose亲和层析纯化后,MTS法测定其生物学活性。结果 酶切鉴定和测序结果证实,rb FGF-2基因序列与设计序列相同,且在NdeⅠ和Bam HⅠ位点连入表达载体。表达的rb FGF-2蛋白相对分子质量约21 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的37.8%,可与牛FGF-2单克隆抗体特异性结合;纯化后,SDS-PAGE检测其纯度超过95%。含有共表达系统的大肠埃希菌中rb FGF-2蛋白表达量为仅含表达载体的大肠埃希菌的2.28倍。在6.25 ng/ml浓度时,rb FGF-2蛋白具有显著的促细胞增殖作用。结论 分子伴侣Gro ES-Gro EL共表达能够显著提高rb FGF-2蛋白的表达水平及其生物活性。

    2018年10期 1095-1098+1103页 [查看摘要][在线阅读][下载 254K]
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  • 夏桑菊对甲型H1N1流感病毒的作用及其机制

    于思明;李艳华;姜义;王磊;

    目的 探讨夏桑菊对甲型H1N1流感病毒的作用及其机制。方法 MTT法检测夏桑菊对MDCK细胞的半数有毒浓度(TC50)及对甲型H1N1流感病毒半数抑制浓度(IC50),并计算选择指数(selection index,SI);Reed-Muench法检测甲型H1N1流感病毒对MDCK细胞的半数感染量(TCID50);空斑减少试验检测夏桑菊对甲型H1N1流感病毒的作用;荧光染色法观察夏桑菊对流感病毒NP蛋白的核定位作用;Western blot法检测夏桑菊作用流感病毒感染细胞后NF-κB通路相关蛋白的表达情况。结果 TC50为4.98 mg/m L,IC50为2.063 mg/m L,SI为2.414,TCID50为0.044 668;甲型H1N1流感病毒经夏桑菊作用后,抑制了病毒株的空斑形成、病毒NP蛋白的核输出及NF-κB通路相关蛋白Iκκα、Iκκβ、NF-κBp50、NF-κBp65的磷酸化。结论 夏桑菊对甲型H1N1流感病毒有明显的抑制作用,可能是通过抑制NF-κB通路相关蛋白磷酸化实现的。

    2018年10期 1099-1103页 [查看摘要][在线阅读][下载 319K]
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  • 结核分枝杆菌PPE36-p27蛋白的原核表达及其在结核诊断中的应用

    郭瑞;郭玉峰;居军;黄焕原;魏振宏;

    目的 原核表达结核分枝杆菌标准菌株PPE36-p27蛋白,并应用于结核特异性细胞免疫检测。方法 以结核分枝杆菌H37RV基因组DNA为模板,采用PCR法扩增PPE36基因,纯化回收后插入至原核表达载体p EASY,将测序正确的重组质粒转入感受态E.coli BL21(DE3),诱导表达PPE36-p27蛋白,经SDS-PAGE鉴定及NI-NTA亲和层析柱纯化。将纯化后的PPE36-p27作为特异性刺激原,建立新型T细胞检测方法 ELISPOT-IL-12技术。结果 重组质粒p EASY-PPE36经双酶切及测序鉴定,构建正确。PPE36-p27蛋白的相对分子质量约30 000,纯化后蛋白浓度为14.69μg/m L。重组蛋白PPE36-p27应用于ELISPOT-IL-12检测方法时,可刺激机体产生细胞因子IL-12,与包被的抗IL-12抗体产生特异性结合,可见明显斑点。结论 PPE36-p27蛋白在原核表达系统成功表达,以其为刺激原建立了ELISPOT-IL-12检测技术,可应用于结核的早期诊断。

    2018年10期 1104-1107+1113页 [查看摘要][在线阅读][下载 358K]
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  • 武汉市洪山区2010~2016年疑似预防接种异常反应监测分析

    徐丹丹;祝明清;刘志胜;陈洁;赵明江;

    目的 分析武汉市洪山区2010~2016年疑似预防接种异常反应(Adverse Event Following Immunization,AEFI)的发生特征,分析影响因素,提高监测敏感性。方法 通过中国免疫规划信息管理系统和儿童预防接种报表信息,收集武汉市洪山区2010~2016年报告的AEFI个案数据及接种信息,采用描述性方法,对相关指标进行流行病学分析。结果 2010~2016年,洪山区共报告AEFI 385例,年平均报告率为17.85/10万剂,其中一般反应295例,占76.62%,临床表现以发热、红肿、硬结为主;异常反应72例,占18.70%,主要表现为过敏性皮疹(27.78%)、斑丘疹(40.28%)、荨麻疹(25%);严重异常反应3例(占比4.17%),其中过敏性紫癜2例,热性惊厥1例;无接种事故发生。反应多发生在2岁以下的儿童,占78.18%;每年4~9月份为AEFI报告高峰期;引起AEFI主要相关疫苗中,一类疫苗为白喉破伤风联合疫苗、乙型脑炎疫苗和含麻疹成分疫苗(40.43/10万),二类疫苗为百白破Hib联合疫苗、23价肺炎球菌多糖疫苗和无细胞百白破-灭活脊灰-b型流感嗜血杆菌联合疫苗;一类疫苗AEFI报告率为18.90/10万剂,高于二类疫苗的7.09/10万剂,差异有统计学意义(P<0.01);所有AEFI病例,均已治愈或好转,3例严重异常反应均已治愈,转归良好。结论 武汉市洪山区AEFI监测系统运行良好,AEFI报告率与监测质量逐步提高,监测敏感性还需进一步提高。

    2018年10期 1108-1113页 [查看摘要][在线阅读][下载 221K]
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  • 2006和2016年长春市1~59岁人群乙型肝炎血清流行病学调查分析

    陶育晖;闫莉;王崇;徐红芹;张君鹏;于建星;

    目的 分析长春市2006和2016年1~59岁人群乙型肝炎(简称乙肝)血清流行病学调查结果。方法 按照多阶段整群随机抽样的方法,抽取长春市的德惠市和南关区1~59岁人群进行乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBs Ag)携带率、乙肝表面抗体(hepatitis B surface antibody,HBs Ab)阳性率和乙肝疫苗(hepatitis B vaccine,Hep B)接种率调查分析。结果 2006年932名和2016年1 097名调查对象中,HBs Ag携带率分别为3.22%和1.64%,HBs Ab阳性率分别为51.07%和52.51%,Hep B接种率分别为58.15%和67.73%。不同年龄段间HBs Ag携带率、HBs Ab阳性率及Hep B接种率的差异均有统计学意义(P<0.05),性别间HBs Ag携带率、HBs Ab阳性率及Hep B接种率的差异均无统计学意义(P>0.05);城乡间HBs Ab阳性率及Hep B接种率的差异均有统计学意义(P<0.05),2006年城乡间HBs Ag携带率差异有统计学意义(P<0.05),2016年差异无统计学意义(P>0.05)。结论10年间Hep B接种率有所提高,HBs Ag携带率下降,HBs Ab阳性率变化较小。

    2018年10期 1114-1117页 [查看摘要][在线阅读][下载 156K]
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  • 仿生控释BMP-2和VEGF的PELA微球支架对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的Wnt/β-catenin通路的影响

    任前贵;王瞾;张坤;

    目的 制备外黏附复合重组人骨形态发生蛋白(recombinant human bone morphogenetic protein 2,rh BMP-2)内包封血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的微囊,并研究其对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)向成骨细胞分化的Wnt/β-catenin通路的影响。方法 以聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸三嵌段共聚物(polylactide-poly-ethylene glycol-polylactide,PELA)作为微囊的囊材,制备其外黏附rh BMP-2、内包封VEGF的微囊,制备微囊支架,实验分为对照组、BMP-2/PELA组、PELA/VEGF组和BMP-2/PELA/VEGF组。ELISA法检测微囊支架在1、2、4、8、12、16、22、28、35、42 d于PBS中缓释的rh BMP-2和VEGF的浓度;MTT法检测微囊支架对BMSCs作用3、7、14 d细胞活性的影响;Western blot法检测微囊支架对BMSCs作用3、7、14 d,BMSCs向成骨细胞分化中Wnt/β-catenin通路及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)蛋白表达的影响。结果 微囊支架在PBS中第2天,BMP-2释放了约60%,而VEGF则释放了约32%;4组微囊支架对BMSCs作用3、7、14 d,细胞活性差异无统计学意义(P>0.05)。在第14天,BMP-2/PELA/VEGF组Wnt、β-catenin及ALP的表达量均显著高于第3和7天(P<0.05),而第7天的表达量均显著高于第3天(P<0.05)。结论 成功制备了BMP-2/PELA/VEGF微囊支架,对BMSCs无细胞毒性作用,可使BMSCs向成骨细胞进一步分化。

    2018年10期 1118-1121+1125页 [查看摘要][在线阅读][下载 316K]
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  • 黄山市两县区婴幼儿卡介苗接种效果的分析

    张向阳;骆卫群;杨静;

    目的 分析黄山市祁门县及徽州区婴幼儿卡介苗(BCG)接种效果。方法 对黄山市祁门县及徽州区两县区接种BCG 12周的婴幼儿进行BCG纯蛋白衍生物(purified protein derivatives of BCG,BCG-PPD)试验,并对试验结果进行统计学分析。结果 黄山市两县区婴幼儿卡痕率99.03%、BCG-PPD阳性率89.37%。祁门县婴幼儿BCG-PPD阳性率(93.46%)明显高于徽州区(85.00%),城市婴幼儿BCG-PPD阳性率(95.19%)明显高于农村(83.50%),差异均有统计学意义(P<0.01);男性婴幼儿BCG-PPD试验阳性率(89.00%)与女性(89.72%)差异无统计学意义(P>0.05);两县区婴幼儿卡痕均径为4.32 mm,卡痕均径≥3 mm BCG-PPD阳性率(92.49%)明显高于卡痕均径<3 mm的阳性率(73.53%),差异有统计学意义(P<0.01);在城市二级以上医院产科接种室接种的婴幼儿的BCGPPD阳性率与各预防接种门诊差异无统计学意义(P>0.05)。结论 黄山市两县区BCG接种质量总体较好,但存在城市与农村间接种质量不平衡现象;卡痕均径大小可作为BCG接种质量参考依据之一。

    2018年10期 1122-1125页 [查看摘要][在线阅读][下载 167K]
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  • 先天性心脏病儿童预防接种安全性分析

    郑东旖;刘兆秋;马松;张爱玲;张文静;时念民;

    目的 探讨先天性心脏病儿童预防接种的安全性。方法 选取2013年7月至2017年7月于清华大学第一附属医院进行预防接种的先天性心脏病患儿共69例,以当日相同社区、同一性别、接种同类疫苗儿童作为安全性观察对照样本,进行疫苗接种后安全性主动监测的调查分析。结果 69例先天性心脏病患儿中,15例手术治疗后愈合以及54例未手术自愈或未自愈患儿,均于不同时期进行疫苗接种后,仅8例患儿出现不良反应,其中5例经判断与疫苗接种无关,且8例接种者均在24 h内恢复正常。与对照组相比,两组反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 先天性心脏病儿童在心功能正常及机体健康情况下进行预防接种,不良反应发生率较低,安全性较高。

    2018年10期 1126-1129页 [查看摘要][在线阅读][下载 145K]
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  • 腮腺炎减毒活疫苗工作代毒种工艺优化

    刘辉;孙雅;王刚;宋艳梅;陆梦溪;王东雁;付永其;

    目的 优化腮腺炎毒种制备工艺,控制麻腮风联合减毒活疫苗(measles,mumps and rubella combined vaccine,live,MMR)中腮腺炎分型基础滴度和稳定性。方法 应用全自动细胞计数仪提高鸡胚活细胞计数精度,确定MOI并按最适MOI制备腮腺炎病毒工作种子批,选取病毒最适收获时间,优化腮腺炎病毒工作种子批制备工艺。采用优化后的毒种连续制备3批次腮腺炎病毒原液,检测原液病毒滴度及由其制备的MMR中腮腺炎病毒分型基础滴度与(37±1)℃1周热稳定性。结果 优化后的毒种制备的腮腺炎病毒原液滴度稳定在6.5~7.0 lg CCID50/m L,较优化前提高了0.5~0.7个log。采用优化后腮腺炎病毒原液制备的MMR中的腮腺炎病毒分型基础滴度在5.2~5.8 lg CCID50/m L,热稳定性在4.8~5.5 lg CCID50/m L;80%的MMR中麻腮风各组分病毒比均能达到1∶>20∶1。结论 优化后的腮腺炎病毒工作种子批制备的MMR中腮腺炎病毒分型基础滴度和稳定性均显著提升。

    2018年10期 1130-1134页 [查看摘要][在线阅读][下载 265K]
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  • 人用疫苗生产用人二倍体细胞株KMB17的鉴定

    目的 鉴定本所自主建立的人用疫苗生产用人二倍体细胞株KMB17的正确性。方法 用染色体核型检查法和短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因分型法对本所疫苗生产用人二倍体细胞株KMB17进行鉴定。将疫苗生产用KMB17细胞经秋水仙素处理,积累中期相染色体后,低渗条件下释放出染色体,吉姆萨染料染色制片,镜检,观察染色体结构,精确计数100个细胞的染色体数目;选取人源细胞的20个STR位点对KMB17细胞进行DNA分型,并将获得的STR图谱与ATCC和DSMZ数据库进行比对分析。结果 高倍镜下观察可见,样品细胞染色体组结构正常,无缺失和突变;精确计数100个细胞中,染色体数为46的细胞数有84个,无染色单体和染色体断裂细胞,无结构异常细胞,亚二倍体细胞14个,超二倍体细胞数2个。STR基因分型获得的特征性图谱清晰,未出现三单位基因,在ATCC和DSMZ数据库中均未找到与其细胞分型完全匹配的细胞株。结论 本所自主建立的疫苗生产用人二倍体细胞株KMB17的细胞染色体结构和数目均正常,不存在污染和交叉污染,为正确细胞株。

    2018年10期 1135-1141页 [查看摘要][在线阅读][下载 342K]
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  • 实验设计法优化可溶性人肿瘤坏死因子αI型受体包涵体的复性工艺

    秦娇荣;蔡峰;赵兆;代云见;李春阳;

    目的 通过实验设计(Design of Experiment,Do E)方法对重组的可溶性人肿瘤坏死因子αⅠ型受体(soluble tumor necrosis factorαreceptorⅠ,s TNFαRⅠ)包涵体复性工艺中的关键参数进行优化。方法 采用Do E软件中的中心复合设计(Central Composite Design)建立二次模型(Quadratic Model),对复性工艺中游离巯基浓度(C-SH)和复性液蛋白浓度(C-Pro)2个关键参数进行优化。设置2个响应值:每克湿菌体中所获得的s TNFαRⅠ蛋白收率和每制备10 g s TNFαRⅠ蛋白所需复性体积(V-10 g),通过Do E软件对模型数据进行评估分析。在s TNFαRⅠ收率最高及V-10 g最小的前提下,采用二次模型响应面分析预测最优的复性参数值,并通过两次放大试验对优化结果进行验证。结果由2因素5水平2个Block共14组试验结果所建立的Do E响应面二次模型中心点重复性好,试验点均符合正态分布。响应面二次回归分析中,分别以s TNFαRⅠ收率和V-10 g作为响应值进行失拟检验的P均>0.05,模型失拟不显著。预测值和真实值接近,模型拟合度好。信噪比均>4,表明该模型有效,可用于复性工艺优化指导。通过以上模型得出:当C-Pro为0.48 mg/m L,复性起始C-SH为8.69 mmol/L时模型愿望值(0.643)最高,s TNFαRⅠ收率为16.38 mg/g,V-10 g为36.73 L。通过两次放大试验对优化结果进行验证,s TNFαRⅠ收率分别为11.34和9.72 mg/g,与优化前(收率均值5.1 mg/g)相比,有所提高。结论 Do E软件中心复合设计的二次模型可用于s TNFαRⅠ包涵体复性条件的筛选,且筛选结果为后续工艺放大提供了可靠的实验依据。

    2018年10期 1142-1149页 [查看摘要][在线阅读][下载 557K]
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  • 流感病毒灭活疫苗的研究进展

    年悬悬;杨晓明;张家友;

    流感病毒(influenza virus)具有抗原漂移和抗原转换的特性,易引发流行。目前我国使用最多的流感疫苗主要是针对甲型和乙型流感病毒的流感病毒灭活疫苗(inactivated influenza vaccine,IIV)。研制开发广谱性流感病毒疫苗是疫苗研制过程中面临的巨大挑战。病毒学家和免疫学家通过基因工程技术、病毒培养和动物模型的建立,增进了人体对流感病毒免疫基础的认识,在灭活疫苗研究上获得了巨大突破。本文将针对流感病毒易流行机制和灭活疫苗最新的研究进展作一综述。

    2018年10期 1150-1155页 [查看摘要][在线阅读][下载 213K]
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  • 急性期蛋白作为动物应激诊断标志物的研究进展

    袁建彬;郑树森;杨焕民;郭景茹;

    机体受到外界各种应激原刺激时,会诱发机体非特异性防御反应,并引发急性期反应。急性期蛋白(acute phase protine,APP)是主要由肝细胞合成的蛋白,可以改变对组织损伤、感染、应激引起的炎症反应的表达。急性期蛋白在动物体发生应激反应时内环境稳态变化与抗应激能力息息相关,因此研究急性期蛋白在畜禽应激相关疾病中变化成为必要。本文针对几种主要急性期蛋白的分类及其在动物体应激状态下表达量的变化与检测作一综述。

    2018年10期 1156-1159页 [查看摘要][在线阅读][下载 154K]
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  • 已上市生物制品的批准情况及创新性浅析

    刘志磊;张彦彦;李洁;高恩明;

    2018年10期 1160-1162页 [查看摘要][在线阅读][下载 112K]
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  • 美国生物制品生产变更管理的研究及其对我国的启示

    石男;戴伟;王雪薇;顾金梦;张云涛;杨悦;

    2018年10期 1163-1167页 [查看摘要][在线阅读][下载 415K]
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