李响;高向东;田宏;饶春明;

• 1:中国食品药品检定研究院重组技术产品室
• 2:中国药科大学生命科学与技术学院

摘要(Abstract)：

目的建立融合蛋白FP3等电点毛细管等电聚焦(Capillary isoelectric focusing,cIEF)电泳分析方法。方法采用中性涂层的毛细管,有效长度为20 cm,总长度为30 cm,内径为50μm;分离温度20℃;检测波长280 nm;20 Psi压力进样99 s,电压20 kV分离聚焦20 min,电压25 kV化学迁移25 min。比较不同两性电解质(PharmalyteTM3-10和AmpholineTM3.5-10)、增溶剂类型及浓度、聚焦电压(15、20、30 kV)对样品分离效果的影响,并验证系统的适应性、方法的重现性及系统的稳定性。结果建立的cIEF方法可使样品的电荷异构体有效分离,样品主峰与次主峰的分离度为1.249(USP)。AmpholineTM3.5-10可使样品的各个电荷异质性组分更有效地分离;6 mol/L尿素能提供良好的增溶环境;20 kV聚焦电压即可获得良好的分离效果。连续5次进样,主峰和次主峰迁移时间相对标准偏差(RSD)分别为1.29%和1.32%,样品主区带等电点范围为6.33～6.90,样品在24 h内检测结果稳定。结论建立了融合蛋白FP3等电点cIEF分析方法,该方法具有分离度高、重现性好、方法稳定和结果准确等优点,为该类制品的质量控制提供了更好的手段。

关键词(KeyWords)： 毛细管等电聚焦电泳;融合蛋白;等电点

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家863计划资助项目(2007AA021601);; 重大新药创制资助项目(2009ZX09307)

作者(Authors): 李响;高向东;田宏;饶春明;

DOI: 10.13200/j.cjb.2012.04.100.lix.015

参考文献(References)：

• [1]Hjertén S,Elenbring K,Kilár F,et al.Carrier-free zone elec-trophoresis,displacement electrophoresis and isoelectric focusingin a high-performance electrophoresis apparatus[J].J Chromatogr,1987,403(1):47-61.
• [1]Schwer C.Capillary isoelectric focusing:a routine method for pro-tein analysis[J].Electrophoresis,1995,16(11):2121-2126.
• [3]Liu Z,Wu SS,Pawliszyn J.Characterization of plant growth-pro-moting rhizobacteria using capillary isoelectric focusing with wholecolumn imaging detection[J].J Chromatogr A,2007,1140(1-2):213-218.
• [4]Liu Z,Drabovich AP,Krylov SN,et al.Dynamic kinetic capillaryisoelectric focusing:apowerful tool for studying Protein—DNA In-teractions[J].Anal Chem,2007,79(3):1097-1100.
• [5]Mack S,Cruzado-Park I,Chapman J,et al.A systematic study inCIEF:defining and optimizing experimental parameters critical tomethod reproducibility and robustness[J].Electrophoresis,2009,30(23):4049-4058.
• [6]Wang JZ.Research development and quality control of biopharma-ceutical[M].2nd ed.Beijing:Science Press,2007:119-125,174-177.