中国生物制品学杂志

2010, v.23(07) 770-773

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流感疫苗血凝素含量测定替代方法的建立及验证
Development and Validation of Alternative Method for Determination of Haemagglutinin Content in Influenza Vaccine

邵铭;李娟;宋颖丽;崔晓雨;袁力勇;方捍华;李长贵;李凤祥;王军志;

摘要(Abstract):

目的建立测定流感疫苗血凝素(Haemagglutinin,HA)含量的替代方法 ,并进行验证,以解决大流行流感发生初期疫苗原液中HA定量的难题。方法优化糖苷酶处理条件,将流感疫苗原液经糖苷酶处理后,以还原SDS-PAGE方法分离样品,以灰度扫描法确定HA蛋白百分比,结合样品总蛋白数值,计算样品中HA含量。以该方法和传统的单向免疫扩散(SRID)法分别测定7批流感疫苗原液中HA含量,并进行比较。结果优化的糖苷酶处理条件为:总蛋白400μg/ml,PNGaseF加入比例为1:50。样品经糖苷酶处理后,以还原SDS-PAGE法可以清晰区分各蛋白条带,经测序后确定HA两个亚基,与预期相对分子质量一致。该方法测定7批流感疫苗原液中HA含量的结果与SRID法测定结果的符合率在87.90%~122.20%之间。结论初步建立了测定流感疫苗中HA含量的替代方法 ,在WHO参考品供应不到位时,可用于大流感发生时疫苗原液中HA之定量。

关键词(KeyWords): 流感疫苗;血凝素,糖蛋白类,流感病毒;聚丙烯酰胺凝胶电泳;免疫扩散

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 邵铭;李娟;宋颖丽;崔晓雨;袁力勇;方捍华;李长贵;李凤祥;王军志;

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