中国生物制品学杂志

2019, v.32(08) 858-861

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IQ结构域的GTP酶激活蛋白1基因短发卡RNA重组质粒的构建及表达
Construction and expression of IQ-domain GTPase-activating protein 1-short hairpin RNA plasmid

邓青;杨成园;王安彦;牛仕诗;郝跃鹏;寇俊婷;孙雪娇;王晓霞;

摘要(Abstract):

目的构建特异性针对人IQ结构域的GTP酶激活蛋白1(IQ-domain GTPase-activating protein 1,IQGAP1)基因短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)的重组质粒,检测其在人食管癌KYSE150细胞中的表达。方法以人IQGAP1 mRNA序列为靶向设计合成含有shRNA序列的寡核苷酸,克隆至真核表达载体GV102中,构建重组质粒IQGAP1-shRNA,转化DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆测序鉴定。用脂质体2000介导IQGAP1-shRNA转染KYSE150细胞作为IQGAP1-shRNA干扰组,同时设转染载体GV102为对照组,RT-PCR及Western blot法检测IQGAP1基因的干扰效果。结果经测序鉴定,重组质粒IQGAP1-shRNA构建正确。IQGAP1-shRNA干扰组及对照组转染KYSE150细胞均可见绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),两组转染效率分别为(76±5. 780)%和(83±3. 851)%。IQGAP1-shRNA干扰组IQGAP1 mRNA转录水平和蛋白表达水平与对照组比较差异均有统计学意义(P <0. 001),表达抑制率分别为(82±2. 424)%及(77±2. 791)%。结论成功构建了IQGAP1-shRNA真核表达质粒,能特异性降低食管癌KYSE150细胞中IQGAP1基因的表达,为进一步研究IQGAP1基因在食管癌中的功能及靶向治疗作用奠定了基础。

关键词(KeyWords): IQ结构域的GTP酶激活蛋白1;短发卡RNA;RNA干扰;重组质粒;食管癌

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金(81372676);; 山西省自然科学基金(201601D011130)

作者(Authors): 邓青;杨成园;王安彦;牛仕诗;郝跃鹏;寇俊婷;孙雪娇;王晓霞;

DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002718

参考文献(References):

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