中国生物制品学杂志

2010, v.23(02) 138-141+149

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小鼠鸟氨酸脱羧酶抗酶1功能基因的克隆及原核表达
Cloning and Prokaryotic Expression of Functional Gene of Mouse Ornithine Decarboxylase Antizyme-1

刘梦瑶;韩钰;蔡富强;何玲;王艳林;

摘要(Abstract):

目的克隆小鼠鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)功能基因,原核表达并纯化OAZ1重组蛋白。方法采用RT-PCR法从小鼠黑色素瘤细胞总RNA中扩增OAZ1基因,通过重叠延伸PCR技术构建无需移码即可全长翻译的功能基因,并构建重组表达质粒pET15b/OAZ1-T,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果重叠PCR法扩增出692bp的OAZ1功能基因,重组表达质粒经酶切及测序鉴定正确,重组蛋白可在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达。纯化的重组蛋白纯度可达79.96%,且可与抗His标签抗体特异性结合。结论已成功克隆了小鼠OAZ1功能基因,原核表达并纯化了重组OAZ1蛋白。

关键词(KeyWords): 鸟氨酸脱羧酶抗酶1;功能基因;重叠延伸PCR;原核表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金资助项目(30772590)

作者(Author): 刘梦瑶;韩钰;蔡富强;何玲;王艳林;

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