中国生物制品学杂志

2018, v.31(03) 311-314

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前蛋白转化酶枯草溶菌素9单克隆抗体抗原结合活性间接ELISA测定方法的建立
Development of an indirect ELISA for determination of antigen-binding activity of monoclonal antibody against proprotein convertase subtilisin/kexin type 9

杜向瑞;韩月然;陈妍;高扬;李剑;程绍辉;

摘要(Abstract):

目的建立前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)单克隆抗体抗原结合活性的间接ELISA测定方法。方法利用链酶亲和素-生物素系统捕获包被PCSK9蛋白,采用间接ELISA法检测PCSK9单抗参比品和供试品,通过拟合四参数方程Y=(A-D)/[1+(X/C)~B]+D,得出两者的半数有效浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC_(50)),计算供试品的抗原结合活性。同时验证该方法的专属性和精密性。结果 PCSK9单抗参比品、供试品及Evolocumab(Amgen)的曲线均呈显著的剂量依赖关系,符合四参数方程,且R~2>0.99;抗CD115抗体及空白稀释液不存在类似的剂量效应曲线;重复性、人员及日间精密性的相对标准偏差(relative standard deviatin,RSD)分别为7.5%、11.3%和10.4%,均<15%。结论成功建立了抗PCSK9单抗抗原结合活性的间接ELISA检测方法,该方法专属性和精密度良好,可用于PCSK9单抗抗原结合活性的常规测定。

关键词(KeyWords): 前蛋白转化酶枯草溶菌素9;单克隆抗体;抗原结合活性;酶联免疫吸附试验

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 杜向瑞;韩月然;陈妍;高扬;李剑;程绍辉;

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