中国生物制品学杂志

2008, (11) 995-998+1005

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LKB1(Thr336)磷酸化多克隆抗体的制备及其应用
Preparation and Application of Phosphorylated LKB1(Thr336)Polyclonal Antibody

任艳敏;黄蓓;魏浩;赖柳静;

摘要(Abstract):

目的制备LKB1(Thr336)磷酸化多克隆抗体,并以其检测细胞中LKB1的表达。方法用生物信息学方法选取LKB1Thr336位点附近10个氨基酸,且使Thr336位点磷酸化,并铰链到BSA上。以此为抗原免疫家兔,制备抗血清,纯化后通过ELISA法检测抗体效价,Westernblot法检测抗体特异性,并用LKB1抗体和p-LKB1(Thr336)抗体分别检测正常细胞及肿瘤细胞中LKB1的表达。结果纯化后的p-LKB1(Thr336)抗体效价为1∶1000;LKB1抗体不仅识别His-LKB1蛋白,而且识别p-LKB1(Thr336)抗原,而p-LKB1(Thr336)抗体仅识别p-LKB1(Thr336)抗原;在正常细胞HL7702和HEK293中,LKB1表达较多,而在HeLa细胞中,LKB1基本没有表达;在这3种细胞中,p-LKB1(Thr336)基本没有表达;在肿瘤细胞S180、COS-7和Caco2中,LKB1和p-LKB1(Thr336)均有表达,p-LKB1表达相对较多。结论已制备了特异性的p-LKB1(Thr336)多克隆抗体,LKB1-Thr336位点的磷酸化可能是某些肿瘤发生的特征,有望成为肿瘤诊断的指标之一。

关键词(KeyWords): LKB1(Thr336);磷酸化;多克隆抗体;生物信息学;肿瘤细胞

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 安徽省教育厅重点项目(2006KJ087A);; 安徽省中青年学科带头人培养对象经费

作者(Author): 任艳敏;黄蓓;魏浩;赖柳静;

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