中国生物制品学杂志

2013, v.26(11) 1632-1636

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鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒的研制
Preparation of double antibody sandwich ELISA diagnostic kit for F1 antigen of Yersinia pestis

常娅莉;席仲兴;吴智远;徐秉臣;彭林锋;胡丽娜;热娜;雷刚;韩少波;张正雷;卜培英;袁浩嘉;王秉翔;

摘要(Abstract):

目的研制鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒,并进行验证。方法用鼠疫菌F1抗原免疫家兔制备抗血清,经50%饱和硫酸铵盐析2次后,再经Sephacryl S-300凝胶柱层析纯化,作为包被抗体;制备鼠疫菌F1抗原单克隆抗体腹水,并进行纯化,用HRP标记单抗,作为酶标抗体;建立鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA检测方法,连续制备3批诊断试剂盒,并建立内部质控品。对试剂盒进行板内板间精密性、灵敏度、线性范围、特异性、重复性、准确性和稳定性验证。结果制备的试剂盒检测精密性参比品的板内变异系数为5.2%,板间变异系数为8.23%;试剂盒的线性范围为3.9162.5 ng/ml,最低检测限为3.0 ng/ml;试剂盒检测鼠疫菌菌液的结果为阳性,而与近缘假结核耶尔森菌无交叉反应;试剂盒检测高、中、低3种浓度F1抗原含量的变异系数为4.54%62.5 ng/ml,最低检测限为3.0 ng/ml;试剂盒检测鼠疫菌菌液的结果为阳性,而与近缘假结核耶尔森菌无交叉反应;试剂盒检测高、中、低3种浓度F1抗原含量的变异系数为4.54%8.4%,回收率在104%8.4%,回收率在104%108%之间;试剂盒稳定性良好,有效期至少为1年。结论成功制备了鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒,为鼠疫的临床诊断及流行病学监测提供了一种快速检测手段,也为新型鼠疫组分疫苗F1抗原含量的检测提供了方法。

关键词(KeyWords): 鼠疫耶尔森菌;F1抗原;单克隆抗体;酶联免疫吸附测定

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家“863”课题(2006AA02Z461)

作者(Authors): 常娅莉;席仲兴;吴智远;徐秉臣;彭林锋;胡丽娜;热娜;雷刚;韩少波;张正雷;卜培英;袁浩嘉;王秉翔;

DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.001949

参考文献(References):

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