中国生物制品学杂志

2014, v.27(03) 320-324

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小鼠睾丸组织高表达基因mINCA1真核表达质粒的构建及其RNA干扰靶点的筛选
Construction of eukaryotic expression vector for high expression of mINCA1 gene in mouse testis and screening of RNA interference target of mINCA1

杨丽娟;李晓宾;杨红;于保锋;王海龙;郭睿;

摘要(Abstract):

目的构建小鼠睾丸组织高表达基因mINCA1的真核表达质粒,并筛选其RNA干扰靶点。方法从BALB/c小鼠睾丸组织中扩增mINCA1基因,插入真核表达载体pMSCVpuro,构建重组真核表达质粒pMSCVpuro-mINCA1,转染人胚肾HEK 293T细胞,转染48 h后,分别采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中mINCA1基因mRNA的转录及蛋白的表达。设计并合成针对mINCA1基因的4个RNA干扰质粒,分别与质粒pMSCVpuro-mINCA1共转染HEK293T细胞,采用Western blot法筛选mINCA1基因的干扰靶点。结果 PCR、双酶切及测序结果证实重组真核表达质粒pMSCVpuro-mINCA1构建正确;pMSCVpuro-mINCA1质粒转染的HEK 293T细胞中有mINCA1基因mRNA的转录及蛋白的表达;干扰质粒PGPU6/GFP/Neo-shRNA1和PGPU6/GFP/Neo-shRNA3可显著降低mINCA1蛋白的表达量。结论成功构建了mINCA1基因真核表达质粒,并筛选出mINCA1基因的2个有效干扰靶点,为进一步研究mINCA1基因的功能及作用机制奠定了实验基础。

关键词(KeyWords): mINCA1基因;真核细胞;基因表达;RNA干扰;精子发生

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 山西省归国留学人员基金(2011-043)

作者(Author): 杨丽娟;李晓宾;杨红;于保锋;王海龙;郭睿;

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