中国生物制品学杂志

2007, (09) 637-641

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重组hTRAIL腺病毒载体的构建及鉴定
Construction and Identification of Recombinant Adenovirus for Expression of hTRAIL

杨芳;易山;李鸿钧;谢天宏;施锐;孙茂盛;

摘要(Abstract):

目的构建表达hTRAIL基因的重组腺病毒载体。方法以重组质粒pThioHisA-TRAIL中提取的TRAIL基因为模板,采用PCR法扩增基因片段。将扩增的基因片段插入穿梭质粒pShuttle-CMV,并转化大肠肝菌DH5α。筛选重组质粒pShuttle-CMV-TRAIL,电转化已转化了pAdEasy-1的BJ5183细胞。筛选重组腺病毒质粒pAdEasy-TRAIL,用Lipofectamine转染293细胞,制备携带人全长TRAIL基因的重组复制缺陷型腺病毒(Ad-TRAIL)。氯化铯密度梯度离心法纯化Ad-TRAIL病毒颗粒,并测定病毒滴度。采用RT-PCR法检测TRAIL基因在293细胞中的转录。以Ad-TRAIL转染YTMLC细胞,采用免疫荧光法和流式细胞术检测TRAIL基因的表达。结果纯化后的Ad-TRAIL病毒颗粒数为2.77×1012VP/ml,感染性滴度为109.5(3.2×109)CCID50/ml。经RT-PCR扩增出约843bp的基因片段,与目的片段大小一致。流式细胞术和免疫荧光法均检测到TRAIL在YTMLC细胞中的表达,表达产物主要存在于细胞质中。结论已成功构建了表达hTRAIL重组腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗提供了依据。

关键词(KeyWords): 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体;重组腺病毒;基因治疗;构建;鉴定

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 杨芳;易山;李鸿钧;谢天宏;施锐;孙茂盛;

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